Determinación de creatinina

Practica No. 5

INTEGRANTES:Ortiz Pineda MarcosRamirez Pérez Luis AlfredoGuerrero Pedraza María José

OBJETIVO

Determinar a través de la espectrofotometría la concentración de creatinina en plasma.

Conocer las reacciones cinéticas en las pruebas de laboratorio.

ANTECEDENTES

CREATININA

La creatinina es el producto de degradación de la creatina. La creatina es un derivado de aminoácidos, el cuerpo la fabrica básicamente en el hígado, los riñones y el páncreas, y también puede obtenerse a través de una dieta rica en carne o pescado (podemos encontrar unos 5 gr., de creatina por cada kilo de carne). Se acumula básicamente en los músculos esqueléticos (aproximadamente un 98 %) en forma de creatina libre unida a una molécula de fosfato (PCr o fosfocreatina). La PCr sirve como fuente inmediata de energía para la contracción muscular para lo que se degrada produciendo creatinina. Esta es llevada a la sangre a través riñones los cuales la filtran del cuerpo en la orina (puede también ser medida en la orina).

DETERMINACIÓN DE CREATININA

El mejor parámetro bioquímico sanguíneo de la función renal es la creatinina. En principio, cuanto mayor es el descenso de la función renal, tanto más elevado es el valor de la creatinina sérica.

Los aminoácidos glicina, arginina y metionina forman en el hígado la creatina, que por fosforilación da la fosfocreatina, que circula por la sangre hacia el músculo y cerebro, y solamente en cantidades trazas se elimina por la orina. La fosfocreatina acumulada en el músculo es un depósito de energía y con la pérdida del fósforo se convierte en creatina, la cual por deshidratación pasa a creatinina. La creatinina es, por tanto, el anhídrido de la creatina, la cual una vez que pasa a sangre no vuelve a ser utilizada y se excreta de forma constante por la orina. La creatina, en cambio, vuelve a ser reabsorbida por los túbulos, lo que explica que sólo aparezcan trazas de este metabolito en la orina.

La creatinina se forma endógenamente en el metabolismo muscular, existiendo una relación directa con la masa muscular.

SE PUEDE MEDIR EN PLASMA Y ORINA POR LA FILTRACIÓN TUBULAR

Fundamentalmente la creatinina es filtrada por los glomérulos, no se reabsorbe en circunstancias normales, y sólo en una mínima proporción se secreta a nivel tubular, aumentando dicha secreción con el incremento de la concentración sérica de creatinina en la insuficiencia renal progresiva. Puede haber reabsorción tubular de creatinina en pacientes con insuficiencia cardíaca grave. A diferencia de la uremia, la concentración plasmática de creatinina es prácticamente constante en un mismo sujeto e independiente del contenido proteico de la dieta y dependiente tan sólo de su función renal.

Por todo ello, como medida de filtración glomerular, la determinación de creatinina es muy superior a la de la urea. Es decir, la medición de los niveles de creatinina sérica es clínicamente más específica como índice de la función renal que la determinación de urea; sin embargo, esta última es más sensible. Por tanto, si utilizamos ambas determinaciones como pruebas de screening de la función renal, la determinación de la urea produciría más falsos positivos, mientras que la determinación de la creatinina nos daría más falsos negativos; de hecho la función renal puede estar claramente restringida a pesar de los valores normales de la creatinemia.

NIVELES NORMALES DE UREA Y CREATININA

Un resultado normal es de 0.7 a 1.3 mg/dL para los hombres y de 0.6 a 1.1 mg/dL para las mujeres.Las mujeres generalmente tienen niveles de creatinina más bajos que los hombres, debido a que ellas normalmente tienen menor masa muscular.En principio se recomienda la valoración conjunta de ambas determinaciones, así como la relación entre ambas, expresada por el cociente de los valores plasmáticos de urea/creatinina, que normalmente se sitúa alrededor de 40. Valores superiores se observan en situaciones de hipercatabolismo o cuando hay un enlentecimiento del flujo de orina tubular (que permite una mayor reabsorción de urea), como cuando hay una disminución de la perfusión renal o en la obstrucción urinaria parcial bilateral. Un nivel de creatinina próximo al

límite superior de la normalidad indica únicamente que el paciente debe tener aún un filtrado glomerular y un rendimiento renal de por lo menos el 50% del normal. Aunque los valores plasmáticos de urea y creatinina sean normales no se puede descartar la existencia de nefropatía, de hecho puede haber hasta un 50-60% de nefronas no funcionales sin que por ello se alteren los niveles de urea y creatinina. Por tanto estas determinaciones bioquímicas presentan un valor limitado por su escasa sensibilidad diagnóstica. En este aspecto ambas pruebas son superadas por un test de funcionalidad renal, el aclaramiento de creatinina.

