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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela Profesional de Enfermería

INFORME FINAL

VALIDACIÓN DEL EFECTO SEDATIVO, ANTIEDEMATIZANTE YTOXICIDAD DE Valeriana officinalis (Valeriana); Melissa

officinalis (Melisa); Thymus vulgaris (Tomillo); Foeniculumvulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o

Maracuyá) EN RATONES .

Blgo. JAVIER JESUS CARDENAS TENORIO

(Resolución Nº: 359-2011–R-Callao, 18 Abril 2011; del 01 de Abril 2011 al 31 de Julio del 2012)

LIMA – PERU

2012

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INDICE

Resumen ............................................................... 3

Introducción .......................................................... 4

Marco Teórico ....................................................... 7

Materiales y métodos........................................... 12

Resultados ........................................................... 18

Discusión ............................................................. 24

Referenciales........................................................ 27

Apéndice ................................................................ 30

Anexo ................................................................. 36

3

RESUMEN

Esta investigación se realizó con la finalidad contribuir al estudio

farmacológico de las plantas medicinales que son usadas popularmente por la

población Chalaca, para el tratamiento de enfermedades. Evaluar la actividad

sedante y reducción del edema con el extracto de Valeriana officinalis (Valeriana);

Melissa officinalis (Melisa); Thymus vulgaris (Tomillo); Foeniculum vulgare

(Hinojo); Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá) en ratones

Para llevar a cabo la investigación, se emplearon ratones albinos sepa BALB/c

(Mus musculus), con un peso de 22 a 24 g. Se evaluó el ensayo de la chimenea

actividad motora, ensayo de tabla agujereada o de curiosidad, la tracción, la

actividad edematica y la toxicidad. Un grupo control negativo, al cual se le

administró suero fisiológico; un grupo control positivo, a los que se les administro

Clorpromazina 5 mg/Kg de peso y veneno de Bothrops barnetti; y los grupos

experimentales a los que se les administró la infusión de la planta Valeriana

officinalis (Valeriana); Melissa officinalis (Melisa); Thymus vulgaris (Tomillo);

Foeniculum vulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá)

en dosis de 750mg/Kg y 1000mg/Kg de peso y un grupo que se les administró la

infusión de las plantas en dosis de 1g/Kg a 5 g/Kg de peso.

De acuerdo a los resultados obtenidos es posible concluir que los extractos de las

plantas a las dosis empleadas, no evidencia acción de tipo sedativo, ansiolítica,

inhibidor de la inflación. La Dosis Letal Media (DL50) en las dosis de 1g/Kg a

5g/Kg administradas por vía peritoneal, realizando observaciones durante 3 días.

Se estableció entonces que las plantas no son tóxicas a ninguna de las dosis

utilizadas.

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INTRODUCCION

Los antiguos peruanos han recurrido al uso de las plantas para curar o

aliviar sus enfermedades. Las propiedades curativas atribuidas algunas plantas,

eran la mayoría de veces acciones inexistentes, pero numerosas plantas usadas

con fines terapéuticos por nuestros antepasados, aun en la actualidad siguen

siendo utilizadas con mucha efectividad.

En estas últimas décadas la medicina tradicional ha tomado un gran auge,

debido al costo elevado de los medicamentos sintéticos y a los efectos

secundarios o adversos que la mayoría de ellos presenta.

Perú se caracteriza por poseer una muy amplia variedad de especies

vegetales de incalculable valor por sus propiedades nutritivas y curativas, por lo

que los peruanos recurren a las plantas para aliviar muchas de sus enfermedades

que les aquejan.

Como drogas tranquilizantes, se designan a las que tienen la propiedad de

relajar al paciente excitado, con poca tendencia al sueño, a dosis usuales y sin

alteración manifiesta de la conciencia.

La sedación es la atenuación de la hiperexcitabilidad nerviosa con el

relajamiento del paciente en individuos normales o neuróticos con cierta

disminución de la memoria y juicio, reduciéndose la actividad motora.

Las drogas que la producen se denominan sedantes, ya que disminuyen la

actividad, moderan la excitación y calman a quien la recibe.

En la actualidad como en cualquier parte del mundo, el problema de las

enfermedades de tipo nervioso ocupa los primeros lugares, representando ello una

preocupación de las autoridades para las autoridades de salud, ya que el consumo

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de tranquilizantes y estupefacientes por la población, ha incrementado

alarmantemente, como una forma de afrontar el estrés que produce la situación

económica, de violencia y de inseguridad que se vive en nuestra ciudad.

El presente trabajo se ha realizado dentro de la investigación básica.

