UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD …...prueba o difusión de disco sobre el enterococcus...

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE ODONTOLOGÍA

CARRERA DE ODONTOLOGÍA

“EFECTO INHIBIDOR DEL HIDROXIDO DE CALCIO PURO CON ACEITE

ESENCIAL DE MANZANILLA “Matricaria Chamonilla” AL 100% EN

COMPARACIÓN CON HIDROXIDO DE CALCIO MAS

PARAMONOCLOROFENOL ALCANFORADO E HIDROXIDO DE CALCIO

PURO, SOBRE CEPAS DE ENTEROCOCCUS FAECALIS. ESTUDIO IN VITRO”

Proyecto de Investigación presentado como requisito previo la obtención del título

de Odontólogo

Autor: Hidalgo Narváez Juan Pablo

Tutora: Dra. Hidalgo Araujo Paola Daniela

Quito. Julio - 2016

ii

DEDICATORIA

El presente trabajo está dedicado a Dios por ser mi luz, esperanza y fortaleza,

demostrándome cada día que su amor es inmensamente grande.

A mis padres Rufo y Elizabeth por su amor, comprensión, esfuerzo y apoyo

incondicional durante este largo camino, ustedes fueron el pilar fundamental que

me permitió alcanzar la meta.

A mis hermanos gracias por estar a mi lado y apoyarme desde siempre, espero

algún día recompensar todo lo que han hecho por mí.

A mis compañeros de aula y de carrera ya que juntos fuimos alcanzando la meta

que nos propusimos

Esta obra se las dedico con todo mi cariño

Juan Pablo

iii

AGRADECIMIENTO

A la Universidad Central del Ecuador, Facultad de Odontología a todos los

docentes y demás personas que aportaron de una u otra manera en nuestra

formación profesional.

A mi asesora de tesis la Dra. Daniela Hidalgo.

A los miembros del jurado examinador Dr. Roberto Romero, Dra. Gabriela Tapia y

Dra. Silvana Terán por su colaboración en la realización, revisión y evaluación de

este trabajo investigativo.

De manera especial al Bioq. Darwin Roldan por su supervisión en el proceso de

obtención del aceite esencial de Matricaria chamomilla “manzanilla”, a la Dra.

Fernanda Loaiza por su ayuda y guía en la realización del trabajo práctico de

laboratorio y a todas las personas que estuvieron inmersos en la realización de

este trabajo de investigación.

iv

DERECHOS DE AUTOR

Yo, HIDALGO NARVÀEZ JUAN PABLO, en calidad de autor del trabajo de

investigación EFECTO INHIBIDOR DEL HIDROXIDO DE CALCIO PURO CON

ACEITE ESENCIAL DE MANZANILLA “Matricaria Chamonilla” AL 100% EN



PURO, SOBRE CEPAS DE ENTEROCOCCUS FAECALIS. ESTUDIO IN VITRO.

Autorizo a la UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR a hacer uso del contenido

total o parcial que me pertenece, con fines estrictamente académicos y de

investigación.

Los derechos que como autor me corresponden, con excepción de la presente

autorización, seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los

artículos 5, 6, 8. 19 y demás pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual y su

Reglamento.

También autorizo a la Universidad Central del Ecuador realizar la digitalización y

publicación de este trabajo de investigación en el repositorio virtual, de conformidad

a lo dispuesto en el Art. 144 de la Ley Orgánica de Educación Superior

CC. 1002806600

v

APROBACION DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN

Yo, PAOLA DANIELA HIDALGO ARAUJO, en mi calidad de tutora del trabajo de

titulación. Modalidad Proyecto de Investigación. Elaborado por JUAN PABLO

HIDALGO NARVÁEZ: cuyo título es: EFECTO INHIBIDOR DEL HIDROXIDO DE

CALCIO PURO CON ACEITE ESENCIAL DE MANZANILLA “Matricaria

Chamonilla” AL 100% EN COMPARACIÓN CON HIDROXIDO DE CALCIO MAS


PURO, SOBRE CEPAS DE ENTEROCOCCUS FAECALIS. ESTUDIO IN VITRO”,

previo a la obtención de Grado de Odontólogo; considero que el mismo reúne los

requisitos y méritos necesario en el campo metodológico y epistemológico. Para

ser sometido a la evaluación por parte del tribunal examinador que se designe., por

lo que lo APRUEBO, a fin de que el trabajo sea habilitado para continuar con el

proceso de titulación determinado por la Universidad Central del Ecuador.

En la ciudad de Quito a los 22 días del mes de Junio del 2016

DOCENTE – TUTORA

C.C:1717344566

vi

APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL

El tribunal constituido por Dr. Roberto Romero, Dra. Gabriela Tapia, Dra. Silvana

Terán

Luego de receptar la presentación oral del trabajo de titulación previo a la obtención

del título de Odontólogo, presentado por el señor Juan Pablo Hidalgo Narváez.

Con el título

EFECTO INHIBIDOR DEL HIDROXIDO DE CALCIO PURO CON ACEITE




PURO, SOBRE CEPAS DE ENTEROCOCCUS FAECALIS. ESTUDIO IN VITRO

Emite el siguiente veredicto APROBADO.

Fecha: 22 de Julio del 2016

Para constancia de lo actuado firman:

Nombre Apellido Calificación Firma

Presidente Dr. Roberto Romero 16 ptos

Vocal 1 Dra. Gabriela Tapia 20 ptos

Vocal 2 Dra. Silvana Terán 18 ptos

vii

CONTENIDOS

DEDICATORIA .................................................................................................... ii

AGRADECIMIENTO ........................................................................................... iii

AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL………………………………iv

INFORME DE APROBACIÓN DEL TUTOR ....................................................... v

CERTIFICACIÓN DEL TRIBUNAL ..................................................................... vi

CONTENIDOS .................................................................................................. vii

ÍNDICE DE FIGURAS ........................................................................................ x

ÍNDICE DE TABLAS .......................................................................................... ix

RESUMEN ......................................................................................................... xi

ABSTRACT ....................................................................................................... xii

INTRODUCCIÓN ............................................................................................... 1

CAPITULO I ....................................................................................................... 2

1. EL PROBLEMA ................................................................................... 2

1.1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ................................................. 2

1.2. OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN ................................................ 4

1.2.1. Objetivo General .................................................................................. 4

1.2.2. Objetivos específicos ........................................................................... 4

1.3. JUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA .................................................... 5

1.4. HIPÓTESIS ......................................................................................... 5

CAPITULO II ...................................................................................................... 6

2. MARCO TEORICO .............................................................................. 6

2.1. Enterococcus Faecalis ........................................................................ 6

2.2. Hidróxido de calcio ............................................................................ 10

2.3. Matricaria chamomilla “Manzanilla” ................................................... 12

2.4. Paramonoclorofenol alcanforado ....................................................... 15

CAPITULO III ................................................................................................... 19

3. METODOLOGÍA ................................................................................ 19

3.1. Tipo de investigación ......................................................................... 19

3.2. Muestra de estudio ............................................................................ 19

3.2.1. Muestra.............................................................................................. 19

viii

3.3. Criterios de inclusión y exclusión ....................................................... 20

3.3.1. Criterios de inclusión ......................................................................... 20

3.3.2. Criterios de exclusión ........................................................................ 20

3.4. OPERACIONALIZACIÓN DE LAS VARIABLES ................................ 20

3.5. Instrumentos ...................................................................................... 21

3.6. PROCEDIMIENTO Y TECNICA ........................................................ 22

3.6.1. Obtención del aceite esencial de manzanilla “Matricaria Chamomilla” al

100% .......................................................................................................... 22

3.6.2. Preparación del hidróxido de calcio con las soluciones “aceite esencial

de manzanilla, paramonoclorofenol y solución salina” ..................................... 23

3.6.2.1. Microorganismo y reactivación de las cepas bacterianas .................. 26

3.6.3. Preparación de agar mueller hinton en cajas Petri ............................ 27

3.6.4. Siembra bacteriana en las cajas Petri ............................................... 28

3.6.5. 3.6.6 Grupo de control ....................................................................... 29

3.6.6. Prueba de difusión de disco .............................................................. 29

CAPITULO IV ................................................................................................... 31

4. RESULTADOS .................................................................................. 31

4.1. Análisis estadístico sin grupo de control ............................................ 31

4.1.1. Análisis de varianza sin grupo de control .......................................... 35

4.1.2. Prueba de Tukey sin grupo de control ............................................... 37

4.2. Análisis estadístico con grupo de control .......................................... 38

4.2.1. Análisis de varianza con grupo de control ......................................... 40

4.2.2. Prueba de Tukey análisis de varianza sin grupo de control .............. 42

CAPITULO V .................................................................................................... 44

5. DISCUSION ....................................................................................... 44

CAPITULO IV ................................................................................................... 47

6. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ..................................... 47

6.1. CONCLUSIONES .............................................................................. 47

6.2. RECOMENDACIONES ..................................................................... 48

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................. 49

ANEXOS .......................................................................................................... 53

ix

ÍNDICE DE TABLAS

Tabla 1. Operacionalización de variables .............................................................. 20

Tabla 2. Resultados de la medición de halos de inhibición ................................... 31

Tabla 3. Datos estadísticos hidróxido de calcio puro ............................................ 32

Tabla 4. Datos estadísticos hidróxido de calcio + manzanilla ............................... 33

Tabla 5. Datos estadísticos hidróxido de calcio + paramonoclorofenol ................. 33

Tabla 6. Análisis de varianza sin grupo de control ................................................ 36

Tabla 7. Diferencia promedios sin grupo control ................................................... 37

Tabla 8. Resultados de la medición de halos de inhibición aplicación

gentamicina ........................................................................................................... 38

Tabla 9. Comparación medidas halos inhibición ................................................... 39

