UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS...
76
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS MODALIDAD: INVESTIGACIÓN TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO PARA OPTAR POR EL GRADO DE QUÍMICOS Y FARMACÉUTICOS TEMA: “EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD INHIBITORIA DE LA ENZIMA ALFA GLUCOSIDASA CON EXTRACTOS DE HOJAS DE GUAYABA (Psidium guajava L.)” AUTORES: CÉSPEDES GUZMÁN MARÍA DEL CISNE ESTRADA CADENA PAUL JEFFERSON TUTORA: QF MARÍA ELENA JIMÉNEZ, MSc CO-TUTORA: QF MARÍA DEL CARMEN VILLACRÉS, PhD GUAYAQUIL – ECUADOR 2019
Transcript of UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS...
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
MODALIDAD: INVESTIGACIÓN
TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO PARA OPTAR POR EL GRADO DE QUÍMICOS Y FARMACÉUTICOS
TEMA: “EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD INHIBITORIA DE LA ENZIMA
ALFA GLUCOSIDASA CON EXTRACTOS DE HOJAS DE
GUAYABA (Psidium guajava L.)”
AUTORES:
CÉSPEDES GUZMÁN MARÍA DEL CISNE
ESTRADA CADENA PAUL JEFFERSON
TUTORA: QF MARÍA ELENA JIMÉNEZ, MSc
CO-TUTORA: QF MARÍA DEL CARMEN VILLACRÉS, PhD
GUAYAQUIL – ECUADOR 2019
I FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA QUÍMICA Y FARMACIA
UNIDAD DE TITULACIÓN
FICHA DE REGISTRO DE TESIS/TRABAJO DE GRADUACIÓN
TÍTULO Y SUBTÍTULO: “EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD INHIBITORIA DE LA ENZIMA ALFA
GLUCOSIDASA CON EXTRACTOS DE HOJAS DE GUAYABA (Psidium guajava L.)”
AUTOR (ES) (Apellidos/Nombres): CÉSPEDES GUZMÁN MARÍA DEL CISNE ESTRADA CADENA PAÚL JEFFERSON
DOCENTE TUTOR Y DOCENTE REVISOR (Apellidos/Nombres):
Q.F MARÍA ELENA JIMÉNEZ HEINERT, M.Sc Q.F FRELLA SORAYA GARCÍA LARRETA, Mgs
INSTITUCIÓN: UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
UNIDAD/FACULTAD: FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
MAESTRÍA/ESPECIALIDAD:
GRADO OBTENIDO: TERCER NIVEL- QUIMICOS Y FARMACÈUTICOS
FECHA DE PUBLICACIÓN: SEPTIEMBRE-2019 No. DE PÁGINAS: 76
ÁREAS TEMÁTICAS: INVESTIGACIÓN
PALABRAS CLAVES/ KEYWORDS: α-GLUCOSIDASA, DIABETES, Psidium guajava L, CONTROL POSITIVO.
RESUMEN/ABSTRACT
El tipo de diabetes más frecuente es de tipo 2, la Organización Mundial de la Salud pronóstica que
será la séptima causa de muerte para el año 2030. La α-glucosidasa, una hidrolasa del intestino
delgado, transforma almidón y carbohidratos en glucosa al reaccionar con los enlaces 1-4 durante la
digestión. En el presente trabajo el objetivo es evaluar la actividad inhibitoria de la enzima α -
glucosidasa en extractos de hojas de Psidium guajava L, para ellos se realizaron pruebas y se
determinaron que solidos totales se encuentra dentro del rango establecido por NTE INEN 1911
(2009), además que en ambos extractos mediante un ensayo in vitro presentó fuerte inhibición sobre
la enzima apoyando la hipótesis planteada, entre los resultados obtenidos, se dieron pequeñas
variaciones entre los extractos y variedades estudiadas, esto pudo ser por las condiciones, factores
climáticos, o el tipo de extracción.
ADJUNTO PDF: SI
NO
CONTACTO CON AUTOR/ES: Teléfono: 0983733200
0978628295
E-mail: [email protected] [email protected]
CONTACTO CON LA INSTITUCIÓN:
Nombre: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
Teléfono: (04) 2293680
E-mail: : www.fcq.ug.edu.ec
X
II
III
IV
V FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA QUÍMICA Y FARMACIA
UNIDAD DE TITULACIÓN
VI
VII
VIII
IX
X
XI
XII
Dedicatoria
A mi padres Ing. Ángel Céspedes y Lcda. Janneth Guzmán, porque el
trabajo de 22 años hoy rinde uno de sus frutos. ¡Madre Dios, tú y yo
sabemos cuánto costó hacer realidad este sueño! A mi hermana Geanella
Céspedes Guzmán, cuñado Dr. Daniel Rivera Robles y a mis sobrinos
Daniella Rivera Céspedes y Duval Aguirre Valdiviezo por ser ese apoyo
incondicional para cumplir mis sueños y nunca dejarme derrumbar.
A toda mi familia: mis abuelitos (Papi Olmedo y Mami Yoli), tías/os
(Marisol, Talita y Fernando), primas/os, padrinos (Dra. Gabriela Aguirre, Q.F
Duval Aguirre y Gianela Valdiviezo Carvajal), porque su apoyo es el motor
de mis esfuerzos y presencia el motivo de mi alegría.
A Dios, porque en Él descubrí que “en la vida lo que realmente nos
cuesta, es lo que más se aprecia”
Autora: María del Cisne Céspedes Guzmán
XIII
Dedicatoria
Son muchas las personas que han contribuido al proceso y conclusión de
esta meta. El presente trabajo está dedicado principalmente a Dios, por
haberme dado la vida y permitirme el haber llegado hasta este momento tan
importante de mi formación profesional, a mi familia por haber sido mi apoyo a
lo largo de toda mi carrera universitaria y a lo largo de mi vida. A mi novia que
me ha acompañado en esta etapa, aportando a mi formación tanto profesional
y como ser humano. A la Dra. María del Carmen Villacrés, principal colaborador
durante todo este proceso, quien con su dirección, conocimiento, enseñanza y
colaboración permitió́ el desarrollo de este trabajo.
A mis profesores, gracias por su tiempo, por su apoyo así como por la
sabiduría que me transmitieron en el desarrollo de mi formación profesional.
Autor: Paúl Jefferson Estrada Cadena
XIV
Agradecimiento
A Dios, que permitiéndome ser testigo de su grandeza, hace de cada
experiencia vivida una bendición.
A mis padres, en especial a mi madre Lcda. Janneth Guzmán Sarmiento
quien con su ejemplo, consejo y apoyo incondicional hizo posible la
cristalización de éste y muchos otros logros.
A mi novio Ing. Dennis Merchán Aguilar , porque con tu ejemplo demostraste
que el esfuerzo siempre tiene recompensa y con tu amor lograste que cada día
lo pueda enfrentar con una sonrisa.
A la Facultad de Ciencias Químicas y mis maestros, porque su enseñanza
hoy define una de mis metas y sus consejos siempre marcarán mi vida.
A mi tutora de tesis Q.F Maria Elena Jiménez M.Sc, Co-tutora Q.F Maria del
Carmen Villacrés PhD y docente Q.F Maria Pilar Fondevila PhD, por su guía,
tiempo y paciencia; quién al encaminar mi labor, me brindaron conocimientos
claves para la consecución de esta investigación.
A la Q.F Patricia Manzano y a su hija Dra. Andrea Orellana por haberme
facilitado el Laboratorio de Biomedicina de la ESPOL para llevar acabo la parte
experimental de mi tesis.
Autora: María del Cisne Céspedes Guzmán
XV
Agradecimiento
En primer lugar doy infinitamente gracias a dios por haberme dado fuerza y
valor para culminar esta etapa de mi vida y por permitirme disfrutar a mi familia,
gracias a mi familia por apoyarme en cada decisión, proyecto, por demostrarme
la gran fe que tienen en mí, por permitirme culminar con éxito y que siempre
podré contar con ellos, gracias a la vida porque cada día me demuestra lo
hermosa que es y lo justa que puede llegar a ser. Gracias a mi novia, por
acompañarme durante todo este arduo camino y compartir conmigo alegrías y
fracasos. A mi cotutora de tesis, por su valiosa guía y asesoramiento a la
realización de la misma. A mi tutora de tesis por toda la colaboración brindada,
durante la elaboración de este proyecto.
Gracias a todas las personas que ayudaron directa e indirectamente en la
realización de esta tesis.
Autor: Paúl Jefferson Estrada Cadena
XVI
TABLA DE CONTENIDO RESUMEN .....................................................................................................XXII
ABSTRACT ...................................................................................................XXIII
INTRODUCCIÓN ............................................................................................... 1
CAPÍTULO I PROBLEMA ................................................................................. 3
I.1. Planteamiento y Formulación del Problema......................................................... 3
I.2. Justificación e Importancia ...................................................................................... 4
I.3. Hipótesis ...................................................................................................................... 6
I.4. Objetivos ..................................................................................................................... 6
I.4.1. Objetivo General ................................................................................................. 7
I.4.2. Objetivos Específicos ........................................................................................ 7
I.5. Variables ...................................................................................................................... 7
I.5.1. Variable Dependiente ......................................................................................... 7
1.5.2. Variable Independiente .................................................................................... 7
I.6. Variables, Conceptualización e Indicadores. ....................................................... 8
CAPÍTULO II MARCO TEORICO ..................................................................... 9
II.1. Antecedentes ............................................................................................................. 9
II.2. Diabetes Mellitus ....................................................................................................... 9
II.3. Resistencia a la insulina ........................................................................................ 10
II. 4. Complicaciones de la diabetes ........................................................................... 10
II.5. Clasificación según la Asociación Americana de Diabetes ........................... 11
II.5.1 . Diabetes Tipo 1 ............................................................................................... 11
II.5.2. Diabetes Tipo 2................................................................................................. 12
II.6. Enzimas involucradas en la digestión de carbohidratos. ............................... 16
II.7. Inhibidores de la enzima α- glucosidasa............................................................ 18
II.8. Impacto Social de la diabetes............................................................................... 22
II.9. Psidium guajava L. ................................................................................................. 22
II.9.1 Propiedades medicinales de la Psidium guajava L. ...................................... 23
II.9.2. Origen y Taxonomía ............................................................................................ 23
CAPITULO III METODOLOGÍA ....................................................................... 25
III.1 Tipo de Investigación ......................................................................................... 25
III.1.1. Diseño de la Investigación ............................................................................ 25
III.1.2. Lugar de la Investigación .............................................................................. 25
III.1.3. Período de la Investigación .......................................................................... 26
III.1.4. Recursos Empleados ..................................................................................... 26
XVII
III.1.5. Introducción..................................................................................................... 26
III.1.6. Área de Estudio ............................................................................................... 26
III.1.7.Trabajo Experimental ...................................................................................... 26
III.2. Equipos, Insumos, Materiales y Reactivos. ...................................................... 27
III.2.1. Materia prima e insumos ............................................................................... 27
III.2.2 Reactivos ........................................................................................................... 27
III.2.4. Equipos ............................................................................................................. 28
III.3 Obtención del Material Vegetal ............................................................................ 28
III.4 PROCESAMIENTO DE MATERIA PRIMA ............................................................ 28
III.4.1. Limpieza y desinfección del material vegetal ........................................... 28
III.4.2. Maceración ....................................................................................................... 29
III.5. Parte Experimental ................................................................................................ 29
III.5.1. Preparación del extracto acuoso ................................................................. 29
III.5.2. Preparación del extracto etanólico ............................................................. 29
III.5.3. Determinación de Sólidos Totales .............................................................. 30
III.5.4. Ensayo de inhibición de la enzima α-glucosidasa ................................... 30
III.5.5. Preparación de los Reactivos ...................................................................... 31
III.5.7. Procedimiento para la inhibición de la enzima α -glucosidasa. ............ 31
CAPÍTULO IV – RESULTADOS Y DISCUSIONES ......................................... 33
IV.1 Sólidos Totales ....................................................................................................... 33
IV.2 Actividad inhibitoria de los extractos acuosos y etanólicos de las hojas en
estudio sobre la enzima α-glucosidasa. .................................................................... 35
DISCUSIONES ................................................................................................................. 38
CONCLUSIONES ............................................................................................ 40
RECOMENDACIONES .................................................................................... 41
BIBLIOGRAFÍA ............................................................................................... 42
Glosario: Definición de términos básicos .................................................... 47
ANEXOS .......................................................................................................... 49
XVIII
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 1. Definición operacional de las variables ............................................... 8
Tabla 2.Criterios para el diagnóstico de Diabetes ............................................ 16
Tabla 3. Antidiabéticos orales que participan en el tratamiento de la diabetes,
incluida las α-glucosidasas ............................................................................... 21
Tabla 4. Clasificación Taxonómica de Psidium guajava L. .............................. 23
Tabla 5. Resultados de la determinación de sólidos totales en el extracto
acuoso de Psidium guajava L. .......................................................................... 33
Tabla 6. Resultados de la determinación de sólidos totales en el extracto
etanólico de Psidium guajava L. ....................................................................... 33
Tabla 7. Concentraciones de los extractos utilizados para sólidos totales....... 34
Tabla 8. Resultados de sólidos totales en las dos variedades de Psidium
guajava L. ......................................................................................................... 35
Tabla 9. Actividad inhibitoria de la enzima α- glucosidasa presente en la hojas
de Psidium guajava L. obtenidas en dos zonas del Ecuador ........................... 35
Tabla 10. Valores de sólidos totales utilizados en el ensayo enzimático. ........ 37
XIX
ÍNDICE DE FIGURA
Figura 1. Hoja de la guayaba (Psidium guajava L) ......................................... 23
Figura 2 . Efecto inhibitorio de los extractos acuosos y etanólicos para ambas
variedades frente al control positivo ................................................................. 37
XX
ÍNDICE DE ANEXOS Anexo 1. Recolección de las hojas de Psidium guajava L. ............................. 49
Anexo 2. Selección de las hojas de Psidium guajava L. .................................. 49
Anexo 3. Lavado de las hojas. ......................................................................... 49
Anexo 4. Secado de muestra al ambiente. ...................................................... 49
Anexo 5. Secado de muestra en estufa con circulación de aire ...................... 49
Anexo 6. Muestra totalmente seca .................................................................. 49
Anexo 7. Triturado y pulverizado de la muestra seca ...................................... 50
Anexo 8. Muestra pulverizada ......................................................................... 50
Anexo 9. Pesaje de la muestra seca (hoja de Psidium guajava L.) ................. 50
Anexo 10. Preparación del extracto acuoso .................................................... 50
Anexo 11. Filtrado del extracto acuoso............................................................ 50
Anexo 12. Filtrado del extracto etanólico ......................................................... 50
Anexo 13. Presentación del Extracto acuoso y etanólico de las hojas de
Psidium guajava L. ........................................................................................... 50
Anexo 14. Cápsula + muestra en estufa a 105°C ............................................ 51
Anexo 15. Cápsula + residuo en desecador .................................................... 51
Anexo 16. Extracto acuoso de zonas desérticas ............................................. 51
Anexo 17. Extracto etanólico de zonas desérticas .......................................... 51
Anexo 18. Extracto acuoso de zonas húmedas ............................................... 51
Anexo 19. Extracto etanólico de zonas húmedas ............................................ 51
Anexo 20. Certificado de Identificación del espécimen.................................... 53
XXI
LISTA DE ABREVIATURAS Y SIMBOLOS
ADA= Asociación Americana de Diabetes
ADH= α-amilasa pancreática humana.