Las concentraciones séricas en creatinina aumentan en: Insuficiencia renal crónica secundaria a glomerulonefritis crónica,

nefrosis diabética, riñón poliquístico, nefroesclerosis, pielonefritis crónica y gota, para nombrar algunos, debido a la incompetencia de los riñones para excretar la creatinina.

Los valores séricos de creatinina pueden ser normales en algunos casos de insuficiencia renal aguda o crónica leve debido a que el valor plasmático de la creatinina emplea de 7-10 días para estabilizarse cuando el IFG disminuye.

Una creatinina plasmática elevada indica insuficiencia renal grave de larga duración. Un incremento de 4-5mg/100ml es evidencia de disfunción importante.

La nefritis crónica con uremia puede provocar valores tan altos como 20-30 mg/100 ml.

Uropatía obstructiva de larga duración, que puede presentarse en hipertrofia prostática, estenosis uretral bilateral y cálculos renales, debido la dificultad para el flujo libre de la orina y del IFG. La depuración renal es baja.

Disminución crónica del IFG debido a causas prerrenales, como se observa en insuficiencia cardiaca congestiva.

Valores falsos reportados en algunos métodos de análisis (prueba original de Jaffé) que originan interferencias secundarias por reacción de otras sustancias.

Algunas personas con masa muscular muy grande, que producen cantidades mayores de creatinina, por lo general, la elevación es ligera.

Cetoacidosis diabética, debido a una lectura falsamente elevada por el aumento de cetonas en el suero.

Rechazo de trasplante de riñón, debido a una filtración escasa de productos de desecho por el riñón ineficaz. En tales casos, el indicador más sensible de la función renal pueden ser las determinaciones en serie de creatinina sérica.

MÉTODOS DE DETERMINACIÓN

Las técnicas analíticas de determinación de la creatinina se resumen en el método colorimétrico de Jaffé y en el método enzimático de la creatininasa.

En la reacción de Jaffé, el ácido pícrico en medio alcalino forma con la creatinina un tautómero de picrato de creatinina de color naranja rojizo brillante que se mide a 500 nm.

El método enzimático se basa en la utilización de la enzima creatininasa (creatinina-amidohidrolasa), que hidroliza la molécula de creatinina según la reacción:

La disminución de absorbancia a 340 nm es directamente proporcional al nivel de creatinina de la muestra.

DEPURACIÓN DE LA CREATININA

El Clearence de creatinina es un método muy preciso para determinar la capacidad de filtrado de los riñones. El término inglés es clearance, que significa “aclaración” o “limpieza”. El Clearence expresa la cantidad de plasma sanguíneo por unidad de tiempo liberada de una determinada mezcla de

sustancia. Por lo tanto, es un valor de la capacidad de eliminación de sustancias.

Incluso si el nivel de creatinina en el suero de la sangre se encuentra en el rango normal, utilizando el depuración de creatinina se puede determinar una disminución de la capacidad de filtrado. Por tanto, es adecuada para detectar una enfermedad renal crónica o una insuficiencia renal incipiente. La medición de la depuración de creatinina es un poco más laboriosa porque además de tomar una muestra de sangre se debe recoger la orina durante un período de 24 horas.El médico determina la concentración de creatinina en la orina y en el suero, y calcula el volumen de orina por minuto, es decir, la cantidad de orina que el paciente elimina por minuto. El Clearence de creatinina se expresa por la siguiente fórmula:

Como los filtros del riñón también se denominan glomérulos (ovillos capilares), el valor calculado se llama tasa de filtrado glomerular o TFG. Se expresa en mililitros por minuto y por superficie del cuerpo, y en sujetos sanos es de unos por 120 mililitros por minuto por cada 1,73 m2 de superficie corporal. El valor varía según la edad y el género. En contraste con la concentración de creatinina en el suero, que aumenta con la disminución de la función renal, la depuración de creatinina o TFG baja si se deteriora la función de los riñones. La depuración de creatinina parece disminuir con la edad (cada década corresponde a una disminución de aproximadamente 6.5 ml/min / 1.73 m2).Las fórmulas aproximativas, con cuya ayuda la determinación de la TFG requiere considerablemente menos tiempo, son sin embargo ligeramente menos precisas y no son adecuadas en todos los casos, debido a que una pequeña cantidad de creatinina es secretada por los tubos de filtración en los riñones, la depuración de creatinina no es exactamente equivalente a la tasa de filtración glomerular. De hecho, la depuración de creatinina generalmente sobreestima esta tasa, lo cual es particularmente válido en pacientes con insuficiencia renal avanzada.. El representante más conocido de las fórmulas

aproximativas es la llamada fórmula de Cockroft-Gault, que considera el peso y la masa muscular aproximada del paciente.