Tabla 10. Datos estadísticos hidróxido de calcio puro .......................................... 39

Tabla 11. Análisis de varianza sin grupo de control .............................................. 41

Tabla 12. Diferencia promedios con grupo control ................................................ 42

x

ÍNDICE DE FIGURAS

Figura 1. Pesaje en gramos Ca(OH)2 y colocación en cajas Petri por triplicado .. 23

Figura 3. Hidróxido de calcio, Paramonoclorofenol alcanforado, aceite esencial de

manzanilla ............................................................................................................. 24

Figura 4. Mezclas preparadas ............................................................................... 24

Figura 5. Discos de papel filtro de 6mm e impregnación de la sustancia en discos

de papel filtro ......................................................................................................... 25

Figura 7. Discos impregnados con Ca(OH)2 + paramonoclorofenol ..................... 25

Figura 8. Discos impregnados con Ca(OH)2 + suero salino ................................. 25

Figura 9. Discos impregnados con Ca(OH)2 + aceite esencial de manzanilla ...... 26

Figura 10. Cepas de enterococcus faecalis revitalizadas en agar ........................ 27

Figura 11. Rotulado de las 20 cajas Petri .............................................................. 28

Figura 13. Elución en solución salina 0.85% ........................................................ 28

Figura 14.Turbidez del 0,5 de la escala de McFarland .......................................... 29

Figura 15.Inoculación de las cepas de Enterococcus ........................................... 29

Figura 16. Discos de gentamicina y colocación de discos placas Petri ................. 30

Figura 18. Colocación de discos de cada sustancia utilizada en las cajas Petri ... 30

Figura 19. Comparación de resultados ................................................................. 34

Figura 20. Estabilidad de las muestras ................................................................. 35

Figura 21. Estabilidad de las muestras ................................................................. 40

xi

TEMA: EFECTO INHIBIDOR DEL HIDROXIDO DE CALCIO PURO CON ACEITE




PURO, SOBRE CEPAS DE ENTEROCOCCUS FAECALIS. ESTUDIO IN VITRO.

AUTOR: Juan Pablo Hidalgo Narváez

TUTORA: Dra. Paola Daniela Hidalgo Araujo

RESUMEN

El presente estudio se concentra en demostrar que sustancias son las más efectivas para inhibir cepas de enterococcus faecalis, entre estas sustancias se encuentran el hidróxido de calcio, extracto de manzanilla y paramonoclorofenol alcanforado. Para determinar la efectividad de las sustancia se utilizó el ensayo de prueba o difusión de disco sobre el enterococcus faecalis ATCC 29212; Los resultados determinaron que la mayor acción inhibidora fue la obtenida en el uso de hidróxido de calcio más paramonoclorofenol. Es importante mencionar, que existe una mínima variación entre los tres elementos investigados, llegando a determinar que no existe diferencia entre los promedios de las muestras, por lo que, sus efectos son estadísticamente similares. Para contrastar este resultado, se utilizó el efecto de la gentamicina el cual tiene un mayor efecto.

Palabras claves: HIDRÓXIDO DE CALCIO, EXTRACTO DE MANZANILLA, PARAMONOCLOROFENOL, ENTEROCOCCUS FAECALIS.

xii

TITLE: INHIBITORY EFFECT OF PURE CALCIUM HYDROXIDE WITH 100%

PURE CHAMOMILE (Matricaria chamonilla) OIL, COMPARED TO CALCIUM

HYDROXIDE WITH CAMPHORATED PARAMONOCHLOROPHENOL, AND

PURE CALCIUM HYDROXIDE, AGAINST Enterococcus faecalis STRAINS. IN

VITRO STUDY.

AUTHOR: Juan Pablo Hidalgo Narváez

TUTOR: Dr. Paola Daniela Hidalgo Araujo

ABSTRACT

This study focuses on testing which substances are most effective in inhibiting Enterococcus faecalis; these substances include calcium hydroxide, chamomile extract and camphorated paramonochlorophenol. In order to determine the effectiveness of said substances, this study used the disc diffusion test on Enterococcus faecalis ATCC 29212 strains. The results determined that the highest inhibitory effect was that of the combination of calcium hydroxide with paramonochlorophenol. However, it is important to mention that the variation between the three assessed substances was minimal, allowing us to conclude that there is no significant differences between sample averages; the effects of all three substances are statistically similar. To provide some contrast, this study considered gentamycin, a substance more effective than those assessed herein.

Keywords: CALCIUM HYDROXIDE/ CHAMOMILE EXTRACT/ PARAMONOCHLOROPHENOL/ Enterococcus faecalis.

1

INTRODUCCIÓN

La cavidad bucal alberga un sin número de microorganismos en un sistema de

complejidad considerable. Se pueden identificar entre 200 y 300 especies de

bacterias nativas de la cavidad bucal humana, las mismas que pueden crecer y

multiplicarse dependiendo de las condiciones de ambiente en donde viven. Entre

las bacterias más frecuentes que están asiladas en la cavidad bucal se encuentran

el enterococcusfaecalis, estos microorganismos se asocian en parejas y cadenas

cortas (Liebana, 2002)y si bien su hábitat es el intestino se han podido aislar como

microbiota normal en la mucosa oraly dorso de la lengua.(Padilla & Roncal, 2014)

El enterococcusfaecalis, es una bacteria muy resistente a los procedimientos de

desinfección del conducto, esta especie bacteriana es la segunda más común

“capaces de penetrar en los túbulos dentinarios,convirtiéndose así en inaccesible a

la acción de irrigantes y medicamentos intraconducto”(Padilla & Roncal, 2014)

Por otra parte el hidróxido de calcio es una sustancia empleada en la práctica diaria

odontológica como “medicamento intraconducto que ha demostrado efectos

antimicrobianos en los conductos radiculares, debido a su excelente acción

bactericida y bacteriostáticadebido a su disociación en iones calcio e hidroxilo, que

influyen en el metabolismo celular”(Tello, 2008)

De allí, que esta investigación tiene como objetivo principal comparar los efectos

antibacterianos del hidróxido de calcio puro más el aceite esencial de manzanilla

“matricaria chamomilla” al 100% en comparación con hidróxido de calcio más

paramonoclorofenol alcanforado e hidróxido de calcio puro, sobre cepas de

enterococcusfaecalis, con el propósito de determinar la acción antibacteriana que

poseen estas sustancias y conocer que sustancia resulta en una mayor efectividad

contra la bacteria objeto del estudio.

2

CAPITULO I

1. EL PROBLEMA

1.1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Uno de los tratamientos de mayor prevalencia en Odontología es el tratamiento del

conducto radicular y extirpación total de la pulpa dental (nervio, arteria y vena);

estos si no se tratan adecuadamente, pueden ocasionar perdida de la unidad

dentaria afectada, teniendo como consecuencia alteraciones: estéticas, digestivas,

entre otras.

Al ejecutar estos procesos odontológicos por parte del especialista existe el riesgo

de permanencia de bacterias como el enterococcusfaecalis, que está presente en

el sistema gastrointestinal del ser humano, en el caso de no tomar las debidas

precauciones en los procedimientos de limpieza e higiene. La característica de la

bacteria mencionada, es su alta resistencia a los mecanismos de desinfección, lo

que dificulta aún más su eliminación en los procedimientos odontológicos.

Al ingresar estos microorganismos en la pieza dental y/o cavidad bucal del paciente

se puede producir una infección que no permite el éxito en el tratamiento

odontológico, además motiva continuas visitas al especialista y reduce la

efectividad de los procedimientos de Endodoncia mencionados.

En el sentido de búsqueda de elementos que faciliten la asepsia en los consultorios

dentales, la medicina natural, a partir de las plantas y sus propiedades

antimicrobianas, últimamente ha recibido mucha atención de los científicos,

comprobándose las propiedades de sus componentes que van confirmando que

permiten combatir a los agentes patógenos.

Además, porque es importante conocer más sobre plantas medicinales como

métodos alternativos en el consultorio dental, pues con su ayuda, no se deberán

utilizar fármacos que a largo plazo se pueden volver perjudiciales para el

organismo.

3

A criterio de Farinango(2012) “actualmente la medicina natural es una de las

alternativas más empleadas en la población en general, el uso de las plantas

medicinales en la salud buco dental ha despertado el interés por sus distintas

ventajas”. Este aspecto del uso de la medicina natural en la Odontología establece

un mayor interés para la ejecución de la presente investigación.

4

1.2. OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN

1.2.1. Objetivo General

Determinar el efecto inhibidor del hidróxido de calcio puro con manzanilla al 100%

en comparación al hidróxido de calcio más paramonoclorofenol alcanforado y el

hidróxido de calcio puro sobre cepas de enterococcusfaecalis, en estudios in vitro

al cabo de un tiempo de determinación de exposición.

1.2.2. Objetivos específicos

Investigar la medida de los halos de inhibición formados por el hidróxido de

calcio puro con aceite esencial de manzanilla al 100% en el cultivo bacteriano

de enterococcusfaecalis.

Establecer la medida de los halos de inhibición formados por el hidróxido de

calcio más paramonoclorofenol alcanforado en el cultivo bacteriano de

enterococcusfaecalis.

Determinar la medida de los halos de inhibición formados por el hidróxido de

calcio puro en el cultivo bacteriano de enterococcusfaecalis.

Comparar estadísticamente las medidas de los halos de inhibición formados

por el hidróxido de calcio puro con aceite esencial de manzanilla al 100%,

hidróxido de calcio más paramonoclorofenol y el hidróxido de calcio puro en

las cepas de enterococcusfaecalis.