AGT= Inhibidor de la α-glucosidasa.
DMG= Diabetes mellitus gestacional.
DMT2= Diabetes mellitus tipo 2.
EAC= Enfermedad de las arterias coronarias.
FC= Frecuencia cardiaca.
GAD= Ácido glutámico descarboxilasa.
HLA= Antígenos leucocitarios humanos.
HNF= Factor nuclear de hepatocitos
IADPSG= Asociación Internacional de Grupos de Estudios de Diabetes y
Embarazo.
INEC= Instituto Nacional de Estadísticas y Censos.
IR= Resistencia a la Insulina.
MET= Equivalente metabólico.
MSP= Ministerio de Salud Pública.
OGTT= Test Oral de tolerancia a la glucosa.
OMS= Organización Mundial de la Salud.
PPG= Hiperglucemia postprandial.
SNS= Sistema Nervioso Simpático.
XXII FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA QUÍMICA Y FARMACIA
UNIDAD DE TITULACIÓN
“EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD INHIBITORIA DE LA ENZIMA ALFA
GLUCOSIDASA CON EXTRACTOS DE HOJAS DE GUAYABA (Psidium
guajava L.)”
Autores: Céspedes Guzmán María del Cisne
Estrada Cadena Paúl Jefferson
Tutora: Q.F María Elena Jiménez, MSc
Cotutora: Q.F Maria del Carmen Villacres, PhD
RESUMEN
El tipo de diabetes más frecuente es de tipo 2, la Organización Mundial de la
Salud pronóstica que será la séptima causa de muerte para el año 2030. La α-
glucosidasa, una hidrolasa del intestino delgado, transforma almidón y
carbohidratos en glucosa al reaccionar con los enlaces 1-4 durante la
digestión. En el presente trabajo el objetivo es evaluar la actividad inhibitoria de
la enzima α-glucosidasa en extractos de hojas de Psidium guajava L, para ellos
se realizaron pruebas y se determinaron que solidos totales se encuentra
dentro del rango establecido por NTE INEN 1911 (2009), además que en
ambos extractos mediante un ensayo in vitro presentó fuerte inhibición sobre la
enzima apoyando la hipótesis planteada, entre los resultados obtenidos, se
dieron pequeñas variaciones entre los extractos y variedades estudiadas, esto
pudo ser por las condiciones, factores climáticos, o el tipo de extracción. Se
demostró que existen limitadas variaciones entre el control positivo y el extracto
acuoso de zonas húmedas, recomendándose tomar infusiones de hojas de
guayaba, siempre bajo supervisión médica.
PALABRAS CLAVES: α-GLUCOSIDASA, DIABETES, Psidium guajava L, CONTROL
POSITIVO.
XXIII FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA QUÍMICA Y FARMACIA
UNIDAD DE TITULACIÓN
“EVALUATION OF THE INHIBITORY ACTIVITY OF THE ALFA
GLUCOSIDASE ENZYME WITH GUAYABA LEAF EXTRACTS (Psidium
guajava L.)
Authors: Céspedes Guzmán María del Cisne
Estrada Cadena Paúl Jefferson
Advisor: Q.F María Elena Jiménez, MSc
Co-Advisor: Q.F Maria del Carmen Villacrés, PhD
ABSTRACT
The most frequent type of diabetes is type 2, the WHO prognosis that will be the
seventh cause of death by 2030. α-Glucosidase, a hydrolase of the small
intestine, transforms starch and carbohydrates into glucose by reacting with the
1 bonds -4 during digestion. In the present work the objective is to evaluate
the inhibitory activity of the α-glucosidase enzyme in extracts of Psidium
guajava L leaves, for them tests were carried out and it was determined that
total solids are within the range established by NTE INEN 1911 (2009) , in
addition that in both extracts by means of an in vitro test, it presented strong
inhibition on the enzyme supporting the hypothesis raised, among the results
obtained, there were small variations between the extracts and varieties
studied, this could be due to the conditions, climatic factors, or type of
extraction. It was shown that there are limited variations between the positive
control and the aqueous extract of humid areas, it is recommended to take
infusions of guava leaves, always under medical supervision.
KEYWORDS: α-GLUCOSIDASE, DIABETES, Psidium guajava, POSITIVE CONTROL
1
INTRODUCCIÓN
La hiperglicemia o diabetes es un problema mayor de salud. En Ecuador y
en numerosos países, la población recurre a medicina ancestral para ayudarse
en el control de la dolencia. Psidium guajava L ha sido una de las especies
vegetales utilizadas con aparente éxito para el control de la diabetes.
Control sobre la absorción de carbohidratos es un enfoque interesante,
prometedor que necesita ser explorado. Por lo tanto este estudio está basado
en la investigación de actividad inhibitoria en extractos de la planta de Psidium
guajava L., que es originaria de México, extendiéndose por América del Sur en
especial Ecuador, conocida como guayaba, la cual es muy utilizada como
opción natural para el tratamiento de la Diabetes Mellitus.
El ensayo se llevó a cabo en el Laboratorio de Biomedicina de la Facultad de
Ingeniería Marítima, Ciencias Biológicas, Oceánicas y Recursos Naturales,
Escuela Superior Politécnica del Litoral (ESPOL) durante el año 2019,
realizando la experimentación in vitro en microplacas de 96 pocillos; los
resultados fueron leídos mediante un lector de microplacas espectrofotómetro
marca SYNERGY/ HTX a una longitud de onda de 405 nm.
El presente trabajo se encuentra dividido en 5 secciones o capítulos, los
cuales se encuentran distribuidos de la siguiente manera: Capitulo I:
Planteamiento (Según la (American Diabetes Association, 2010) la diabetes es
considerada una enfermedad no transmisible, la cual requiere vigilancia médica
continua para así poder prevenir complicaciones y reducir el riesgo de
complicaciones a futuro. Tanto las hojas como el fruto de guayaba (Psidium
guajava L.) han sido utilizados en el tratamiento ancestral de diabetes mellitus
como un efectivo hipoglucémico) y formulación del Problema (¿Tienen los
extractos de hojas de Psidium guajava L. acción inhibitoria sobre la enzima α-
glucosidasa?), Justificación e Importancia (Las α-glucosidasas son enzimas
que tienen como función degradar los carbohidratos en las microvellosidades
del epitelio del intestino delgado, tomando como principal objetivo facilitar su
absorción) Hipótesis (Los extractos alcohólicos y acuosos a partir de hojas de
Psidium guajava L. inhiben la enzima α-glucosidasa), Variables y
2
Conceptualización de las variables. Capitulo II. Marco Teórico que contiene
información de antecedentes y fundamentación científica (Estudios anteriores
han demostrado que el extracto de Psidium guajava L. es un efectivo
hipoglicemiante que puede utilizarse sin problemas debido a su bajo costo o
facilidad de encontrar en cualquier medio, especialmente para personas que
padecen esta enfermedad. La alfa glucosidasa es una hidrolasa que se
encuentra en el epitelio del intestino delgado, que transforma almidón y
carbohidratos en glucosa al reaccionar con los enlaces 1,4 durante la
digestión. Los inhibidores conocidos al momento son: acarbosa, miglitol y
voglibosa. La acarbosa es una pseudotetramaltosa de origen microbiano,
ubicada en el borde de las vellosidades del intestino delgado. Voglibosa es
utilizada como tratamiento de primera línea en Japón para mejora de la
hiperglucemia postprandial (PPG, por su nombre en inglés) en pacientes
diabéticos con respuesta inadecuada a la dieta y terapia de ejercicios. Capitulo
III. Metodología de la Investigación que se encuentra compuesta por el tipo de
investigación (Exploratorio – Experimental de laboratorio – Estadístico),
materiales, equipos, reactivos (Psidium guajava L, α- glucosidasa derivada de
Saccharomyces cerevisiae, p-nitrofenil- α-D-glucopiranósido, Acarbosa, Fosfato
Dibásico de potasio, Etanol; Lector de microplacas, balanza analítica, estufa,
licuadora, potenciómetro), diseño experimental utilizada, procedimiento
utilizado para la inhibición de la enzima α- glucosidasa. Capitulo IV. Análisis e
interpretación de resultados en el que se evalúa mediante análisis estadístico,
la capacidad que tienen los extractos de Psidium guajava L. para poder inhibir
la enzima de α-glucosidasa. Capítulo V. Conclusiones: En las hojas de
Psidium guajava L, el extracto que presentó mayor actividad frente a la enzima
α-glucosidasa fue el extracto acuoso de las zonas húmedas. Los extractos
acuosos de las zonas desérticas presentaron una actividad intermedia mientras
que el extracto etanólico de las zonas desérticas presentó menor actividad
inhibitoria sobre esta enzima, comparado con los demás extractos.
3
CAPÍTULO I PROBLEMA
I.1. Planteamiento y Formulación del Problema
Planteamiento del Problema
Según la (American Diabetes Association, 2010) la diabetes es considerada
una enfermedad no transmisible, la cual requiere vigilancia médica continua
para así poder prevenir complicaciones y reducir el riesgo de complicaciones a
futuro. En la actualidad la diabetes es uno de los problemas de salud más
desafiantes a nivel mundial cuyas complicaciones conlleva a la muerte.
De acuerdo a la información emitida en el 2015 por el Instituto Nacional de
Estadísticas y Censos (INEC), la diabetes es el segundo motivo más frecuente
de mortalidad en el Ecuador. Precisamente, el Ministerio de Salud Pública
(MSP) informó que, dentro de los casos atendidos en el marco del ministerio,
fueron reportados 106 mil pacientes nuevos con diabetes tipo 2 durante el año
2016 (Acosta, 2017).
Según lo expresado en Costeo de la Enfermedad Diabetes Mellitus Tipo 2
(2013), en los casos en que el paciente presenta una diabetes sin
complicaciones y cuya prescripción farmacológica es simple, el costo del
tratamiento alcanza aproximadamente los 826 dólares anuales; por otro lado,
los gastos correspondientes a una expectativa de vida muy ajustada, bordean
los 27,600 mil dólares (Acosta, 2017).
Según el estudio SECCAID (Spain estimated cost Ciberdem-Cabimer in
Diabetes) en Europa (2013) los costes directos de la diabetes ascienden a
5.809 millones de euros anuales, de los cuales 2.143 millones son debidos a
las complicaciones asociadas a la enfermedad. Del total del presupuesto
sanitario el 8,2% se destina a diabetes (Crespo, Riestra, & López, 2013)
El coste sanitario anual de un paciente con diabetes es de 1.770 €. Sin
embargo, es el tratamiento de las complicaciones lo que resulta muy costoso.
15% del coste de la enfermedad es debido a fármacos antidiabéticos.
24% procede de otros fármacos (antihipertensivos, hipolipemiantes).
4
61% se debe a la atención primaria y a hospitalizaciones.
Tanto las hojas como el fruto de guayaba (Psidium guajava L.) han sido
utilizados en el tratamiento ancestral de diabetes mellitus como un efectivo
hipoglucémico (Yam, Villaseñor, & Peña, 2010).
