ver. 2 - ナカライテスク株式会社 · sumoタグ発現システム...

SUMOタグ発現システム

ワクチンアジュバント

DNAワクチンアジュバント

DNAワクチンプラスミド

ポリ L- リシンデンドリグラフト

ワクチン研究関連 ELISA キット

OVAペプチド

ver. 2.9

2 https://www.nacalai.co.jp/ワクチン研究

LifeSensors 社　SUMO タグ発現システム

ワクチンとなる抗原を発現精製したときに、余計なアミノ酸が抗原に残っていると抗体作成における抗原として適切ではありません。本システムでは、ユビキチン様タンパク質 SUMO をタグとして使用し、SUMO プロテアーゼでタグを切断します。同プロテアーゼは SUMO の立体構造を認識するためリンカーを必要としません。* ご注意：目的タンパク質の N 末端側にプロリンを持つタンパク質の場合、SUMO プロテアーゼを使用することができません。

● ネイティブなタンパク質（タグ無し）が得られる

● SUMO プロテアーゼは立体構造を認識するので、正確かつ迅速

● 可溶化を促進

1. マーカー2. IMAC（一回目）溶出3. HIC 添加サンプル（2 と同じ）4. HIC 溶出5. SUMO プロテアーゼ処理6. IMAC（二回目）添加サンプル7. IMAC（二回目）フロースルー8. IMAC（二回目）溶出9. Blank

10. IMAC（二回目）フロースルー× 2タグの無い抗原 rPA が得られた（レーン 7、10）

■ 抗原作製例 rPA の発現・精製

SUMO タグ融合タンパク質のタグを切断するプロテアーゼ（SUMO プロテアーゼ）は、SUMO の立体構造を認識し切断します。従って、N 末端側に不要なアミノ酸が残らずネイティブなタンパク質の作製が可能です。また目的タンパク質の内部配列が切断される心配はありません。一般的に使用されるプロテアーゼが非特異的消化をするのに対し、SUMO プロテアーゼは正確であることが報告されています

（下記文献参照）。Lee, C.D. et al. An improved SUMO fusion protein system for effective production of native proteins. Protein Sci. 17(7), 1241-8 (2008).

■ SUMO プロテアーゼの特長

* ベクター番号 7（p.3 参照）は、His タグの上流側に DYKDDDDK タグがあります。

■ SUMO タグの性能タグ切断プロテアーゼの切断が正確

SUMO はフォールディングしやすい性質を持ち、SUMO の性質により目的タンパク質もともに正確な立体構造を形成することで、可溶性タンパク質の発現を促進すると考えられています。

■ 各種タグ融合タンパク質との可溶性発現の比較

LB 培地で大腸菌を培養後、ペレットを回収し緩衝液を添加しソニケーション処理を行ったサンプル（UN：IPTG 非誘導および IN：IPTG誘導）、ソニケーション後に遠心した上清（S：可溶性画分）とペレット（IB：不溶性画分）を電気泳動し CBB 染色を行った。結果として、他のタグ融合タンパク質と比較し、SUMO タグ融合タンパク質が、可溶性画分に高効率で発現していることが示されています。使用したタグ：His6, Ub(ubiquitin), SUMO, MBP(maltose binding protein), GST(glutathione S-transferase), TRX(Thioredoxin), NUS A

■ 性能比較例 SUMO タグを用いた可溶性タンパク質の発現

3https://www.nacalai.co.jp/ ワクチン研究

1. 発現系本発現システムでは、以下の発現系に適合する発現ベクターおよびキットを販売しています。また、SUMO タグの種類は、3 種類用意されており、それぞれのタグに応じた適切なプロテアーゼが用意されています。使い分けは、"2.SUMO タグの種類 " をご参照ください。

