Validacin Mtodos Analticos Cuantitativos, Cualitativos y Semicuantitativos.Rigoberto Marcelo Yez VeraDiciembre 2011

Norma NCh2547.Of 20035.5 Procedimientos Analticos.5.5.2 El laboratorio debe usar slo procedimientos validados. VALIDARVERIFICAR

ValidacinConfirmacin mediante el examen y la obtencin de evidencias objetivas que aseguran el cumplimiento de una serie de requerimientos particularmente definidos para aplicaciones concretas

(ISO 8402-1994 o NCh2000 ISO 8402).

VALIDACIN DE MTODOS CUANTITATIVOS Parmetros de calidad (desempeo analtico): - LINEALIDAD- EXACTITUD: PRECISIN: *Repetibilidad *Reproducibilidad-VERACIDAD, Trazabilidad - INCERTIDUMBRE-SELECTIVIDAD/ESPECIFICIDAD/INTERFERENCIAS- SENSIBILIDAD- LMITE DE DETECCIN- LMITE CUANTIFICACIN- ROBUSTEZ

LL = L. de linealidad LC = L. de CuantificacinLD = L. de Deteccin ANLISIS CUANTITATIVO

-LINEALIDADCapacidad del mtodo analtico de obtener resultados linealmente proporcionales entre la concentracin del analito y su respuesta.Anlisis estadstico:*Curva regresin y = a + b x *Coeficiente de determinacin r2*Anlisis de varianza (regresin) con Estimacin falta de ajuste Error residual puro.ANLISIS CUANTITATIVOSi p>0,05 es significativo y por ende los datos tienden a ser lineales.

Seleccin del modelo: Normalmente una lnea rectay = a + b x

Establecimiento del diseo experimental: dominio experimental: rango de concentraciones distribucin de las medidas nmero de medidas.

Estimacin de los parmetros del modelo. Regresin por mnimos cuadrados.

Validacin del modelo: ANOVA.

ETAPAS DE LA REGRESIN

Linealidad: Curva de Calibracin IgGINMUNONEFELOMETRA Medicin instrumental (seal): intensidad de la luz dispersada por los complejos antgenos-anticuerpos.

Hoja1

Concentracin (mg/dL)Medicin 1Medicin 2

Xlog(X)Ylog(Y)Ylog(Y)

11.6751.06712633.1019482.977

5.83750.7669352.9716722.827

2.91880.4656652.8234082.611

1.45940.1644082.6112152.332

0.7297-0.1372072.3161032.013

0.3648-0.4381202.079351.544

Hoja2

Hoja3

CURVA CALIBRACION IgG

CURVA CALIBRACIN IgG

ExactitudGrado de concordancia entre el resultado de una medicin y el valor de referencia aceptado o verdadero

Nota: El trmino exactitud cuando se aplica a un conjunto de resultados de mediciones implica la combinacin de los componentes aleatorios y de un error sistemtico comn o de un componente de sesgo (Norma ISO 5725-1 e ISO 3534-1)

Exactitud (Norma ISO 3534-1)-Precisin: grado de concordancia entre resultados de mediciones obtenidas independientes bajo condiciones establecidas.-Veracidad: grado de concordancia entre el valor medio obtenido a partir de una serie de resultados y un valor de referencia aceptado.

Exactitud = Precisin + Veracidad

PrecisinLa precisin depende slo de la distribucin de errores aleatorios y no tiene ninguna relacin con el valor verdadero o el valor especificado.-Repetibilidad-Precisin intermedia o reproducibilidad intralaboratorio-Reproducibilidad

(Norma ISO 5725-1 e ISO 3534-1)

REPETIBILIDAD:Es la medida de la precisin de un mtodo efectuado en las mismas condiciones, sobre el mismo analito, con el mismo mtodo,con el mismo operador, utilizando el mismo instrumento de medida y durante un corto intervalo de tiempo.PRECISIN:Grado de concordancia entre resultados de mediciones obtenidas de una serie repetida de anlisis, sobre una muestra homognea, bajo condiciones establecidas (Norma ISO 3534). ANLISIS CUANTITATIVO VALIDACIN