A causa de la hidrolisis de almidón se da un incremento de los niveles de
glucosa provocando hiperglicemia la cual actúa las enzimas α-amilasa y α-
glucosidasa, etc. La inhibición de estas enzimas puede contribuir a controlar la
hiperglicemia postpandrial, se presume que sería una estrategia para el control
de la diabetes. La desventaja de los inhibidores terapéuticos sobre α-
glucosidasa (acarbosa, miglitol y voglibosa) tienen la propiedad de inhibir en
altos porcentajes de α-amilasa lo que ocasiona desórdenes en el tracto
digestivo como diarrea, distensión y flatulencias abdominales. Los inhibidores
de origen natural se presume que tienen baja actividad de inhibición de α-
amilasa y probablemente una fuerte inhibición sobre α-glucosidasa, con la
ventaja de mostrar efectos secundarios menores en pacientes que requieran
terapia efectiva para la hiperglicemia postpandrial (López, Aguilar, & Dublán,
2014).
Por este motivo se propone determinar si los extractos acuosos y etanólicos
de las hojas de Psidium guajava L. presentan actividad inhibitoria sobre la
enzima α- glucosidasa, la cual sería de suma importancia para poder ofrecer
una vía alterna de medicamento natural económico para el tratamiento de
diabetes (Rodríguez, Lafourcade, & Pérez, 2013).
Formulación del Problema
¿Tienen los extractos de hojas de Psidium guajava L. acción inhibitoria sobre
la enzima α-glucosidasa.?
I.2. Justificación e Importancia
La guayaba (Psidium guajava L) ha sido cultivada durante muchos años, y
considerada como un componente fundamental en la dieta del ser humano. Los
5
diferentes estudios que se han hecho demuestran que las hojas de guayaba
tienen múltiples beneficios, el de mayor importancia es el de reducir problemas
de salud como: diabetes mellitus tipo 2 (DMT2), resultando un efectivo
hipoglucémico gracias a la cantidad de compuestos fenólicos (guaverina, ácido
psidiolico, quercetina) que le confieren dicha propiedad (Yam, Villaseñor, &
Peña, 2010).
La Organización Mundial de la Salud (OMS), clasificó a la diabetes como
una enfermedad crónica que se manifiesta cuando el páncreas no produce la
suficiente cantidad de insulina (diabetes tipo 1), o cuando el organismo no
utiliza eficazmente la insulina (diabetes tipo 2) (OMS, 2016). Esta enfermedad
constituye un grave problema de salud en Ecuador en la actualidad ocupa la
segunda causa de muerte y la primera es por las enfermedades isquémicas del
corazón. El INEC informa que la tasa de mortalidad por diabetes incrementó en
10 años el 51%, es decir en el año 2007 hubo 3.292 fallecidos y en el año 2016
4.906 fallecidos; entre ellos, más mujeres fallecieron que hombres por diabetes.
La principal causa de esta enfermedad es el sedentarismo, la falta de actividad
física y la mala alimentación, es por ello que se observa que 6 de cada 10
ecuatorianos tienen sobrepeso y obesidad, indicando que es un excelente
candidato para la enfermedad. Se estima que el tratamiento anual para un
paciente puede costar USD 25.000 (INEC, 2017).
En la actualidad en el Ecuador, se consume gran variedad de productos
naturales que provienen de plantas medicinales de uso ancestral, como es el
Aloe vera. Sin embargo en el mercado no se observan variedad de fitofármacos
a base de hojas de guayaba (Psidium guajava L) a pesar de las propiedades
que reporta el uso ancestral. Las aplicaciones más importantes reportadas son:
febrífuga, antisecretoria, antimicrobial, bactericida, cicatrizante, emenagoga,
hipoglicémica, laxativa, nutritiva, espasmolítica (Yam, Villaseñor, & Peña,
2010).
El origen de la guayaba es incierto, pero se le ubica en Mesoamérica.
Actualmente su cultivo y uso se extiende desde México y Centroamérica, hasta
Sudamérica, en específico Brasil y Perú, en Las Antillas y el sur de Florida. Su
área ecológica se encuentra en la franja paralela al ecuador, con límites que no
van más allá de los 30º de cada hemisferio. Actualmente se le encuentra en
6
más de 50 países con clima tropical. En Hawái, la guayaba crece en franjas
desérticas con precipitaciones menores a 250 mm (Rodríguez, Vargas, &
Espinoza, 1995).
Las α-glucosidasas son enzimas que tienen como función degradar los
carbohidratos en las microvellosidades del epitelio del intestino delgado,
tomando como principal objetivo facilitar su absorción. Los polisacáridos,
oligosacáridos y disacáridos son hidrolizados y a la vez transformados en
monosacáridos; la hidrolisis es producida por las α-glucosidasas como son:
maltasa, glucoamilasa, dextrinasa y sacarasa. Los responsables conocidos de
la inhibición de las α-glucosidasas, son los flavonoides (isoflavonas, flavonoles,
antocianidinas) (Young Kim, Hoon Kim, & Hyun Jin, 2019).
El medicamento de referencia para evaluar la inhibición de α-glucosidasa es
la Acarbosa y Miglitol. Ambas sustancias reducen la formación de
monosacáridos y disponibilidad de glucosa, hexosas que consecuente son
absorbidas en el intestino, y así producen la disminución de los niveles
postprandiales de glucosa en la sangre e insulina. El uso clínico de la Acarbosa
es limitado, ya que posee múltiples efectos adversos después de su
administración como son: provocar trastornos gastrointestinales, además de
costo elevado y la falta de evidencia en cuanto a la prevención de la diabetes.
Por esta razón se considera prudente no recomendar la Acarbosa o el Miglitol
para personas con prediabetes; es por eso que se ha optado por acudir a la
medicina natural poniendo en uso las excelentes propiedades que nos brinda
las hojas de guayaba (Salgado & Calle, 2001).
I.3. Hipótesis
Los extractos alcohólicos y acuosos a partir de hojas de Psidium guajava L.
inhiben la enzima α-glucosidasa.
I.4. Objetivos
7
I.4.1. Objetivo General
Evaluar la actividad inhibitoria de la enzima α-glucosidasa en extractos de
hojas de Psidium guajava L.
I.4.2. Objetivos Específicos
Preparar los extractos acuosos y etanólicos a partir de hojas de Psidium
guajava L.
Comparar cuál de los dos extractos (acuosos o etanólicos) inhiben
mayor porcentaje de la enzima α-glucosidasa
Estudiar frente a un medicamento de referencia ¨Acarbosa¨ (control
positivo), la actividad inhibitoria de la enzima α-glucosidasa.
I.5. Variables
I.5.1. Variable Dependiente
Actividad inhibitoria de la enzima α-glucosidasa.
1.5.2. Variable Independiente
Extractos acuosos y etanólicos a partir de Psidium guajava L.
8
I.6. Variables, Conceptualización e Indicadores.
Tabla 1. Definición operacional de las variables
VARIABLE
CONCEPTUALIZACIÓN INDICADOR MEDICIONES
Dependiente
Enzima α -glucosidasa:
Enzima codificada por el
gen GAA esencial para el
catabolismo de glucógeno a
glucosa en los lisosomas.
La inhibición de la solución
standard de α-glucosidasa
Independiente
Extracto Alcohólico: Son
extractos líquidos
concentrados, obtenidos de
la extracción de una planta
o parte de ella, utilizando
como solvente alcohol y
agua.
Concentración del extracto
Extracto Acuoso:
Son extractos líquidos cuyo
solvente es el agua. Son
menos concentrados que
los extractos hidro
alcohólicos, con la ventaja
de no presentar sedimento
y su color y aroma son más
suaves.
9
Fuente: Autores
CAPÍTULO II MARCO TEORICO
II.1. Antecedentes
Estudios anteriores han demostrado que el extracto de Psidium guajava L.
es un efectivo hipoglicemiante que puede utilizarse sin problemas debido a su
bajo costo o facilidad de encontrar en cualquier medio, especialmente para
personas que padecen esta enfermedad. Esta planta posee en su estructura
gran cantidad de alcaloides, esteroides y compuestos fenólicos, que son los
que le otorgan su propiedad hipoglicemiante (Vigo, 2016).
Tanto los extractos acuosos como etanólicos de las hojas de Psidium
guajava L presentan efecto hipoglucemiante a dosis de 50-800 mg/kg en ratas.
Con la diferencia que el extracto acuoso provoca la atenuación de la elevación
postpandrial de glucosa en el torrente sanguíneo, mejorando la hiperglicemia
en ratas. En el extracto etanólico se reporta un efecto antihiperglucemiante es
decir mantiene los niveles de azúcar sin riesgo de producir hipoglucemia, en un
biomodelo de diabetes mellitus Tipo 2 (DMT2) (Vigo, 2016).
II.2. Diabetes Mellitus
Es considerada como el conjunto de enfermedades metabólicas
caracterizadas por hiperglicemia crónica causada por la falta de secreción de
insulina, fallas en la acción de la insulina o ambas. A largo plazo la
hiperglicemia crónica de la diabetes está asociada con complicaciones en el
funcionamiento normal de varios órganos, ocasionando daños principalmente
en: riñones, vasos sanguíneos, ojos, nervios y corazón. Los pacientes con
diabetes tienen una mayor incidencia de enfermedad cardiovascular
10
aterosclerótica, arterial periférica y cerebrovascular (Genuth, Bennett, &
Defronzo, 2010).
Algunos de los pacientes con diabetes son asintomáticos, especialmente
aquellos con diabetes tipo 2 durante los primeros años de la enfermedad. Otros
con hiperglucemia marcada y especialmente niños con deficiencia absoluta de
insulina pueden sufrir poliuria, polidipsia, polifagia, pérdida de peso y visión
borrosa. La diabetes no controlada puede provocar estupor, coma y, si no se
trata, la muerte, debido a una cetoacidosis o al síndrome hiperosmolar no
cetónico (Akram T Kharroubi & Hisham M Darwish, 2015).
II.3. Resistencia a la insulina
Es una amalgama de alteraciones metabólicas que incluyen
hiperinsulinemia, dislipidemia, hipertensión, tolerancia deficiente a la glucosa,
hígado graso y estado proinflamatorio. A nivel mundial, la epidemia de
Resistencia a la Insulina (IR) se encuentra relacionada con el estilo de vida. La
IR ha asumido proporciones gigantescas debido al efecto acumulativo de la
falta de actividad física por un lado, y el consumo de una dieta densa en
calorías. Por otro lado la IR no tiene límites, puede afectar a cualquier grupo de
edad y tanto los individuos delgados como los obesos con la misma tenacidad
(Mathur, Shagun, & Velpandian, 2015).
II. 4. Complicaciones de la diabetes
Las complicaciones que podrían presentarse a largo plazo en la diabetes
incluyen retinopatía con pérdida potencial de visión; nefropatía que conduce a
insuficiencia renal; neuropatía periférica con riesgo de úlceras en los pies,
amputaciones y articulaciones de Charcot; y neuropatía autonómica que causa
síntomas gastrointestinales, genitourinarios y cardiovasculares y disfunción
sexual (Genuth, Bennett, & Defronzo, 2010).
11
II.5. Clasificación según la Asociación Americana de Diabetes
El tipo de diabetes de una persona depende de las situaciones al momento
del diagnóstico, y no todos los pacientes encajan en una sola clase. Ejemplo,
una persona con diabetes mellitus gestacional (DMG) puede continuar siendo
hiperglucemia después del parto y se puede determinar que, de hecho, tiene
diabetes tipo 2.
Alternativamente, una persona que adquiere diabetes debido a las grandes
dosis de esteroides exógenos puede volverse normoglucémica una vez que se
suspenden los glucocorticoides, pero luego puede desarrollar diabetes muchos
años después de episodios recurrentes de pancreatitis. Otro ejemplo sería una
persona tratada con tiazidas que desarrolla diabetes años más tarde. Debido a
que las tiazidas en sí mismas rara vez causan hiperglucemia grave, es
probable que estas personas tengan diabetes tipo 2 que se exacerba con el
medicamento (Genuth, Bennett, & Defronzo, 2010).
1. Diabetes mellitus de tipo 1 (Autoinmune e idiopática)
2. Diabetes mellitus de tipo 2 (disminución de la producción de insulina)
3. Otros tipos específicos de diabetes:
a) Los defectos genéticos de la célulaβ.
b) Infecciones.
c) Formas poco frecuentes de diabetes inmunomediada.
d) Endocrinopatías.
e) Los defectos genéticos en la acción de la insulina.
f) Enfermedades del páncreas exocrino.
g) Drogas o químicos inducidos.
h) Otros síndromes genéticos a veces asociado con la diabetes.
4. Diabetes gestacional (DMG) (Moncayo Loor , 2014).
II.5.1 . Diabetes Tipo 1
II.5.1.1. Diabetes inmunomediada. Esta forma de diabetes, representa
solo del 5 al 10% de las personas con diabetes. Anteriormente abarcada por
los términos diabetes dependiente de la insulina, diabetes tipo 1 o diabetes de
12
aparición juvenil, resulta de una destrucción autoinmune de la células β del
páncreas. Los marcadores de la destrucción inmune de las células β incluyen
autoanticuerpos de células de los islotes, autoanticuerpos contra la insulina,
autoanticuerpos contra GAD(GAD65) y autoanticuerpos contra las tirosina
fosfatasas IA-2 y IA-2β. Uno y generalmente más de estos autoanticuerpos
están presentes en 85 a 90% de los individuos cuando se detecta inicialmente
la hiperglucemia en ayunas (Genuth, Bennett, & Defronzo, 2010).