5

1.3. JUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA

La medicina natural aunque ha sido utilizada como tratamiento médico general

desde hace muchos años, es muy poco conocida como posible aporte al ámbito

odontológico. Al respecto, existen investigaciones para estudiar el comportamiento

de ciertos compuestos de origen vegetal sobre flora mixta salival y bacterias de

Streptococcusmutans, entre las que se pueden señalar las realizadas con aceite

esencial de Camelliasinensis "Te verde" y extracto etanólico de Propóleo.

Con el aceite esencial de la Matricaria chamomilla "manzanilla" ocurre algo similar,

sus múltiples beneficios médicos son bien conocidos se le han atribuido

propiedades antiinflamatorias y antisépticas pero su posible uso como ingrediente

de asepsia dental tiene limitadas referencias investigativas; esta circunstancia,

motiva la realización de la investigación y su aplicación en el medio odontológico.

Dada la escasez de investigaciones científicas en el área temática, fortalece el valor

del trabajo propuesto. De esta manera, la presente investigación podrá brindar una

alternativa de solución al problema planteado en las páginas iniciales de este

escrito.

1.4. HIPÓTESIS

El efecto inhibidor del hidróxido de calcio puro con manzanilla al 100% es mayor

que el hidróxido de calcio más paramonoclorofenol alcanforado y el hidróxido de

calcio puro sobre cepas de enterococcusfaecalis en estudios in vitro.

6

CAPITULO II

2. MARCO TEÓRICO

2.1. EnterococcusFaecalis

Portenier, Walitmo, & Haapasalo(2003) mencionan que hasta el año de 1980, los

enterococos no eran considerados un género bacteriano independiente, más bien

estaban incluidos dentro de los estreptococos a pesar de sus diferentes

características. Los enterococos pasaron a formar parte de otro género formal en

1984 después de realizar varios estudios de hibridación ADN-ADN o ADN-ARN

donde se demostró mayores diferencias en comparación con los estreptococos.

(González, 2015)

“El Enterococcusfaecalises considerado el microorganismo patógeno más

relacionado a las infecciones endodóncicas persistentes, ya que suele ser aislado

con frecuencia en la flora mixta. Eventualmente esta bacteria logra sobrevivir en los

conductos radiculares ya que tiene una capacidad de adaptarse y soportar

circunstancias ecológicas extremas debido a sus propiedades microbiológicas y su

habilidad de formar el biofilm” (Liebana, 2002)

Acosta (2005) delimita advirtiendo que los más comunes de Enterococcus son el

Faecalis y el Faecium y podría conceptualizarlos de la siguiente manera.

“Los enterococos, particularmente Enterococcusfaecalis y Enterococcusfaecium,

forman parte de la flora normal del tracto gastrointestinal tanto humano como animal

y del tracto genitourinario femenino humano. En la última década, estos organismos

han adquirido cada vez más importancia como patógenos nosocomiales, a pesar

de su baja virulencia”(Acosta, 2005, pág. 1).

Lo que está intentando afirmar Acosta con “patógenos nosocomiales” es que su

ambiente normal en áreas de hospitales es una de las causas de la transmisión de

enfermedades. Además este tipo de enterococos puede habitar en el área bucal

como lo menciona (Díaz, Salas, Fernández, & Martínez, 2007)

7

“Los enterococos pueden ser aislados de cavidad bucal y pueden actuar como

microorganismos patógenos en infecciones del tracto urinario y en casos de

endocarditis subaguda, además pueden originar infecciones intraabdominales,

pélvicas y en neonatales” (Díaz, Salas, Fernández, & Martínez, 2007)

Estudios realizados por Canalda(2006)han indicado que “una de las peculiaridades

de esta bacteria, es que tolera bien pH cercano a 12, se cree que esta capacidad

se debe a que puede sintetizar proteínas cuando se expone a condiciones adversas

de supervivencia, como pueden ser la irrigación con hipoclorito de sodio”(pág. 38)

Género Enterococcus

Taxonomía y clasificación del Género Enterococcus

El término enterococcus fue utilizado por primera vez en 1899 por Thiercelin, para

describir un nuevo diplococo gram positivo de origen intestinal, en el mismo año,

Mac Callun y Hasting publicaron un caso de endocarditis producida por

MicrococcusZimogenis (hoy sinónimo de Enterococcusfaecalis), posteriormente en

1906 la denominación de Streptococcusfaecalis sería utilizada por AndrewsHorder

para describir un caso de endocarditis producida por un coco gram positivo,

manteniéndose esta última hasta la década de los 80 que cambio a E. faecalis.

(Murray, 1990)

En 1937 Sherman clasificó los estreptococos en cuatro grupos: piogénicos,

viridans, lácticos y enterococos. El grupo enterococo está compuesto por

microorganismos que crecen a 10 y 45 ºC en NaCI al 6,5% sobreviven a 60 ºC

durante 30 minutos y son capaces de hidrolizar la esculina. Estas características

siguen hoy vigentes para la diferenciación de este grupo de cocos gram positivos.

En el esquema serológico de Lancefield, propuesto a comienzo de la década de los

30, el grupo D se correlacionó con los enterococos de la clasificación de Sherman

aunque no todos los estreptococos grupo D son enterococos. La separación en dos

géneros diferentes de los estreptococos grupo D no enterococos y enterecocos, no

tuvo lugar hasta comienzos de los 80 (Murray, 1990)

8

Kalima(2002), propuso en 1970 que S. feacalis y streptucoccusfaeciun fueran

transferidos a un nuevo grupo el género Enterococcus (Krogstad, R.C., &

Moeilering, 1986) ; esto no ocurre hasta 85, año en que aparece en la Lista de

nombres bacterianos aprobados del International Journal of

SystematicBacteriology. (Krogstad, R.C., & Moeilering, 1986)

Tras la publicación del trabajo deScheleifer& Kilpper-Batz(1984)en el que se

propone la nueva denominación de Enterococcusfaecalisy Enterococcusfaecium,

para S. faecalisy S. faecium, como consecuencia de los resultados obtenidos de

hibridaciones ADN-ADN y ADN-rARN entre cepas pertenecientes a estreptococos

grupo O enterococos, y no enterococos y Streptococcus. Posteriormente, también

se cambian las denominaciones de streptococcusavium,

Streptococcuscassellflavus, Streptococcusdurans, streptococcusgallinarum, y

Streptococcusmalodoratus. (Reguera, 1995)

En la novena edición del Bergey’s Manual of SystematicBacteriology, de la sección

12 (cocos gram positivos), se describen en el apartado Enterococos, incluidas en

el género Streptococcus, las cepas S. faecalis, S. faecium,avium,y S. gaflinarun. El

género Enterococcusestá constituido, hoy, por doce especies, las cuatro descritas

en el Bergey’s como Streptococcusenterococos, y las siguientes:

Enterococcusdurans, Enterococcuscasseliflavus,

Enterococcusmaloduratus,Enterococcushiree, Enterococcusmundtti,

Enterococcusrafflnosus, enterococcussoutarius, y Enterococcuspseudoavium

(Reguera, 1995)

Identificación y características microbiológicas del enterococcusfaecalis

“Enterococcusfaecalis es un coco Gram positivo, anaerobio facultativo, no presenta

movilidad, no esporulado, puede presentarse solo, en pares o en cadenas, el

tamaño de cada célula oscila entre 0,5 y 0,8 micrómetros; puede crecer a una

temperatura de 35°C; e incluso a temperaturas entre 10 y 45°C. Es una bacteria

tolerante al cloruro de sodio al 6.5% y a sales biliares, así también son especies

fermentativas que no producen gases. Ostenta pared celular constituida por

peptidoglucanos y ácido teicoico” (Liebana, 2002)

9

Reaccionan con el antisuero D de Lancefield, aunque algunos E. aviunson

reconocidas por el antisuero Q (158, 210). El determinante antigénico, grupo

específico, que responde al antisuero O de Lanceficíd es un ácido glicerol-teicoico

asociado con la membrana citoplásmica.(Reguera, 1995)(1

El contenido guanina-citosina (G+C) está comprendido entre el 37 y 45%. La

estructura del peptidoglicano es de tipo A (Lys-D-Asp), excepto E. faecalisque es

de tipo B (Lys-Ala 23) (210). Son inmóviles, excepto E. casseliflavus, E. gallenaruny

algunas cepas de E. faecalis (Reguera, 1995)

Factores de Patogenicidad

Para Arias (2009) la resistencia de esta bacteria no depende tanto de sus factores

de virulencia como de su capacidad para sobrevivir y persistir como patógeno en el

interior de los conductos radiculares, lo que consigue por diversos motivos a los

que menciona Arias pero en este caso se ha escogido los más fundamentales.

“Puede subsistir largas temporadas de escases de nutrientes y utilizar el suero

como fuente de alimento. A demás el suero procedente del hueso alveolar y del

ligamento periodontal le sirve de ayuda para unirse al colágeno tipo 1. Resiste a la

medicación intraconducto con hidróxido de calcio durante más de 10 días en el

interior de los túbulos” (Arias, 2009).

Con todo lo mencionado anteriormente se ha caracterizado las posibilidades de

sobrevivencia de la bacteria enterococos en situaciones adversas, esto crea la

necesidad de buscar un tratamiento adecuado en la lucha por desinfectar

ambientes contaminados por el mismo.

10

2.2. Hidróxido de calcio

“El hidróxido de calcio en un polvo blanco producto de la calcinación del

carbonocálcico” que en su nomenclatura equivaldría a la siguiente fórmula: CO3Ca

= CaO + CO2CaO + H2O = Ca (OH)2. (pág. 45).