発現の宿主プロモーター選択マーカー SUMO タグの

種類 *2分泌

シグナルSUMO プロテアーゼの

種類 *3価格表

対応番号 *1大腸菌宿主

大腸菌 T7

AmpSUMO SUMO Protease 1

1Kan 2

AmphSUMO3 SUMO Protease 2

3Kan 4

AmpSUMOstar SUMOstar Protease

5Kan 6

酵母（P.pastoris） AOX1Amp Zeocin™ hSUMO3

+SUMO Protease 2 7

Zeocin™

SUMOstar SUMOstar Protease

8酵母（S.cerevisiae） CUP1

Amp

Trp 9

昆虫細胞 Polh －+ 10

11

哺乳類細胞 CMV Neomycin+ 12

13

*1：価格表に対応するようにベクターを番号付けしています。ベクターの詳細は、下記の " ベクターマップ " をご参照ください。*2：SUMO タグの種類の詳細は、下記の "2. SUMO タグの種類 " をご参照ください。*3：SUMO プロテアーゼの種類については、下記の "3. SUMO プロテアーゼの種類 " をご参照ください。

2. SUMO タグの種類SUMO タグは以下の 3 種類用意されており、発現系や目的タンパク質の性質により、使い分けしてください。本タンパク質の N 末端にはHis タグが付加されており、切断後の SUMO タグの除去が簡単に行えます。

SUMO タグの種類由来使い分けSUMO 酵母・大腸菌発現システムのみ適応hSUMO3 ヒト・目的タンパク質の N 末端に疎水性アミノ酸を多く含む場合に推奨

SUMOstar 遺伝子改変 SUMO ・大腸菌発現、酵母、昆虫細胞、哺乳類細胞の発現システムに適応・内在性（真核生物）のプロテアーゼによる切断を回避

3. SUMO プロテアーゼの種類LifeSensors 社では、切断する SUMO タグに応じて、3 種類の SUMO プロテアーゼを用意しています。各プロテアーゼは、非常に高効率でSUMO タグ融合タンパク質から SUMO タグを正確に切断します。また、N 末端側には His タグが付加されており、切断に使用したプロテアーゼの除去が簡単に行えます。

プロテアーゼ切断する SUMO タグ活性の定義至適 pH/ 至適温度SUMO Protease 1 SUMO 各製品は、基質となる各 SUMO タグ-GFP

タンパク質を 37℃、1 時間の条件下、1unit で90μg 以上切断します。

至適 pH：5.5～9.5至適温度：30℃ *SUMO Protease 2 hSUMO3

SUMOstar Protease SUMOstar

純度：95% 以上 / 形態：溶液 / 比活性：1×105U/mg 以上* 本酵素は上記至適条件以外にさまざまな pH、塩濃度、低温条件（4℃）下でも切断可能です。詳細は以下の文献をご参照ください。

Journal of Structural and Functional Genomics 5, 75-86 (2004).

■ 製品ラインアップ

ベクターは、特定の制限酵素により処理する必要があります。大腸菌発現ベクターの場合、BsaⅠによる処理が必要です。本制限酵素処理により、ACCT の粘着末端と XbaⅠで消化した場合に形成される粘着末端と同じ CTAG の粘着末端が形成されます。この BsaⅠによる処理後に、必要に応じて SacⅠ、SalⅠ、HindⅢなどの制限酵素サイトを利用することも可能です。その他の発現ベクターのマップ等の詳細な情報はメーカーWeb site（https://www.lifesensors.com/expression-systems/）でご確認ください。

■ ベクターマップ例）大腸菌発現ベクター


リンカー配列は不要で、目的の配列を付属のベクターにクローニング後、ターゲットタンパク質を発現。

高発現するターゲットタンパク質をNi-カラムにて精製。

カラムから溶出させたターゲットタンパク質をSUMOプロテアーゼで切断。

切断後のサンプルを再度、Ni-カラムに添加。プロテアーゼと SUMOタグは、His タグにより吸着、ターゲットタンパク質のみ溶出。

使用方法

分泌タンパク質における SUMOstar の効果を試験するために、分泌シグナル gp67 を持つ tryptase と SUMOstar-tryptase 発現用バキュロウイルスを Sf9 昆虫細胞に感染させた。培地を回収し SDS-PAGE を行った後、CBB 染色により検出した。これらのデータから、SUMOstar タグは分泌型の tryptase の発現を促進することが示されました。