II.5.1.2. Diabetes idiopática. Algunas formas de diabetes tipo 1 no tienen
etiologías conocidas. Algunos de estos pacientes tienen insulinopenia
permanente y son propensos a la cetoacidosis, pero no tienen evidencia de
autoinmunidad. Aunque solo una minoría de los pacientes con diabetes tipo 1
entra en esta categoría, de los que lo hacen, la mayoría son de ascendencia
africana o asiática. Las personas con esta forma de diabetes sufren de
cetoacidosis episódica y presentan diversos grados de deficiencia de insulina
entre los episodios. Esta forma de diabetes es característicamente hereditaria y
carece de pruebas inmunológicas para la autoinmunidad contra las células β
(Genuth, Bennett, & Defronzo, 2010).
II.5.2. Diabetes Tipo 2
La cetoacidosis rara vez ocurre espontáneamente en este tipo de diabetes;
cuando se ve, generalmente surge en asociación con el estrés de otra
enfermedad como una infección. Esta forma de diabetes con frecuencia no se
diagnostica durante muchos años porque la hiperglucemia se desarrolla
gradualmente y en etapas más tempranas puede no ser lo suficientemente
grave como para que el paciente note alguno de los síntomas clásicos de la
diabetes. Sin embargo, estos pacientes tienen un mayor riesgo de desarrollar
complicaciones macrovasculares y microvasculares (Genuth, Bennett, &
Defronzo, 2010).
Se proyecta que esta enfermedad tendrá un crecimiento mayor en los
próximos años en el mundo, especialmente en los Estados Unidos,
aumentando a más de 54.9 millones de pacientes en 2030. La diabetes tipo 2
progresa como resultado de factores ambientales y genéticos. Incluyendo
13
factores de riesgo modificables como por ejemplo, la hipertensión arterial,
sedentarismo y colesterol elevado. Es por ello, que la actividad física es
considerada como uno de los elementos claves para reducir el riesgo de
Diabetes tipo 2 y retraso en su inicio.
La actividad física puede ser moderada o vigorosa, es decir que la moderada
se la considera como cualquier actividad física que requiere un gasto
energético de 3-6 equivalente metabólico (MET), es por eso que esta actividad
es idónea para la prevención primaria de la diabetes tipo 2, debido a que está
bien establecida.
La actividad física intensa, que requiere un gasto energético de ≥ 6 MET,
provoca aumento sustancial de la frecuencia cardiaca (FC), la que esta
inversamente asociada con Diabetes Mellitus Tipo 2 (DMT2). En cambio la
actividad física de intensidad moderada está asociada con un mayor riesgo de
diabetes tipo 2. Por lo tanto, la actividad de intensidad vigorosa, como correr,
puede conferir mayores beneficios sobre cualquier otra actividad para la
prevención de la diabetes tipo 2. Se recomiendan que las personas realicen al
menos 500 MET-min/semana de actividad física (75 minutos/semana de
actividad física de intensidad vigorosa) para conseguir beneficios para la salud,
incluido la prevención de la diabetes tipo 2 ( Wang, et al., 2019).
II.5.3 Defectos genéticos de la célula β.-Estas formas de diabetes se
caracterizan frecuentemente por la aparición de hiperglucemia a una edad
temprana. Se les conoce como diabetes de inicio en la madurez de los jóvenes
(MODY) y se caracterizan por un deterioro en la secreción de insulina con un
mínimo o ningún defecto en la acción de la insulina. Se heredan en un patrón
autosómico dominante. Hasta la fecha, se han identificado anomalías en seis
loci genéticos en diferentes cromosomas. La forma más común se asocia con
mutaciones en el cromosoma 12 en un factor de transcripción hepática
denominado factor nuclear de hepatocitos (HNF)-1α (Genuth, Bennett, &
Defronzo, 2010).
II.5.3.1, Defectos genéticos en la acción de la insulina.-Las anomalías
metabólicas asociadas con las mutaciones del receptor de insulina pueden
variar desde hiperinsulinemia e hiperglucemia moderada hasta diabetes grave.
Algunos individuos con estas mutaciones pueden tener acantosis nigricans. Las
14
mujeres pueden ser virilizadas y tener ovarios quísticos agrandados. En el
pasado, este síndrome se denominaba resistencia a la insulina de tipo A. El
leprechaunismo y el síndrome de Rabson-Mendenhall son dos síndromes
pediátricos que tienen mutaciones en el gen del receptor de insulina con las
posteriores alteraciones en la función del receptor de insulina y la resistencia
extrema a la insulina. El primero tiene rasgos faciales característicos y suele
ser fatal en la infancia, mientras que el segundo está asociado con anomalías
de los dientes y las uñas y la hiperplasia de la glándula pineal (Genuth,
Bennett, & Defronzo, 2010).
II.5.3.2. Enfermedades del páncreas exocrino.- Cualquier proceso que
dañe de manera difusa el páncreas puede causar diabetes. Entre los procesos
adquiridos incluyen pancreatitis, traumatismo, infección, pancreatectomía y
carcinoma pancreático. Los adenocarcinomas que afectan solo a una pequeña
porción del páncreas se han asociado con la diabetes. Esto implica un
mecanismo distinto de la simple reducción de la masa de células β. Si es lo
suficientemente extensa, la fibrosis quística y la hemocromatosis también
dañarán las células β. La pancreatopatía fibroculosa puede ir acompañada de
dolor abdominal que se irradia a la espalda y calcificaciones pancreáticas
identificadas en el examen de rayos X (WHO, 1999).
II.5.3.3. Endocrinopatías.- Varias hormonas (hormona de crecimiento,
cortisol, glucagón, epinefrina) antagonizan la acción de la insulina. Las
cantidades excesivas de estas hormonas (por ejemplo, acromegalia, síndrome
de Cushing, glucagonoma, feocromocitoma) respectivamente pueden causar
diabetes. Esto generalmente ocurre en individuos con defectos preexistentes
en la secreción de insulina, y la hiperglucemia generalmente se resuelve
cuando se resuelve el exceso de hormona. La hipopotasemia inducida por
somatostatina y aldosterona puede causar diabetes, al menos en parte, al
inhibir la secreción de insulina. La hiperglucemia generalmente se resuelve
después de la eliminación exitosa del tumor (Genuth, Bennett, & Defronzo,
2010).
II.5.3.4. Diabetes inducida por fármacos o sustancias químicas.
Muchas drogas pueden perjudicar la secreción de insulina. Es posible que
estos medicamentos no causen diabetes por sí solos, pero pueden precipitar la
15
diabetes en personas con resistencia a la insulina. En tales casos, la
clasificación no está clara porque se desconoce la secuencia o la importancia
relativa de la disfunción de las células β y la resistencia a la insulina. Ciertas
toxinas como el Vacor (un veneno para ratas) y la pentamidina intravenosa
pueden destruir permanentemente las células β pancreáticas (Genuth, Bennett,
& Defronzo, 2010).
II.5.3.5. Infecciones.-Ciertos virus se han asociado con la destrucción de las
células β. La diabetes ocurre en pacientes con rubéola congénita, aunque la
mayoría de estos pacientes tienen HLA (Antígenos leucocitarios humanos) y
marcadores inmunes característicos de la diabetes tipo 1. Además, el
citomegalovirus, el adenovirus y los paramixovirus (paperas) se han implicado
en la inducción de ciertos casos de la enfermedad (Genuth, Bennett, &
Defronzo, 2010).
II.5.3.6Formas infrecuentes de diabetes inmunomediada. En esta
categoría, hay dos condiciones y es probable que ocurran otras. El síndrome
del hombre rígido es un trastorno autoinmune del sistema nervioso central
caracterizado por la rigidez de los músculos axiales con espasmos dolorosos.
Los pacientes generalmente tienen títulos altos de autoanticuerpos contra ácido
glutámico descarboxilasa (GAD), y aproximadamente un tercio desarrollará
diabetes. Los anticuerpos anti receptor de insulina pueden causar diabetes al
unirse al receptor de insulina, bloqueando así la unión de la insulina a su
receptor en los tejidos diana. Sin embargo, en algunos casos, estos
anticuerpos pueden actuar como agonistas de la insulina después de unirse al
receptor y, por lo tanto, pueden causar hipoglucemia. Los anticuerpos contra el
receptor de insulina se encuentran ocasionalmente en pacientes con lupus
eritematoso sistémico y otras enfermedades autoinmunes (Genuth, Bennett, &
Defronzo, 2010).
II.5.4. Diabetes mellitus gestacional. Durante muchos años, la DMG
(Diabetes mellitus gestacional) se ha definido como cualquier grado de
intolerancia a la glucosa con inicio o primer reconocimiento durante el
embarazo. A medida que la epidemia en curso de obesidad y diabetes ha
llevado a más diabetes tipo 2 en mujeres en edad fértil (Genuth, Bennett, &
Defronzo, 2010).
16
Después de las deliberaciones de 2008-2009, la Asociación Internacional de
Grupos de Estudio de Diabetes y Embarazo (IADPSG), un grupo de consenso
internacional con representantes de múltiples organizaciones obstétricas y de
diabetes, incluida la Asociación Americana de Diabetes (ADA), recomendó que
las mujeres de alto riesgo de tener diabetes en su visita prenatal inicial,
utilizando criterios estándar (Tabla 2), recibir un diagnóstico de diabetes no
gestacional.
Tabla 2.Criterios para el diagnóstico de Diabetes
Fuente: (American Diabetes Association, 2010).
II.6. Enzimas involucradas en la digestión de carbohidratos.
II.6.1. Alfa amilasa. La amilasa es una metaloenzima producida por las
glándulas salivales que hidroliza el almidón generando glucosa, maltosa,
dextrinas e isomaltosa. Su actividad inicia la digestión en la cavidad bucal. La
producción de saliva es controlada por el sistema nervioso simpático (SNS) y el
1. A1C ≥ 6.5% La prueba debe realizarse en un laboratorio utilizando un método
que esté certificado por NGSP y estandarizado al ensayo DCCT.
OR
2. El ayuno se define como la no ingesta de calorías durante al menos 8 h.
OR
3. 2-h glucosa en plasma ≥ 200 mg/dl (11.1 mmol/l) durante un test oral de
tolerancia a la glucosa (OGTT). La prueba debe realizarse según lo descrito por la
Organización Mundial de la Salud (OMS). Utilizando una carga de glucosa que contiene
el equivalente a 75 g de glucosa anhidra disuelta en agua.
OR
4. En un paciente con síntomas clásicos de hiperglucemia o crisis hiperglucémica,
una glucosa plasmática aleatoria ≥ 200 mg/dl (11.1 mmol/l)
17
parasimpático. El proceso se completa posteriormente con la α-amilasa
pancreática humana (APH) en el intestino (Sancho Cantus, Santiesteban
López, Cuerda Ballester, Solera Gómez, & De la Rubia Ortí, 2018).
La cantidad producida varía dependiendo de factores como el grado de
hidratación, consumo de tabaco o alcohol, y por supuesto la ingesta de
carbohidratos y actividad física (Sancho Cantus, Santiesteban López, Cuerda
Ballester, Solera Gómez, & De la Rubia Ortí, 2018).
Al inhibir la α-amilasa se disminuirá la absorción de glucosa en sangre
después de una comida, es por eso que la contribución de esta enzima al
aumento de la glucemia posprandial la transforma en un objetivo para el
tratamiento de DMT2.
El inhibidor de uso clínico que afecta tanto a la α-amilasa y α-glucosidasa,
es la acarbosa. Sin embargo, se asocia con varios efectos secundarios que en
algunos casos conducen a la interrupción del tratamiento (Salgado & Calle,
2001).
Los vegetales se han utilizado durante muchos años como productos
medicinales para el tratamiento de algunas enfermedades como por ejemplo: la
diabetes, y son una fuente prometedora para nuevos compuestos
antihiperglucémicos efectivos, con menos efectos adversos (Petersen & et al ,
2019).
Su objetivo es prevenir la hidrólisis de los hidratos de carbono, mediante la
inhibición de las enzimas α-amilasa y α-glucosidasa secretadas y situadas en el
intestino delgado. Esta sería una opción de medicamentos para el tratamiento
de la diabetes ya que al retrasar la digestión de hidratos de carbono se
consigue una tasa reducida de absorción de glucosa. Sin embargo, ha sido
reportado que se han observado hipoglucemias y cambios rápidos de la
glucosa en sangre, como en la enfermedad de las arterias coronarias (EAC),
isquemia cardiaca y en pacientes diabéticos tratados con insulina y
sulfonilureas (Esmaeili, S & et al , 2019).
La encargada en degradar los polisacáridos en oligosacáridos y disacáridos
es la α-amilasa pancreática, a diferencia de la α-glucosidasa que los degrada
en monosacáridos. La mayoría de inhibidores sintéticos, como la acarbosa,
18
posee fuertes propiedades inhibitorias de amilasa y glucosidasa, causando una
inhibición exagerada de la actividad de la amilasa y una posterior fermentación
anormal de carbohidratos no digeridos en el colon. Por lo tanto, la estrategia
para controlar la liberación de glucosa en el intestino, parece ser una inhibición
moderada de amilasa junto con una fuerte inhibición de glucosidasa (Petersen
& et al , 2019).
II.6.2. Alfa Glucosidasa. Es una hidrolasa que se encuentra en el epitelio
del intestino delgado, que transforma almidón y carbohidratos en glucosa al
reaccionar con los enlaces 1,4 durante la digestión.
