7/21/2019 Uriselect 4 63726_10_2009_ES

1/4

1

UriSelect4 63726 63727 - 64694AISLAMIENTO Y RECUENTO DE GRMENES URINARIOS IDENTIFICACIN DIRECTA DEEscherichia coli, Proteus, Enterococos

1. INTERS CLNICOUriSelect4 es un medio que permite: El aislamiento y el recuento de todos los grmenes

urinarios por un mtodo de siembra con bucle deinoculacin calibrado

La identificacin directa, mediante evidencia de lasactividades enzimticas, de las bacteriasresponsables ms frecuentemente de las infeccionesurinarias: Escherichia coli, Proteus, enterococos

Orientacin para el diagnstico de otros patogenosurinarios, en particular las enterobacterias del grupoK.E.S. (Klebsiella, Enterobacter, Serratia).

2. PRINCIPIO

La identificacin de E.coli se realiza destacando laactividad de 2 enzimas: la galactosidasa y latriptofanasa; la separacin por la galactosidasa delprimer substrato cromgeno contenido en este medioprovoca la coloracin rosa de las colonias

Las Proteus se caracterizan por una actividad TDApositiva; la Proteus mirabilisse identifica por su perfilde indol negativo

Los enterococos se revelan por la presencia de una glucosidasa (esculinasa); la separacin por estaenzima del segundo substrato cromgeno contenidoen el medio provoca una coloracin azul turquesa delas colonias.

MODO DE REVELAR LAS DIFERENTES ACTIVIDADES

ENZIMTICAS EspontneoPara la galactosidasa y la glucosidasa: coloracin delas colonias obtenida tras 18 a 24 horas de incubacin a37C:

Reaccinpositiva

Reaccinnegativa

-galaktosidase rosa

-glukosidase azul-turquesablanca o incolora

Espontneo o tras adicin de reactivo

Reaccin positiva Reaccinnegativa

TDA

coloracin marrn-anaranjada de lacolonia y de la gelosa Si lacoloracin es de intensidad dbil,aada 1 gota de percloruro dehierro en 1 colonia aislada:coloracin marrn-verdosa enalgunos segundos

ausencia decoloracin

Tras adicin de reactivoPara la triptofanasa (produccin de indol): Adicin de unagota de reactivo de Kovacs (o de James) sobre 1 coloniaaislada, directamente sobre la gelosa (vase: captulo 6.Utilizacin).

Reaccinpositiva

Reaccin negativa

Indol (Kovacs)

viraje a rosadel reactivo en15 segundosmximo

el reactivopermanece

incoloro,transcurridos15 segundos

Indol (James)

viraje a rojo dela colonia en 15segundos

mximo

ausencia de viraje dela colonia en15 segundos

3. PRESENTACIN Medio listo para usar:

- caja de 20 placas de Petri (90 mm) (URI4)cdigo 63726

- caja de 100 placas de Petri (90 mm) (URI4)cdigo 63727

Medio deshidratado : frasco de 500 g cdigo 64694

4. COMPOSICINUriSelect 4 es un medio en gelosa no selectivo,compuesto de: Una base nutritiva rica, que contiene 4

peptonas, lo que asegura el cultivo de todos los grmenesurinarios 2 substratos cromgenos para la deteccin de lasenzimas bacterianas: galactosidasa y glucosidasaTriptfano, para destacar la actividad de la triptofanasa(produccin de indol) y de la triptfano desaminasa (TDA).

Preparacin del medio:Homogeneice el polvo contenido en el frasco.Aada 56,8 gramos de medio deshidratado a un litro deagua destilada estri, agitando continualmente hasta quese obtenga una suspensin homognea (10 mn). Caliente,agitando con frecuencia, hasta hervir y que se consiga ladisolucin completa. Si es necesario, ajuste el pH a 7,3.Esterilice en el autoclave a 120C durante 15 minutosantes de dispensar en placas de Petri o frascos.

5. CONDICIONES DE CONSERVACIN - VALIDEZ Medio listo para usar : a +2-8C, protegido de la luz. Medio deshidratado: frasco cerrado hermticamente

en un lugar seco y fresco.La fecha de caducidad y el nmero de lote estn indicadosen el envasado.

7/21/2019 Uriselect 4 63726_10_2009_ES

2/4

2

6. UTILIZACINMaterial: Material suministrado: Medio UriSelect4 Material especfico no suministrado:

- Reactivo de Kovacs: frasco de 15ml (x2)cdigo 55313

Adems, el laboratorio deber disponer de pipetasestriles, de una estufa de 37C y de un recipiente para

desechos contaminados.