“Introducido para su uso en Endodoncia por B. W. Herman en 1920, el hidróxido de

calcio es un polvo blanco alcalino, poco soluble en agua (1,7lg/ L). Sus propiedades,

que lo llevaron a ser ampliamente utilizados en endodoncia, se relacionan en gran

medida con su disociación en iones calcio o hidroxilo. Para usarlo como medicación

temporaria entre sesiones, el hidróxido de calcio se mezcla con un vehículo

preferentemente acuoso (agua estéril, solución fisiológica entre otros), para

deformar una suspensión con pH aproximado de 12,4”(Soares & Goldberg, 2002,

pág. 133)

Aunque se proponen otros vehículos para mezclarlos con el polvo la presencia de

agua es fundamental para que se produzca la disociación iónica antes dicha.

(Soares & Goldberg, 2002)

“El hidróxido de calcio Ca(OH)2, representa un auxiliar precioso de la terapéutica

endodóntica se utiliza en diversas situaciones clínicas por su poder antiséptico y su

propiedad de estimular o crear condiciones favorables para la reparación hística”

(Soares & Goldberg, 2002)

Sus propiedades que lo llevaron a ser ampliamente utilizado en Endodoncia se

relacionan en gran medida con su disociación en iones calcio Hidroxilo.

Es el medicamento intraconducto más utilizado, indicado en el control y tratamiento

de las reabsorciones radiculares, perforaciones, tratamiento de fracturas

transversales, apicogénesis, tanto en dientes con o sin vitalidad y en piezas que

presenten o no lesión periapical(De Lima, 2009)

En el tratamiento de dientes con pulpa mortificada, la indicación para el uso de

hidróxido de calcio como medicación temporaria entre sesiones se funda en su

11

acción antiséptica reconocida, resultante de su pH elevado. “Al colocarse en el

interior del conducto radicular en contacto directo con las paredes dentinarias se

produce en presencia de agua la ionización del hidroxilo de calcio y por

consiguiente, la alcalinización del medio” (Soares & Goldberg, 2002)

“Al llegar al interior de los túbulos dentinarios, los iones hidroxilo modifican el pH de

la dentina, lo que provoca la destrucción de la membrana celular de las bacterias y

de sus estructuras proteicas. Las alteraciones del pH de la masa dentinaria torna

inadecuado el medio para la supervivencia de la mayoría de los microorganismo de

la flora endodontica. (Soares & Goldberg, 2002, pág. 134)

De acuerdo con lo que menciona Briones (2009) las propiedades del hidróxido de

calcio son las siguientes:

Induce la remineralización de la dentina.

Posee un pH altamente alcalino.

Potente bactericida.

Es antinflamatorio.

Produce envejecimiento pulpar por estimulación de las fibras colágenas.

Biocompatibilidad excelente con tejidos periapicales.

No es tóxico

Se ha demostrado que “el hidróxido de calcio actúa sobre las endotoxinas

bacterianas, hidroliza la porción lipídica del liposacárido bacteriano (LPS), presente

en la pared celular de las bacterias anaeróbicas gram negativas, y neutraliza su

acción estimulante sobre el proceso de reabsorción del tejido óseo” (Soares &

Goldberg, 2002, pág. 134)

Mecanismo de acción del hidróxido de calcio.

“El hidróxido de calcio tiene un alto poder bactericida y es tal vez la medicación más

empleada en Endodoncia como complemento de la preparación biomecánica. Su

acción antiséptica se debe fundamentalmente a su alto pH, que hace incompatible

12

el desarrollo bacteriano en su contacto. La acción del hidróxido de calcio como

medicamento intraconducto puede ser explicada por la difusión de iones hidroxilos

a través de la dentina, lo cual influye en el crecimiento y multiplicación bacteriana”

(Fereira, 2005)

“Es un medicamento utilizado como medicación intrarradicular, pudiendo ser

entresesiones o en períodos largos de tiempo; está indicado en el control y

tratamiento dereabsorciones radiculares, perforaciones, tratamientos de fracturas

transversales,apicogénesis e inducción de cierre apical, tanto en dientes vitales o

sin vitalidad”(Lima, 2003)

“El efecto de su pH altera el transporte de nutrientes y componentes orgánicos a

través de la membrana citoplasmática, inhibiendo las actividades enzimáticas que

son esenciales para la vida bacteriana, tales como metabolismo, crecimiento y

división celular, y ejerciendo una acción tóxica para la bacteria. También activa la

fosfatasa alcalina, que es una enzima hidrolítica íntimamente relacionada con el

proceso de mineralización del tejido”(Fereira, 2005)

Por estas razones, se cree que el hidróxido de calcio presenta dos propiedades

enzimáticas esenciales que son:

Inhibición de las enzimas bacterianas por su efecto antibacterial.

Activación de las enzimas tisulares, tal como la fosfatasa alcalina, la cual

favorece la restauración del tejido a través de la mineralización

2.3. Matricaria chamomilla “Manzanilla”

“La utilización de sustancias naturales en el tratamiento de diferentes

enfermedades, constituyen en la actualidad un desafío en la medicina y se ofrece

como alternativa, especialmente para aquellas que no existe un remedio adecuado”

(Domingo & López-Brea, 2003)

13

En la actualidad se ha llegado a un proceso de difusión de las propiedades de los

productos naturales o que se derivan de estos. Dentro de este contexto se ha

incluido a la esencia de manzanilla con el fin de investigar las propiedades

medicinales de dicha planta.

“Las plantas medicinales han sido utilizadas durante siglos como un método

curativo siendo los países más pobres los que particularmente han optado por esta

alternativa debida a ciertas razones entre las que se destacan su bajo costo, poca

toxicidad y la simplicidad para su elaboración”(Sanchez, Gonzàlez, & Lura, 2006,

pág. 89)

La manzanilla para Gispert, Cantillo, Rivero y Oramas(2008) “es considerada una

planta medicinal y su eficacia curativa se conoce desde la antigüedad” (pág. 35) y

su acción en el tratamiento de algunas bacterias mediante la fusión con otros

elementos.

Composición Química

“La parte principal de la planta de manzanilla son sus flores, ya que aquí se

encuentran los compuestos químicos que forman parte del aceite esencial entre los

que resalen el camazuleno, bisabolol y la apigenina, además de otros compuestos

como las cumarinas, flavonoides, antemidina, ácido antémico, matricina, taninos,

ácidos grasos, carotenos, ácido ascórbico y ácido salicílico” (Morón, Furones, &

Pineda, 1996)

Farmacología

“La manzanilla actúa principalmente como: Antinflamatorio, coleréticos, colagogos,

sedantes y relajantes además presenta propiedades antisépticas y anti infecciosas

que están relacionadas con el contenido de aceites esenciales como el camazuleno

y bisabolol, la presencia de flavonoides y matricina” (Pardo & Morales, 2006)

Además mencionan que tinturas de manzanilla presentan efectos sobre algunos

microorganismos que forman parte del biofilm y su efecto es similar al de la

14

clorhexidina. También indica que sus propiedades antiinflamatorias se deben al

mecanismo que impide la acción directa de la encima COX-2. (Gaete & Oliva, 1998)

Por otra parte Romero et al. (2009) menciona que el principal mecanismo de acción

de la manzanilla durante los procesos infecciosos es la ruptura de la membrana

celular la misma que puede ocurrir por tres razones: Aumento de la permeabilidad,

afectación de la estabilidad estructural y por consiguiente desestabilidad de la

bicapalipídica produciendo la lisis bacteriana. (Romero, Hernández, & Gil, 2009,

pág. 10)

Uso reportado

“Las hojas y las flores son ampliamente usadas para tratar una gran variedad de

males, tales como las infecciones gastrointestinales (diarrea, dispepsia, flatulencia,

gastralgia, gastritis, inflamación intestinal, parasitismo, indigestión, inapetencia),

inflamación urinaria, amigdalitis, cefalea, convulsiones, difteria, dismenorrea, gota,

histeria, insomnio, lumbago, ictericia e hidropesía, nerviosismo y reumatismo”

(Cruz, 2009, pág. 10)

La aplicación terapéutica endodóntica del aceite esencial de manzanilla podría

estar dirigida para una de las fases del procedimiento clínico, como irrigante durante

la sesión de trabajo endodóntico o como medicación intraconducto entre sesiones.

(Linares, 2012)

La manzanilla de forma tópica es utilizada en forma de compresas, cataplasmas y

emplastos para aliviar inflamaciones así como afecciones dermatomucosas, por vía

oral la manzanilla tiene la propiedad antinflamatoria, calmante, depurativa,

expectorante y estimulante.

15

Efectos adversos

“El manejo de las flores puede producir dermatitis de contacto y reacciones

alérgicas el uso excesivo de la infusión puede ser abortivo por ser un estimulante

uterino, de donde está contraindicado en embarazadas” (Cruz, 2009, pág. 8)

Descripción Botánica

“Planta herbácea anual de fuerte aroma, frondosa y rastrera que no sobrepasa los

50 cm. De altura. Su tallo ramificado, cilíndrico, estriado y velloso, es de color verde

blanquecino. Hojas alternas y segmentadas. Las flores, amarillas en el centro y

rodeadas de lígulas blancas, están dispuestas en cabezuelas solitarias al final del

péndulo”(Cárdenas, 2009, pág. 4)

Pueden realizarse descripciones detalladas, pero se ha considerado oportuno para

la investigación lo que se ha mencionado con el objetivo de no mencionar

elementos innecesarios.

Aceite Esencial de Manzanilla

Por otro lado el aceite esencial de manzanilla en un estudio realizado por Ríos

(2008) en el que demuestra las propiedades de dicho componente en el tratamiento

de algunas infecciones humanas afirma que:

“El aceite esencial de manzanilla es un ingrediente popular en tópicos de salud y

de belleza por sus efectos calmante y antiinflamatorio sobre la piel. Debido al amplio

uso del aceite esencial de manzanilla en el presente estudio se evaluó el potencial

citotóxico y contra Leishmania de este aceite…La actividad citotóxica se evaluó en

células promonocíticas humanas”(Ríos, 2008, págs. 203-204).