■ 実施例 ① 昆虫細胞発現系での可溶化タンパク質の高発現

左図）分泌型の哺乳類細胞発現系により、GzmB（Granzyme B）を発現させた後、培地を回収し、電気泳動後、GzmB に対する抗体を用いて検出しました。その結果、SUMO タグを付加した場合、6xHis タグのみの場合と比較し、GzmB の発現が促進されていることが示されています。サンプル：各サンプルを 2 レーンずつ泳動

右図）分泌型の哺乳類細胞発現系により、マウス由来の PLA2 を発現させた後、培地を回収し、電気泳動後、His タグ抗体を用いて検出しました。その結果、SUMOstar タグを付加した場合、6xHis タグのみの場合と比較し、発現が促進されていることが示されています。

■ 実施例 ② 哺乳類細胞発現系での使用例

LifeSensors 社では、発現ベクター、SUMO プロテアーゼ、SUMO タグ抗体などを一纏めにしたキットを販売しています。・発現ベクター・SUMO プロテアーゼ・SUMO タグ抗体・コントロールタンパク質（SUMO-GFP）

■ キット内容


発現系製品名ベクター対応番号 *1 メーカー製品番号容量価格キット

大腸菌

pE-SUMOpro Amp Kit 1 1000A 1 kit 193,000pE-SUMOpro Kan Kit 2 1000K 1 kit 193,000pE-SUMOpro3 Amp Kit 3 1010A 1 kit 193,000pE-SUMOpro3 Kan Kit 4 1010K 1 kit 193,000pE-SUMOstar Amp Expression Kit 5 1100A 1 kit 193,000pE-SUMOstar Kan Kit 6 1100K 1 kit 193,000

酵母pP-Pichia Secretory SUMOpro3 Expression Kit 7 2150 1 kit 193,000pY-Pichia Secretory SUMOstar Expression Kit 8 2160 1 kit 193,000pY-SUMOstar Saccharomyces Intracellular Expression Kit 9 2100 1 kit 193,000

昆虫細胞pI-SUMOstar Insect (BEVs) Secretory Expression Kit 10 3105 1 kit 193,000pI-SUMOstar Insect (BEVS) Intracellular Expression Kit 11 3100 1 kit 193,000

哺乳類細胞

pM-Mammalian Secretory SUMOstar Kit 12 7120 1 kit 193,000pM-Mammalian Intracellular SUMOstar Kit 13 7110 1 kit 193,000

ベクター単品

大腸菌

pE-SUMOpro Amp 1 1001A 20 μg 71,500pE-SUMOpro Kan 2 1001K 20 μg 71,500pE-SUMOpro3 Amp 3 1016 20 μg 71,500pE-SUMOpro3 Kan 4 1011 20 μg 71,500pE-SUMOstar Amp 5 1106 20 μg 71,500pE-SUMOstar Kan 6 1101 20 μg 71,500

酵母pP-secSUMOpro3 Vector 7 2151 20 μg 71,500pY-SUMOstar Pichia Secretory Vector 8 2161 20 μg 71,500pY-SUMOstar Saccharomyces Intracellular Vector 9 2101 20 μg 71,500

昆虫細胞pI-SUMOstar Insect (BEVs) Secretory Vector 10 3106 20 μg 71,500pI-SUMOstar Insect (BEVS) Intracellular Vector 11 3101 20 μg 71,500

哺乳類細胞

pM-SUMOstar Mammalian Secretory Vector 12 7121 20 μg 71,500pM-SUMOstar Mammalian Intracellular Vector 13 7111 20 μg 71,500