El presente estudio nos permitió realizar una investigación inicial sobre el

efecto sedativo de las siguientes plantas Valeriana officinalis (Valeriana); Melissa

officinalis (Melisa); Thymus vulgaris (Tomillo); Foeniculum vulgare (Hinojo);

Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá) que son usados en nuestra la

región. La presente investigación tuvo como objetivos específicos evaluar la

acción tranquilizante y/o sedante, la actividad antiedematica y evaluar la actividad

toxica de las plantas Valeriana officinalis (Valeriana); Melissa officinalis (Melisa);

Thymus vulgaris (Tomillo); Foeniculum vulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor

de la Pasión o Maracuyá) que son usadas con frecuencia por la población, la

sedación es un proceso de relajación de estados de excitabilidad que presenta la

persona, la inflamación es una reacción local conectivo-vascular, provocado por

los componentes endógenos en respuesta a una injuria en el tejido. Sin embargo,

los componentes que inducen edema pueden alterar algunas funciones esenciales

en el organismo. Esta investigación es una alternativa en la utilización de plantas

medicinales que ayuden a la sedación o relajación del paciente y a reducir la

inducción del edema.

La importancia del uso de las plantas medicinales por la población en la

prevención o tratamiento de dolencias, es una modalidad terapéutica que es

utilizada mundialmente por largo tiempo, esto ha venido incrementándose en la

última década, ello debido al costo de los medicamentos , que ha obligado a

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muchos pobladores a buscar alternativas para curar sus enfermedades. Es por

esto que el uso de las plantas medicinales con fines terapéuticos, últimamente han

vuelto a adquirir importancia en nuestro país y localidad.

Por lo antes referido, se hace necesario que se realicen estudios

farmacológicos, para evaluar si las plantas medicinales poseen las propiedades

terapéuticas que popularmente se les atribuyen.

En el caso de Valeriana officinalis (Valeriana); Melissa officinalis (Melisa);

Thymus vulgaris (Tomillo); Foeniculum vulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor

de la Pasión o Maracuyá) en Perù y en la localidad no existen estudios

farmacológicos que validen las propiedades tranquilizantes y sedante o la acción

antiinflamatoria que popularmente se les atribuye, por lo que es necesario evaluar

si las plantas poseen dichos efectos.

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MARCO TEORICO

El uso de las plantas medicinales data desde los albores de la humanidad.

En el Perú, en 1937, el doctor Carlos Gutiérrez Noriega (1906-1948) inició el

estudio racional de las plantas con la hoja de coca y el cactus San Pedro.

Su discípulo, el doctor Vicente Zapata Ortiz (1914-1997) siguió la línea de

investigación con lo referente a la cocaína. A partir de 1955 se comenzó a evaluar

los efectos farmacológicos de otras plantas como la Veratrum sp., Rauwolfia sp.,

Calceolaria deflexa, Muehlenbeckia volcanica, Erythrina falcata, Trychocereus

pachanoi, Solanum sp., Peperomia galioides, Croton draconoide, Croton lechleri,

Sapindus saponaria, Uncaria tomentosa, Lepidium meyenii.

Apaza (2005) realiza la evaluación del efecto analgésico del Lupinus

mutabilis en comparación con la morfina. Para ello se utilizaron 5 grupos de

ratones machos albinos de aproximadamente 25 gramos de peso a los que se les

acondicionó en el Bioterio de la Facultad de Medicina y se les suministró alimento

y agua. Los animales fueron distribuidos en G1: Control negativo, G2: Lupinus

mutabilis, 300 mg/kg, G3: Lupinus mutabilis, 300 mg/kg + Naloxona, 5 mg/kg; G4:

Morfina, 10 mg/kg y G5: Morfina ,10 mg/kg+ Naloxona,5 mg/kg. Primero se

evaluaron los umbrales basales del dolor de los animales de experimentación, a

continuación se les administró por vía intraperitoneal las sustancias mencionadas

para cada grupo, realizándose el control a la ½ hora, 1 hora, 1 ½ hora, posteriores

a la administración, realizándose mediciones por triplicado. DE acuerdo a los

resultados, se observó un efecto analgésico similar al de la morfina,

evidenciándose el bloqueo por naloxona tanto en el grupo tratado con morfina

8

como en el tratado con Lupinus mutabilis a la ½ hora. Los datos fueron analizados

estadísticamente en el Programa GraphPad Prism y Excel XP.

Arana (2005) evaluó la Actividad Antiinflamatoria de Ananas sativus

(PIÑA) Y Cucurbita citrullus (SANDÍA). La presente investigación tuvo como

objetivo estudiar la actividad protectora antiinflamatoria de Ananas sativus y

Cucurbita citrullus por la técnica de edema subplantar por carragenina en ratas

albinas machos. Se usaron ocho grupos de ocho ratas a los cuales se les

administró distintas sustancias: G1: Control, G2: Diclofenaco, G3: Piña 250 mg/Kg,

G4: Piña 500 mg/Kg, G5: Piña 1000 mg/Kg, G6: 250 mg/Kg, G7: 500 mg/Kg y G8:

1000 mg/Kg, para luego administrarles la carragenina y apreciar el efecto

protector.