2.4. Paramonoclorofenol alcanforado

“El Paramonoclorofenol alcanforado es un antiséptico intraconducto muy utilizado.

Fue introducido en odontología por Walkhoff en 1891. Es un derivado del fenol,

16

sólido a temperatura ambiente. Se obtiene al triturar cristales de paraclorofenol con

alcanfor. La proporción aproximada es de dos partes de paraclorofenol por tres de

alcanfor. El resultado es un líquido oleoso, color ámbar, con un característico olor

penetrante”(Fereira, 2005, pág. 48)

El Paramonoclorofenol presenta doble acción antiséptica basada en la función

fenólica y en la presencia del ion cloro, liberado con lentitud durante el uso.El

alcanfor con el que se asocia además de servir como vehículo, disminuye la acción

irritante del derivado fenólico, de lo cual resulta un fármaco con bajo poder de

agresión a los tejidos vivos. Como características desfavorables se incluye su

acción básicamente por contacto y la neutralización de su efecto en presencia de

materia orgánica. (Soares & Goldberg, 2002)

El paramonoclorofenol forma parte de numerosas combinaciones de antiséptico

como el Cresophene, Clorotimonol, Cresanol y Neogrove. También es componente

de pastas antisépticas como las de Walkhoff y Maisto, así como de pastas alcalinas

como las de Frank, Holland o Leonardo, que lo combinan con el hidróxido de calcio;

estas pastas son de suma utilidad como medicación tópica de conductos con

lesiones periapicales crónicas por su efectividad frente a una flora mixta y

fundamentalmente anaeróbica” (Briones, 2010, pág. 48)

También se ha estudiado la combinación del paramonoclorofenol con el hidróxido

de calcio, demostrándose que paramonoclorofenol incrementa los efectos

antibacteriales del hidróxido. Esta combinación destruye bacterias en los túbulos

en un período de 1 hora excepto para el Enterococcusfaecalis, para el cual se

requiere un día. La combinación del paramonoclorofenol alcanforado e hidróxido

produce una sal pesada, paramonoclorofenolato de calcio, la cual en un ambiente

acuoso libera lentamente el paramonoclorofenol y el hidróxido de calcio”(Fereira,

2005)

Propiedades:

Bactericida Penetrante

Sinérgico o potenciador de la acción de otros fármacos

17

Poco irritante (biocompatible)

Alivia el dolor Bajo costo

Fecha de caducidad amplia (Briones, 2009)

Mecanismo de acción del Paramonoclorofenol alcanforado:

El paramonoclorofenol alcanforado es un halofenol cuya acción antiséptica se debe

fundamentalmente a la lenta liberación de cloro naciente. Es un efectivo bactericida

cuando se pone en contacto directo con las bacterias, pero no produce inhibición

del desarrollo bacteriano cuando los vapores son los únicos responsables de su

actividad.

El mecanismo de acción antiséptico se debe a la ruptura de la pared celular

bacteriana y precipitaciones de las proteínas celulares; consecuentemente,

también ocurre la inactivación del sistema de enzimas esenciales”(Farinango,

2012)

“El paramonoclorofenol alcanforado disminuye la capacidad de adherencia de los

macrófagos inflamatorios de una manera dosis dependiente; tomando en cuenta

que la adhesión es el primer paso en el proceso de fagocitosis de los macrófagos

y en la presentación del antígeno, el paraclorofenol y paramonoclorofenol

alcanforado, podrían inhibir la función del macrófago y modular reacciones

inflamatorias e inmunes en los tejidos periapicales que conllevan a los procesos

reparativos” (Briones, 2009)

Efectos del Paramonoclorofenol Alcanforado

Los principales efectos de este antiséptico son los siguientes

Solórzano (2011) estudió los efectos del paramonoclorofenol alcanforado sobre las

células del ligamento periodontal humano y encontraron que este medicamento

inhibe la viabilidad y la proliferación de las células del ligamento periodontal de una

manera dosis dependiente, razón por la cual se cree que podría causar daños en

18

el periodonto e impedir la cicatrización y regeneración periodontal. (Solórzano,

2011, pág. 56).

El paramonoclorofenol alcanforado tiene una importante acción sobre los

microorganismos aeróbios más resistente al tratamiento; es comparativamente

menos activo sobre anaeróbios”(Fereira, 2005)

Pueden mencionarse otros efectos de este componente, pero es importante

recalcar el uso en el tratamiento de la salud dental más concretamente en

Endodoncia.

“Debido a la baja dosis y frecuencia de exposición, su uso clínico es generalmente

seguro para los humanos. Sin embargo, en altas concentraciones son altamente

citotóxicos”(Briones, 2009, pág. 48)

19

CAPITULO III

3. METODOLOGÍA

3.1. Tipo de investigación

El diseño de la investigación corresponde a un diseño experimental, ya que, el

investigador genera una situación para tratar de explicar interrelación entre dos

variables (Hernandez Sampieri, 2010). En este caso, el efecto inhibidor del

hidróxido de calcio puro con aceite de manzanilla, el hidróxido de calcio con

paramonoclorofenol y el hidróxido de calcio puro sobre la bacteria

enterococcusfaecalis.

El método de investigación según análisis y alcance de los resultados será de tipo

experimental in vitro debido a que mediante la manipulación de una o varias

variables y en condiciones controladas se utilizarán medios de cultivo que servirán

para el desarrollo de las bacterias, manejadas directamente en el laboratorio.

3.2. Muestra de estudio

3.2.1. Muestra

Población: Cepa de Enterococcusfaecalis ATCC 29212 adquirida a través de

(MEDIBAC S.A.).

Para determinar la muestra, se aplica el tipo de muestreo no probabilístico, que

se define como “un procedimiento de selección donde la elección de unidad de

análisis no depende de la probabilidad de un cálculo, sino de la decisión del

investigador” (Gómez, 2012).

En la presente investigación las cepas de estudio son provistas por el Laboratorio

MEDIBAC S.A. a criterio del investigador.

20

Muestra.- bacterias propias de los tratamientos de Endodoncia.

3.3. Criterios de inclusión y exclusión

3.3.1. Criterios de inclusión

Cultivos de bacterias Enterococcusfaecalis provenientes de la cepa ATCC29212

que cumplan todos los requisitos de un medio ideal.

3.3.2. Criterios de exclusión

Cultivos que no cumplan los requerimientos normales como disponibilidad

denutrientes, consistencia adecuada del medio, condiciones adecuadas

dehumedad, luz ambiental, pH adecuado, temperatura, esterilidad.

3.4. OPERACIONALIZACIÓN DE LAS VARIABLES

Tabla 1. Operacionalización de variables

Variable Dimensiones Indicadores Escala

Independiente: Hidróxido de calcio

puro con aceite esencial de matricaria

chamomilla

Una concentración al 100%

Cuantitativa

100%


con paramonoclorofenol

mas alcanfor

Proporción estándar Cuantitativa

Razón de mezcla

entre los componentes


puro Una concentración Cuantitativa

Razón de mezcla

entre los componentes

21

Variable Dimensiones Indicadores Escala

Dependiente: Efecto inhibidor del hidróxido de calcio

puro con aceite esencial de matricaria

chamomilla “manzanilla” al 100%

Actividad antibacteriana al 100%

Cuantitativa

Milímetros

3.5. Instrumentos

Para el desarrollo de la presente investigación se utilizaron los siguientes

materiales, reactivos y equipos:

Estudio invitro:

Cepa de Enterococcusfaecalis ATCC 29212

Reactivos:

Suero salino

Manzanilla

Hidróxido de Calcio

Paramonoclorofenol alcanforado

Gentamicina

Agua destilada

Solución salina

Agar Mueller-Hinton

Materiales:

Cajas Petri de vidrio

Papel filtro

Tubos de vidrio

22

Espátula metálica

Puntas desechables para micropipeta

Frascos de vidrio

Palillos de madera

Pinzas metálicas

Hisopo de algodón

Asa metálica

Equipos

Balanza analítica

Cabina de flujo laminar

Micropipeta de 200µL

Autoclave

Incubadora

Mechero Bunsen

Regla milimetrada para medir halos

Calibrador Vernier

Bomba peristáltica Langer

3.6. PROCEDIMIENTO Y TECNICA

3.6.1. Obtención del aceite esencial de manzanilla “Matricaria Chamomilla”

al 100%

La obtención del aceite esencial de manzanilla se efectuó mediante el método por

arrastre de vapor, decantación y purificación en rota vapor con la ayuda del

Bioquímico Darwin Roldán de la Facultad de Bioquímica de la Universidad Central

del Ecuador. Con la aplicación de esta técnica generalmente se garantiza la

obtención del aceite esencial de manzanilla puro libre de impurezas.

Se colocó aproximadamente 150 gramos de flores secas (muestra vegetal) en un

balón de fondo plano durante un tiempo aproximado de 4 horas, esta muestra entró

23

en contacto con el vapor de agua como resultado del sobrecalentamiento de un litro

de agua en un recipiente aparte, los aceites esenciales son arrastrados por la

corriente de vapor de agua para ser condensados, recolectados y separados de la

parte acuosa, obteniendo una cantidad aproximada de 3 ml de aceite esencial al

100% por cada destilación.