MediaDesviacin estndarCoeficiente de variacinAnlisis de varianza F (comparacin de la desviacin estndar)

Estudio homogeneidad muestra: Anlisis de varianza (F) Prueba de tde Student.ANLISIS ESTADSTICO DE LA PRECISIN

REPETIBILIDAD INMUNONEFELOMETRA PARA LA DETERMINACIN IgG. Homogeneidad muestra

Muestra

Contramuestra

n

6

6

Media

1557.50

1554.67

s

52.129

82.199

CV

3.347 %

5.287 %

t calculado = 0.0713 < t tabla 5;0.025 = 2.571

REPRODUCIBILIDAD:Es la medida de la precisin de los resultados de un mtodo analtico efectuado sobre el mismo analito, pero en condiciones diferentes (diferentes equipos utilizados, el operador, el perodo de tiempo, etc.) ANLISIS CUANTITATIVO VALIDACINPRECISIN

REPRODUCIBILIDAD INMUNONEFELOMETRA PARA DETERMINACIN DE IgG IgG mg/dL

DA 1DA 2DA 3

155615681564156815431606162415561585148115981556159816021535151814131568

REPRODUCIBILIDAD INMUNONEFELOMETRA PARA DETERMINACIN DE IgG Anlisis de Varianza--------------------------------------------------------------------------------------Fuente var. SC gl CM F P--------------------------------------------------------------------------------------Entre grupos 1496,78 2 748,389 0,28 0,7626Intra grupos 40682,8 15 2712,19--------------------------------------------------------------------------------------Total (Corr.) 42179,6 17

n

18 (en tres das diferentes)

media

1557.72

DE

12.27

CV

0.8 %

Precisin

99.2 %

VERACIDAD:Grado de concordancia entre el valor medio obtenido de una serie de resultados y el valor de referencia aceptado (certificado). Norma ISO 3534Anlisis estadstico Media experimental Desviacin estndar experimental Prueba de t de Student

ANLISIS CUANTITATIVO VALIDACIN

VERACIDAD INMUNONEFELOMETRAPARA DETERMINACIN DE IgG MRC DB Lote 084705 931,8IgG mg/dL 942,3n = 10951.8 924,8918,6927.1920,5938,4935,2918,8 Media experimental930.9Media certificada 925.0

VERACIDAD INMUNONEFELOMETRAPARA DETERMINACIN DE IgG Se acepta la hiptesis de nulidad Ho. Existe trazabilidad

Valor exp.

MRC

media

930,9

925

s (DE)

11,0545

t calculado = 1,6963

IncertidumbreMagnitud asociada con el resultado de medicin que caracteriza la dispersin de los valores que razonablemente podran ser asignados al mesurando

Incertidumbre-Incertidumbre estndar:Incertidumbre de un resultado de medicin expresada como desviacin estndar.-Incertidumbre estndar combinada:Incertidumbre estndar como resultado de una estimacin mediante la propagacin de errores con base en las incertidumbres individuales.-Incertidumbre expandidaIncertidumbre estndar que se expresa como un intervalo de confianza.

gl = n - 1 (grado libertad) nivel = 0,05CLCULO DE INCERTIDUMBRE EXPANDIDA U MRC IgG exp. = 7,9 mg/dL

SELECTIVIDAD / ESPECIFICIDAD

Capacidad del mtodo analtico para medir en forma exacta un analito particular dentro de una mezcla compleja, sin interferencia de otras sustancias o analitos. ANLISIS CUANTITATIVO VALIDACINMagnitud influyente, magnitud que no es el mesurando pero afecta al resultado de la medicin (interferencia).