製品名切断タグメーカー製品番号容量価格SUMO プロテアーゼ単品

SUMO Protease 1 SUMO 4010

250 units 42,900500 units 82,500

1000 units 153,0005000 units 666,000

SUMO Protease 2 hSUMO3 4020

250 units 42,900500 units 82,500

1000 units 153,0005000 units 666,000

SUMOstar Protease SUMOstar 4110

250 units 42,900500 units 82,500

1000 units 153,0005000 units 666,000

製品名メーカー製品番号容量価格SUMO プロテアーゼ用ポジティブコントロール単品SUMO Protease 2 control protein 5004 100 μg 47,300SUMO Protease 1 control protein 5000 100 μg 47,300SUMOstar Protease control protein 5010 100 μg 47,300SUMO 抗体単品Anti-hSUMO3 antibody AB7030 250 μg 82,500Anti-SUMO/SUMOstar antibody AB7002 100 μg 82,500

* 価格表に掲載のベクターの詳細は、p.3 に掲載の " 製品ラインアップ 1. 発現系 " をご参照ください。< 商標について > SUMOpro®、SUMOpro-3® は、LifeSensors の登録商標です。SUMOstar™ は、LifeSensors の商標です。


InvivoGen 社では、徹底した無菌条件下で製造し、エンドトキシン試験済みの VacciGrade™ アジュバントを販売しています。本グレードの製品ではヒトワクチンで利用されている Alum や、アジュバントとして期待されている

（後述の各リガンドの文献を参照ください）自然免疫受容体リガンドなどをラインアップしています。

● 徹底した無菌条件下で製造

● エンドトキシン試験済み

■ Alum およびエマルジョンアジュバント

製品名概要 Th 応答使用比率または作用濃度

エンドトキシンレベル

メーカー製品番号容量価格

AddaVax™ スクアラン水中油型 Th2 1：1

（AddaVax™：抗原） <1EU/ml vac-adx-10 10 ml 56,000

Alhydrogel® adjuvant 2%

水酸化アルミニウムゲル（Alum） Th2 1：9-1：1

（Alhydrogel：抗原）－ vac-alu-250 250 ml 60,000

CFA 完全フロイントアジュバント油中水型 Th1 1：1

（CFA：抗原） <1EU/mlvac-cfa-10 10 ml 17,000vac-cfa-60 6×10 ml 35,000

IFA 不完全フロイントアジュバント油中水型 Th2 1：1

（IFA：抗原） <1EU/mlvac-ifa-10 10 ml 14,000vac-ifa-60 6×10 ml 29,000

■ 自然免疫受容体リガンド

製品名文献概要 Th 応答作用量エンドトキシンレベル


c-di-AMPVacciGrade™ 1, 2, 3 細胞質内 DNA センサーアゴニスト Th1/Th2 5-50μg/mouse <0.005EU/μg vac-nacda 1 mg 87,000

c-di-GMPVacciGrade™ 1, 2, 3, 4 細胞質内 DNA センサーアゴニスト Th1/Th2 5-50μg/mouse <0.005EU/μg vac-nacdg 1 mg 87,000

Flagellin FliCVacciGrade™ 5, 6

TLR5 アゴニストS. typhimurium 由来のリコンビナントフラジェリン

Th1/Th2 1-10μg/mouse <0.005EU/μg vac-fla 50 μg 361,000

GardiquimodVacciGrade™ 7 TLR7 アゴニスト

イミダゾキノリン化合物 Th1 10-100μg/mouse <0.005EU/μg vac-gdq 5 mg 145,000

ImiquimodVacciGrade™ 8 TLR7 アゴニスト

イミダゾキノリン化合物 Th1 10-100μg/mouse <0.005EU/μg vac-imq 5 mg 91,000

MPLA-SMVacciGrade™ 9, 10, 11

TLR4 アゴニストS a l m o n e l l a e n t e r i c a s e r o v a r minnesota mutant R595 由来モノホスホリルリピド A