Los azúcares simples (monosacáridos) libres pueden provocar hiperglicemia
cuando son absorbidos en el torrente sanguíneo. Por lo tanto, el desarrollo de
los inhibidores de la -glucosidasa, como son la acarbosa, voglibosa y miglitol,
han sido uno de los tratamientos ideales para pacientes con diabetes tipo 2
mediante la reducción de la hiperglucemia posprandial (Young Kim, Hoon Kim,
& Hyun Jin, 2019).
Recientemente, nuevos fármacos contra la diabetes han sido desarrollados a
partir de flavonoides obtenidos de vegetales. Kaempferol, quercetina, luteolina,
quercetina 3-O- (6-O´-galloyl)--glucopiranósido y 3,7,8,3',4'-
pentahidroxiflavona han expuesto posibles actividades inhibitorias para evitar la
reacción catalítica de la -glucosidasa (Young Kim, Hoon Kim, & Hyun Jin,
2019).
Estos inhibidores son semejantes a la estructura de la antocianina excepto
por la diferencia en la carga positiva de oxígeno del anillo C de flavonoides
(Young Kim, Hoon Kim, & Hyun Jin, 2019).
II.7. Inhibidores de la enzima α- glucosidasa.
Los inhibidores conocidos al momento son: acarbosa, miglitol y voglibosa.
La acarbosa es una pseudotetramaltosa de origen microbiano, ubicada en el
borde de las vellosidades del intestino delgado (Fleitas, 2015). Acarbosa y
miglitol impiden que, posterior a una comida, los carbohidratos sean asimilados
a nivel intestinal; disminuyendo con ello la hiperglucemia postprandial. Con el
19
uso de estos fármacos es posible retardar el ingreso de glucosa a la circulación
sistémica, extendiendo el tiempo de la célula beta para incrementar la
segregación de insulina, que responde al pico de glucosa plasmática. Como
monoterapia la acarbosa disminuye el nivel de glucosa plasmático de ayuno de
25 a 30mg/dL y la HbA1c disminuye entre 0.7 a 1.0%. Ambos principalmente
afectan la glucosa posprandial la cual disminuye de 40 a 50mg/dL después de
una comida.
Estas drogas son de más utilidad en pacientes con diabetes tipo 2 de
reciente inicio con hiperglicemia de ayuno leve y en pacientes diabéticos que
toman una sulfonilurea o metformina y requieren una disminución adicional de
glucosa plasmática de ayuno. Algunos estudios han reportado una moderada
disminución en el nivel de triglicéridos plasmáticos, pero sin cambios en el nivel
de CLDL o HDL con acarbosa (Fleitas, 2015).
La acarbosa debe ser ingerida con el primer bocado de la comida para
mayor efectividad. La dosis máxima es de 75 a 100 mg; 2 o 3 veces al día, la
dosis debe incrementarse 25 mg cada 2 a 4 semanas para minimar los efectos
secundarios gastrointestinales, los cuales ocurren hasta en el 30% de los
pacientes diabéticos tratados con acarbosa. A este tipo de pacientes se le
suele administrar una dosis inicial recomendada de 50 mg tres veces al día de
Acarbosa, pero después de 6 a 8 semanas se le puede incrementar hasta una
dosis de mantenimiento de 100-200 mg tres veces al día, en el caso de ser
necesario. Cabe recalcar que la Acarbosa causa una inhibición excesiva de la
α-amilasa pancreática, dándose como resultado la acumulación de hidratos de
carbono no digeridos en el colon, los que sirven como sustrato para la
fermentación por bacterias (Ganiyu Oboh, Babatunde Ogunsuyi, Damilola
Ogunbadejo, & Adeniyi Adefegha, 2016). Altas dosis de acarbosa (200 a
300mg; 3 veces/día) elevan los niveles de aminotransferasas según se ha
reportado, pero la función hepática retorna a lo normal cuando se suspende el
fármaco (Santa Cruz & Zacarías, 2002).
La dosis de miglitol recomendada va de 50 a 100mg; 3 veces al día. Ambos
están contraindicados en pacientes con enfermedad inflamatoria intestinal.
Acarbosa no debe indicarse con una creatinina sérica > 2.0mg/dL, o en
pacientes con cirrosis. Los efectos colaterales ocurren hasta en 30% de los
20
pacientes tratados con acarbosa. Entre los efectos secundarios encontramos
dolor abdominal, diarrea y flatulencia; por tanto se recomienda que al principio
la dosis sea reducida y, para llegar a la dosificación máxima, la cantidad
suministrada se incremente en forma paulatina (Santa Cruz & Zacarías, 2002).
En el caso del Miglitol, aún no hay estudios adecuados que permitan la
utilización como tratamiento de preferencia para diabetes tipo 2, el mismo
medicamento está indicado en conjunto con las sulfonilureas. Es por eso que
ambos medicamentos no son tratamiento de elección por el médico, por su
limitación y la más importante es la intolerancia digestiva. Como ventaja, tiene
muy buena asociación con metformina, se la considera segura porque no
producen hipoglicemias (Ganado, Garay, & Vega, 2016).
II.7.1. Voglibosa: Es un N-sustituido derivado de valiolamina, que es un
aminociclitol de cadena ramificada, y el resto N-sustituido se deriva de glicerol.
Su fórmula molecular es C10H21NO7 y peso molecular es 267.28; no tiene olor
pero sabor dulce. Es fácilmente soluble en agua y ácido acético, poco soluble
en metanol, difícilmente soluble en etanol y casi insoluble en éter (Chen , Lu ,
Fan , & Shen, 2017).
El inhibidor de la α-glucosidasa (AGI) voglibosa, es uno de los orales más
utilizados como agentes antidiabéticos en Japón. Es un tratamiento de primera
línea para mejora de la hiperglucemia postprandial (PPG, por su nombre en
inglés) en pacientes diabéticos con respuesta inadecuada a la dieta y terapia
de ejercicios, a la vez como tratamiento complementario a otros fármacos
antidiabéticos orales y la insulina (Chen , Lu , Fan , & Shen, 2017).
Al inhibir la acción de estas enzimas, la voglibosa retrasa la digestión y
absorción de carbohidratos, atenuando así el pico postprandial en niveles
plasmáticos de glucosa y secreción de insulina. Al igual que con otros
inhibidores de la alfa glucosidasa (AGIs), una de las ventajas de este
medicamento es que no estimula la liberación de insulina y, por tanto, no causa
hipoglucemia.
La voglibosa tiene una absorción lenta después de la administración oral; las
concentraciones plasmáticas son generalmente indetectables en dosis
terapéuticas. Hasta la fecha se ha identificado que no tiene metabolitos activos.
Después de la ingestión, la mayoría del fármaco activo inalterado permanece
21
en el tracto gastrointestinal, donde se metaboliza por enzimas intestinales y
flora microbiana, se excreta rápidamente en heces y solo tiene excreción renal
despreciable. En experimentos de interacción farmacológica, la administración
concomitante de voglibosa no tuvo efecto en la farmacocinética de warfarina,
hidroclorotiazida, digoxina, glibenclamida, dapagliflozina o vildagliptina (Chen ,
Lu , Fan , & Shen, 2017).
Tabla 3. Antidiabéticos orales que participan en el tratamiento de la diabetes, incluida las α-glucosidasas
Clase
Compuesto
Mecanismo de acción
Acción fisiológica
primaria
Ventajas
Desventajas
Biguanidas
Metformina
Activa AMP-
kinasa
Reduce la producción hepática de
glucosa
No incremento de peso.
No hipoglucemia. Probable
descenso de eventos CV
Efectos secundarios GI (diarrea, dolor
abdominal) Acidosis láctica,
Insuficiencia de vitamina B12
Sulfonilureas
Gliclazida
Glibenclamida Glimepirida
Glipizida
Obstruye
canales KATP en membrana
de célula b
Incremento de la
secreción de insulina
Amplia experiencia
Reducción de riesgo de
complicaciones microvasculares
Hipoglucemia Incremento de peso
Alteración del preacondicionamiento cardíaco en isquemia
Baja durabilidad.
Inhibidores de DPP-4
Linagliptidina Sitagliptina
Saxagliptina Vildagliptina
Inhibe enzima DPP-4
Incrementa niveles de
GLP-1 y GIP
Incremento de secreción de
insulina.Reducción de la secreción de
glucagón.
No hipoglucemia No ganancia de
peso Óptima tolerancia
Eficiencia moderada en
descenso de HbA1c Pancreatitis
Inhibidores de
SGLT-2
Canagliflozina Dapagliflozina Empagliflozina
Inhiben el transportador SGLT-2 en el túbulo contorneado proximal
Incrementa la excreción renal de
glucosa Eleva excreción de
Na. Reducen la glucotoxicidad.
No hipoglucemias Disminuyen peso Rebaja la presión arterial (sistólica)
Aumento de riesgo de infecciones genitales; infecciones urinarias.
Meglitinidas
(glinidas)
Nateglinida Repaglinida
Obstruye canales KATP en membrana
de célula b
Incrementa la secreción de
insulina
Reduce la glucemia
posprandial Flexibilidad
Hipoglucemia Aumento de peso Alteración en isquemia Dosificación
frecuente
22
Tiazolidinedionas
Pioglitazona
Activa el factor nuclear de
transcripción PPAR-γ
Incremento de la sensibilidad a la
insulina
No hipoglucemia Durabilidad
Incremento del colesterol HDL
Reducción de los triglicéridos
Reducción de los eventos CV
Fracturas
Ganancia ponderal Edema/ICC
Incremento del riesgo cáncer de vejiga
Inhibidores de α
glucosidasas
Miglitol Acarbosa
Inhiben la α- glucosidasa
intestinal
Retrasa la absorción intestinal de carbohidratos
No hipoglucemia Reducción de la
glucemia posprandial
Reducción de los eventos CV
(STOP-NIDDM)
Eficacia reducida en descenso de HbA1c
Efectos secundarios GI (flatulencias)
Dosificación frecuente
Agonistas del receptor de
GLP-1
Lixisenatida Exenatida
Exenatida LAR Liraglutida
Activación de los receptores
de GLP-1
Incremento de secreción de
insulina. Reducción de secreción de
glucagón. Retarda vaciamiento
gástrico. Incrementa la
saciedad
No hipoglucemia
Disminución ponderal
Protección cardiovascular
Efectos secundarios GI (náusea, vómitos)
Pancreatitis Hiperplasia de células C/carcinoma
medular de tiroides (roedores)
Administración parenteral
Fuente: (Ampudia-Blasco & Perelló Camacho, 2016)
II.8. Impacto Social de la diabetes
En el año 2014 hubo 422 millones de pacientes con diabetes, y al siguiente
año hubo 1.6 millones de muertes a causa de esta enfermedad a nivel mundial.
El tipo de diabetes más frecuente que representa esta enfermedad es la de
tipo 2, la misma que ocuparía el séptimo puesto de la tasa de mortalidad para
el 2030 reportado por la OMS. Es por ello que se necesitan, tratamientos
adicionales para combatir la creciente incidencia de esta dolencia (Young Kim,
Hoon Kim, & Hyun Jin, 2019).
II.9. Psidium guajava L.
Se presenta como un árbol de poca altura, de la familia Myrtacear. Es común
en los trópicos y subtrópicos, tanto en las Américas como en África y Asia; en
muchos casos es utilizado para curar dolencias de la piel, dolor de estómago,
indigestión, antiinflamatorios, diabetes,etc (Angana, Sudin, & Mohan, 2019).
El fruto de este árbol es una de las fuentes naturales más ricas de vitamina
C que contiene de 2 a 5 veces más vitamina C que las naranjas. Entre las
frutas, ocupa el tercer lugar en contenido de vitamina C después de las cerezas
ácidas (Patrima, Devi, & Vidhur, 2018)
23
II.9.1 Propiedades medicinales de la Psidium guajava L.
La hoja de guayaba se ha utilizado tradicionalmente para el tratamiento de la
diabetes en el este de Asia y en otros países y también se ha evaluado el
efecto antihiperglucémico en algunos modelos animales. Sin embargo, el
efecto del extracto de hoja de guayaba sobre la absorción de sacáridos y en la
reducción de las alteraciones metabólicas que conducen a la aparición de IR
sigue sin aclararse (Mathur, Shagun, & Velpandian, 2015).
II.9.2. Origen y Taxonomía
Dicha planta es originaria de México; la cual se extiende por toda América
del Sur, Europa, África y Asia (Temsiri, Sakornrat, & Siriporn, 2019).
La clasificación taxonómica de la Psidium guajava L es la siguiente:
Tabla 4. Clasificación Taxonómica de Psidium guajava L.
Figura 1. Hoja de la guayaba (Psidium guajava L)
Fuente: (Bandera & Pérez, 2015).
El género Psidium, incluido en esta familia, está compuesto por 150
especies aproximadamente; algunas de las más importantes son P. cattleianum
Reino Plantae
División Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Subclase: Rosidae
Orden: Myrtales
Familia: Mirtaceae
Subfamilia: Myrtoideae
Género Psidium
Especie: Psidium guajava L.
24
Sabine, P. fredrichsthalianum (Berg) Nied y P. guajava (Bandera & Pérez,
2015).
II.9.3. Composición química
Entre los principales constituyentes de Psidium guajava L. se encuentran:
Vitaminas
Taninos
Compuestos fenólicos
Flavonoides: quercetina y guaijavarina. La quercetina es conocida por
sus efectos espasmolítico, antioxidantes, antimicrobianos e antinflamatorios y
la guaijavarina por su efecto antibacteriano.