Los valores obtenidos para Ananas sativus y Cucurbita citrullus mostraron

ser estadísticamente significativos (p<0.05) por la prueba de ANOVA. Por un lado,

piña mostraba alta actividad a 250 mg/Kg, mientras la sandía incrementaba su

actividad a medida que se aumentaba la concentración. Sin embargo, con la

prueba de Scheffe, sólo se pudo comprobar dicha significancia para los valores de

piña 250 mg/Kg. A las otras dos concentraciones, se incrementó la inflamación,

indicando incluso una posible intoxicación producto de alguna sustancia no

identificada. Al examen fitoquímico, se encontraron flavonoides para ambas

plantas, lo cual demuestra que ambas plantas poseen actividad antiinflamatoria.

Posibles factores que hayan alterado la significancia estadística incluyen sesgo del

experimentador, sesgo instrumental y baja disponibilidad de animales de

experimentación.

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Ataca (2005) realizo la Comparación del Efecto Analgésico entre

HIPORURO y Morfina. Se realizó el presente estudio para evaluar el efecto

analgésico de Alchornea castaneifolia (Hiporuro), en comparación con Morfina. El

Método utilizado fue el “Plantar Test” o “Plancha Caliente”. Los animales de

experimentación fueron ratones albinos, a los cuales, se les evaluó previamente el

umbral del dolor basal, para posteriormente administrarles las sustancias

respectivas, por vía intraperitoneal, a las dosis de 100, 150 y 250 mg/kg de peso

para Hiporuro, de 10mg/kg de peso de Morfina y 5 mg/Kg de peso para Naloxona.

Utilizamos 70 ratones albinos distribuidos en siete grupos de diez animales cada

uno; se administraron los fármacos según el esquema siguiente: Grupo 1:

Hiporuro 100 mg/kg. Grupo 2: Hiporuro 150 mg/kg, Grupo 3: Hiporuro 250 mg/kg,

Grupo 4: Suero fisiológico 3 ml/kg, Grupo 5: Hiporuro 250 mg/kg + Naloxona

5mg/kg, Grupo 6: Morfina 10mg/kg, Grupo 7: Morfina 10 mg/kg + Naloxona

5mg/kg. El primer control se realizó 30 minutos después de la administración de

las sustancias mencionadas, seguida de dos mediciones con intervalos de 30

minutos para cada grupo. Con Hiporuro a 100mg/kg, 150 y 250, se produjo

aumento del umbral del dolor, destacando el efecto logrado por la mayor dosis

utilizada, con la cual se alcanzó el 50% del efecto analgésico correspondiente a la

morfina. La Naloxona, redujo el efecto analgésico tanto de la Morfina como el de

Hiporuro, lo que hace suponer que los mecanismos analgésicos podrían ser

similares

Brophy (2005) estudio la Dosis Efectiva Media (DE50) del efecto

Antiinflamatorio del Extracto Metanólico de Lupinus mutabilis S. en ratas.

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Se evaluó la Dosis Efectiva Media (DE50) del efecto antiinflamatorio del

extracto metanólico de las semillas de Lupinus mutabilis Sweet al 10% p/v. El

efecto antiinflamatorio, fue evaluado con la técnica de Winter y Sughisita (CYTED

1995); Para ello, utilizamos 40 ratas albinas, de ambos sexos, distribuidas

aleatoriamente en 5 grupos de 8 animales cada uno, a las cuales se les midió los

volúmenes normales de las patas derechas posteriores de las ratas en un

pletismómetro. Los extractos a ensayar se administraron por vía oral intragástrica

a las dosis de 100, 200, 400 y 500 mg/kg utilizando jeringas de 1 ml con agujas

adaptadas para ser usadas como sonda orogástrica. El vehículo utilizado fue agua

destilada denominándose control negativo. Media hora después de la

administración del extracto a las diferentes concentraciones se inyectaron 0.2 ml

de una solución acuosa al 2% de carragenina en la aponeurosis plantar derecha

de las ratas. La medida del volumen de la pata derecha inflamada se realizó por

inmersión en el agua que contenía el pletismómetro hasta el maleolo lateral,

realizando la medición a la 3 y 4 hora después del inicio del experimento, teniendo

en cuenta que la respuesta vascular máxima producida por carragenina ocurre

aproximadamente alrededor de las 4 horas y coincide con la fase mediada por las

prostaglandinas, calculando el porcentaje de inhibición de la inflamación por

diferencia entre los volúmenes de las patas medidas antes de la producción de la

inflamación y a los tiempos 3h y 4h, realizándose el análisis estadístico por

análisis de varianza para evaluar el efecto significativo entre los grupos tratados y

el control.

Se evidenció que con la dosis de 100mg/kg se produjo la máxima

inflamación es decir hubo una inhibición del 0% de inflamación y a las dosis de

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200, 400 y 500mg/kg se obtuvieron una inhibición del 35%, 72% y 80.4%

respectivamente. Obteniéndose una DE50 de 241 mg/kg de peso, con un límite

superior al 95% de 300.65 y un límite inferior de 193.233mg/kg.