Interferencia de la sealAlgunos compuestos presentes en la muestra por un artefacto aumentan o disminuyen la magnitud del mecanismo de deteccin. Ejemplos:Fluorescena, EDTA , Azida de Sodio, Lpidos, Complemento, Fibringeno, Albmina

Deteccin y control de interferenciasSon difciles de detectar pues se desconoce el resultado verdadero. Se obtienen de los datos del fabricante o de literatura. El laboratorio debe establecer requisitos de ausencia de interferencia para valores definidos de las magnitudes.

Verificar resultados de pacientes con condiciones clnicas asociadas con interferencias (enfermedades hepticas, fallas renales, embarazo, incongruencias con cuadro clnico.

Inspeccionar las muestras visualmente buscando hemlisis, ictericia, lipemia o evaluarlas usando ndicadores sricos.

ESTUDIO DE INTERFERENCIASPrueba de dilucin lineal (las interferencias no se comportan linealmente con la dilucin).

Analizar la muestra por otro mtodo (comparacin de mtodos).

Tratar la muestra para remover, destruir o inhibir sustancias potencialmente interferentes.

Anlisis de muestras enriquecidas con el interferente.

SENSIBILIDADEs la capacidad de un mtodo analtico de registrar ligeras variaciones de la concentracin.ANLISIS CUANTITATIVO VALIDACIN = Sensibilidadb = Pendiente obtenida desde la regresin lineal.Sm = desviacin estndar de la muestra.

LMITE DE DETECCIN (LD)

Menor concentracin o cantidad de analito detectable con razonable certeza por un procedimiento analtico dado. Concentracin que proporciona una seal en el instrumento significativamente diferente de una muestra blanco. ANLISIS CUANTITATIVO VALIDACINYbl = seal promedio del blanco.Sbl = desviacin estndar del blanco.b = pendiente obtenida desde la regresin lineal del analito.

LMITE DE CUANTIFICACIN (LC)

Es la menor concentracin de analito que puede determinarse con precisin y exactitud razonables en las condiciones establecidas y se expresa en unidades de concentracin. ANLISIS CUANTITATIVO VALIDACINYbl = seal promedio del blanco.Sbl = desviacin estndar del blanco.b = pendiente obtenida desde la regresin lineal del analito.

ROBUSTEZ:

Grado de concordancia de los resultados al efectuar cambios en las condiciones operativas y ambientales normalizadas del mtodo. ANLISIS CUANTITATIVO VALIDACIN

Capacidad de un procedimiento de permanecer inalterado por pequeas pero deliberadas variaciones en los parmetros del mtodo y provee informacin de su comportamiento en la rutina.

Parmetros estudiar: -Efectos del congelado-descongelado-Tiempos de incubacin- Cambio pH tampones-Temperaturas de incubacin-Longevidad de los reactivos-Preparacin de la muestra-Conservacin de la muestra. ROBUSTEZ

NORMA NCh 2446.Of1999 Gua para la validacin de mtodos de ensayo Principios y conceptos generales

5 Procedimiento de validacin5.1 Los laboratorios de ensayo y los organismos de acreditacin deben contar con procedimientos y directrices para planificar y controlar el proceso de validacin de mtodos de ensayo. Sin embargo, la discusin anterior ha indicado claramente que no puede desarrollarse un procedimiento nico. En consecuencia, tiene que desarrollarse una gama de diferentes alternativas de tcnicas de validacin. Cun detallada deba ser la validacin, depende de las circunstancias (necesidades, costos, posibilidades, riesgos, etc.).

DOCUMENTO A, 0/2 de la Soc. Espaola de Bioq. Cln. y Patologia MolecularSOBRE RESPONSABILIDADES EN LA OBTENCIN DE EVIDENCIA OBJETIVA DE LA VALIDACIN DE MTODOS NORMALIZADOS:El Laboratorio Clnico debera establecer requisitos y verificar, al menos las siguientes caractersticas metrolgicas:1.-Error sistemtico (sesgo). El fabricante del calibrador deber proporcionar la trazabilidad y la incertidumbre del valor asignado. Deber proporcionar datos sobre la veracidad de los resultados. Sin embargo, el Laboratorio debera obtener sus evidencias que el proceso proporciona resultados satisfactorios

2.-Interferencias (magnitudes influyentes). El fabricante deber proporcionar la informacin de las interferencias.