Toma de la orinaLa toma de la orina es una etapa importante del examencitobacteriolgico de la misma. Se recomienda efectuar elexamen de la orina de la maana.Para evitar cualquier contaminacin por la flora que viveen simbiosis, es indispensable proceder de la formasiguiente: En el caso del hombre: realizar una limpieza

cuidadosa del meato urinario y del glande consolucin de Dakin

En el caso de la mujer: no es necesario sondar. Unalimpieza minuciosa de los rganos genitales externoscon solucin de Dakin es suficiente. Es deseable

colocar un tampn vaginal, especialmente durante elperodo menstrual.

En ambos casos, debe eliminarse el inicio de la miccin yrecoger la orina del "chorro medio" en un recipiente estril. En el caso de lactantes: debe utilizarse un colector

estril de orina.Sembrar la orina en la hora siguiente a la toma. En casode no ser posible, conservar la orina a + 4C de forma quese evite cualquier proliferacin microbiana.

Siembra Utilizar un bucle de inoculacin calibrado de 10 l Sostener verticalmente el bucle y sumergirlo dentro

de la orina

Descargar el bucle realizando una estra sobre unradio de la caja: figura (1) Desde la parte alta del recipiente y sin recargar el

bucle, practicar estras apretadas sobre toda lasuperficie de la gelosa, perpendicularmente al radiotrazado al principio de la siembra: figura (2)

IncubacinIncubar la placa sembrada de esta forma de 18 a 24 horasen la estufa a 37C

7. LECTURA - INTERPRETACION RecuentoPasadas 18 a 24 horas de incubacin a 37C, secomparar la densidad de las colonias presentes en lamitad superior de la placa con la del esquema siguiente:

103 104 105 106 107

Un recuento de 104 grmenes/ml correspondefrecuentemente a una contaminacin. Sin embargo, talresultado debe interpretarse en funcin de la leucocituria ydel contexto clnico.Un recuento de 105 grmenes/ml correspondeprobablemente a una infeccin, siempre que se hayarealizado correctamente la toma.

IdentificacinEstablecer el diagnstico en funcin del color de lascolonias:

ROSAActividad galactosidasa positiva; hay sospecha de E.colique debe confirmarse mediante una investigacin de laproduccin de indol: Si el germen es indol : se trata de un E.coli Si el germen es indol : la identificacin se realizar

por un mtodo clsico.

Investigacin de la produccin de indol en el caso decultivo monomicrobiano Dejar caer directamente sobre la gelosa 1 gota de

reactivo de Kovacs sobre 1 colonia sospechosa bienaislada:- Si el reactivo vira al rosa en 15 segundos como

mximo, la bacteria es indol - Si el reactivo permanece incoloro tras 15

segundos, la bacteria es indol Dejar caer directamente sobre la gelosa 1 gota de

reactivo de James sobre 1 colonia sospechosa bienaislada:- Si la colonia vira al rojo en 15 segundos como

mximo, la bacteria es indol - Si la colonia permanece incolora tras 15 segundos,

la bacteria es indol En caso de cultivo polimicrobiano, practicar la

investigacin del indol segn la tcnica descrita en elprrafo 7 del captulo "OBSERVACIONES".

AZUL-TURQUESAActividad de glucosidasa positiva; realizar un examenmicroscpico: COCCI, con colonias de tamao pequeo ( = 0,5

1,5mm) INTENSAMENTE coloreadas en AZULTURQUESA: se trata de un enterococo

Si no se cumple una de estas condiciones, identificar elgermen por un mtodo clsico.

AZUL-VIOLETADoble actividad enzimtica galactosidasa y glucosidasa; realizar un examen microscpico: BACILOS, con colonias de gran tamao ( = 2,0

3,0mm) y color azul-violeta: fuerte presuncin debacteria perteneciente al grupo K.E.S. (Klebsiella Enterobacter Serratia); identificar por un mtodoclsico.

MARRN-ANARANJADOActividad TDA : se trata de una bacteria perteneciente algrupo Proteus-Providencia-Morganella. (Si la intensidad dela coloracin es dbil, la adicin de una gota de perclorurode hierro sobre una colonia reforzar la revelacin de laactividad enzimtica: viraje del reactivo al marrn-verdosoen algunos segundos).