A la dosis de 500 mg se observó algunas convulsiones y se produjo la

muerte en una de ellas posiblemente al alto contenido en alcaloides como:

esparteína, lupinina, entre otros, que tiene el extracto metanólico de las semillas

de Lupinus mutabilis S que al igual que otras plantas como la Digitalis purpurea

que es cardiotónica, presentan un bajo índice terapéutico, debiendo ser utilizadas

con precaución

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MATERIAL Y METODOS

- Material Biológico

- Recolección de Muestra.-

En la presente investigación, mi universo estuvo integrado por la infusión

de las hojas de Valeriana officinalis (Valeriana); Melissa officinalis (Melisa);

Thymus vulgaris (Tomillo); Foeniculum vulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor

de la Pasión o Maracuyá).

Se recolecto el material vegetal, se realizó la herborización de muestras en

el laboratorio de Bioquímica de la Facultad de Ciencias de La salud.

Se desecaron y trituraron las hojas de las plantas.

Se preparó una infusión al 10%: se peso 10 gramos del material vegetal

desecado, se agregó 100 ml de agua hirviendo, dejando reposar durante 30

minutos y luego se filtro

2. – EVALUACION FARMACOLOGICA DE LA ACCION TRANQUILIZANTE

Y/O SEDANTE.

2.1. ENSAYO DE LA CHIMENEA ACTIVIDA MOTORA:

Estudiada por Boissier & Simon (1962). (4)

Se emplearon ratones albinos sepa BALB/c (Mus musculus), con un peso

de 22 a 24 g. Cada ratón se colocó en un tubo de vidrio de 30 cm. de largo y un

diámetro interno apropiado al tamaño del animal. El experimento evaluó las

funciones de equilibrio y tono muscular del animal. Se usaron 6 ratones por cada

dosis usada.

- Grupo Nº 1: (testigo) recibieron por vía peritoneal, una suspensión

acuosa de solución fisiológica 30 minutos antes de realizar el ensayo.

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- Grupo Nº 2: Se administró clorpromazina 5mg/Kg de peso

respectivamente por vía intraperitoneal (ip), 30 minutos antes del

ensayo.

- Grupo Nº 3: Tratados con las plantas en estudio, se administro la

infusión de la planta por vía intraperitoneal, a dosis comprendidas entre

500 mg y 1000 mg/Kg de peso, 30 minutos antes del experimento.

PROCEDIMIENTO.

El tubo se coloca en posición horizontal, luego se introduce al ratón por la

boca del tubo, cuidando que la cabeza del animal esté hacia adelante,

empujándolo con la varilla de vidrio, hasta llegar al otro extremo, se coloca el tubo

en posición vertical e inmediatamente el ratón intentara subir en retroceso, se

anota el tiempo que tardara el animal en subir hasta la marca situada a 20 cm. de

la base del tubo.

EVALUACIÓN.

El resultado es positivo cuando el ratón logra pasar la marca trazada sobre

el tubo en menos de 30 segundos.

2.2. ENSAYO DE LA TABLA AGUJEREADA O DE LA CURIOSIDAD.

Estudiada por Boissier (1961) (4)

Consiste en medir la actividad del ratón colocado en una situación libre, en

un lugar constituido por una tabla cuadrada con 16 orificios, de 3 cm de diámetro

cada uno periódicamente introduce la cabeza en los agujeros, se determina el

número de agujeros explorados cada minuto, durante 5 minutos.

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Esta prueba, permite apreciar la curiosidad, la actividad exploratoria y

eventualmente la ansiedad, por lo cual estos efectos permiten seguir la relación de

exploración comportamiento y curiosidad del ratón.

PROCEDIMIENTO.

- Grupo Nº 1: (testigo) recibió por vía oral (vo), suspensión de solución

fisiológica 30 minutos antes del experimento.

- Grupo nº2: tratados con clorpromazina 5mg/Kg de peso respectivamente

por vía intraperitoneal (ip), 30 minutos antes del ensayo.

- Grupo Nº 3: se trato con la planta en estudio, se administro la infusión por

vía intraperitoneal, dosis comprendidas entre 700 mg y 1 000 mg/Kg de peso, 30

minutos antes del experimento.

El ensayo consiste en colocar al ratón en el centro de la tabla, se cuenta el

número de agujeros explorados, y se anotan éstos al término de cada minuto,

durante 5 minutos.

EVALUACION.

El resultado es positivo cuando el número de agujeros explorados por el

animal tratado con la infusión, disminuye hasta acercarse o igualarse al tratado

con clorpromazina.

2.3. ENSAYO DE LA TRACCION.

Estudiado por Courvoisier (4,5)

Se usaron ratones albinos de sepa sepa BALB/c (Mus musculus) de un

peso de 22 a 24 g.

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PROCEDIMIENTO

- Grupo Nº 1: (testigo) recibió por vía oral, suspensión de solución

fisiológica 30 minutos antes del experimento.

- Grupo nº2: tratados con clorpromazina 5mg/Kg de peso respectivamente

por vía intraperitoneal (ip), 30 minutos antes del ensayo.

- Grupo Nº 3: se trato con la planta en estudio, se administro la infusión por

vía intraperitoneal, dosis comprendidas entre 700 mg y 1 000 mg/Kg de peso, 30

minutos antes del experimento.