DOCUMENTO A, 0/2 de la Soc. Espaola de Bioq. Cln. y Patologia MolecularSOBRE RESPONSABILIDADES EN LA OBTENCIN DE EVIDENCIA OBJETIVA DE LA VALIDACIN DE MTODOS NORMALIZADOS:3.-Imprecisin interdiaria (reproducibilidad). Responsabilidad Laboratorio.4.-Lmite de deteccin. El fabricante deber propocionar especificaciones de imprecisin, sensibilidad y lmite de deteccin. El Laboratorio debera estudiar el lmite de deteccin cuando observa diferencia.5.-Contaminacin6.-Verificar dilucin

Reglas CLIA (Clinical Laboratory Improvement Amendments) Regulacin Validacin de Mtodos (JCAHO, Joint Commission for Accreditation of Healthcare Organizations; CAP, College of American Pathologists ; COLA, Commission on Office Laboratory Accreditation)Recomendacin de validacin de mtodos de acuerdo a la complejidad de la prueba o determinacin:

-Pruebas de mnima complejidad (waived tests). No hay recomendacin para la validacin de mtodo. Seguir directrices del fabricante.

Reglas CLIA (Clinical Laboratory Improvement Amendments) Regulacin Validacin de Mtodos (JCAHO, Joint Commission for Accreditation of Healthcare Organizations; CAP, College of American Pathologists ; COLA, Commission on Office Laboratory Accreditation)-Pruebas de moderada y alta complejidad (Non-Waived tests) aprobados por el FDA los estudios de validacin de mtodos deberian seguir las siguientes recomendaciones:-Verificar los parmetros de calidad o especificaciones de desempeo (demostrar resultados comparables a los establecidos por el fabricante):-Exactitud -Precisin-Rango de los resultados analticos reportado por el mtodo -Verificar que los intervalos de referencia del fabricante son apropiados para la poblacin de pacientes del laboratorio.

Reglas CLIA (Clinical Laboratory Improvement Amendments) Regulacin Validacin de Mtodos (JCAHO, Joint Commission for Accreditation of Healthcare Organizations; CAP, College of American Pathologists ; COLA, Commission on Office Laboratory Accreditation)-Pruebas de moderada y alta complejidad (Non-Waived tests) aprobados por el FDAActividades a realizar por el laboratorio:-Comparacin de mtodos para estimar la inexactitud o sesgo.-Replicar muestra o control para estimar la imprecisin-Hacer estudio de linealidad para estimar elrango de la determinacin reportado por el fabricante-Obtener valores de referencia para verificar intervalo de referencia indicado por el fabricante

Reglas CLIA (Clinical Laboratory Improvement Amendments) Regulacin Validacin de Mtodos (JCAHO, Joint Commission for Accreditation of Healthcare Organizations; CAP, College of American Pathologists ; COLA, Commission on Office Laboratory Accreditation)-Pruebas de moderada y alta complejidad (Non-Waived tests) modificados o desarrollados en el laboratorio, la validacin de los mtodos requiere:-Exactitud-Precisin-Sensibilidad analtica-Especificidad analtica, incluyendo el estudio de sustancias interferentes-Rango de los resultados analticos reportado por el mtodo -Intervalo de referencia (valores normales)-Cualquier otro parmetro requerido para el desempeo del mtodo