7/21/2019 Uriselect 4 63726_10_2009_ES

3/4

3

Practicar la investigacin del indol: en caso de cultivomonomicrobiano :- dejar caer 1 gota de reactivo de Kovacs

directamente sobre 1 colonia de color marrn:. ausencia de viraje del reactivo en 15 segundos:

indol ; se trata de un Proteus mirabilis. viraje al rosa del reactivo en los 15 segundos

siguientes: indol ; se trata de un Proteus

indolgeno o de una Providencia o de unaMorganella: identificar de forma precisa por unmtodo clsico.

- dejar caer 1 gota de reactivo de Jamesdirectamente sobre 1 colonia de color marrn :. ausencia de viraje de la colonia en 15

segundos: indol ; se trata de un Proteusmirabilis

. viraje al rojo de la colonia en los 15 segundossiguientes: indol ; se trata de un Proteusindolgeno o de una Providencia o de unaMorganella: identificar de forma precisa por unmtodo clsico.

En caso de cultivo polimicrobiano, practicar lainvestigacin del indol segn la tcnica descrita en el

prrafo 3 del captulo "OBSERVACIONES".

BLANCO o INCOLOROIdentificacin por un mtodo clsico

Perfil de las bacterias ms frecuentemente aisladas

BACTRIAS COLNIASCARACTE-RSTICAS

COLOR-GALAC

TOSIDASE-GLUKOSIDASE

INDOL TDA

E.coli ROSA + - + -

Proteusmirabilis

MARRN-ANARANJADO

- - - +

Indol ProteusProvidenciaMorganella

MARRN-ANARANJADO

- - + +

EnterococcusAZUL-

TURQUESA- + - -

KES-enterobakt.

AZUL-VIOLETA +(-)*

+ +/- -

* Muy raramente, algunas cepas pertenecientes al grupoK.E.S. presentan una actividad galactosidasa dbil: elcolor de las colonias es en este caso intermedio entre elazul-violeta y el azul turquesa.

8. OBSERVACIONES

1. Galactosidasa Ms de un 99% de las cepas de E. coliposeen una

actividad galactosidasa Un pequeo porcentaje de cepas distintas a la E.coli

poseen una actividad galactosidasa y puedenaparecer de color rosa en este medio: se trata decepas aisladas rara vez en el curso de infeccionesurinarias (Salmonella, Shigella, estreptococosA) o decepas que pueden encontrarse en este tipo deinfecciones pero son indol (Citrobacter,estafilococos, estreptococoB).

2. Un porcentaje muy pequeo de cepas de E.colipresenta un perfil indol .

3. Glucosidasa Entre los estreptococos, nicamente los enterococos

expresan su carcter glucosidasa produciendocolonias intensamente

coloreadas en azul-turquesa Cualquier colonia decocci que presente una coloracin muy plida nodeber considerarse como un enterococo: deberidentificarse por un mtodo clsico (puede tratarse deestreptococos de los grupos A o B)

Algunas cepas de Proteus vulgaris y de Providenciarettgeri poseen una actividad glucosidasa y formancolonias azules sobre gelosa coloreada en marrn-anaranjado.

4. Galactosidasa + Glucosidasa

Por regla general, las bacterias que pertenecen algrupo K.E.S. poseen la doble actividad enzimtica galactosidasa y glucosidasa, lo que comporta unacoloracin azul-violeta de las colonias Sin embargo,ciertas cepas de este grupo pueden presentar unaactividad galactosidasa dbil: el color de lascolonias es en este caso intermedio entre el azul-violeta y el azul turquesa

Citrobacter diversusforma colonias de color azul-violeta que tienen un carcter indol .

7/21/2019 Uriselect 4 63726_10_2009_ES

4/4

4

5. La investigacin de la catalasa, de la oxidasa y de lasaglutinaciones por pruebas de ltex pueden realizarsedirectamente a partir de colonias aisladas en UriSelect4.

6. La identificacin por un mtodo clsico y el antibiogramapueden realizarse directamente en colonias tomadas enUriSelect4.

7. Mtodo para la investigacin de la produccin de indolen el caso de cultivo polimicrobiano:

- prueba de Kovacs: depositar de 1 a 3 coloniasmorfolgicamente homogneas sobre un disco depapel secante. Aadir una gota de reactivo deKovacs. Las bacterias que presentan un perfil indoldarn inmediatamente una coloracin rosaintensa. Si la reaccin es negativa (bacterias indol), no se observar ninguna coloracin.

