UNE-EN ISO 11290-1:2017
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scharlab.com · [email protected] Scharlab The Lab Sourcing Group TECHNICAL INFO UNE-EN ISO 11290- 1 :2017 Grandes ventajas ➤ Medio cromogénico ➤ Elevada tasa de recuperación ➤ Identificación fácil y rápida en 24h ➤ Colonias verdes azuladas rodeadas de un halo opaco Agar Listeria según Ottaviani y Agosti Es importante el control del patógeno Listeria monocytogenes en los alimentos destinados al consumo humano y animal por la gravedad de la enfermedad que provoca y por su persistencia a distintos tratamientos. Es un organismo resistente al calor, a la refrigeración a agentes como la sal, los nitritos y la acidez. Los alimentos que deben ser controlados son aquellos alimentos listos para el consumo destinados a lactantes y/o usos médicos especiales y los alimentos listos para el consumo distintos a los anteriores que pueden favorecer el desarrollo de Listeria monocytogenes (Reglamento CE 2073/2005 y 1441/2007).
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TECHNICAL INFO
UNE-EN ISO 11290-1:2017
Calidad de los alimentosMicrobiología de los alimentos para consumo humano y para animales.Método horizontal para la detección y recuento de Listeria monocytogenes.
Método de detección
Grandes ventajas➤ Medio cromogénico
➤ Elevada tasa de recuperación➤ Identificación fácil y rápida en 24h
➤ Colonias verdes azuladas rodeadas de un halo opaco
Agar List
eria
según O
ttavia
ni
y Agost
i
Es importante el control del patógeno Listeria monocytogenes en los alimentos destinados al consumo humano y animal
por la gravedad de la enfermedad que provoca y por su persistencia a distintos tratamientos.
Es un organismo resistente al calor, a la refrigeración a agentes como la sal, los nitritos y la acidez.
Los alimentos que deben ser controlados son aquellos alimentos listos
para el consumo destinados a lactantes y/o usos médicos especiales y los alimentos listos para
el consumo distintos a los anteriores que pueden favorecer el desarrollo de Listeria
monocytogenes (Reglamento CE 2073/2005 y 1441/2007).
(opcio
ISO 11290-1:2017 Microbiología de los alimentos para consumo humano y para animales. Método horizontal para la detección y recuento de Listeria monocytogenes.
7Confirmación de Listeria monocytogenes
Confirmación de Listeria spp.6
Enriq.primario3Preparación
de solución inicial2Muestreo
y transporte1
Para la confirmación de Listeria monocytogenes, es obligatorio realizar los siguientes ensayos: · Ensayo de Hemólisis · Utilización de carbohidratos· Aspecto microscópico (Gram)Ensayos opcionales:· Test de la Catalasa· Motilidad· Test CAMP
§ Consultar tabla de resultado de ensayos.
La Norma ISO 11290 no contempla un método específico de muestreo. Se recomienda que las partes interesadas adopten un acuerdo sobre este punto. Véase la Norma ISO 7218 para un correcto transporte y almacenamiento.
Elegir 5 colonias supuestas de cada placa. Sembrarlas en placas de TSYEA para obtener colonias aisladas. Incubar a 35°C o 37°C durante 18-24h.Las colonias características son de entre 1 y 2mm, convexas, incoloras, opacas y con borde cerrado. Realizar los siguientes ensayos: · Reacción de la Catalasa · Tinción de Gram· Ensayo de Motilidad (opcional)· Test Voges Proskauer (opcional)
Aislamiento e identificación5Enriq.
secundario4Parte 1: Método de detección
Añadir una porción de ensayo de X g o ml a 9X g o ml de medio de enriquecimiento selectivo primario (Half Fraser) para obtener una proporción 1/10 (p/v o v/v).
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Partiendo del enriquecimiento primario, sembrar el Agar Listeria seg. Ottaviani y Agosti con asa de siembra. Repetir con el cultivo de enriquecimiento secundario. Repetir la operación con un segundo medio selectivo (Agar OXFORD o Agar PALCAM). Incubar las placas de Agar Listeria seg. Ottaviani y Agosti invertidas durante 24h ± 3h a 37°C (de ser necesario, 24h ± 3h más) y las placas del segundo medio selectivo según las indicaciones del fabricante. Tras incubar 24h ± 3h (en caso de crecimiento débil, 24h ±3h más) examinar presencia de colonias.Agar Listeria seg. Ottaviani y Agosti: Se considera Listeria monocytogenes las colonias verde azuladas, rodeadas de un halo opaco.OXFORD: A 24h, colonias pequeñas (1mm), coloración grisácea con halos negros. A 48h, colonias oscurecidas con posible brillo verdoso, de 2mm aprox. con halos negros y centro hundido.