Reglas CLIA (Clinical Laboratory Improvement Amendments) Regulacin Validacin de Mtodos (JCAHO, Joint Commission for Accreditation of Healthcare Organizations; CAP, College of American Pathologists ; COLA, Commission on Office Laboratory Accreditation)-Pruebas moderada y alta complejidad (Non-Waived tests) modificados o desarrollados en el laboratorio Actividades a realizar por el laboratorio:-Comparacin de mtodos para estimar la inexactitud o sesgo. -Replicar muestra o control para estimar la imprecisin-Hacer estudio de linealidad para estimar el rango a reportar-Lmite de deteccin para estimar interferencias permanentes-Experimentos de recuperacin para estimar proporcin de interferencias-Obtener valores de referencia para estimar el intervalo de referencia

Mtodos Cualitativos y/o SemicuantitativosEn los laboratorios de anlisis se generan cada vez ms mediciones que dan respuesta rpidas de tipo cualitativo.Respuesta de tipo binario: Si / No .Presencia o ausencia de determinado analito.Presencia o ausencia de un determinado nivel del analito.Se denominan sistemas de screening.

Sistemas de ScreeningMuchas veces se utilizan como una etapa previa para luego realizar un anlisis cuantitativo.Evita anlisis cuantitativos a muestras que dan negativo.A nivel microbiolgico generalmente en identificacin bacteriana son diagnsticos y no presuntivos.

Anlisis cualitativoSistema de tamizaje(screening)AnlisiscuantitativoNo se analiza> 2 ng/mL< 2 ng/mLNOSIMenor experimentacin.Decisin rpida.De fcil manejo, porttiles, etc. Sin necesidad de equipos.Ahorro.

Presencia del analitoAusencia del analitoMtodo Confirmatorio

Sistemas de Medida CualitativosAnlisis cualitativo clsico o sensorial:Color: cambio, aparicin.Olor.Turbidez.ELISA.Crecimiento bacteriano.Deteccin instrumental:UV: fluorescencia, potenciometra.Sensores: qumicos, bioqumicos, etc.ELISA.

Anlisis cualitativo clsico o sensorialLa respuesta binaria SI / NO se obtiene directamente.En general la presencia del analito se determina por comparacin con un blanco. Pruebas bateras bioqumicasSe encuentran tambin las pruebas de Kits.Son dispositivos comerciales para pruebas concretas.Contienen todos los reactivos necesarios.Pueden contener algn instrumento sencillo.

Pruebas de kits:Ltex para serotipificar Streptococcus.Tiras de orina.Pruebas rpidas para meningitis bacterianas.API.Mtodo de CIM por microdilucin en microplacasCoaglutinacin.Mtodo ELISA rpido para deteccin C. difficile

Anlisis cualitativo clsico o sensorial

La determinacin se hace mediante una medida instrumental: Colorimetra.Fluoresencia.

La presencia o no de un determinado analito puede ser el nivel lmite de deteccin o a un nivel superior.Anlisis Cualitativo Sensorial

La respuesta instrumental que se obtiene se transforma en respuesta binaria SI/NO e implica un tratamiento de datos.Primero hay que establecer la respuesta instrumental: Valor de absorbancia para la concentracin correspondiente .Si el valor es superior la respuesta es Si.Ej. Mtodos automatizados para Hemocultivos.Ej. Mtodos automatizados para CIM.Ej. Estandarizacin automatizada a 0,5 MF.

Anlisis Cualitativo Sensorial

Mtodo de ELISA Mtodo Semicuantitativo.Se basan en una reaccin inmunolgica .La deteccin puede ser sensorial o instrumental.Ej. Bacterias: C. difficile, E. coli .Ej. Virus: Hepatitis, SIDA, Sarampin, etc.Ej. Parsitos: ChagasAutoinmunidad: ENA, AAN, DNA, etc.

Mtodos cualitativos tambin deben validarse.Validar consiste en verificar y documentar su validez a requisitos especficos.La validacin implica como etapa previa la definicin de los requisitos analticos o de calidad.Luego entonces la determinacin de estos requisitos.Los resultados se expresan diferente a los mtodos cuantitativos.