Th1 2-20μg/mouse － vac-mpla 1 mg 93,000

MPLA SyntheticVacciGrade™ 9, 10, 11 TLR4 アゴニスト

合成モノホスホリルリピド A Th1 2-20μg/mouse － vac-mpls 1 mg 93,000

N-Glycolyl-MDPVacciGrade™ 12 NOD2 アゴニスト

N- グリコリル化ムラミルジペプチド Th1 5-30μg/mouse <0.001EU/μg vac-gmdp 5 mg 93,000

ODN 1585VacciGrade™ 13, 14, 15

TLR9 アゴニストCpG オリゴデオキシヌクレオチドA 型（マウス）

Th1 20-50μg/mouse <0.001EU/μg vac-1585-1 1 mg 199,000


TLR9 アゴニストCpG オリゴデオキシヌクレオチドB 型（マウス）



TLR9 アゴニストCpG オリゴデオキシヌクレオチドB 型（マウス）


ODN 2395VacciGrade™ 20, 21

TLR9 アゴニストCpG オリゴデオキシヌクレオチドC 型（ヒト / マウス）


InvivoGen 社　ワクチンアジュバント


製品名文献概要 Th 応答作用量エンドトキシンレベル


Pam3CSK4VacciGrade™ 22, 23 TLR1/2 アゴニスト

合成トリアシル化リポタンパク質 Th1 2-20μg/mouse <0.001EU/μg vac-pms 1 mg 70,000

Poly(I:C)(HMW)VacciGrade™ 17, 18 TLR3 アゴニスト

ポリイノシンポリシチジン酸 Th1 10-100μg/mouse <0.001EU/μg vac-pic 10 mg 86,000

R848VacciGrade™ 24 TLR7/8 アゴニスト

イミダゾキノリン化合物 Th1 10-100μg/mouse <0.001EU/μg vac-r848 5 mg 198,000

TDBVacciGrade™ 25, 26, 27 Mincle アゴニスト

コード因子の合成アナログ Th1 1-100μg/mouse <0.005EU/μg vac-tdb 2 mg 101,000

1. Ebensen T. et al. Bis-(3',5')-cyclic dimeric adenosine monophosphate: strong Th1/Th2/Th17 promoting mucosal adjuvant. Vaccine 29(32), 5210-20 (2011).

2. Burdette DL. et al. STING is a direct innate immune sensor of cyclic di-GMP. Nature 478 (7370), 515-8 (2010). 3. Karaolis DK. et al. Bacterial c-di-GMP is an immunostimulatory molecule. J Immunol. 1786, 2171-81 (2007).4. Madhun AS. et al. Intranasal c-di-GMP-adjuvanted plant-derived H5 influenza vaccine induces multifunctional Th1 CD4+ cells and strong

mucosal and systemic antibody responses in mice. Vaccine 29(31), 4973-82 (2011).5. Mbow ML. et al. New adjuvants for human vaccines. Curr Opin Immunol. 22(3), 411-6 (2010). 6. Skountzou I. et al. Salmonella flagellins are potent adjuvants for intranasally administered whole inactivated influenza vaccine. Vaccine 28(4),

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Immunology 7, 381-388 (2010).8. Triozzi PL. et al. Regulation of the activity of an adeno-associated virus vector cancer vaccine administered with synthetic Toll-like receptor

agonists. Vaccine 28(50), 7837-43 (2010).9. Rhee eG. et al. TLR4 Ligands Augment Antigen-Specific CD8+ T Lymphocyte Responses Elicited by a Viral Vaccine Vector. J. Virol. 84, 10413-

10419 (2010).10. Didierlaurent A. et al. AS04, an aluminum salt- and TLR4 agonist-based adjuvant system, induces a transient localized innate immune

response leading to enhanced adaptive immunity. J Immunol 183(10), 6186-97 (2009).11. Casella CR. et al. Putting endotoxin to work for us: monophosphoryl lipid A as a safe and effective vaccine adjuvant. Cell Mol Life Sci. 65(20),

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Neisseria meningitidis serogroup . Infect Immun. 75(12), 5939-46 (2007).21. Vollmer J. et al. Characterization of three CpG oligodeoxynucleotide classes with distinct immunostimulatory activities. Eur J Immunol. 34(1),