3.6.2. Preparación del hidróxido de calcio con las soluciones “aceite esencial

de manzanilla, paramonoclorofenol y solución salina”

Mediante una balanza analítica se pesó 200mg de hidróxido de calcio 100% puro

por triplicado, utilizando como recipiente una caja Petri estéril. Se garantizó la

esterilidad del proceso durante la preparación de todas las concentraciones:

Figura 1. Pesaje en gramos Ca(OH)2 y colocación en cajas Petri por triplicado Fuente: Lab. Microbiología SAFEMLAB

La primera concentración de hidróxido de calcio fuemezclada con 300uL de suero

fisiológico estéril, la segunda con 300 uL de paramonoclorofenol y la tercera con

1mL de aceite esencial de manzanilla. El proceso se llevó a cabo en una cabina de

bioseguridad de clase II (Airstearm – ESCO).

24

Figura 2. Hidróxido de calcio, Paramonoclorofenol alcanforado, aceite esencial de manzanilla Fuente: Laboratorio de Microbiología SAFEMLAB

Se procedió a mezclar con el uso de un palillo estéril el hidróxido de calcio con cada

solvente hasta la formación de una crema pastosa. La mezcla de hidróxido de calcio

con el aceite esencial de manzanilla se dificultó por la volatilidad del compuestos

por ello se utilizó solo 1ml de aceite.

Figura 3. Mezclas preparadas

Una vez preparadas las mezclas, los discos de papel filtro de 6mm de diámetro

fueron impregnados por la sustanciacorrespondiente por separado. Estos discos

fueron utilizados en el ensayo de difusión descrito posteriormente.

25

Figura 4. Discos de papel filtro de 6mm e impregnación de la sustancia en discos de papel filtro

Figura 5. Discos impregnados con Ca(OH)2 + paramonoclorofenol

Figura 6. Discos impregnados con Ca(OH)2 + suero salino

26

Figura 7. Discos impregnados con Ca(OH)2 + aceite esencial de manzanilla

3.6.2.1. Microorganismo y reactivación de las cepas bacterianas

El estudio microbiológico se llevó a cabo en las instalaciones del laboratorio de

microbiología SAFEMLAB bajo la tutoría de la doctora microbióloga Fernanda

Loaiza y la técnica a utilizar se llama difusión de disco.

La cepa de Enterococcusfaecalis ATCC 29212 fue adquirida a través del proveedor

nacional (MEDIBAC S.A.). Su presentación en liofilizado facilitó su transporte y

almacenamiento hasta la revitalización. El set comercial cuenta con una ampolla de

hidratación constituida por un caldo nutritivo que una vez que se rompe hidrata al

microorganismo liofilizado en el fondo del recipiente. Con el aplicador del mismo

set se inocula el microorganismo hidratado sobre un medio de cultivo (agar

nutritivo). Luego de incubación a 37 grados centígrados por 18 a 24 horas se

observaron colonias pequeñas y medianas redondas blanquecinas

correspondientes al microorganismo mencionado.

27

Figura 8. Cepas de enterococcusfaecalis revitalizadas en agar

3.6.3. Preparación de agar muellerhinton en cajas Petri

Las pruebas de difusión de disco se realizaron en agar MuellerHinton de acuerdo a

la normativa internacional (CLSI o EUCAST). Se prepararon 20 cajas Petri de

90mm de diámetro con 25ml de medio de cultivo cada una, esto se hizo pesando

19 gramos de medio de cultivo deshidratado en 500ml de agua destilada. La mezcla

se homogenizó colocando la botella pyrex de vidrio sobre una plancha caliente con

agitación magnética durante 10 minutos. El medio de cultivo se esteriliza en

autoclave garantizando un tiempo de exposición de 15 minutos a 121 grados

centígrados.

Al salir del autoclave, el medio de cultivo se mezcla y se deja enfriar hasta 40 grados

centígrados para repartir 25mL de medio líquido en cada caja Petri utilizando una

bomba peristáltica (BT 100; Langer Instruments). Se deja enfriar completamente

hasta que el medio se vuelva sólido por la concentración de agar presente.

Las 20 cajas fueron almacenadas en temperatura de refrigeración y rotuladas del

uno al veinte hasta iniciar el procedimiento experimental

28

Figura 9.Rotulado de las 20 cajas Petri

3.6.4. Siembra bacteriana en las cajas Petri

Con el microorganismo de prueba que fue cultivado por 18-24horas se hace una

elución en solución salina 0.85% estéril hasta alcanzar una turbidezdel 0,5 de la

escala de McFarland (1-2 x 108 UFC/ml). Esta elución fue utilizada para la

inoculación homogénea sobre la superficie completa de las placas de MuellerHinton

utilizando hisopos estériles. Y frotando sobre el agar en todas las direcciones

Figura 10. Elución en solución salina 0.85%

29

Figura 11.Turbidezdel 0,5 de la escala de McFarland

Figura 12.Inoculación de las cepas deEnterococcus Faecalis(1-2 x 108 UFC/ml) en las placas Petri

3.6.5. 3.6.6 Grupo de control

Se utilizó como grupo de control la gentamicina y agua destilada estéril.

3.6.6. Prueba de difusión de disco

Utilizamos el ensayo de Kirby Bauer (difusión de disco) para evaluar el probable

efecto antimicrobiano de las sustancias en estudio, colocando un disco de papel

filtro impregnado con la mezcla de hidróxido de calcio correspondiente sobre la

superficie del agar con sus colonias bacterianas de enterococcusfaecalis. La pinza

30

con la que se coloca cada disco debe ser independiente para evitar el error por

contaminación cruzada.

Figura 13.Discos de gentamicinay colocación de discos placas Petri

Figura 14. Colocación de discos de cada sustancia utilizada en las cajas Petri

31

CAPITULO IV

4. RESULTADOS

Una vez cumplido el tiempo de incubación de 18 a 24 horas se midieron los halos

de inhibición del crecimiento microbiano alrededor de cada disco de prueba, como

se muestra en la tabla 2.Al finalizar el tiempo de incubación se observó una leve

precipitación del hidróxido de calcio hacia el fondo del agar pero los discos de papel

filtro con las sustancias experimentales permanecieron fijas dando lugar a la

formación de los halos de inhibición respectivos.

Posteriormente, se procedió a realizar la medición individual de los halos de

inhibición formados alrededor de cada disco que contenían las sustancias

experimentales mediante un calibrador vernier o regla pie de rey y una regla

milimetrada registrando las medidas en milímetros; de esta manera, se procedió a

realizar las lecturas y el llenado en la tabla de recolección de datos.

Con el fin de obtener un mejor resultado y para verificar la efectividad de los

elementos en estudio, se incorpora la acción de la gentamicina, como grupo de

control en la investigación.

4.1. Análisis estadístico sin grupo de control

Los resultados de medición son los siguientes:

Tabla 2. Resultados de la medición de halos de inhibición

Número muestra Hidróxido

calcio puro

Hidróxido calcio +

Manzanilla

Hidróxido calcio + paramonoclorofenol

1 8 8 6

2 6 6 9

3 6 7 6

4 7 8 8

5 7 8 6

6 8 8 8

7 8 8 7

8 6 8 6

32

Número muestra Hidróxido

calcio puro

Hidróxido calcio +

Manzanilla

Hidróxido calcio + paramonoclorofenol

9 6 7 9

10 6 8 7

11 6 7 7

12 7 6 7

13 8 5 8

14 6 6 6

15 6 5 8

16 7 7 7

17 8 6 6

18 8 8 7

19 6 6 9

20 8 5 8

Fuente:Laboratorio de Microbiología SAFEMLAB Elaborado por: Juan Pablo Hidalgo

Los datos estadisticos calculados en base a las mediciones de la tabla anterior son

los siguientes:

Tabla 3. Datos estadísticos hidróxido de calcio puro

Estadistico Valor calculado Hidróxido calcio

puro

Media 6,90

Minimo 6,00

Máximo 8,00

Mediana 7,00

Desviación estandar 0,91

Margen de error al 5% 0,93

Intervalo

confianza para

media al 95%

Limite superior 7,299

Limite inferior 6,501

Elaborado por: Juan Pablo Hidalgo

33

Tabla 4. Datos estadísticos hidróxido de calcio + manzanilla

Estadistico Valor calculado Hidróxido calcio +

manzanilla

Media 6,85

Minimo 5,00

Máximo 8,00

Mediana 7,00



Intervalo

confianza para

media al 95%




Tabla 5. Datos estadísticos hidróxido de calcio + paramonoclorofenol

Estadistico Valor calculado Hidróxido calcio +

paramonoclorofenol

Media 7,25

Minimo 6,00

Máximo 9,00

Mediana 7,00



Intervalo

confianza para

media al 95%




34

La siguiente figura resume los resultados obtenidos en relación a los valores

máximo, mínimo y media:

Figura 15. Comparación de resultados

Elaboración: Juan Pablo Hidalgo

Como se muestra en la figura anterior, la medición del mayor halo de inhibición se

presenta en la muestra que corresponde al compuesto de hidróxido de calcio más

paramonoclorofenol, el cual tiene un nivel máximo de 9 milímetros y el valor de la

media es 7,25 milímetros.

Esto demuestra que entre los tres componentes, el que tuvo mayor efectividad es

el compuesto de hidróxido de calcio más paramonoclorofenol. En el caso del

hidróxido de calcio puro y el hidróxido de calcio más manzanilla, tuvieron resultados

muy similares en la media y el valor máximo.

En cuanto a la estabilidad de los resultados de la medición del halo de inhibición, el

hidróxido de calcio es la más estable, ya que tiene un valor de desviación estándar

de 0,91; por el contrario, la muestra de hidróxido de calcio más manzanilla es la

que tiene un valor de desviación estándar de 1,14, lo que indica que tiene mayor

inestabilidad. Como lo muestra la siguiente figura:

6,9

6

8

6,8

5

5

8

7,2

5

6

9

M E D I A M Í N I M O M Á X I M O

Hidroxido calcio puro Hidroxido calcio + Manzanilla Hidroxido calcio + paramonoclorofenol

35

Figura 16. Estabilidad de las muestras


Los resultados obtenidos de la medida de los halos de inhibición son muy similares

entre los tres componentes, por lo que es necesario, aplicar el análisis de la

varianza y la Prueba Tukey.