Alcoholes
Ácidos sesquiterpénicas triterpenoides.
Raíz
En las raíces de este árbol contienen una gran cantidad de taninos; también
se puede encontrar leucocianidina, esteroles, cumarinas (ácido gálico), y un
gran porcentaje de carbohidratos y sales (Pazmiño, Sarmiento, & Burbano,
2015).
Corteza
Su composición es de un 12 al 30% de taninos, esteroles, resinas,
polifenoles, casuarina y cristales de oxalato de calcio (Pazmiño, Sarmiento, &
Burbano, 2015).
Flor
Se encuentran compuestos como: cumarinas, flavonoides y ácido oleánico
(triterpeno) (Pazmiño, Sarmiento, & Burbano, 2015).
Hojas
Mentol, acetato de terpenilo, α-Pineno, β-pineno, longiciclina, óxido de
cariofileno, β-bisabolol, alcohol isopropílico y cariofileno, son algunos de los
25
aceites esenciales con principios activos cuya presencia se observa en las
hojas. Sumado a lo anterior, existe una abundante cantidad de flavonoles
(flavonoide), eugenol, clorofila, taninos, triterpenos, ácido málico, saponinas y
aceites volátiles (Pazmiño, Sarmiento, & Burbano, 2015).
Fruto
Se encuentran compuestos como saponinas combinadas con ácido
olenoleico; también se reporta ácido cinamoico, ácido-3-hexenoico, flavonoides
33 (quercetina y guaijavarina) polifenoles, taninos, terpenos, glucósidos
antraquinonas y pectina (Pazmiño, Sarmiento, & Burbano, 2015).
Semilla
Se encuentra abundantes semillas de pequeños tamaños en el fruto del
árbol de la guayaba. Estas contienen un 14% de aceite en peso seco, 15% de
proteínas y 13% de almidón, también posee 10 compuestos flavonoides y
fenólicos por ejemplo: la quercetina (Pazmiño, Sarmiento, & Burbano, 2015).
CAPITULO III METODOLOGÍA
III.1 Tipo de Investigación
Exploratorio – Experimental de laboratorio- Estadístico.
III.1.1. Diseño de la Investigación
El trabajo es de carácter experimental porque los resultados son
obtenidos mediante técnicas específicas.
III.1.2. Lugar de la Investigación
La investigación se desarrolló en:
Laboratorio de Medicamentos de la Facultad de Ciencias Químicas en la
Universidad de Guayaquil.
Laboratorio de Biomedicina de la Facultad de Ingeniería Marítima,
Ciencias Biológicas, Oceánicas y Recursos Naturales, Escuela Superior
Politécnica del Litoral (ESPOL).
26
III.1.3. Período de la Investigación
El trabajo se lo realizó de Mayo a Agosto del 2019.
III.1.4. Recursos Empleados
Talento humano.
Investigadores: Céspedes Guzmán María del Cisne y Estrada Cadena
Paúl Jefferson
Tutora: Q.F. Jiménez Maria Elena. Mgs.
III.1.5. Introducción
En este capítulo se describirá la metodología experimental utilizada en el
desarrollo del presente trabajo de investigación. Los métodos incluyen:
recolección de hojas de guayaba incluidas en el estudio, selección y
preparación de las muestras, obtención de extractos acuosos y etanólicos,
desarrollo de los ensayos de inhibición ¨in vitro¨ de la enzima α-glucosidasa
para determinar la actividad inhibitoria. Este trabajo se caracteriza por la
actividad inhibitoria de la enzima α-glucosidasa a partir de extractos acuosos y
etanólicos de Psidium Guajava L.
III.1.6. Área de Estudio
El presente estudio se realizó en la ciudad de Guayaquil, provincia del
Guayas, y las hojas fueron adquiridos en dos sitios del Ecuador: Recinto El
Achiote, provincia del Guayas donde se obtuvo la muestra de zonas húmedas y
Parroquia Chanduy, provincia de Santa Elena donde se obtuvo la muestra de
zona desértica.
III.1.7.Trabajo Experimental
El tratamiento de material vegetal, obtención de extractos se realizó en
el laboratorio de medicamentos y la evaluación de la actividad inhibitoria sobre
α -glucosidasa se realizó en el Laboratorio de Biomedicina de la Facultad de
Ingeniería Marítima, Ciencias Biológicas, Oceánicas y Recursos Naturales,
Escuela Superior Politécnica del Litoral (ESPOL).
III.1.8. Identificación Taxonómica del Material Vegetal
27
Las hojas recolectados de las dos zonas climáticas del Ecuador, fueron
sometidos a un reconocimiento taxonómico a fin de verificar sus características
botánicas. Fueron llevados al Herbario QCA, de la Escuela de Ciencias
Biológicas, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Pontificia Universidad
Católica del Ecuador. La clasificación botánica fue realizada por el Blgo. Álvaro
Pérez Mg.
III.2. Equipos, Insumos, Materiales y Reactivos.
III.2.1. Materia prima e insumos
Guayaba (Psidium guajava L)
Agua potable
Agua destilada.
III.2.2 Reactivos
α-glucosidasa derivada de Saccharomyces cerevisiae Sigma/Aldrich
G5003.
p-nitrofenil-α-D-glucopiranósido (pNPG) Sigma/Aldrich N1377
Acarbosa Sigma/Aldrich A8980
Fosfato Dibásico de potasio Sigma/Aldrich 1048731000
Etanol al 96%
III.2.3 Materiales
Soporte Universal
Agitadores
Embudos pyrex
Cocina eléctrica
Papel absorbente
Papel filtro
Papel aluminio
Vidrio reloj
Vaso de precipitación 500-1000 ml
Probeta 500 ml
Espátula
Pipeta multicanal
28
Puntas desechables
Pipeta automática de 1000 uL
Matraz erlenmeyer.
III.2.4. Equipos
Lector de microplacas espectrofotómetro
Balanza analítica.
Estufa
Licuadora
Reverbero
pHmetro
III.3 Obtención del Material Vegetal
Las hojas de Psidium guajava L. (guayaba) fueron colectadas en fresco, en
diferentes zonas climáticas del Ecuador, unas se recogieron en la finca Bella
Isla ubicada vía a Bucay, provincia del Guayas donde se goza una zona
climática tropical y húmeda, en el mes de Enero. Por otra parte la segunda
variedad se tomó del sector Chanduy provincia de Santa Elena, donde se goza
de una zona climática desértica y calurosa, en el mes de Febrero.
La colecta se realizó con la ayuda de unas tijeras especializadas para el
corte sin afectar su naturaleza.
En el laboratorio de Medicamentos de la Facultad de Ciencias Químicas.
Universidad de Guayaquil, se realizó la selección y secado en estufa a 40°C ±
2°C por 4 días. Se realizó la molienda y se guardó en frascos ámbar.
III.4 PROCESAMIENTO DE MATERIA PRIMA
III.4.1. Limpieza y desinfección del material vegetal
- Las muestras se recolectaron de plantas de guayaba de las dos
variedades mencionadas.
- Se procedió a la identificación botánica de las especies vegetales.
29
- Se tomaron las hojas y se eliminó cualquier tipo de impureza y cuerpos
extraños, sacudiéndolas y lavándolas en una solución al 0.1 M de hipoclorito de
sodio.
- Se tendieron en un espacio ventilado sin la incidencia directa de la luz
solar, a temperatura ambiente por siete días para posteriormente secarlas en
una estufa y triturarlas.
- Se trituraron las hojas, recolectando el producto en recipientes por
separados para evitar la confusión de las dos variedades de Guayaba.
- Se almacenaron las muestras evitando contacto con la luz y humedad en
recipientes de vidrio forrados con papel aluminio para evitar el contacto directo
de la luz solar.
III.4.2. Maceración
Para la maceración se colocaron 200 g de Material Vegetal Seco (MVS) en
recipientes de vidrio cubiertas con 1000 ml de etanol al 96% se sella y envuelve
con papel aluminio, para evitar la evaporación del alcohol y la incidencia de luz,
al cabo de diez días se filtró para obtener el extracto.
III.5. Parte Experimental
Ambos extractos se prepararon a partir de hojas previamente seleccionadas,
descartando aquellas que presentaban lesiones visibles debidas a
contaminación microbiana o maltrato post-cosecha.
III.5.1. Preparación del extracto acuoso
Las hojas de guayaba se secaron en una estufa a 40° C durante cuatro días,
luego se pulverizó y el polvo obtenido se guardó en un frasco ámbar. Se pesó
20 g del polvo, se le adicionó 150 mL de agua destilada, se sometió a ebullición
durante 30 minutos, se filtró y el líquido filtrado se concentró a 25 ml con una
temperatura a 60°C. Posteriormente se lo guardó a -0 °C, hasta su uso.
III.5.2. Preparación del extracto etanólico
Con este propósito se pesó 200 g del polvo de las hojas de guayaba y se le
adicionó 1,000 mL de etanol al 96%, mezcla que se maceró durante 10 días, se
filtró, para su almacenamiento a temperatura ambiente hasta su uso.
30
III.5.3. Determinación de Sólidos Totales
Se realizó a partir de 2 mL de extracto homogéneo, los cuales se
transfirieron a una cápsula de porcelana previamente tarada, limpia y seca.
Posteriormente se trasladó a una estufa con una temperatura de 105 +/- 2ºC
durante 3 horas, hasta evaporación del disolvente y peso constante. Se retiró el
sistema (cápsula-muestra) de la estufa y se la colocó en un desecador hasta
que alcanzó la temperatura ambiente y se procedió a pesar en una balanza
previamente tarada. Todo este proceso se lo realizo por triplicado
La cantidad de sólidos totales (St), expresados en %, se calculó por la
expresión siguiente:
St =𝑃𝑟 − 𝑃
𝑉× 100
Donde
Pr = masa de la cápsula más el residuo (g)
P = masa de la cápsula vacía (g)
V = volumen de la porción de ensayo (mL)
100 = factor matemático
III.5.4. Ensayo de inhibición de la enzima α-glucosidasa
El ensayo de inhibición de α-glucosidasa se basa en la liberación de una
molécula de p-nitrofenol como producto del sustrato utilizado p-nitrofenil α-D-
glucósido en presencia de la enzima α-glucosidasa.
El fundamento del ensayo se describe en la siguiente reacción:
p- nitrofenil- α –D- glucopiranósido+ H2O alfa glucosidasa α –D- Glucosa + p-
nitrofenol
En donde la actividad de la α-glucosidasa se evalúa indirectamente a través
del p-nitrofenol liberado (el cual absorbe a 415 nm). Y una unidad de enzima
31
liberará 1,0µmol de D-glucosa y 1,0µmol de p-nitrofenol por minuto, a partir de
p-nitrofenil α-D-glucósido a pH 6,8 y 37°C. Por lo tanto a mayor inhibición de la
enzima, menor es la cantidad de p-nitrofenol encontrada.
III.5.5. Preparación de los Reactivos
A. Solución tampón Carbonato de Sodio
Se prepararon 250 mL de solución madre de Carbonato de Sodio; se
pesaron 1,33 g de sustancia y se agregó poco a poco a 250 mL con agua
destilada, previamente colocados en un vaso de precipitación.
B. 67 mM solución buffer de fosfato de potasio (PBS), pH 6.8 A 37°C
Se prepararon 100 ml en agua destilada usando 67 mM de Fosfato dibásico
de Potasio. Se pesaron 0,912 g de sustancia y se aforaron a 100 ml con agua
destilada. Se colocó la solución en el pHmetro y se ajustó el pH a 6.8 con 1 M
HCl.
C. 0,914 mM de solución p-nitrofenil-α-D-glucopiranósido (PNP-G)
Se pesaron 0,028 g de PNP-G y se aforaron en 100 ml de PBS Buffer pH 6.8
(Moncayo & Cazar, 2014).
D. Solución enzimática de α-glucosidasa, 5,7 U
Se preparó una solución stock de α-glucosidasa con la cual se preparó una
solución de trabajo con 5,7 U.
E. Solución de acarbosa
Se utilizó una solución de acarbosa (0.44 mg/mL) como control positivo de
inhibición.
III.5.7. Procedimiento para la inhibición de la enzima α -glucosidasa.
Se utilizó una microplaca de 96 pocillos donde se colocó 5μl de la solución
enzimática junto con 5μl de inhibidor (muestra), conservándose luego a una
temperatura de 37ºC por 5 minutos para alcanzar el equilibrio. La reacción
química se dió inicio al agregar 140 μl de p-nitrofenil- α-D-glucopiranósido
32
(PNP-G) (0,914 mM en 2500 μl de PBS 67 mM). Toda la solución fue incubada
a 37ºC por 15 minutos. Una vez transcurrido el tiempo de incubación de la
muestra, se agregó a cada microplaca 100 μl de solución de carbonato de
sodio para detener por completo la reacción química. Esta microplaca
posteriormente fue transferida a un espectrofotómetro lector de microplacas
donde las absorbancias fueron registradas a una longitud de onda de 405 nm
La antepenúltima columna de la placa se destinó para el blanco en el cual se
colocaban todos los reactivos excepto la enzima.
Para la última columna de la placa no se colocó inhibidor, definiendo este
sistema como el 100% de actividad enzimática (Herrera, Poveda, & Cazar,
2018).