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Mechanism of Action. J Immunol. (2012). [Epub ahead of print]23. Jayakumar A. et al. TLR1/2 activation during heterologous prime-boost vaccination (DNA-MVA) enhances CD8+ T Cell responses providing

protection against Leishmania (Viannia). PLoS NeglTrop Dis. 5(6), e1204 (2011).24. Baldwin sL. et al. Intradermal immunization improves protective efficacy of a novel TB vaccine candidate. Vaccine 27, 3063-3071 (2009).25. Christensen D. et al. Cationic liposomes as vaccine adjuvants. Expert Rev Vaccines. 10(4), 513-21 (2011).26. Schoenen H, et al. Cutting edge: Mincle is essential for recognition and adjuvanticity of the mycobacterial cord factor and its synthetic

analog trehalose-dibehenate. J Immunol. 184(6), 2756-60 (2010).27. Agger EM. et al. Cationic liposomes formulated with synthetic mycobacterial cordfactor (CAF01): a versatile adjuvant for vaccines with

different immunological requirements. PLoS One. 3(9), e3116 (2008).


■ pBOOST

DNA ワクチンアジュバントの輸送方法は、Th1 応答または Th2 応答にバイアスをかけることが知られています。このバイアスは、インターフェロン制御因子（IRF）や TANK-binding kinase 1（TBK1）を同時に輸送することによって更に増強されます。本製品はこれら遺伝子をコードしており、これによってワクチン効率を高めることが可能となります。

■ プラスミドマップ

● 野生型 IRF-1IRF-1 は主に Th2 抗体産生応答を増強します *1。筋肉注射または遺伝子銃による DNA ワクチンの接種の後、IRF-1 は抗体価を最大で10 倍増強します。● 変異型 IRF-3IRF-3 は主に Th1 T 細胞応答を増強します。Ser396 を Asp に置換するポイントミューテーションを導入することで常時活性型であるIRF-3 を作製しました。この超活性型 IRF-3 は野生型よりも 10 倍以上、IFN-αおよび IFN-βプロモーターを活性化します *2。● キメラ IRF7/3IRF-3 および IRF-7 は異なる標的プロモーターを活性化することで Th1 および Th2 応答の双方を増強します *1。双方の IRF の生物学的特長を利用するために、IRF-7 の DNA への結合特異性と超活性型 IRF-3 の強力な転写活性化能を合わせた IRF-7/3 キメラは超活性型IRF-3 のみの場合と比較し、10 倍以上強力に IFN-αをよび IFN-βプロモーターを活性化します *3。

*1 Sasaki S. et al. Regulation of DNA-raised immune responses by cotransfected interferon regulatory factors. J Virol. 76(13), 6652-9 (2002).*2 Servant MJ. et al. Identification of the minimal phosphoacceptor site required for in vivo activation of interferon regulatory factor 3

in response to virus and double-stranded RNA. J Biol Chem. 278(11), 9441-7 (2003).*3 Bramson JL. et al. Super-activated interferon-regulatory factors can enhance plasmid immunization. Vaccine. 21(13-14), 1363-70 (2003).

■ 製品説明 pBOOST2

pBOOST3-mTBK1 プラスミドはマウス TBK1 遺伝子を発現します。非古典的な IκB キナーゼである TANK-binding kinase 1（TBK1）が、DNA ワクチンのアジュバント効果に関与していることが分かりました *4。DNA ワクチンが投与されると、CpG 非依存的で TBK-1依存的に I 型インターフェロンや炎症性サイトカインが誘導されます。このことから、TBK-1 を発現するプラスミドと共に投与することで、DNA ワクチンにより誘導される免疫原性を増強することが期待されます。

*4 Ishii KJ. et al. TANK-binding kinase-1 delineates innate and adaptive immune responses to DNA vaccines. Nature 451, 725-729 (2008).