El ensayo consiste en tomar al ratón por la piel del lomo o por la cola,

haciéndolo agarrarse del hilo de metal con las patas anteriores, después se suelta

y el ratón en condiciones normales, efectúa el restablecimiento llevando las patas

posteriores a tocar el hilo metálico, en menos de 3 segundos.

3.- Ensayos Biológicos.

- Medida de la Formación del edema.

La actividad de formación de edema usando el veneno se realizo de

acuerdo al Método de Yamakawa et al. (1976). Los ratones sepa BALB/c (Mus

musculus) fueron inyectados en la almohadilla plantar de la pata derecha con 50 ul

de solución salina conteniendo 10 µg de veneno de Bothrops barnetti y la misma

solución salina inyectada en la pata contraria. Los ratones fueron sacrificados con

una sobre dosis de éter y ambas patas removidas a la altura tibio- tarsal y

pesadas. El valor del edema es la diferencia de peso entre la pata inyectada con

veneno y la inyectada con salina.

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- Efecto de fármacos y extracto de planta en la inhibición del edema por

el veneno.

Se evaluó el efecto preventivo y reductor de la Indometacina (5mg/Kg) y

Dexametasona (1mg/Kg) y el extracto hidroalcoholico de plantas utilizando el

método de Yamakawa et al.(1976), empleando ratones albinos.

Se prepararon grupos de 6 ratones albinos machos de 20 a 22 g de peso a

los cuales se les inoculo por vía subcutánea dosis de fármacos y el extracto

hidroalcoholico de las plantas, para realizar los estudios que a continuación se

indican:

a) Estudio de prevención de formación de edema inducido por la secreción

glandular de Bothrops barnetti: Una hora o 30 min. antes de la aplicación del

veneno se inoculo por vía subcutánea Dexametasona 1mg/Kg, Indometacina

5 mg/Kg, y el extracto hidroalcoholico de las plantas.

b) Estudio de reducción del edema inducido por la secreción glandular de

Bothrops barnetti: Se inoculo el veneno y después de 30 minutos o 1 hora se

inoculo por vía subcutánea Dexametasona 1mg/Kg, Indometacina 5 mg/Kg, y

el extracto hidroalcoholico de las plantas respectivamente. Para evaluar el

edema se medido dentro de las 2 horas de haberse administrado el veneno.

En cada uno de los experimentos se contara con su grupo control

respectivo.

4.- ESTUDIO DE LA TOXICIDAD AGUDA DL50

La metodología empleada para el cálculo de DL50 es descrita por Sperman

y Karber (19). Se utilizaron 5 grupos de 6 ratones albinos sepa BALB/c (Mus

musculus) de 22 a 20 g de peso, sometidos a dieta líquida Ad Libitum 24 horas

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antes del experimento. Las plantas en estudio fueron administradas por vía

peritoneal a dosis de 1 a 5 g de plantas/Kg de peso corporal. Los animales se

mantuvieron bajo observación durante 3 días después del tratamiento, y en caso

de fallecimiento se calcula el periodo de vida media

- Método Estadístico

Se uso la t de Student.

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RESULTADOS

El ensayo de la chimenea podemos medir el equilibrio y tono muscular de

los ratones luego de la administración de (Cuadro N° 1) de las dosis de planta y

ninguno disminuye la motricidad comparado con el control (clorpromazina de ellas

reduce la actividad de los ratones en estudio), manteniendo su actividad los

ratones.

En el ensayo de la tabla agujereada se evalúa la reacción de exploración,

curiosidad y ansiedad de los ratones, las infusiones a las dosis de 700 mg/Kg y

1000mg/Kg de peso no se ven alteradas en dicha actividad (Cuadro N° 2)

En la prueba de tracción se observa que los ratones no sufren ninguna alteración

a las diferentes dosis de las plantas, ya que estos se sujetan usando el tren

posterior y delantero al hilo metálico (Cuadro N° 3)

La inducción del edema por el veneno de Bothrops barnetti no es modificado por la

el extracto de las plantas, aun cuando se aplicó 30 minutos antes y después de la

inoculación del veneno, observándose la progresión del edema hasta exceder el

100% de la pata inoculada (Cuadro N° 4).

La DL50 de las diferentes concentraciones de las plantas no muestran ser letales

para los ratones (Cuadro N°5).

La prueba de T-Student (p>0, 05) realizada a las diferentes pruebas sale no

significativo.

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Cuadro N° 1. Ensayo de la Chimenea Actividad Motora usando el extracto de

Valeriana officinalis (Valeriana); Melissa officinalis (Melisa); Thymus vulgaris

(Tomillo); Foeniculum vulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o

Maracuyá).

