UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN
BIOMEDICINA
Métodos y Técnicas de Estudio en Biología Celular
UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN
BIOMEDICINA
UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA
Inmunoblotting (western blot), Dot/slot blotInmunocitoquímicaInmunofluorescenciaInmunoprecipitaciónELISA/EIA/RIACromatografía de inmunoafinidadMicroscopia electrónica (morfología)
UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA
Estructura de los anticuerpos
Tipos de Anticuerpos
Selección clonal: Delección
Selección clonal: expansión
Conceptos
Inmunógeno, antígeno.Carrier: BSA, KLH.Unión covalente (cross-linking): MBS, glutaraldehido, DSS.Péptidos inmunogénicosProteínas nativas y desnaruralizadas.Otras moléculasAdjuvante de Freund: completo e incompleto.Primera inmunización y recuerdos.
Conceptos
Anticuerpos policlonales
1. Inmunización del conejo
2. Recuerdos
3. Extracción de sangre
4. Preparación del suero
5. Purificación del anticuerpo (métodos opcionales)
6. Caracterización del antisuero
Anticuerpos policlonales
Anticuerpos monoclonales
1. Inmunización del ratón
2. Extracción del bazo
3. Preparación de hibridomas (mieloma+B)
4. Selección de los clones
5. Producción y uso de anticuerpos
Elección del tipo de anticuerpo
Marcaje de Anticuerpos
Marcaje de Anticuerpos para uso en Células
Immunoblotting (western blot)Immunoblotting (western blot)
Inmunocitoquímica
Las flechas indican la presencia de neuronas con hormona liberadora de la hormona del crecimiento en el Núcleo Arcuato (cerebro) de rata de 4 meses.
Inmunocitoquímica
Localización de la “calbinding” (calbindina) en cerebelo de rata
Microscopia (confocal e inmunofluorescencia)
Inmunoprecipitación
Inmunoprecipitación
ELISA
ELISA
Cromatografía de inmunoafinidadCromatografía de inmunoafinidad
Oro Coloidal
Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm) en células endoteliales. La barra corresponde a 0,25 M.
Oro Coloidal
Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm). G: aparato de Golgi; Lu: lumen vascularLa barra corresponde a 0,25 M.