■ 製品説明 pBOOST3

製品名コード遺伝子メーカー製品番号容量価格pBOOST2-wtmIRF1 野生型　マウス IRF1 pbst2-wtmirf1 20 μg 111,000 pBOOST2-wthIRF1 野生型　ヒト IRF1 pbst2-wthirf1 20 μg 111,000 pBOOST2-samIRF3 変異型　マウス IRF3 pbst2-samirf3 20 μg 111,000pBOOST2-sahIRF3 変異型　ヒト IRF3 pbst2-sahirf3 20 μg 111,000pBOOST2-samIRF7/3 キメラ　マウス IRF7/3 pbst2-samirf73 20 μg 111,000 pBOOST2-sahIRF7/3 キメラ　ヒト IRF7/3 pbst2-sahirf73 20 μg 111,000pBOOST3-mTBK1 マウス TBK1 pbst3-mtbk1 20 μg 111,000pBOOST2-mcs マルチクローニングサイト（コントロール） pbst2-mcs 20 μg 111,000 pBOOST2-LacZ LacZ pbst2-lacz 20 μg 111,000pBOOST3-mcs マルチクローニングサイト（コントロール） pbst3-mcs 20 μg 111,000

InvivoGen 社　DNA ワクチンアジュバント


■ pVAC 目的抗原に対する中和抗体の誘導に

pVAC は筋肉注射により液性免疫を刺激するために設計された DNA ワクチンプラスミドです。目的抗原タンパク質は、pVAC にコードされている膜貫通アンカードメイン（ヒト胎盤アルカリホスファターゼ由来）の上流へクローニングすることで細胞表面に固定されます。筋肉細胞表面上に産生された抗原ペプチドは抗原提示細胞（APC）によって取り込まれ、主要組織適合複合体（MHC）クラスⅡ経路を介して処理されると考えられています。

■ プラスミドマップ

● 高レベルの抗原遺伝子発現pVAC プラスミドは骨格筋細胞および抗原提示細胞において高レベルで発現させるためにアカゲザル EF1α 遺伝子のプロモーター部位を用いています。発現レベルは SV40 エンハンサーを付加することでさらに増強されています。SV40エンハンサーの付加は、特に分裂しない細胞においてプラスミドの核内移行を促進します。

● 抗原遺伝子の持続的な発現pVAC を大腸菌内で複製およびセレクションするために必要とされる細菌由来の遺伝子領域は、最小化した複製起点

（Ori）を使用し、CpG-free Zeocin™ 耐性遺伝子（Sh-ΔCpG）を用いることで免疫原性の CpG モチーフを減少させています。

● 抗原遺伝子の簡便なクローニングpVAC には複数の汎用的な制限酵素サイトを持つマルチクローニングサイト（MCS）が存在します。

1. Corr M. et al. In vivo priming by DNA injection occurs predominantly by antigen transfer. J Immunol. 163(9), 4721-7 (1999).2. Forns X. et al. DNA immunization of mice and macaques with plasmids encoding hepatitis C virus envelope E2 protein expressed

intracellularly and on the cell surface. Vaccine 17, 1992-2002 (1999).3. McCluskie MJ et al. Route and method of delivery of DNA vaccine influence immune responses in mice and non-human primates.

Mol Med 5, 287-300 (1999).

■ 製品説明

製品名分泌シグナル（IL2）メーカー製品番号容量価格

pVAC1-mcs 有り pvac1 20 μg 111,000

pVAC2-mcs 無し pvac2 20 μg 111,000

InvivoGen 社　DNA ワクチンプラスミド


■ ポリL-リシンデンドリグラフト抗体作製にも利用可能

本製品は COLCOM 社（フランス）の製品であり、様々な用途にご利用いただけます。

● 生体成分（リシン）100% なのでバイオコンパチブル

● 水に易溶で熱に安定

● 表面に多数の NH2 基があり表面修飾が容易

製品ラインアップとして世代２（G1）～世代 5（G5）のデンドリグラフトと世代 1（G1）の PLL をご用意しています。

世代 G1 G2 G3 G4 G5

分子量 1,450 8,600 22,000 65,300 172,300

直径 -pH7（nm） 2 4.5 7 11 16

リシン数 8 48 123 365 963

■ 製品仕様

デンドリグラフトにハプテンを連結し、ウサギで免疫を実施。デンドリグラフト自体は低免疫原性であることを確認（→ワクチンとしても効果的）

Romestand, B et al. Dendrigraft poly-L-lysine: a non-immunogenic synthetic carrier for antibody production. Biomacromolecules. 11(5), 1169-73 (2010).

