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7/21/2019 Contraste de Fases

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Microscopía de

Contraste deFases



r nc p o e a croscop a eContrastes

Se basa en el %ec%o de ue cuando inter'eren

ondas ue tienen un determinado desfase seproduce una interferencia constructi"a +con ma&oramplitud o destructi"a +con menor amplitud.



Objetivo de la Microscopía deContrastes

(l ob#eti"o es manipular el desfase de dos %aces de

lu! para trasladar esas peue-as "ariaciones defase a los correspondientes cambios de amplitudue se "isuali!an como diferencias de contraste.

eue-as diferencias de fase se con"ierten encambios de intensidad.



Constitución del Microscopio de Contraste

de Fase

El Microscopio de Contraste de Fases Contiene:

Diafragma anular en el Condensador que consta de unanillo transparente con la parte central oscurecida y queforma un cono de luz hueco como el del microscopio de

campo oscuro.

El condensador presenta un disco que proyecta un haz deluz con forma anular, y en la lente de salida de los objetivos,se agregan unos anillos de fase!, que son discos

transparentes con un dise"o en relieve, cabe destacar quee#isten dos tipos diferentes de anillos de fase, denominadospositivo y negativo, los cuales tienen distintos efectos sobrela luz y por lo tanto, las im$genes se ven diferentes en cadauno, esto se e#plicar$ m$s adelante.



Constitución del Microscopio de Contraste

de Fase

Placa de Difracción ó Placa de Fase

dentro del tubo del sistema de lentes objetivos,la cual consta de un anillo ranurado a manerade disco.

Ocular similar al del microscopio de campoclaro.



IPOS DE MICROSCPIOS DE CONRASE DE!ASES

Contraste de "ase osc#ro o

positivo$ cuando los ra&os de lu!, la des"iada& la no des"iada tienden a cancelarse creandouna interferencia destructi"a & %acer ue elob#eto apare!ca muc%o m0s oscuro ue los

alrededores.Contraste de "ase brillante one%ativo$ se presenta cuando retrasamos lalu! no des"iada & la %acemos 1 de lon)itud

de onda menor, lo ue %ace ue sal)a altiempo con la lu! des"iada, ue tiene unretraso de 1 de lon)itud de onda, lo)randode esta manera ue sal)an al mismo tiempo& se recombinen



!ORMACI&N DE LA IMAGEN

(l primer paso es separar la lu! directa dela lu! difractada. ara ello se coloca, en elplano focal de la condensadora, un

diafra)ma anular ue pro&ecta en elin'nito la ima)en de un %a! anular.

(ste cono de lu! %ueco pasa a tra"*s de lamuestra sin des"iarse & la d*bil lu!difractada por la muestra se etiende entodo el plano focal posterior del ob#eti"o.



A'(SE DELMICROSCOPIO

%a correspondencia entre las placas de fase de losobjetivos y los diafragmas anulares de la condensadora hade ser e#acta. & cada placa le corresponde un diafragmaanular y el centrado de ambos ha de ser e#acto.

El centrado se realiza con una lente de 'ertrand quepermite enfocar el diafragma anular del condensador

%a iluminaci(n de )*hler debe estar ajustada y eldiafragma de apertura completamente abierto paratrabajar en modo contraste de fases.

+ara centrar las placas con el diafragma anular se insertala lente de 'ertrand y se enfoca. e gira el disco de lacondensadora para insertar el diafragma anular quecorresponda y se hacen coincidir con unos tornillos de

ajuste




En el año 1893, el profesor August Köhler propuso un método de

iluminación para optimizar la oser!ación microscópica " la

microfotograf#a, $ue permite apro!echar al m%&imo las

capacidades de las lentes 'o(eti!os) iluminando la muestra enestudio con un campo de luz uniforme cu"o di%metro sea igual al

del %rea de captura del o(eti!o* +os microscopios modernos est%n

diseñados para aplicar la iluminación Köhler " los re$uerimientos

son 'figs* -1. " -13)/

0 ondensador $ue sue " a(a para enfocar el cono de luz*

0 2omilla con lente colectora*

0 os diafragmas, un diafragma de campo situado a ni!el de la

l%mpara " un diafragma de apertura, colocado dea(o del

condensador*




4luminaci$n 56%ler. Se debe iluminar el esp*cimen si)uiendo elesuema. La l0mpara posee un 'lamento +S incandescentecu&a lu! es captada por la lente colectora L1 & re)ulada por el

diafra)ma de campo 71. La ima)en S8 del 'lamento de lal0mpara es pro&ectada al plano del se)undo diafra)ma 72. (steprimer paso se reali!a con 71 completamente abierto. La alturadel condensador L2 se re)ula de manera ue su punto focal est*en el plano 72. La ima)en del diafra)ma de campo 71 es

pro&ectada en el plano de la preparaci$n por el condensador




E#isten dos tipos de iluminaci(n )*hler:

-n mtodo en el cual la luz es transmitida atravs del espcimen /transmitida0.

1tro mtodo cuando la luz es reflejada desdeel espcimen /incidente0.

%a iluminaci(n )*hler transmitida es usada

para especimenes transparentes osemitransparentes.

%a iluminaci(n )*hler incidente es 2til paraobjetivos como el metal, los cuales no

transmiten luz




La luz incidente atraviesa undiafragma anular, y la lente delcondensador focaliza un anillo circularde luz sobre la muestra. La luz quepasa sin obstáculos a través de lamuestra es focalizada por el objetivo

sobre el grueso anillo gris de la placade fase, que absorbe parte de la luzdirecta y altera su fase en un cuartode longitud de onda. Si una muestrarefracta ó difracta la luz, se altera lafase de algunas ondas lluminosas y

éstas se redirigen a través de ladelgada región clara de la placa defase. Se recombinan las lucesrefractada y no refractada en el planode la imagen para formar la imagen.




Pasos para el ajuste de iluminación Köhler:

1.- Enfoca el especimen.2.- Con el diafragma completamente cerrado localiado lo m!s cercadel origen de lu "campo iris# de manera $ue puedas %er los l&mites

del diafragma.'.- (rae los m!rgenes del campo iris a enfo$ue aumentando odisminu)endo el enfo$ue con la arueda del condensador. (anto elespecimen como el iris de*en estar en foco.+.- Centra la imagen del campo iris usando las ruedas decondensador-centrador.,.- *re el centrado ) enfoca el campo iriso de maneras $ue los

m!rgenes del campo iris estn m!s all! del campo de %isión./.- justa el condensador iris para incrementar o disminuir elcontraste de la imagen. 0a apertura óptima depende del especimen.unca uses esta apertura para controlar la intensidad de lu..- justa la intensidad de lu con el potenciómetro o con filtros dedensidad neutra "para fotograf&a en color#.



RA)ECORIA DE LA L(* EN L MICROSCOPIO DE!ASES



ara con"ertir un microscopio con"encional enuno de contraste de fases se sustitu&e elcondensador & el ob#eti"o por los de contraste

de fases, los cuales contienen un 'ltro enanillo & una placa de fases respecti"amente

Los ob#eti"os de contraste de fases se

identi'can por sus letras "erdes & la indicaci$ndel tama-o del anillo de fases +%1, %2, %3 o%C, %L, %

?Se puede con"ertir el microscopio normal enuno de contraste de fases@