Para calcular el porcentaje de inhibición se utilizó la siguiente fórmula:
% inhibición α-glucosidasa = [(𝑨𝒐−𝑨𝒃𝒍𝒂𝒏𝒄𝒐) − (𝑨𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂−𝑨𝒃𝒍𝒂𝒏𝒄𝒐)]
(𝑨𝒐 − 𝑨𝒃𝒍𝒂𝒏𝒄𝒐)× 𝟏𝟎𝟎
Siendo:
Ao= Absorbancia del 100% de la actividad enzimática.
Amuestra = absorbancia de la muestra o del patrón.
Y el Ablanco= como la absorbancia de la muestra o patrón sin la
presencia de la enzima.
33
CAPÍTULO IV – RESULTADOS Y DISCUSIONES
IV.1 Sólidos Totales
Se determinó sólidos totales a los cuatro extractos tanto acuosos como
etanólicos de Psidium guajava L: variedad de zonas desérticas y húmedas,
mediante triplicado por cada extracto.
Tabla 5. Resultados de la determinación de sólidos totales en el extracto
acuoso de Psidium guajava L.
F
u
e
n
t
e
:
A
utores
Tabla 6. Resultados de la determinación de sólidos totales en el extracto
etanólico de Psidium guajava L.
Fuente : Autores
Variedad de zona desértica Variedad de zonas húmedas
g/2ml mg/ml g/2ml mg/ml
0.0616 30.8 0.0503 25.15
0.0621 31.05 0.0500 25
0.0617 30.85 0.0493 24.65
Promedio 0.0618 30.9 0.0499 24.9333
Desviación
estándar
0.0002
0.1080
0.0004
0.2095
Variedad de zona desértica Variedad de zonas húmedas
g/2ml mg/ml g/2ml mg/ml
0.0848 42.4 0.0475 23.75
0.0838 41.9 0.0474 23.7
0.0857 42.85 0.0478 23.9
Promedio
0.0848
42.3833 0.0476 23.7833
Desviación
estándar
0.0007 0.3880 0.0001 0.0850
34
Tabla 7. Concentraciones de los extractos utilizados para sólidos totales
Zonas climáticas Concentración µg/ul
Desérticas
Extracto acuoso
30.9
Extracto etanólico
42.38
Húmedas
Extracto acuoso
24.93
Extracto etanólico
23.78
Fuente: Autores
VARIEDAD DE ZONAS DESÉRTICAS
ACUOSO
St =𝑃𝑟 − 𝑃
𝑉× 100
St =0.0618
2x 100
St = 3.09 %
ETANÓLICO
St =𝑃𝑟 − 𝑃
𝑉× 100
St = 0.0848
2x 100
St = 4.24 %
35
VARIEDAD DE ZONAS HÚMEDAS
ACUOSO
St =𝑃𝑟 − 𝑃
𝑉× 100
St =0.0499
2x 100
St= 2.50 %
ETANÓLICO
St =𝑃𝑟 − 𝑃
𝑉× 100
St = 0.0476
2x 100
St= 2.38 %
Tabla 8. Resultados de sólidos totales en las dos variedades de Psidium
guajava L. Parámetro
Sólidos Totales (%)
Variedad de zona desértica
Variedad de zonas húmeda
Acuoso Etanólico Acuoso Etanólico
3.09 % 4.24 % 2.50 % 2.38 %
Fuente: Autores
IV.2 Actividad inhibitoria de los extractos acuosos y etanólicos de las
hojas en estudio sobre la enzima α-glucosidasa.
Los resultados de los ensayos de inhibición de la enzima α-glucosidasas en
extractos acuosos y etanólicos de las hojas de las dos variedades vegetales se
muestran resumidos en la Tabla # 9.
36
Se observa que las dos variedades presentaron acción inhibitoria entre 78 –
90% sobre esta enzima, lo cual apoya la hipótesis planteada en la presente
investigación, demostrándose que los extractos de las hojas de la especie
Psidium guajava. L, provenientes de zonas desérticas y húmedas de la región
de la Costa Ecuatoriana, existen metabolitos que inhiben la acción de la enzima
α-glucosidasa.
El porcentaje de inhibición de α-glucosidasa se encontró en un rango de
valores más altos para las zonas húmedas en ambos extractos. Esta relativa
variación en el porcentaje de la actividad inhibitoria de cada extracto hace
presumir que las muestras respectivas, adquiridas en lugares diferentes del
Ecuador, provienen de la misma variedad, que crecen en ambas zonas
climáticas.
Tabla 9. Actividad inhibitoria de la enzima α- glucosidasa presente en la hojas
de Psidium guajava L. obtenidas en dos zonas del Ecuador
Especie Zonas climáticas % Actividad Inhibitoria sobre
α-glucosidasaa
Psidium
guajava. L
(guayaba)
Desérticas
Extracto Etanólico 78,18± 5,77
Extracto Acuoso 79,91± 9,02
Húmedas Extracto Etanólico
84,82± 3,41
Extracto Acuoso 90,45± 1,88
Acarbosa 97 ± 0,33
Promedio de 4 repeticiones
Fuente: Autores
En la Figura 2 se muestra el efecto inhibitorio de los extractos acuosos y
etanólicos para ambas variedades, frente al control positivo (Acarbosa) de las
hojas de Psidium guajava L sobre la actividad a-glucosidasa. En general, el
extracto etanólico de zonas desérticas obtuvo menor porcentaje de inhibición
que los demás, pero ambas variedades en extractos acuosos y etanólicos
fueron menos efectivos comparados con el compuesto terapéutico (acarbosa)
que obtuvo el 97%. El extracto etanólico de zonas desérticas (Ext Et Zd) obtuvo
el 78,18% el extracto etanólico de zonas húmedas (Ext Et Zh) obtuvo el
37
84,82% el extracto acuoso de zonas desérticas (Ext Ac Zd) el 79,91%, el
extracto acuoso de zonas húmedas (Ext Ac Zh) obtuvo el 90,45%.
Figura 2 . Efecto inhibitorio de los extractos acuosos y etanólicos para ambas variedades frente al control positivo
Fuente: Autores
En general el porcentaje de la actividad inhibitoria de α-glucosidasa de los
extractos etanólicos es menor que los extractos acuosos en el caso de las zona
desérticas; pero la actividad inhibitoria de los extractos etanólicos es levemente
menor que la de las extractos acuosos; se presume que compuestos fenólicos
que se han reportado con anterioridad en cada uno de ellas podrían medir esta
actividad.
97%
78,18%84,82%
79,91%
90,45%
0
20
40
60
80
100
120
Acarbosa Ext Et Zd Ext Et Zh Ext Ac Zd Ext Ac Zh
% d
e In
hib
ión
de
α-g
luco
sid
asa
Tipos de muestras
Porcentaje de Inhibición de α- glucosidasa
38
Tabla 10. Valores de sólidos totales utilizados en el ensayo enzimático.
Fuente: Autores
DISCUSIONES
Las limitadas diferencias encontradas en esta investigación con respecto a
estudios preliminares pudieran ser debidas a la diferencia entre las variedades
estudiadas, los factores climáticos, su origen, y al tipo de extracción.
Los sólidos totales (St) fueron mayores en los extractos de la variedad de
zona desértica comparado con la variedad de zona húmeda; en cuanto a las
dos variedades de Psidium guajava L estas se encuentran dentro del rango
según la Norma INEN 1911:2009 que define <8.0% como valor máximo para
sólidos totales (NTE INEN, 2009).
Un estudio realizado por (Alegesan & et al, 2012) reportó que el extracto
acuoso de Psidium guajava L, muestra una fuerte inhibición (99.5%) con una
concentración de 10 mg/ml sobre la enzima α-glucosidasa. Estos autores
reportaron que los componentes activos que inhiben la α-glucosidasa son
apigenina 7-O-glucósido y dihidro-3,3,4,5,7 - glucósido de pentahidroxiflavona.
Esto indica que la investigación se encuentra entre estos valores para el
extracto acuoso en las zonas húmedas, obteniéndose el 90,45% de inhibición
sobre esta enzima. La actividad de estos extractos puede deberse a la
presencia de otro (s) compuesto (s) inhibidor (es).
Variedad Volumen µL Solidos totales mg/ml
Porcentaje de inhibición
Zonas húmedas
Extracto acuoso
1,25 31.16 ± 0.0004 90.45 ± 1.88
Extracto etanólico
1,25 29.73 ± 0.0001 84.82 ± 3.41
Zonas desérticas
Extracto acuoso
1,25 38.63 ± 0.0002 79.91 ± 9.02
Extracto etanólico
1,25 52.98 ± 0.0007 78.18 ± 5.77
39
Schäfer y Högger, propone que las altas concentraciones de cualquier
extracto vegetal siempre inhibirán las enzimas por inhibición no específica,
aunque esto no ha demostrado (Schäfer & Högger, 2007)
Un estudio realizado por Rodríguez y colaboradores reportaron que el
extracto etanólico produce efecto antihiperglucemiante en un modelo de
diabetes tipo-2 en ratas Sprague Dawley; mientras que el extracto acuoso
inhibe la enzima alfa-glucosidasa in vitro, permitiendo reducir la elevación
postpandrial de glucosa en sangre y mejorar la hiperglicemia en modelos de
ratones (Rodríguez, Lafourcade, & Pérez, 2013)
40
CONCLUSIONES
De acuerdo a los resultados obtenidos en el análisis, se pudo llegar a las
siguientes conclusiones:
Se obtuvo los extractos acuosos y etanólicos de hojas de guayaba
(Psidium guajava L.) por maceración para los etanólicos y por ebullición
para los acuosos.
Se determinó sólidos totales de los extractos acuosos y etanólicos de las
hojas de Psidium guajava aplicando la técnica especificada
anteriormente, obteniéndose los siguientes resultados: para variedad de
zonas desérticas en extracto acuoso de 30.9 mg/mL y etanólico de 42.38
mg/mL, variedad de zonas húmedas en extracto acuoso de 24.93 mg/mL
y etanólico 23.78 mg/mL. Considerando estos resultados se concluye
que la variedad de las zonas desérticas para ambos extractos tienen
mayor cantidad de sólidos totales que los de la zona húmeda.
En las hojas de Psidium guajava L, el extracto que presentó mayor
actividad frente a la enzima α-glucosidasa fue el extracto acuoso de las
zonas húmedas. Los extractos acuosos de las zonas desérticas
presentaron una actividad intermedia mientras que el extracto etanólico
de las zonas desérticas presentó menor actividad inhibitoria sobre esta
enzima, comparado con los demás extractos.
Se obtuvo un mayor porcentaje de sólidos totales para la zona desértica
(3.09% – 4.24%); mientras la zona húmeda tuvo un porcentaje menor
(2.38% - 2.50%).
En revisión de la hipótesis planteada al iniciar el estudio, los resultados
indican que esta fue correcta.
41
RECOMENDACIONES
Inhibición de la enzima de alfa-glucosidasa es un enfoque prometedor
para controlar la absorción de carbohidratos con la finalidad de manejar
los niveles de glicemia. Recomendamos continuar los estudios en otras
variedades de Psidium, enfocándose en la posible inhibición de la α-
glucosidasa.
Consumir infusiones de hojas de Psidium guajava como componentes
de la dieta en pacientes diabéticos por sus propiedades
normoglucemiantes, bajo supervisión médica.
Evaluar el efecto de mayores diluciones en los extractos, con el fin de
obtener porcentajes de inhibición menores que los presentes en la
investigación.
Evaluar la actividad inhibitoria en extractos hidroalcohólicos,
comparando la eficiencia con extractos acuosos y alcohólicos.
Continuar estos estudios para identificar el/los metabolitos que ejercen el
efecto inhibitorio sobre la α-glucosidasa.
42
BIBLIOGRAFÍA
Acosta, W. (2017, Noviembre 14). Diabetes. Retrieved from En Ecuador la
diabetes es la segunda causa de mortalidad general, según los datos del
Instituto Nacional de Estadística y Censos (INEC) del 2015. Además, de
acuerdo a datos del MSP, en 2016 se reportaron 106 mil casos nuevos
de diabetes tipo 2 atendidos e
Akram T Kharroubi, & Hisham M Darwish. (2015). Diabetes mellitus: The
epidemic of the century. World Journal Of Diabetes , 19.
Alegesan, & et al. (2012). Identification of α-Glucosidase Inhibitors From
Psidium guajava Leaves and Syzygium cumini Linn. Seeds .
International Journal of Pharma Sciences and Research (IJPSR) , 316-
321.
American Diabetes Association. (2010, Enero). Diabetes. Retrieved from
http://care.diabetesjournals.org/content/33/Supplement_1/S11.full
American Diabetes Association. (2014, Enero). Diagnosis and Classification of
Diabetes Mellitus. Retrieved from
http://care.diabetesjournals.org/content/37/Supplement_1/S81.full
Ampudia-Blasco, F., & Perelló Camacho, E. (2016). Tratamiento de la diabetes
mellitus (II).HIPOGLUCEMIANTES NO INSULÍNICOS. Medicine, 18(12),
1013-1025.
Angana, B., Sudin, K., & Mohan, L. (2019, Enero 23). Chemical Composition of
Leaf Essential Oil of Psidium guajava L. from North East India. Retrieved
from
https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/0972060X.2019.1574213
Bandera, E., & Pérez, L. (2015). Review Genetic breeding of guava (Psidium
guajava L.). Retrieved from Redalyc.org:
http://www.redalyc.org/pdf/1932/193243640009.pdf
Carretero Gómez, J., & Arévalo Lorido, J. (2018, Marzo 19). Evaluación clínica
y tratamiento de la diabetes en pacientes con enfermedad renal crónica.