PLANTA DOSIS N° RATONES SEDADOSControl 0

Clorpromazina 5 mg/Kg 6Valeriana A 0

B 1Melisa A 0

B 0Tomillo A 0

B 0Hinojo A 0

B 0Maracuyá A 0

B 0Se emplearon ratones albinos sepa BALB/c (Mus musculus), con un peso de 22 a 24 g.

seis ratones por dosis de Valeriana officinalis (Valeriana) 500 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B);

Melissa officinalis (Melisa) 500 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B); Thymus vulgaris (Tomillo) 500

mg/kg (A), 1000mg/Kg (B); Foeniculum vulgare (Hinojo) 500 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B);

Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá) 500 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B). Para

analizar los resultados 1 esta sedado y 0 no esta sedado el ratón. (Cárdenas, T. 2012)

20

Cuadro N° 2. Ensayo de la Tabla Agujereada usando el extracto de Valeriana

officinalis (Valeriana); Melissa officinalis (Melisa); Thymus vulgaris (Tomillo);

Foeniculum vulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá).

PLANTA DOSIS N° AGUJEROSEXPLORADOS

Control 35Clorpromazina 5 mg/Kg 4

Valeriana A 32B 28

Melisa A 33B 29

Tomillo A 31B 30

Hinojo A 33B 35

Maracuyá A 28B 33

Se emplearon ratones albinos sepa BALB/c (Mus musculus), con un peso de 22 a 24 g.

seis ratones por dosis de Valeriana officinalis (Valeriana) 500 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B);

Melissa officinalis (Melisa) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B); Thymus vulgaris (Tomillo) 700

mg/kg (A), 1000mg/Kg (B); Foeniculum vulgare (Hinojo) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B);

Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B).

(Cárdenas, T. 2012)

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Cuadro N° 3. Ensayo de la Tracción usando el extracto de Valeriana officinalis

(Valeriana); Melissa officinalis (Melisa); Thymus vulgaris (Tomillo); Foeniculum

vulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá).

PLANTA DOSIS N° RATONESsegundos

Control 2Clorpromazina 5 mg/Kg 5

Valeriana A 2B 1.5

Melisa A 1B 1

Tomillo A 2B 2

Hinojo A 2B 1

Maracuyá A 1.3B 1.7

Se emplearon ratones albinos sepa BALB/c (Mus musculus), con un peso de 22 a 24 g.

seis ratones por dosis de Valeriana officinalis (Valeriana) 500 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B);

Melissa officinalis (Melisa) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B); Thymus vulgaris (Tomillo) 700

mg/kg (A), 1000mg/Kg (B); Foeniculum vulgare (Hinojo) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B);

Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B).

(Cárdenas, T. 2012)

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Cuadro N° 4: Actividad antiedematizante del extracto de Valeriana officinalis

(Valeriana); Melissa officinalis (Melisa); Thymus vulgaris (Tomillo); Foeniculum

vulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá) inducido por

el veneno de Bothrops barnetti “sancarranca”

Muestra Edema aB. barnetti 1.09±0.04

Control B. barnetti 38,25%Valeriana A 42,16%

B 45,66%Melisa A 52,32%

B 47,06%Tomillo A 49,22%

B 52,67%Hinojo A 53,09%

B 51,47%Maracuyá A 47,76%

B 51,36%

Se emplearon ratones albinos sepa BALB/c (Mus musculus), con un peso de 22 a 24 g.

seis ratones por dosis de Valeriana officinalis (Valeriana) 500 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B);

Melissa officinalis (Melisa) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B); Thymus vulgaris (Tomillo) 700

mg/kg (A), 1000mg/Kg (B); Foeniculum vulgare (Hinojo) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B);

Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B).

a La actividad edematizante se expresa en términos de dosis minina edematizante (MED),

se define como la cantidad de veneno (ug) que induce el incremento en el 30% del

volumen de la pata inyectada cuando se compara con la pata control. (Cárdenas, T.J.

2012)

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Cuadro N° 5. Toxicidad Aguda DL50 Infusión de las hojas de Valeriana officinalis

(Valeriana); Melissa officinalis (Melisa); Thymus vulgaris (Tomillo); Foeniculum

vulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá).

DOSIS N° ratones muertos 72 Hrs1g/Kg pesos 6/02g/Kg pesos 6/03g/Kg pesos 6/04g/Kg pesos 6/05g/Kg pesos 6/0

La letalidad DL50 fue determinada usando 5 grupos de 6 ratones albinos sepa BALB/c

(Mus musculus) de 22 a 20 g de peso, sometidos a dieta líquida Ad Libitum 24 horas

antes del experimento. 6/0 seis ratones ninguno muerto (Cárdenas, T. 2012)

24

DISCUSION

El empleo de las plantas medicinales con fines curativos cada día va en aumento

lo que hace necesaria la validación de las especies vegetales que poseen

propiedades terapéuticas y ampliar nuestro conocimiento en el empleo de los

productos que de ellas se extraen. Los diferentes remedios a base de plantas

medicinales presentan una inmensa ventaja con respecto a los tratamientos

químico. En las plantas los principios activos se hallan siempre biológicamente

equilibrados por la presencia de sustancias complementarias, que van a

potenciarse entre si, pero también no debemos olvidar que decir natural no es

indicativo de inocuo, ya que las plantas pueden ser toxicas si son empleadas

inadecuadamente.