VALORES NORMALES DE ANÁLISIS DE DEPURACIÓN DE CREATININALa depuración a menudo se mide como milímetros/minuto (ml/min). Los valores normales son:

Hombres: 97 a 137 ml/min Mujeres: 89 a 128 ml/min

REACCIÓN CINÉTICALa cinética química es el estudio de las velocidades de las reacciones químicas y de los mecanismos mediante los que tienen lugar. La cinética química introduce la variable tiempo en el estudio de las reacciones químicas y estudia el camino que siguen los reactivos para convertirse en productos.La velocidad de reacción es la rapidez con que se modifica la concentración de un producto o un reactivo al transcurrir el tiempo.

FACTORES QUE INFLUYEN EN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN Estado físico de los reactivos: Las reacciones son más rápidas si los

reactivos son gaseosos o están en disolución. En las reacciones heterogéneas la velocidad dependerá de la superficie de contacto entre ambas fases, siendo mayor cuanto mayor es el estado de división.

Concentración de los reactivos: La velocidad de la reacción se incrementa al aumentar la concentración de los reactivos, ya que aumenta el número de choques entre ellos.

Temperatura: Un incremento de la temperatura provoca un incremento en la energía cinética de las moléculas, lo que hace que sea mayor el número de moléculas que alcanza la energía de activación.

Catalizadores: Los catalizadores cambian la energía de activación de una determinada reacción, y por lo tanto varían la velocidad de reacción

MATERIALESMuestra sanguínea

Reactivo 1 para determinar creatinina (Blanco)Reactivo 2 para determinar creatinina (Verde)

Inserto

Estándar de creatinina 2 mg/dL

Agua destilada

Micro pipetas (100- 1000µl y 5- 50µl) y sus puntillas

Tubos eppendorf

Celdillas para espectrofotómetro

Espectrofotómetro

PROCEDIMIENTO1.- La persona que trabajo el procedimiento antes realizo su lavado de manos correspondiente, para eliminar cualquier agente contaminante tomando en cuenta uso de guantes para un mayor aislamiento.

2.- Utilizamos la muestra de la práctica anterior sobre flebotomía.

3.- Utilizamos el inserto que proporciona el equipo siguiendo el procedimiento para el cálculo del nivel de creatinina.

4.- Se prepararon 3 tubos eppendorf con las siguientes cargas de muestra (tabla), utilizamos las micropipetas para realizar esta tarea, asimismo nos apoyamos con las gradillas que contenían las puntas para las micropipetas para llevar un conteo correcto del número de muestra preparada, después colocamos las puntas en una solución para su limpieza.En esta ocasión utilizamos 2 reactivos y nuestro blanco fue agua destilada.Método con dos reactivos

Reactivo 1 200 LμReactivo 1 200 μLMuestra 40 μL

5.- Calibramos la longitud de onda en el espectrofotómetro.

6.- Se calculó la absorbancia número 1 del estándar, 25 segundos después de preparar los reactivos con el estándar.

7.- Se calculó la absorbancia 2 del estándar que se tomó 2 minutos después de la absorbancia 1.

8.- Calculamos la absorbancia número 1 de la muestra, 25 después de preparar los reactivos.

9.- Se calculó la absorbancia 2 de la muestra que se tomo 2 minutos después de la absorbancia 1.

11.- Por ultimo aplicamos la fórmula para obtener el resultado final de ambas muestras:

(A2-A1) Muestra (A2-A1) Estándar

(0.052-0.048) Muestra (0.055-0.045) Estándar

X n

X 2= 0.8 mg/dL

Conclusiones.

Durante esta práctica aprendimos que se debe de leer muy bien el inserto del kit que se va a utilizar, con la finalidad de comprender correctamente cual es el procedimiento que se debe de realizar, pues este puede cambiar de uno a otro kit. En este caso en específico, nos dimos cuenta que los detalles por más pequeños que parezcan o insignificantes que los creamos, nos pueden llegar a alterar por completo nuestros resultados y por consiguiente también dar un diagnóstico equivocado el cual afectaría a nuestros pacientes.

BibliografíaAnálisis de depuración de creatinina. (10 de Agosto de 2009). Obtenido de Clinica DAM:

https://www.clinicadam.com/salud/5/003611.html

Diaz Portillo, J., Fernandez del Barrio , M., & Paredes Salido, S. (1997). Aspectos básicos de bioquímica clínica. Madrid: Díaz de Santos.

Examen de creatinina en la sangre. (8 de Abril de 2013). Obtenido de MedinePlus: https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003475.htm

Valores renales. (19 de Marzo de 2012). Obtenido de Onmeda.es: http://www.onmeda.es/exploracion_tratamiento/valores_rinones-depuracion-de-creatinina-4446-4.html