Revista Clinica Española, 6(11), 4-7.
Cazzola, M., & et al . (2019, Abril 01). Bronchodilators in subjects with asthma-
related comorbidities. Respiratory Medicine(151), 43-48.
Céspedes, M., & Estrada, P. (2019, Junio 25). Resultados de promedio y
desviación estandar de las cápsulas vacías. Guayaquil, Guayas,
Ecuador.
43
Chen , X., Lu , Y., Fan , Y., & Shen, Y. (2017, Abril 04). Voglibose: An Important
Drug for Type 2 Diabetes. Discovery, Chemical Synthesis, and Biological
Activity 1a edicion, 237-278.
Crespo, C., Riestra, M., & López, A. (2013). Costes directos de la diabetes
mellitus y de sus complicaciones en España (Estudio SECCAID: Spain
estimated cost Ciberdem-Cabimer in Diabetes). Dialnet, 182-189.
Retrieved from https://dialnet.unirioja.es/servlet/articulo?codigo=6446234
Dweck, A. (2004). Composición Química de Psidium Guayava. Retrieved from
A review of Guava (Psidium guajava):
http://www.dweckdata.com/Published_papers/Psidium_guajava.pdf
Esmaeili, S, & et al . (2019, Mayo 02). Dipyridamole Inhibits α-amylase/α-
glucosidase at sub-micromolar concentrations; in-vitro, in-vivo and
theoretical studies. Bioorganic Chemistry(30), 3--5.
Fleitas, A. (2015). Efecto antihiperglucemiante en condciones fisiológicas y
seguridad de la Fe2+Clinoptilolita. La Habana, Cuba: Universitaria.
Ganado, E., Garay, I., & Vega, L. (2016, Julio). Antidiabéticos orales. Farmacia
profesional, 30(4), 5-8.
Ganiyu Oboh, Babatunde Ogunsuyi, O., Damilola Ogunbadejo, M., & Adeniyi
Adefegha, S. (2016, Marzo 15). Influence of gallic acid ona-amylase
anda-glucosidase inhibitory properties of acarbose. Journal of Food and
Drug Analysis, 24, 627-634.
Genuth, S., Bennett, P., & Defronzo, R. (2010, January). Diagnosis and
Classification of Diabetes Mellitus. Retrieved from AMERICAN
DIABETES ASSOCIATION:
http://care.diabetesjournals.org/content/33/Supplement_1/S62.full
Herrera, E., Poveda, N., & Cazar, N. (2018). Evaluación de la actividad
inhibitoria de las enzimas α y β glucosidasa en frutos de la Sierra Sur
Ecuatoriana. Retrieved from Trabajo de titulación previo a la obtención
del título de Bioquímico Farmacéutico.:
http://dspace.ucuenca.edu.ec/bitstream/123456789/31214/1/trabajo%20
de%20titulaci%C3%B3n.%20doc.pdf
Herrera, T., Navarro del Hierro, J., Fornari, T., Reglero, G., & Martin, D. (2018,
Julio 22). Inhibitory effect of quinoa and fenugreek extracts on pancreatic
lipase and αamylase under in vitro traditional conditions or intestinal
simulated conditions. Food Chemistry, 270, 509-517.
Hygum, K., Linde, J. S., & Langdahl, B. (2019). Diabetes and bone,
Osteoporosis and Sarcopenia. Elsevier, 6-7.
44
INEC. (2017). Ecuador en cifras . Retrieved from
http://www.ecuadorencifras.gob.ec/documentos/web-inec/Inforgrafias-
INEC/2017/Diabetes.pdf
López, L., Aguilar, L., & Dublán, O. (2014). Actividad antioxidante e inhibidora
de αglucosidasa y α-amilasa de tres variedades de tres variedades de
cebolla (Allium cepa L.). Electrónica Nova Scientia, Vol. 6 (234-247).
Mathur, R., Shagun, D., & Velpandian, T. (2015, Abril 14). Psidium guajava
Linn. leaf extract affects hepatic glucose transporter-2 to attenuate early
onset of insulin resistance consequent to high fructose intake: An
experimental study. Retrieved from PubMed:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4357967/
Moncayo Loor , A. S. (2014). Evaluacion del potencial inhibidor de las enzimas
α y β glucosidasa en algunos frutos nativos del Ecuador. Cuenca,
Ecuador.
Moncayo, A., & Cazar, M. (2014). Evaluación del Potencial inhibidor de las
enzimas α y β glucosidasa en algunos frutos nativos del Ecuador.
Retrieved from Trabajo de graduación previo a la obtención del título de
Ingeniero de Alimentos :
http://dspace.uazuay.edu.ec/bitstream/datos/3605/1/10287.pdf
NTE INEN. (2009, 07). Norma Tecnica Ecuatoriana. Retrieved from NTE INEN
1911:2009: http://181.112.149.204/buzon/normas/1911.pdf
Nuno-Solinís, R., Alonso-Morán, E., Arteagoitia Axpe, J., Ezkurra Loiola, P.,
Orueta, J., & Gaztambide, S. (2016, Agosto 08). Healthcare costs of
people with type 2 diabetes mellitus in the Basque Country (Spain).
ENDOCRINOLOGÍA Y NUTRICIÓN, 10, 543-550.
OMS. (2016). Retrieved from https://www.who.int/topics/diabetes_mellitus/es/
Patrima, G., Devi, S., & Vidhur, K. (2018, Diciembre 15). Effect of integrated
nutrient management on growth and yield og guava (Psidium guajava
L.). Retrieved from Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry:
http://www.phytojournal.com/archives/2019/vol8issue1/PartU/8-1-178-
348.pdf
Pazmiño, K., Sarmiento, G., & Burbano, Z. (2015). Comparación del efecto
normoglucemiante de la infusión VS extracto etanólico de las hojas de
guayaba (Psidium guajava L) en ratas de experimentación con diabetes
inducida. Retrieved from Trabajo de titulación presentado como requisito
precio para optar por el grado de Química y Farmacéutica:
http://repositorio.ug.edu.ec/bitstream/redug/9052/1/BCIEQ-T-
0144%20Pazmi%C3%B1o%20Vinueza%20Karla%20Alejandra.pdf
45
Pereira da Silva, C., & et al . (2018, Septiembre 22). Identification and action of
phenolic compounds of Jatobá-do-cerrado (Hymenaea stignocarpa
Mart.) on α-amylase and α-glucosidase activities and flour effect on
glycemic response and nutritional quality of breads. Food Research
International, 4-9.
Petersen, M. J., & et al . (2019, Abril 25). Immobilized α-amylase magnetic
beads for ligand fishing: Proof of concept and identification of α-amylase
inhibitors in Ginkgo biloba. Phytochemistry, 164, 94-101.
Rodríguez, A., Lafourcade, A., & Pérez, L. (2013). Hojas de Psidium guajava L.
Revista Cubana de Farmacia, 127-135.
Rodríguez, G., Vargas, G., & Espinoza, J. (1995). Origen de la guayaba.
Retrieved from Species Plantarum:
http://www.conabio.gob.mx/conocimiento/info_especies/arboles/doctos/5
2-myrta3m.pdf
Rodríguez, R., Lafourcade, A., & Pérez, L. (2013). Hojas de Psidium guajava L .
Cubana de Farmacia, Vol. 47 (127-135).
Salgado, L., & Calle, P. (2001). Acarbosa y diabetes mellitus. Implicaciones
prácticas. An Med Interna, Vol.18 (231-233). Retrieved from
http://scielo.isciii.es/pdf/ami/v18n5/editorial.pdf
Sancho Cantus, D., Santiesteban López, N., Cuerda Ballester, M., Solera
Gómez, S., & De la Rubia Ortí, J. (2018, Septiembre 25). Stress in
Parkinson’s disease. Cortisol and amylase. Revista Cientifica de la
Sociedad Española de Enfermeria Neurologica , 18(10).
Santa Cruz, N., & Zacarías, R. (2002, Junio). Tratamiento farmacológico para la
diabetes mellitus. Retrieved from Medigraphic:
https://www.medigraphic.com/pdfs/h-gea/gg-2002/gg021-2d.pdf
Schäfer, A., & Högger, P. (2007). Oligomeric procyanidins of French maritime
pine bark extract (Pycnogenol) effectively inhibit alpha-glucosidase.
Diabetes Research and Clinical Practice, 41-46.
Temsiri, S., Sakornrat, K., & Siriporn, O. (2019). Antifungal activity of polymeric
micelles of silver nanoparticles. Retrieved from Drug Discoveries &
Therapeutics:
https://www.jstage.jst.go.jp/article/ddt/13/2/13_2019.01024/_pdf/-char/en
Vigo, J. d. (2016, 12 10). Efecto hipoglucemiante de la suplementación diaria
con extracto de “Pisidium guajava L.” en Rattus rattus var albinus.
Trujillo, Perú.
46
Wang, Y., Lee, D., Xuemei, S., Brellenthin, A., Eijsvogels, T., Church, T., . . .
Blair, S. (2019). Leisure-Time Running Reduces the Risk of Incident
Type 2. The American Journal of Medicine, 5-6.
WHO. (1999). Definition, Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus and
its Complications. Retrieved from World Health Organization:
https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/66040/WHO_NCD_NCS
_99.2.pdf
Yam, J., Villaseñor, C., & Peña, M. (2010). Una revisión sobre la importancia
del fruto de Guayaba (Psidium guajava L.) y sus principales
características en la postcosecha. Ciencias Tecnicas Agropecuarias,
Vol,19 (74-81).
Young Kim, H., Hoon Kim, J., & Hyun Jin, C. (2019). Mechanistic investigation
of anthocyanidin derivatives as α-glucosidase inhibitors. Elsevier, 4-5.
47
Glosario: Definición de términos básicos
Acarbosa: es una droga terapéutica que inhibe la alfa glucosidasa de
manera reversible, competitiva y de manera dosis dependiente. Al inhibirla,
retrasa la hidrólisis intestinal de oligosacáridos y disacáridos, principalmente en
la mitad superior del intestino delgado
Alfa-glucosidasa: es una de las enzimas clave involucradas en el
metabolismo y digestión de los carbohidratos en los seres humanos, está
presente en el borde del cepillo del intestino delgado.
Diabetes Mellitus tipo 2: es una enfermedad en la cual la persona no
fabrica suficiente insulina o no la utiliza de forma correcta.
Flavonoides: es el término genérico con que se identifica a una serie de
metabolitos secundarios de las plantas. La estructura base, un esqueleto C6-
C3C6, puede sufrir posteriormente muchas modificaciones y adiciones de
grupos funcionales, por lo que los flavonoides son una familia muy diversa de
compuestos.
Glucosa: azúcar que se encuentra en la miel, la fruta y la sangre de los
animales.
Hiperglucemia: significa cantidad excesiva de glucosa en la sangre. Es el
hallazgo básico en todos los tipos de diabetes mellitus, cuando no está
controlada o en sus inicios.
Hipoglucemia: es un estado definido por una concentración de glucosa en
la sangre anormalmente baja, inferior a 50-60 mg.
48
Hipoglucemiante: dícese del fármaco que posee la capacidad de disminuir
los niveles de glucosa en sangre. Los hipoglucemiantes como la insulina, las
sulfamidas y las biguanidas se utilizan en el tratamiento de la diabetes.
Inhibidores enzimáticos: son sustancias que interfieren con la actividad de
una enzima. Por medio de los inhibidores, una célula puede regular cuáles
enzimas están activas y cuáles inactivas en un momento dado.
Insulina: es una hormona fabricada por el páncreas que ayuda a transportar
la glucosa desde la sangre hacia el interior de las células corporales para ser
transformado en energía.
Sulfonilureas: son derivados de las sulfamidas, en los cuales la estructura
sulfonilurea constituye el grupo esencial de la actividad hipoglucemiante.
49
ANEXOS
Tratamiento de Psidium guajava para la preparación de extractos
acuosos y etanólicos
Anexo 1. Recolección de las hojas de Psidium
guajava L.
Anexo 2. Selección de las hojas de Psidium
guajava L.
Anexo 3. Lavado de las
hojas.
Anexo 4. Secado de
muestra al ambiente.
Anexo 5. Secado de
muestra en estufa con circulación de aire
Anexo 6. Muestra totalmente seca
50
Anexo 7. Triturado y
pulverizado de la muestra seca
Anexo 8. Muestra
pulverizada
Anexo 9. Pesaje de la
muestra seca (hoja de Psidium guajava L.)
Anexo 10. Preparación del extracto acuoso Anexo 11. Filtrado del
extracto acuoso
Anexo 12. Filtrado del
extracto etanólico
Anexo 13. Presentación del Extracto acuoso y etanólico de las
hojas de Psidium guajava L.
51
SÓLIDOS TOTALES
Anexo 14. Cápsula + muestra en
estufa a 105°C
Anexo 15. Cápsula + residuo en
desecador
Anexo 16. Extracto acuoso de zonas
desérticas
Anexo 17. Extracto etanólico de zonas
desérticas
Anexo 18. Extracto acuoso de zonas húmedas
Anexo 19. Extracto etanólico de zonas
húmedas
52
Anexo 20. Certificado de Identificación del espécimen