PALCAM: Dejar 1 hora al aire para recuperar su color entre rosa y púrpura. A 24h, colonias de Listeria pequeñas de color verde grisáceo o oliva (en ocasiones con el centro de color negro) y siempre con un halo negro. A 48h, colonias verdes entre 1,5 y 2mm con depresión central y rodeadas de un halo negro.
Asas de platino/iridioRef. 0009160050
Asas níquel/cromoRef. 0191000013
Transferir 0,1 ml de la solución del paso 3 (enriquecimiento primario) a 10 ml de medio de enriquecimiento secundario Fraser. Incubar 48h ± 2 horas a 35-37°C.
Material y equipamiento para aplicar la ISO
Cepas de control para aplicar la ISOListeria monocytogenes
WDCM 00021 Ref. S00020-MSC
Listeria monocytogenes WDCM 00109CONSULTAR
Escherichia coli WDCM 00012 o 00013
Ref. P10004-MSC Ref. EP2009-MSC
Enterococcus faecalis WDCM 00009 o 00087
Ref. S00008-MSC Ref. EP2008-MSC
Listeria innocua WDCM 00017
Ref. S00019-MSC
Especie HemólisisProducción de ácido Ensayo CAMP (opcional)
Ramnosa Xilosa S. aureus R. equiL. monocytogenes + + – + –L. innocua – V – – –L. ivanovii ı – ı – ıL. seeligeri (+) – + (+) –L. welshimeri – V ı – –L. grayi – – – – –V: reacción variable (+): reacción débil +: > 90% de reacciones positivas –: ausencia de reacción
NOTA: Existen algunes cepas poco comunes de L. monocytogenes que no presentan ß-hemólisis ni reacción positiva en el ensayo CAMP en las condiciones descritas en esta parte de la Norma ISO 11290.
Frascos tipo duquesa estérilesRef. 00202802.1Ref. 00202823.1Ref. 00202828.G
Bolsas Whirl-Pack estérilesRef. 027-200330Ref. 027-200351Ref. 027-200329Ref. 027-200346
Cubiertos estériles para muestreoRef. 630-0SPOON
Autoclave HG 50Ref. 206-021001
Probetas de 50 a 1000mlRef. 073-201752Ref. 073-201753Ref. 073-201754Ref. 073-001755Ref. 073-001756
Medio Half Fraser02-496-50002-496BA0506-145LYO106-136LYO1064-BA5002064-TA5002064-BA02-5064-BA02-3064-BA02-2
Baño de agua WB 22Ref. 074-G-WB22
pH-metro Ref. 0HI9819030
Contador de colonias automático Scan® 500Ref. 603-436000
Bagmixer®
Ref. 603-024230Ref. 603-025100Ref. 603-032230
MicroscopioRef. 0103800043
Pipetas graduadas de vaciado totalRef. 073-991720Ref. 073-991715
Medio Fraser02-496-50002-496BA0506-111LYO106-112LYO106-790LYO1064-TA1125064-BA5001
Agar Listeria Ottaviani-Agosti01-719-50001-719BA05064-PA008406-754-02406-755LYO1
Medio PALCAM 01-470-50001-470BA05064-PA007006-110LYO1
Medio OXFORD01-471-50001-471BA0506-127LYO1
Incubar la solución obtenida en el paso 2 (preparación de solución inicial) a 30ºC durante 24h (± 3 horas). Durante este proceso se puede desarrollar coloración negra en el cultivo (no pasa nada).