■ 実施例抗体作製

製品名メーカー製品番号製品番号容量価格

Dendri-Grafted Poly-L-Lysine G2 Amino Surface DGL-G2-AS 53159-94 100 mg 57,000




Poly-L-Lysines, NH2 G1 PLL-NH2-G1 53158-04 100 mg 40,000

■ ポリL-リシン

ポリL-リシンデンドリグラフトを販売している COLCOM 社では、リシン鎖長ごとに精製する技術の開発により、高品質なポリL-リシンの製造が可能となりました。DDS の開発や、中間体等としてご利用ください。

製品名メーカー製品番号容量価格

Poly-L-Lysines, K6（Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys） PLL-K6 10 mg 48,000

Poly-L-Lysines, K7（Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys） PLL-K7 10 mg 54,000

Poly-L-Lysines, K8（Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys） PLL-K8 10 mg 61,000

Poly-L-Lysines, K9（Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys） PLL-K9 10 mg 69,000

COLCOM 社　ポリ L- リシンデンドリグラフト


Alpha Diagnostic International 社　ワクチン研究関連 ELISA キット

Alpha Diagnostic International 社では、ワクチン研究関連の ELISA キットを豊富に取り扱っています。ワクチンモデル抗原、ODN ワクチンアジュバント関連の ELISA キットの中から一部の製品を紹介します。

Titer Valuesmc154=1.72kUmc155=5.70kUmc157=1.85kUmc158=7.90kU

■ 実施例 Mouse Anti-Ovalbumin IgM ELISA kit（#600-170-OGM）を用いた力価測定

測定対象動物種測定対象の抗体のクラスメーカー製品番号容量価格ワクチンモデル抗原（Ovalbumin、DNP）関連 ELISA キット

Anti-Ovalbumin

マウス

IgG, IgA, IgM 600-100-OGG 1 kit 164,000 IgG1 600-110-OG1 1 kit 164,000IgG2a 600-120-O2A 1 kit 164,000IgG2b 600-130-O2B 1 kit 164,000IgG3 600-140-OG3 1 kit 164,000IgM 600-170-OGM 1 kit 164,000IgE 600-165-OGE 1 kit 164,000

ラットIgG, IgA, IgM 610-100-OGG 1 kit 149,000

IgM 610-120-OGM 1 kit 143,000IgE 610-110-OGE 1 kit 143,000

Anti-Dinitrophenol（DNP）

マウスIgG, IgA, IgM 640-210-DGG 1 kit 149,000

IgM 640-220-DGM 1 kit 149,000IgE 640-200-DGE 1 kit 149,000

ラットIgG 650-110-DGG 1 kit 149,000IgM 650-120-DGM 1 kit 179,000IgE 650-100-DGE 1 kit 179,000

ODN ワクチンアジュバント関連 ELISA キット

Anti-dsDNAマウス

IgG 5120 1 kit 149,000IgM 5130 1 kit 149,000

IgG, IgA, IgM 5110 1 kit 149,000ヒト IgG 3100 1 kit 128,000

Anti-ssDNA マウスIgG 5320 1 kit 149,000

IgG, IgA, IgM 5310 1 kit 149,000

他にもさまざまなワクチン研究関連の ELISA キットや関連製品を販売しています。詳細は Alpha Diagnostic International 社 Web site（http://www.4adi.com/）をご参照ください。

※記載の内容は、'17 年 12 月現在の情報に基づいております。※価格に消費税は含まれておりません。

1712

InvivoGen 社　OVA ペプチド

InvivoGen 社では、ELISPOT 検出法のスタンダードに使用する 2 種類の OVA ペプチドを販売しています。

製品名詳細メーカー製品番号容量価格

OVA 257-264クラスⅠエピトープ、検出用（ELISPOT）配列：SIINFEKL（分子量：963.2）

vac-sin 1 mg 20,000

OVA 323-339クラスⅡエピトープ、検出用（ELISPOT）配列：ISQAVHAAHAEINEAGR（分子量：1773.9）

vac-isq 1 mg 29,000

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