En la presente investigación, trabajamos con cinco especies de plantas

medicinales que la población la suele usar como sedante o relajante, como el

caso de la valeriana que es de conocida referencia en el uso de tener acción

sedativa o inductora del sueño, en el modelo experimental se observa que no

están relacionadas con dicha propiedad, lo que se pudo observar en las plantas es

la acción de reducir los dolores inducidos por el veneno esto por una aplicación

por vía peritoneal. En nuestro experimento Melissa officinalis no reporta acción

sedativa o relajante, Ruiz, 2004 reporta que la tintura estudiada de M. officinalis. al

20 % mostró una acción antiespasmódica, se manifestó con dosis-dependiente en

25

incremento constante, la Melissa actúa de forma inespecífica frente a los

contracciones inducidas por diferentes espasmógenos.

Villegas (1997) reporta que a dosis de 0.1- 1 mg/g de peso de ratón

administrado por i.p. Peperonia galioides, Himatanthus sucumba, Eleuthrine

bulbosa y Anredera diffusa no presentan actividad toxica, similar a lo que

reportamos con las plantas estudiadas, pero hay plantas como Anredera difusa

refiere que tiene una DL50 de 2.18 mg/g de ratón. Los extractos estudiados de

Valeriana officinalis (Valeriana); Melissa officinalis (Melisa); Thymus vulgaris

(Tomillo); Foeniculum vulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o

Maracuyá).sugieren que no son tóxicos, ello podría ser debido a la ausencia o

concentración muy baja de alcaloides los que le suelen conferir toxicidad a las

especies vegetales.

En relación al Foeniculum vulgare, ensayos realizados en laboratorios

mostraron actividades insecticidas, antifúngicas, digestivas, carminativas y

espasmolíticas. Un estudio aleatorizado, doble ciego mostró que cólicos en

lactantes mejoran en una semana de tratamiento con un extracto con base

Chamomilla recutita, Foeniculum vulgare y Melissa officinalis (Savino,2005), lo que

confirma lo encontrado por nosotros, ya que Tomillo, Hinojo solo tendrían acción

sobre musculatura lisa y no en el sistema nervioso.

En referencia a Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá) en nuestra

evaluación no presenta acción sedativa, ello al usar las hojas, la acción sedativa

debería ser evaluada solo con flores por la composición de estas podrían ser los

que presenten la actividad sedativa.

26

En conclusión, Valeriana officinalis (Valeriana); Melissa officinalis (Melisa);

Thymus vulgaris (Tomillo); Foeniculum vulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor

de la Pasión o Maracuyá) no inducen el efecto sedativo, antiedematizante y no

manifiestan una toxicidad marcada lo cual permita su uso frecuente.

Observándose que los ratones aumentan su diuresis y se reducen los espasmos

digestivos que presentan al inocularse el veneno de Bothrops barnetti.

27

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30APENDICE

31

Cuadro N° 1. Ensayo de la Chimenea Actividad Motora usando el extracto de

Valeriana officinalis (Valeriana); Melissa officinalis (Melisa); Thymus vulgaris

(Tomillo); Foeniculum vulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o

Maracuyá).

PLANTA DOSIS N° RATONES SEDADOSControl 0

Clorpromazina 5 mg/Kg 6Valeriana A 0

B 2Melisa A 0

B 0Tomillo A 0

B 0Hinojo A 0

B 0Maracuyá A 0

B 0Se emplearon ratones albinos sepa BALB/c (Mus musculus), con un peso de 22 a 24 g.

seis ratones por dosis de Valeriana officinalis (Valeriana) 500 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B);

Melissa officinalis (Melisa) 500 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B); Thymus vulgaris (Tomillo) 500

mg/kg (A), 1000mg/Kg (B); Foeniculum vulgare (Hinojo) 500 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B);

32

Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá) 500 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B).

(Cárdenas, T. 2012)

Cuadro N° 2. Ensayo de la Tabla Agujereada usando el extracto de Valeriana

officinalis (Valeriana); Melissa officinalis (Melisa); Thymus vulgaris (Tomillo);

Foeniculum vulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá).

PLANTA DOSIS N° AGUJEROSEXPLORADOS

Control 35Clorpromazina 5 mg/Kg 4

Valeriana A 32B 28

Melisa A 33B 29

Tomillo A 31B 30

Hinojo A 33B 35

Maracuyá A 28B 33

Se emplearon ratones albinos sepa BALB/c (Mus musculus), con un peso de 22 a 24 g.

seis ratones por dosis de Valeriana officinalis (Valeriana) 500 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B);

Melissa officinalis (Melisa) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B); Thymus vulgaris (Tomillo) 700

mg/kg (A), 1000mg/Kg (B); Foeniculum vulgare (Hinojo) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B);

33

Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B).

(Cárdenas, T. 2012)

Cuadro N° 3. Ensayo de la Tracción usando el extracto de Valeriana officinalis

(Valeriana); Melissa officinalis (Melisa); Thymus vulgaris (Tomillo); Foeniculum

vulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá).