Validacin Mtodos Cualitativos

Mtodos Cualitativos Anlisis Cualitativo / screening

SI / NO Con probabilidad de error Tambin tiene dos valores el primero binario y el segundo es la probabilidad de error asociada a la decisin tomada. Se expresan en trminos probabilsticos.

Expresin de Resultados

Requisitos de Calidad

Mtodo CuantitativoMtodo CualitativoLinealidad. - Homogeneidad.Precisin: - Repetibilidad. - Reproducibilidad. - Robustez. Veracidad (exactitud).Incertidumbre.Limite de deteccin.Lmite de cuantificacin.Rango de cuantificacinSelectividad e Interferentes.Especificidad.Sensibilidad.Valor predictivo positivo (VPP).Valor predictivo negativo (VPN).Exactitud diagnstica.Lmite de corte (cut-off).Incertidumbre o regin de error.Lmite de deteccin.Robustez.

EspecificidadSe define como la capacidad o habilidad del sistema de detectar en forma exacta un analito en una matriz.Grado en que un mtodo se ve afectado por otros componentes de la muestra (interferencias) en su capacidad para detectar en forma nica un analito en particular en una matriz.Se expresa como probabilidad.

Proporcin de muestras sin el analito, cuyo mtodo es negativo: E = VN / (VN + FP)Especificidad (E)

Capacidad del mtodo para detectar la menor cantidad del analito particular en una matriz sin interferencia de otros analitos.Es la capacidad o habilidad del sistema de detectar muestras positivas cuando realmente son positivas.Se expresa como probabilidad.Concentracin de un analito necesaria para producir una unidad de cambio de lectura instrumental.

Sensibilidad

Proporcin de muestras que contiene el analito cuyo mtodo es positivo: S = VP / (VP+FN). Sensibilidad (S)

Falsos Negativos (FN)Desviacin negativa.El mtodo a validar da un resultado negativo y el mtodo de referencia da positivo.Corresponden a muestras que contienen uno o ms analitos por encima del valor lmite permitido y que en prueba de screening dan respuesta negativa.Se concluye con este resultado previo que la muestra no contiene el analito en los niveles fijados cuando si lo contiene.

Desviacin positivaCorresponden a aquellas muestras que realmente no contienen el analito en el nivel definido y que por Ej. la prueba de screening lo detecta.Se produce cuando el mtodo a validar proporciona un resultado positivo sin confirmacin y el mtodo de referencia da un resultado negativo.Falsos Positivos (FP)

Exactitud DiagnsticaProporcin de resultados correctos (verdaderos positivos + verdaderos negativos).Es el grado de concordancia entre el resultado obtenido en un ensayo y el valor de referencia que debiera obtenerse.

Proporcin de resultados correctos :ED = (VP+VN) / (VP+FP+VN+FN)Exactitud Diagnstica (ED)

Lmite de Corte o Cut-offLimite de cuantificacin??Nmero mnimo de microorganismos dentro de una variabilidad definida que pueden determinarse bajo las condiciones experimentales del mtodo evaluado.Aplicado a anlisis microbiolgicos cuantitativos.

Resultados mtodosLmite de Corte (cut-off)

Definiciones de Requisitos de CalidadValor del Lmite de Corte (cut-off). Valor de corte del mtodo, dado principalmente por el fabricante, sobre el cut-off resultados positivos y bajo cut-off, resultados negativos. Se basa en una dicotoma (presencia/ausencia, si/no, etc.).C= 2ng/mL

Definiciones de Requisitos de CalidadRegin de Incertidumbre. Corresponde a la imprecisin del mtodo, es un rango donde encontramos error Tipo I o (Falsos positivos) y Tipo II o (falsos negativos) del mtodo.C= 2ng/mL

Definiciones de Requisitos de CalidadRegin de Incertidumbre (*CLSI: EP12-A2):C50: Concentracin del analito donde se produce un 50% de resultados positivos y un 50% de resultados negativos.Intervalo C5 C95: Rango de concentraciones requeridas del analito donde a concentraciones < de C5, son resultados concretamente negativos y > C95 son concretos positivos.Verdaderamente Negativas.Verdaderamente Positivas.C50

Lmite de DeteccinCantidad mnima de analito que puede ser detectado en una muestra pero que no puede ser estimado con precisin o sea que no necesariamente es cuantificado en las condiciones del ensayo.Aplicado a anlisis microbiolgicos cualitativos.Los resultados se expresan como detectado / no detectado.