Nevera de transporteRef. 027-900074
Hidrógeno peróxido HI01351000 Alcohol ácido064CL00081 Violeta cristal oxalato VI0027G100 Solución de Lugol 064CL00101 Safranina OSA0042G100
TSYEA. Añadir a TYSEB (Lovett) 9-18g/l de Agar-Agar para obtener TSYEA02-498-50007-004-500
Sangre agar Nº 2 064-PA9997Agar sangre Columbia 064-PA0004Sangre Agar Base Nº 201-505-500, 01-505BA05Sangre Agar Base01-352-500, 01-352BA05Agar Sangre Base Columbia01-034-500, 01-034BA05 MRVP (Methyl Red VP)064-TA0261 Reactivo de O’Meara RE0060G100Reactivo de Barrit (a-naftol) RE0100G100
Serie Diluflow®
Ref. 603-501103Ref. 603-501203 Ref. 603-502105Ref. 603-502205
Ref. 603-503101Ref. 603-503201Ref. 603-503105Ref. 603-503205
Tabla de resultado
de ensayos
Placas de PetriRef. 63090143NARef. 63090143NE
Incubadora de precisiónRef. 0192000965
Tubos o frascos de ensayoRef. 4506616100 Asas de Digralski
estériles desechablesRef. 00ETARB-02
Bolsas estériles homogeneización Ref. 603-132025 Ref. 603-111425 Ref. 603-122025
Asas de siembra estériles desechablesRef. PIL0030120Ref. PIL0041020
NUEVOS!!!Caldo uso Ramnosa Ref. 064-TA8315Caldo uso Xilosa Ref. 064-TA8316
¡¡¡NUEVOS!!!Caldo uso Ramnosa Ref. 064-TA8315Caldo uso Xilosa Ref 064-TA8316
Descripción Referencia
Muestreo y transporte
Frascos tipo duquesa
00202802.1
00202823.1
00202828.G
Bolsas Whirl-Pack estériles
027-200330
027-200351
027-200329
027-200346
Cubiertos estériles para muestreo 630-0SPOON
Nevera de transporte 027-900074Aparato para la esterilización húme-da (autoclave) 206-020000
Preparación de la solución inicial
Probetas de 50ml a 1000ml de capacidad para la preparación de diluciones y medios completos
073-201752
073-201753
073-201754
073-001755
073-001756
Medio Half Fraser
02-496-500
02-496BA05
06-145LYO1
06-136LYO1
064-BA5002
064-TA5002
064-BA02-5
064-BA02-3
064-BA02-2
Enriquecimiento primario
Incubadora de precisión, capaz de mantenerse 25°C ±1°C y 50°C ±1°C
0192000965
Tubos o frascos de ensayo de capa-cidad apropiada para la esterilización y almacenamiento de los medios de cultivo y la incubación de medios líquidos
4506616100
Enriquecimiento secundario
Baño de agua WB 22. Volumen 22 litros. Temp. máxima 100°C (0,1°C). Con rejilla y tapa.
074-G-WB22
Pipetas graduadas de vaciado total, de capacidad nominal 1ml y 10ml, graduadas en divisiones de 0,1ml y 0,5ml respectivamente.
073-991720
073-991715
Medio Fraser
02-496-500
02-496BA05
06-111LYO1
06-112LYO1
06-790LYO1
064-TA1125
064-BA5001
Descripción Referencia
Aislamiento e identificación
Placas de Petri, de 90mm Ø63090143NA
63090143NE
Asas de platino/iridio de aprox. 3mm Ø 0009160050
Asas níquel/cromo, de aprox. 3mm Ø 0191000013
Asas de Digralski estériles 00ETARB-02
Asas de siembra estériles PIL0030120PIL0041020
Medio ALOA
01-719-500
01-719BA05
064-PA0084
06-754-024
06-755LYO1
Medio PALCAM
01-470-500
01-470BA05
064-PA0070
06-110LYO1
Medio OXFORD
01-471-500
01-471BA05
06-127LYO1
Confirmación de Listeria spp. Medio TSYEA
02-498-500
07-004-500
Confirmación de Listeria spp.
TSYEA02-498-50007-004-500
Hidrógeno Peróxido, sol. 30%, 1l HI01351000
Alcohol ácido, decolorante 064CL00081
Violeta Cristal Oxalato VI0027G100
Solución de Lugol 064CL00101
Safranina O, solución según Gram SA0042G100
Confirmación de Listeria monocytogenes
Sangre Agar Nº 2 064-PA9997
Agar sangre Columbia 064-PA0004
Sangre Agar Base Nº 2, 500g 01-505-500
Sangre Agar Base Nº 2, sachets 01-505BA05
Sangre Agar Base, 500g 01-352-500
Sangre Agar Bas, sachets 01-352BA05
Agar Sangre Base Columbia, 500g 01-034-500
Agar Sangre Base Columbia, sachets 01-034BA05
MRVP (Methyl Red VP) 064-TA0261
Reactivo de O’Meara RE0060G100
Reactivo de Barrit (a-naftol) RE0100G100
Material y equipamiento para aplicar la ISO
Contador de colonias automático Scan® 500 603-436000
pH-metro con sensibilidad de 0,01 pH a 25°C, medidas precisas a ± 0,1 unidades de pH.
0HI9819030
Bolsas estériles homogeneización 603-132025
Bagmixer SW 603-025100
Diluflow®. Diluidores gravimétricos603-501103
603-501203
Microscopio, de contraste de fase 0103800043
Cepas de control para aplicar la ISO
Listeria monocytogenes WDCM 00021 S00020-MSC
Listeria monocytogenes WDCM 00109 CONSULTAR
Escherichia coli WDCM 00012 o 00013
S00004-MSCP10004-MSCEP2004-MSCS00009-MSCEP2009-MSC
Enterococcus faecalis WDCM 00009 o 00087
S00008-MSCEP2008-MSC
Listeria innocua WDCM 00017 S00019-MSC
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ISO 11290-1:2017. Microbiología de los alimentos para consumo humano y para animales. Método horizontal para la detección y recuento de Listeria monocytogenes. Parte 1: Método de detección
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