- prueba DMACA: depositar de 1 a 3 coloniasmorfolgicamente homogneas sobre un disco depapel secante. Aadir una gota de reactivo deDMACA. Las bacterias que presentan un perfilindol darn una coloracin azul turquesa. Si lareaccin es negativa (bacterias indol ), no se

observar ninguna coloracin.

8. La Proteus penneri, especie aislada rara vez, presentaun perfil TDA , indol .

9. Cuando se reconstituye el medio deshidratado, algunosgranos residuales pueden quedar insolubles. La presenciade tales granos no modifica las performancias culturalesdel medio.

10.La interpretacin de los resultados del ensayo deberealizarse teniendo en cuenta el contexto clnico, el origende las muestras, los aspectos macro y microscpicos y,eventualmente, los resultados de otros ensayos.

9. CUALIDADES DE LA PRUEBAUn estudio clnico de prospeccin que utiliza los mediosUriSelect 4, UriSelect 3 y mtodos tradicionales dereferencia ha mostrado que: La deteccin de la actividad Galactosidasa en el

medio UriSelect 4 permite optimizar su sensibilidadpara la identificacin directa de E.colien comparacincon los medios cuyo funcionamiento est basado enla actividad Glucuronidasa. Durante la evaluacinclnica, de 107 cepas de E.coli, el medio de Galactosidasa (UriSelect 4) ha permitido laidentificacin directa de 105 cepas, mientras que elmedio de Glucuronidasa (UriSelect3) ha permitidola identificacin directa de solamente 102cepas.

El medio UriSelect 4 realiza una aportacin entrminos de contraste y legibilidad de los cultivos porsu color, por su opacidad y por la coloracin muyintensa de las colonias (en especial con Enterococcusfaecalis, E.coli y las bacterias del grupo K.E.S.). Poresto, la discriminacin de las diferentes especies seoptimiza en el seno de los cultivos polimicrobianos.

10. CONTROL DE CALIDAD DE LA PRUEBALos rendimientos de crecimiento del medio UriSelect4 severifican con las siguientes cepas (18 a 24 horas deincubacin a 37C) :

CEPAS COLONIASCARACTE-RSTICAS

FARVE

-GALAC

TOSIDASE

-GLUKO

SIDASE INDOL TDAE.coli

ATCC 25922ROSA + - + -

E.faecalisATCC 29212

AZUL-TURQUESA

- + - -

P.mirabilisATCC 25933

MARRN-ANARANJADO

- - - +

P.vulgarisATCC 13315

MARRN-ANARANJADO

- - + +

K.pneumoniaeATCC 13883

AZUL-VIOLETA

+ + - -

S.aureusATCC 25923

BLANCO - - - -

11. CONTROL DE CALIDAD DEL FABRICANTETodos los reactivos fabricados se elaboran segn nuestro

sistema de calidad, que va desde la recepcin de lasmaterias primas hasta la comercializacin final delproducto. Cada lote se somete a valoraciones de controlde calidad y sale al mercado slo cuando est de acuerdocon los criterios de aceptacin predefinidos. Los registrosrelativos a la produccin y al control de cada lote seconservan en Bio-Rad.

12. LIMITES DE USO1 Algunas cepas de estafilococos en ocasiones pueden

inhibirse en el medio UriSelect4.2 Es posible que algunas cepas muy raras de levadura

no se desarrollen en el medio UriSelect4.3 Para obtener colonias bien aisladas, cuando se

sospecha que hay una concentracin de grmenessuperior o igual a 107/ml, se recomienda o realizar unasiembra en dos cajas consecutivas sin recargar elbucle de inoculacin o diluir la orina antes delaislamiento.

4 Medio deshidratado : si se incuba durante ms de 24horas, una coloracin azul leve puede aparecer enalgunas colonias de Staphylococcus aureus.

13. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS1 James A.L., Yeoman P., 1987. Zbl. Bakt. hyg. A267.

188-193.2 Clarridge J.E., Pezzlo M.T., Vosti K.L., Cumitech 2A.

Laboratory diagnosis of urinary tract infections.

Coordinating ed. Weissfeld A.S., American Society forMicrobiology, Washington, D.C.3 Manafi M., Kneifel W., 1991. Acta Microbiologica

Hungarica. 38 (3-4). pp 293-304.

Bio-Rad

3, boulevard Raymond Poincar

92430 Marnes-la-Coquette France

Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00

Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33 10/2009