RobustezEfecto Matriz:Capacidad de un procedimiento de permanecer inalterado por pequeas pero deliberadas variaciones en los parmetros del mtodo y provee informacin de su comportamiento en la rutina.Identificar variables que pueden tener efectos significativos en la respuesta del mtodo.Analizar cada set en condiciones experimentadas dadas y determinar el efecto de cada cambio.Efectos congelado/descongelado, tiempos y temperaturas de incubacin, cambios pH, preparacin y conservacin de la muestra y reactivos.

Resumen Definiciones Requisitos de CalidadEspecificidad. Proporcin de muestras negativas (no reactivas) que son correctamente identificadas.Sensibilidad. Proporcin de muestras positivas o reactivas correctamente identificadas por la prueba.Falso Positivo. Probabilidad de que la muestra clasificada como negativa, d positiva por el mtodo.Falso Negativo. Probabilidad de que la muestra conocida como positiva, d negativa por el mtodo.Valor Predictivo Positivo. Probabilidad que tiene una muestra de ser realmente positiva, cuando el resultado de la prueba resulta reactivo.Valor Predictivo Negativo. Probabilidad que tiene una muestra de ser negativo, cuando el resultado de la prueba es no reactivo.Exactitud diagnstica analtica. Capacidad del mtodo para detectar correctamente los positivos y los negativos.

ObservacionesHay pruebas en las que tiene un impacto a nivel de Salud pblica adems de individual dar un resultado Falsos + o Falso -.Ej. VIHEn resistencia antibitica es de mayor impacto los falsos negativos, o sea informar como sensible cuando es resistente. De mayor trascendencia tambin en Falsos -: Hemocultivos, meningitis, resistencia antibitica, VIH, etc.

Mtodo ideal NormalEnfermoValores mtodoNo falsos positivos o negativosNr de individuos

Realidad mtodosNormal, sin el analitoEnfermo, con el analitoValores Mtodo+2SDFalsos NegativosFalsos PositivosNr de individuos

Resultados mtodosSin enfermedadCon enfermedadVerdaderos PositivosDefiniciones del ejemplo

Resultados mtodoSin enfermedadCon enfermedadFalsos PositivosDefiniciones del ejemplo

Resultados mtodosSin enfermedadCon enfermedadVerdaderos negativosDefiniciones del ejemplo

Resultados mtodoSin enfermedadCon enfermedadFalsos negativosDefiniciones del ejemplo

Evaluador de los requisitos de CalidadTablas de Contingencia. Diferencian las muestras en dos categoras, (+)/(-) segn el mtodo, y establecen una tabla de comparacin respecto del resultado obtenido mediante el criterio de exactitud diagnstica analtica.*CLSI: EP12-A2

Criterio de exactitud diagnsticaPrueba a EvaluarPOSITIVOSNEGATIVOSTotalPOSITIVOSVPFPVP + FP NEGATIVOSFNVNFN + VNTotalVP + FNFP + VNVP + FP +FN +VN

Tablas de ContingenciaLas mas simples son las que diferencian las muestras en dos categoras : positivo o negativo.Luego se establece una tabla de comparacin respecto al resultado obtenido con resultado de mtodo de referencia .A partir de la tabla se calculan los cuatro parmetros bsicos : falsos+, falsos-, sensibilidad y especificidad.