4.1.1. Análisis de varianza sin grupo de control

Con el objeto de determinar si los resultados obtenidos son estadísticamente

similares, se aplica el análisis de varianza de las muestras medidas en los halos de

inhibición.

Aplicando el análisis de datos para varianzas de un solo factor del programa de

Excel, detallan los siguientes resultados:

0,9

1

1,1

4

1,0

7

H I D R O X I D O C A L C I O P U R O H I D R O X I D O C A L C I O P U R O + M A N Z A N I L L A

H I D R O X I D O C A L C I O P U R O + P A R A M O N O C L O R O F E N O L

36

Tabla 6. Análisis de varianza sin grupo de control

Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza

Hidróxido de calcio 20 138 6,9 0,83157895

Hidróxido de calcio + manzanilla

20 137 6,85 1,12611684

Hidróxido de calcio + paramonoclorofenol

20 145 7,25 1,18684211

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las variaciones

Suma de cuadrados

Grados de libertad

Promedio de los cuadrados

Valor F

Valor P

Valor crítico para F

Entre grupos 0,792253333 2 0,396126667 0,3779188 0,68699032 3,158842719

Dentro de los grupos

59,74622 57 1,048179298

Total 60,53847333 59


Las hipótesis planteadas para el análisis de varianza es el siguiente:

Hipótesis nula: Los promedios de los diámetros de los halos de inhibición de las

bacterias al aplicar los componentes del estudio son estadísticamente similares.

Hipótesis alterna: Los promedios de los diámetros de los halos de inhibición de

las bacterias al aplicar los componentes del estudio no son estadísticamente

similares.

Con el 95% de confiabilidad se obtienen los siguientes resultados:

Valor de F: 0,3779188

Valor de P: 0,68699032

Valor crítico de F: 3,158842719

Nivel de significancia de 0,05

El valor de P es mayor al nivel de significancia, por lo tanto se acepta la hipótesis

nula, es decir, los promedios de los diámetros de los halos de inhibición de las

bacterias al aplicar los componentes del estudio son estadísticamente similares.

37

4.1.2. Prueba de Tukey sin grupo de control

La prueba de Tukey se emplea para conocer la diferencia estadísticamente

significativa (HSD) entre muestras, para establecer el cálculo se emplea el siguiente

procedimiento:

1. Determinar los grados de libertad, es igual al número de la muestra menos

uno; en este caso, 60 (tres elementos de veinte muestras cada uno) menos

uno, es igual a 59.

2. Obtener el valor de alfa de la prueba de Tukey, según la tabla de valores

críticos, para 59 grados de libertad y tres grupos, es igual a 3,4.

3. Calcular el cuadrado del error medio, es igual a la suma de cuadrados dentro

de los grupos, con valor de 59,746, según la tabla xx; dividido para los grados

de libertad, según la tabla xx, con valor de 57. El cuadrado del error medio

es igual a 1,048.

4. Calcular HSD, que es igual, al valor de alfa de la prueba Tukey multiplicado

por la raíz cuadrada de la división entre cuadrado error medio y el tamaño

de la muestra; esto es, HSD = 0,778.

5. Construir la siguiente tabla con la diferencia de los promedios de la muestra:

Hidróxido calcio puro = H. Media = 6,90

Hidróxido de calcio + manzanilla = HM. Media = 6,85

Hidróxido de calcio + paramonoclorofenol = HP. Media = 7,25

Tabla 7. Diferencia promedios sin grupo control

H HM HP

H X -0,05 0,35

HM -0,05 X 0,4

HP 0,35 0,4 X


38

La diferencia entre los promedios, establecidos en la tabla anterior, es menor al

valor de HSD de 0,778, por lo tanto, no existe diferencia entre los promedios de las

muestras. Con lo que, se confirma, que el efecto inhibidor entre el hidróxido de

calcio, hidróxido de calcio más manzanilla e hidróxido de calcio más

paramonoclorofenol es similar en las bacterias de enterococcusfecaelis.

4.2. Análisis estadístico con grupo de control

Para establecer el grupo de control, se ha utilizado la gentamicina, que es un

antibiótico aminoglucosido, que se emplea para tratar infecciones bacterianas. Los

resultados en la medición de los halos de inhibición es el siguiente:

Tabla 8. Resultados de la medición de halos de inhibición aplicación gentamicina

Numero muestra Gentamicina

1 20

2 19

3 18

4 18

5 19

6 18

7 20

8 21

9 18

10 20

11 20

12 21

13 20

14 19

15 20

16 21

17 19

18 20

19 21

20 19


Comparando los resultados anteriores con los componentes en estudio se

establece lo siguiente:

39

Tabla 9. Comparación medidas halos inhibición

Numero muestra Gentamicina Hidroxido

calcio puro

Hidroxido calcio +

Manzanilla

Hidroxido calcio + paramonoclorofenol

1 20 8 8 6

2 19 6 6 9

3 18 6 7 6

4 18 7 8 8

5 19 7 8 6

6 18 8 8 8

7 20 8 8 7

8 21 6 8 6

9 18 6 7 9

10 20 6 8 7

11 20 6 7 7

12 21 7 6 7

13 20 8 5 8

14 19 6 6 6

15 20 6 5 8

16 21 7 7 7

17 19 8 6 6

18 20 8 8 7

19 21 6 6 9

20 19 8 5 6


Es notoria la diferencia entre las medidas obtenidas en los halos de inhibición con

gentamicina y los componentes en estudio, esto indica, que la gentamicina tiene

mayor efectividad en el tratamiento de infecciones con la bacteria de

enterococcusfecaelis, esto se va a comprobar con los siguientes análisis

estadísticos.

Tabla 10. Datos estadísticos hidróxido de calcio puro

Estadistico Valor calculado Hidróxido calcio

puro

Media 19,55

Minimo 18,00

Máximo 21,00

Mediana 20,00



40

Intervalo

confianza para

media al 95%




En cuanto a la estabilidad de la muestra con gentamicina, esta es mucho más

estable que hidróxido de calcio y manzanilla e hidróxido de calcio y

paramonoclorofenol. Como lo muestra la siguiente figura:

Figura 17. Estabilidad de las muestras


4.2.1. Análisis de varianza con grupo de control

Con el objeto de determinar si los resultados obtenidos con el grupo de control son

estadísticamente similares, se aplica el análisis de varianza de las muestras

medidas en los halos de inhibición.

0,9

1

1,1

4

1,0

7

1,0

5

H I D R O X I D O C A L C I O P U R O

H I D R O X I D O C A L C I O P U R O + M A N Z A N I L L A

H I D R O X I D O C A L C I O P U R O +

P A R A M O N O C L O R O F E N O L

G E N T A M I C I N A

41

Tabla 11. Análisis de varianza sin grupo de control

Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza

Hidróxido de calcio 20 138 6,90 0,033294737

Hidróxido de calcio + manzanilla

20 137 6,85 0,038394474

Hidróxido de calcio + paramonoclorofenol

20 145 7,25 0,03172

Gentamicina 20 391 19,55 0,8134050

ANÁLISIS DE VARIANZA

Origen de las variaciones

Suma de cuadrados

Grados de libertad

Promedio de los cuadrados

Valor F

Valor P

Valor crítico para F

Entre grupos 2721,65601 3 907,21867 3958,135 2,374E-83 2,72494932

Dentro de los grupos

17,41947 76 0,2292

Total 2739,07548 79


Las hipótesis planteadas para el análisis de varianza es el siguiente:

Hipótesis nula: Los promedios de los diámetros de los halos de inhibición de las

bacterias al aplicar los componentes del estudio y el grupo de control son

estadísticamente similares.

Hipótesis alterna: Los promedios de los diámetros de los halos de inhibición de

las bacterias al aplicar los componentes del estudio y el grupo de control no son

estadísticamente similares.

Con el 95% de confiabilidad se obtienen los siguientes resultados:

Valor de F: 3958,135

Valor de P: 0,00

Valor crítico de F: 2,725

Nivel de significancia de 0,05

42

El valor de P es menor al nivel de significancia, por lo tanto se rechaza la hipótesis

nula y se acepta la hipótesis alterna, es decir, los promedios de los diámetros de

los halos de inhibición de las bacterias al aplicar los componentes del estudio no

son estadísticamente similares.

4.2.2. Prueba de Tukey análisis de varianza sin grupo de control

Para establecer el cálculo se emplea el siguiente procedimiento:

1. Determinar los grados de libertad, es igual al número de la muestra menos

uno; en este caso, 79 (cuatro elementos de veinte muestras cada uno)

menos uno, es igual a 79.

2. Obtener el valor de alfa de la prueba de Tukey, según la tabla de valores

críticos, para 79 grados de libertad y cuatro grupos, es igual a 3,74.

3. Calcular el cuadrado del error medio, que es igual a la suma de cuadrados

dentro de los grupos, con valor de 17,41947, según la tabla xx; dividido para

los grados de libertad, según la tabla xx, con valor de 76. El cuadrado del

error medio es igual a 0,2292.

4. Calcular HSD, que es igual, al valor de alfa de la prueba Tukey multiplicado

por la raíz cuadrada de la división entre cuadrado error medio y el tamaño

de la muestra; esto es, HSD = 0,4004.