PLANTA DOSIS N° RATONESsegundos

Control 2 sgClorpromazina 5 mg/Kg 1

Valeriana A 0B 0

Melisa A 0B 0

Tomillo A 0B 0

Hinojo A 0B 0

Maracuyá A 0B 0

34

Se emplearon ratones albinos sepa BALB/c (Mus musculus), con un peso de 22 a 24 g.

seis ratones por dosis de Valeriana officinalis (Valeriana) 500 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B);

Melissa officinalis (Melisa) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B); Thymus vulgaris (Tomillo) 700

mg/kg (A), 1000mg/Kg (B); Foeniculum vulgare (Hinojo) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B);

Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B). Para

analizar los resultados 1 esta sedado y 0 no esta sedado el ratón. (Cárdenas, T. 2012)

Cuadro N° 4: Actividad antiedematizante del extracto de Valeriana officinalis

(Valeriana); Melissa officinalis (Melisa); Thymus vulgaris (Tomillo); Foeniculum

vulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá) inducido por

el veneno de Bothrops barnetti “sancarranca”

Muestra Edema aB. barnetti 1.09±0.04

Valeriana A 0B 0

Melisa A 0B 0

Tomillo A 0B 0

Hinojo A 0B 0

Maracuyá A 0B 0

Se emplearon ratones albinos sepa BALB/c (Mus musculus), con un peso de 22 a 24 g.

seis ratones por dosis de Valeriana officinalis (Valeriana) 500 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B);

Melissa officinalis (Melisa) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B); Thymus vulgaris (Tomillo) 700

35

mg/kg (A), 1000mg/Kg (B); Foeniculum vulgare (Hinojo) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B);

Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá) 700 mg/kg (A), 1000mg/Kg (B).

a La actividad edematizante se expresa en términos de dosis minina edematizante (MED),se define como la cantidad de veneno (ug) que induce el incremento en el 30% delvolumen de la pata inyectada cuando se compara con la pata control. (Cárdenas, T.J.2012)

Cuadro N° 5. Toxicidad Aguda DL50 Infusión de las hojas de Valeriana officinalis

(Valeriana); Melissa officinalis (Melisa); Thymus vulgaris (Tomillo); Foeniculum

vulgare (Hinojo); Passiflora incarnata (Flor de la Pasión o Maracuyá).

DOSIS N° ratones muertos 72 Hrs1g/Kg pesos 02g/Kg pesos 03g/Kg pesos 04g/Kg pesos 05g/Kg pesos 0

La letalidad DL50 fue determinada usando 5 grupos de 6 ratones albinos sepaBALB/c (Mus musculus) de 22 a 20 g de peso, sometidos a dieta líquida AdLibitum 24 horas antes del experimento. (Cárdenas, T. 2012)

36

ANEXO

37

The venom of Bothrops asper from Guatemala: Toxic activitiesand neutralización by antivenoms

Patricia Saravia, Ermilia Rojas, Teresa Escalante, Viviana Arce, Esteban Chaves,Ruben Velásquez, Bruno Lomonte, Gustavo Rojas, Jose María Gutierrez

Toxicon 39(2001) 401 – 405.

Table 1: Toxic activities induced by B. asper from Guatemala and their

neutralization by two antivenoms a

Effect Activity Neutralization (effective Dose 50%), ulantivenom/mg venom c

ICP antivenom MYN antivenomLethal (LDL50;ug/muse) c

56.8(44.5 – 72.4) 342 (224-465) 934 (448-1053)

Hemorrhagic (MHD;ug) d

11 ± 3 175± 37 272±38 *

Myotoxic (MMD;ug) e 13±3 555±159 458±117Coagulant (MCD;ug) f 3.9± 0.08 133±8 723±14*Defibrinating (MDD;ug)g

2.5 1000 2000*

Edema-forming(MED;ug) h

1±0.1 1482±120 1837±152*

Phospholipase A2(uEq/mg.min) i

24±2 1268±182 2352±225*

Indirect hemolytic(MHeD;ug)

7.6±0.01 1427±50 2472±102*

38

a Except for lethality resuls are presented as mean ± SD (n=4), *p < 0.05 when the twoantivenoms are compared.b Effective Dose 50% defined as the ratio ul antivenom/mg venom at which the effect isreduced by 50%. In the case of coagulant and defibrinating activities, neutralization isexpected as effective Dose (Gene et al ., 1989).c Lethalyti was determined in 16-18 g mice by the intraperitoneal route; 95% confidencelimits are included.d MHD (Minimum Hemorrhagic Dose): amount of venom inducing a hemorrhagic area of 10mm diameter, 2 h after intradermal injection in mice.e MMD (Minimum Myotoxic Dose): amount of venom that 3 h after i.m. injection, induces anincrement in plasma CK activity corresponding to four times the CK activity of miceinjected with PBS.f MCD (Minimum Coagulant Dose): amount of venom which induces coagulant of citratedhuman plasma in 60 s.g MMD (Minimum Defibrinating Dose): minimum amount of venom that renders bloodunclottable 1 h after i.v. injection in mice.