Ventajas:Son de fcil aplicacin en la mayora de los bioensayos.Desventajas:Dan una medida global de la capacidad del mtodo.Se estima que la muestra se comportar estadsticamente de forma similar a las ya analizadas.No se calcula una probabilidad de error en cada muestra en particular.La capacidad de la tabla depende del nmero de muestras analizadas.

Tablas de Contingencia

Teorema de Bayes. Calcula la probabilidad de dar verdadero (positivo o negativo) un resultado cuando en realidad lo es, vale decir, probabilidad que ocurra el evento A dado el evento B.P(VPP) = P(p/a)* P(a) /P(p/a)*P(a)+P(p/b)*P(b) P(VPN) = P(n/a)*P(a)/P(n/a)*P(a)+P(n/b)+P(b)

P(a): prob. de obtener un resultado positivoP(b): prob. de obtener un resultado negativoP(p/a): prob. de obtener un resultado (+) cuando esta presente la enfermedad.P(p/b): prob. de obtener un resultado (+) cuando no esta presente la enfermedad.Evaluador de los requisitos de Calidad

Curvas ROC (Receiver Operating Characteristic o Curvas de Operatividad Relativa). Se generan al evaluar las modificaciones en la sensibilidad y especificidad que son resultantes de la modificacin que se haga en los niveles de corte, de acuerdo al proceso de decisin clnica para un analito determinado.

* A. Pulido, I. Ruisnchez, R. Boqu , F.X. RiusEvaluador de los requisitos de Calidad

Sensibilidad vs. Especificidad.Sensibilidad vs. 1- Especificidad.

Chart3

2

6

35

74

93

98

99

100

100

100

ESPECIFICIDAD (Fraccin verdaderos negativos)

SENSIBILIDAD (Fraccin verdaderos positivos)

Sheet1

1009810098

1009410094

82658265

51265126

207207

8282

3131

2020

1010

0000

Sensitivity

2

6

35

74

93

98

99

100

100

100

Specificity

1002100

1006100

823582

517451

209320

8988

3993

21002

11001

01000

Sheet1

00

00

00

00

00

00

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00

00

1-SPECIFICITY (False Positive Fraction)

SENSITIVITY (True Positive Fraction)

Sheet2

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

SPECIFICITY (True Negative Fraction)

SENSITIVITY (True Positive Fraction)

Sheet3

Chart2

10098

10094

8265

5126

207

82

31

20

10

00

1-ESPECIFICIDAD (Fraccin falsos positivos, FFP)

SENSIBILIDAD (Fraccin verdaderos positivos)

Sheet1

1009810098

1009410094

82658265

51265126

207207

8282

3131

2020

1010

0000

Sensitivity

2

6

35

74

93

98

99

100

100

100

Specificity

Sheet1

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00

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00

00

00

1-SPECIFICITY (False Positive Fraction)

SENSITIVITY (True Positive Fraction)

Sheet2

Sheet3

Lectura de las Curvas ROC* http://ludwig-sun2.unil.ch/~darlene/module4/

PROTOCOLO DE VALIDACIN DE UN MTODO ANALTICO- Identificacin-Titulo-Protocolo redactado por-Protocolo aprobado por-Objetivo-Alcance-Factores crticos-Seleccin y tratamiento muestra y MRC-Identificacin equipo: certificado calibracin-Mtodo analtico: PON-Variables a determinar : anlisis estadstico-Personal que desarrollar la validacin-Criterio de aceptacin para cada parmetro de desempeo-Conclusiones-Registros-Referencias

INFORME DE VALIDACIN DE UN MTODO ANALTICO-Identificacin-Titulo-Informe redactado por-Informe aprobado por

-Objetivo-alcance-Responsabilidad-Equipo, materiales, documentos-Procedimiento-Clculos y anlisis estadsticos-Criterio de aceptacin vs Resultados-Informe de desviaciones-Informe resultados y conclusiones de validacin del mtodo

*