5. Construir la siguiente tabla con la diferencia de los promedios de la muestra:

Hidróxido calcio puro = H. Media = 6,90

Hidróxido de calcio + manzanilla = HM. Media = 6,85

Hidróxido de calcio + paramonoclorofenol = HP. Media = 7,25

Gentamicina = G. Media = 19,55

Tabla 12. Diferencia promedios con grupo control

H HM HP G

43

H X -0,05 0,35 12,65

HM -0,05 X 0,4 12,7

HP 0,35 0,4 X 12,3

G 12,65 12,7 12,3 X


La diferencia entre los promedios, establecidos en la tabla anterior, es mayor al

valor de HSD de 0,4004, por lo tanto, si existe diferencia entre los promedios de las

muestras. Con lo que, se confirma, que el efecto inhibidor entre el hidróxido de

calcio, hidróxido de calcio más manzanilla e hidróxido de calcio más

paramonoclorofenol es diferente al efecto inhibidor de la gentamicina en las

bacterias de enterococcusfecaelis.

44

CAPITULO V

5. DISCUSION

El presente trabajo de investigación buscó determinar si el hidróxido de calcio puro

con manzanilla al 100% en comparación al hidróxido de calcio más

paramonoclorofenol alcanforado y el hidróxido de calcio puro ejercen un efecto

inhibidor sobre las cepas de enterococcusfaecalis, al cabo de un tiempo de

exposición de 24 horas, se pudo evidenciar que el grupo de control en este caso la

gentamicina tuvo la mayor actividad antimicrobiana, cuyosresultados fueron

tomados con la medición de los halos de inhibición presentes en loscultivos

bacterianos formados a las 24 horas de incubación los cuales

estadísticamentemostraron medias de 19,55mm para el grupo de control

(gentamicina), hidróxido de calcio puro 6,90mm; hidróxido de calcio más aceite

esencial de manzanilla al 100% 6,85mm y para el hidróxido de calcio más

paramonoclorofenol de 7,25mm.

Estos resultados permiten observar que los grupos de estudio presentaron un

comportamiento similar en cuanto al efecto inhibitorio de las diferentes

concentraciones preparadas sobre las cepas de enterococcusfaecalis, sin embargo

el compuesto de hidróxido de calcio más paramonoclorofenol alcanforado presenta

una mayor medición del halo inhibitorio si se compara con los compuestos de

hidróxido de calcio puro e hidróxido de calcio más aceite esencial de manzanilla.

Estudios realizados por otros investigadores similares al realizado en este estudio

dan cuenta del efecto antibacteriano de la manzanilla (matricaria chamomilla) frente

a los microorganismos patógenos, así Carpio (2008), en su estudio demostró que

el aceite de Manzanilla (Matricaria Chamomilla) tiene un alto efecto antimicrobiano

contra bacterias de la cavidad oral. De igual manera otra investigación realizada

por Lima (2003)determinó que existe actividad antibacteriana en cepas Gram

negativas del aceite esencial de Matricaria chamomilla al igual que Romero,

Hernández, & Marielsa(2008) demostraron el efecto antiséptico y antiinfeccioso de

la Matricaria recutita viene dado por la presencia de derivados terpénicos como:

45

matricina, camazuleno, a-bisabolol y los óxidos a y b del bisabololchamomilla sobre

el Streptococcusmutans.

Cosco (2010) en su trabajo de tesis determinó la existencia de un efecto inhibidor

del desarrollo bacteriano con el aceite de manzanilla sobre el streptococcusmutans,

además el estudio dio como resultado diferencias significativas con respecto al

tamaño del halo de inhibición en las distintas concentraciones utilizadas.

Estos estudios han demostrado que el aceite esencial de manzanilla muestra su

efecto antimicrobiano sobre las cepas de streptococcus de manera independiente

al porcentaje de concentración así como al tiempo de exposición, a diferencia del

resultado de esta investigación en la cual no se mostró un efecto antimicrobiano del

aceite de manzanilla junto con el hidróxido de calcio.

Mismo resultados que el efecto antimicrobiano del desarrollo bacteriano con el

aceite esencial de manzanilla se han demostrado con el estudio realizado por

Farinango(2012)“el cual confirmó la acción inhibitoria del paramonoclorofenol

alcanforado y gluconatoclorhexidina al 2% sobre las cepas de

enterococcusfaecalis, de igual manera determinó que existe un aumento del efecto

inhibidor al aumentar el tiempo de exposición en el caso de la concentración de

aceite esencial de manzanilla, a mayor concentración mayor poder inhibidor y

viceversa” (Farinango, 2012, pág. 53)

Aguirre (2015)concluyó en su trabajo de investigación que el

paramonoclorofenolfue efectivo sobre el enterococcusfaecaliscon un promedio en

mediciones de sus halos de 15 milímetros a 37ºc por 24 horas, mientras que a las

48 y 168 horas no se observó cambios aparentes.

Para comprobar la actividad antibacteriana del paramonoclorofenol alcanforado

Aguirre(2015)“lo compara con el propóleo al 5% y lo enfrenta a cuatro bacterias

frecuentes en necrosis pulpar, los resultados indican que las dos sustancias fueron

efectivas para eliminar el Enterococcusfaecalis”

Estos estudios difieren con los resultados obtenidos en esta investigación ya que

los halos inhibitorios del hidróxido de calcio junto con el parmonoclorofenol

46

alcanforado denotan una baja acción antimicrobiana dado que la media del halo de

inhibición de este compuesto es de 7,25 mm pero si se compara con los demás

compuestos con los que se realizó las pruebas de efecto antimicrobiano el hidróxido

de calcio + el paramonoclorofenol alcanforado presente la mayor medición del halo

inhibitorio sobre la cepa de estreptococcusfaecalis después del grupo de control

hablando de la gentamicina.

Por otra parte Delgado(2010)utilizó en su estudio el hidróxido de calcio y

clorhexidinasobre las cepas de Enterococcusfaecalisy comprobó que el hidróxido

de calcio muestra unamenor eficacia antibacteriana por lo que se evidenciaron

colonias de Enterococcusfaecalis viablesa los 14 días de iniciado el tratamiento,

demostrando la persistencia del microorganismo, de igual manera los estudios

realizados por Canalda(2006), Cohen&Hargreaves(2008), sugieren que el

Enterococcusfaecalis es una bacteria resistente al hidróxido de calcio ya que hasido

encontrada en los túbulos dentinarios, después del transcurso de una semana

eincluso mayor a 10 días.

De esta misma forma Tanriverdi (1997) coincide con el resultado de

estainvestigación en que períodos cortos de tiempo de aplicación de hidróxido de

calcio sonineficaces para una desinfección apropiada del sistema de conductos

radiculares.

Con estas investigaciones se corrobora los resultados del presente estudio en

donde se observa que no existe efecto antimicrobiano del hidróxido de calcioen los

cultivos de enterococcusfaecalis expuestos a 24 horas de exposición, ya que

presenta un halo de crecimiento de 6,90mm estadísticamente la media más inferior

que el resto de los compuestos utilizados en esta investigación, determinando

resistencia bacteriana a comparación con el grupo de control.

47

CAPITULO IV

6. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

6.1. CONCLUSIONES

El efecto inhibidor del hidróxido de calcio puro con manzanilla al 100%,

determino un efecto mínimo sobre las bacterias investigadas, ya que según

el estudio aplicado en las cepas de enterococcusfaecalis in vitro, presentaron

medidas no significativas en los halos de inhibición.

Confirmado la conclusión anterior, se determina que la medida de los halos

de inhibición formados por el hidróxido de calcio puro con aceite esencial de

manzanilla al 100% en el cultivo bacteriano de enterococcusfaecalis mostro

una medida mínima en milímetros por lo cual su efecto inhibitorio es mínimo

o nulo en comparación con el hidróxido de calcio masparamonoclorofenol e

hidróxido de calcio puro los cuales mostraron halos de inhibición más

significativos.

De esta manera se determina que, el mayor efecto de estos tres compuestos

lo tiene el hidróxido de calcio mas paramonoclorofenol, ya que, tiene la

mayor medida del halo de inhibición.

La ejecución del análisis de varianza y la prueba de Tukey, determinan que

estas muestras son estadísticamente similares, por lo que, el efecto de los

tres componentes en las bacterias de enterococcusfaecalis tienen efectos

similares.

Al establecer como grupo de control la aplicación del antibióticogentamicina,

se obtuvo mejores resultados en los halos de inhibición de la bacteria de

enterococcusfaecalis, ya que determinaron, valores mucho más altos en los

halos de inhibición.. Esto determina que es un tratamiento de mayor

efectividad para la bacteria mencionada.

48

6.2. RECOMENDACIONES

Ampliar la investigación empleando otros antibióticos para conocer su

efectividad sobre la bacteria de enterococcusfaecalis, de esta manera, se

puede verificar, cuál de los medicamentos mencionados surte el mayor

efecto inhibidor.

Otra opción importante, es ejecutar un estudio con diferenciación en los

tiempos de exposición de los elementos empleados, como son, hidróxido de

calcio, aceite de manzanilla y paramonoclorofenol. Los tiempos de

exposición, se pueden aumentar de 24 a 48 o 72 horas; así, se puede

determinar si existe mayor efectividad ante mayor tiempo de exposición y

existe mayor halo de inhibición en la bacteria investigada.

Incorporar en la investigación otro tipo de medicamentos, como el extracto

de propóleo, para verificar su efecto inhibidor en comparación con los

elementos empleados en el presente estudio, que son hidróxido de calcio,

extracto de manzanilla y paramonoclorofenol.

Adicional a las conclusiones que llega el presente estudio sobre el uso de

medicamentos para tratar infecciones bacterianas en tratamiento de

Endodoncia, es importante establecer que las medidas preventivas tienen

igual importancia; esto es la antisepsia, preparación de biomecánica y el uso

de elemento de irrigación en el momento del tratamiento de Endodoncia.

49

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53

ANEXOS

Discos impregnados con Ca(OH)2 + manzanilla Esterilización con calor de pinza

Colocacióndediscos en las placas Petri

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