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MESA 1: VIERNESMIC

RO

IOLO

GÍA

M

ÉD

ICA

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ALUMNO: RAYMUNDO GÓMEZ JOSÉ LUIS

TREPONEMA PALLIDUM

Lesiones Sifilíticas

Chancro sifilítico (úlcera)

Rash en sífilis secundaria

Gomas en paladar duro

TREPONEMA PALLIDUM

ETAPAS DE LA SÍFILIS

SÍFILIS: Diagnostico laboratorio Identificación del T. pallidum

• Microscopio de campo oscuro• Espiroqueta : 0.1 a 0.2 X 6 – 20 um. • Movimiento rotacional• Raspados del chancro duro• No útil en lesiones de boca

• PCR• Biopsia

TREPONEMA PALLIDUM• INMUNOLOGIA – V.D.R.L. Y R.P.R

SÍFILIS: Diagnostico Laboratorio SEROLOGIA• Pruebas no Treponémicas• VDRL• RPR • Pruebas Treponémicas• FTA – ABS= (Absorción de anticuerpos

fluorescentes para treponema) • TPHA= Prueba de Hemoaglutinación del

Treponema Pallidum (agente causante de la sífilis). • MHA-TP = Micro hemaglutinación

Treponema Pallidum• ELISA IgM : basado en la captura del Ac

IgM. Útil en la Sífilis neonatal• ELISA IgG • Western Blot: gran valor en S, congénita.

Alta sensibilidad y especificidad• ELISA, IFI• Pruebas Rápidas

SEROLOGIA DE LA SÍFILIS

MÉTODO DIAGNÓSTICO DE SÍFILIS MEDIANTE SEROLOGÍA

CUADRO SINÓPTICO DE LAS PRUEBAS A REALIZARSE EN LOS DIFERENTES ESTADIOS

Lesión

Campo oscuro o inmunofluorescencia

Tratamiento

Repetir a la semana,1 mes y 3 meses

Falso positivoFTA-ABS

VDRL o RPR

TratamientoPositivo

Dudosoo negativo

No reactivo

Reactivo

Reactivo

No reactivo

Figura 1. Serología en el diagnóstico y el tratamiento de la sífilis temprana (primaria y secundaria) (6)

Lesión

Campo oscuro o inmunofluorescencia

Tratamiento

Repetir a la semana,1 mes y 3 meses

Falso positivoFTA-ABS

VDRL o RPR

TratamientoPositivo

Dudosoo negativo

No reactivo

Reactivo

Reactivo

No reactivo

Lesión

Campo oscuro o inmunofluorescencia

Tratamiento

Repetir a la semana,1 mes y 3 meses

Falso positivoFTA-ABS

VDRL o RPR

TratamientoPositivo

Dudosoo negativo

No reactivo

Reactivo

Reactivo

No reactivo

Figura 1. Serología en el diagnóstico y el tratamiento de la sífilis temprana (primaria y secundaria) (6)

Figura 2. Serología en el diagnóstico y el tratamiento de la sífilis latente (6)

Historia sospechosade sífilis

RepetirVDRL o RPR

FTA-ABS

Punción lumbar para VDRL de Líquido cefalorraquídeo

Tratamiento para sífilis latente o tardía

FTA-ABS

Falso positivo

Falso positivo

Tratamiento sífilis temprana

Repetir VDRL o RPR

Serología reactivade menos de 1 año

Serología reactivade duración desconocidao mayor de 1 año

No reactivo

Reactivo

Reactivo

No reactivo

No reactivo

Reactivo

Reactivo

Reactivo

Figura 2. Serología en el diagnóstico y el tratamiento de la sífilis latente (6)

Historia sospechosade sífilis

RepetirVDRL o RPR

FTA-ABS

Punción lumbar para VDRL de Líquido cefalorraquídeo

Tratamiento para sífilis latente o tardía

FTA-ABS

Falso positivo

Falso positivo

Tratamiento sífilis temprana

Repetir VDRL o RPR

Serología reactivade menos de 1 año

Serología reactivade duración desconocidao mayor de 1 año

No reactivo

Reactivo

Reactivo

No reactivo

No reactivo

Reactivo

Reactivo

Reactivo

Historia sospechosade sífilis

RepetirVDRL o RPR

FTA-ABS

Punción lumbar para VDRL de Líquido cefalorraquídeo

Tratamiento para sífilis latente o tardía

FTA-ABS

Falso positivo

Falso positivo

Tratamiento sífilis temprana

Repetir VDRL o RPR

Serología reactivade menos de 1 año

Serología reactivade duración desconocidao mayor de 1 año

No reactivo

Reactivo

Reactivo

No reactivo

No reactivo

Reactivo

Reactivo

Reactivo

Figura 3. Serología en el diagnóstico y el tratamiento de la sífilis tardía (6)

Tratamiento para sífilis tardía

Reactivo

Punción lumbarpara VDRLde líquidocefalorraquídeo

Repetir

Falso positivo

Evolucióndesconocida

No sífilis

FTA-ABS

VDRL o RPR

Sospecha clínica FTA-ABS Falsopositivo

Reactivo No Reactivo

No Reactivo

Si

No Reactivo

Reactivo

No reactivoReactivo

Reactivo

Figura 3. Serología en el diagnóstico y el tratamiento de la sífilis tardía (6)

Tratamiento para sífilis tardía

Reactivo

Punción lumbarpara VDRLde líquidocefalorraquídeo

Repetir

Falso positivo

Evolucióndesconocida

No sífilis

FTA-ABS

VDRL o RPR

Sospecha clínica FTA-ABS Falsopositivo

Reactivo No Reactivo

No Reactivo

Si

No Reactivo

Reactivo

No reactivoReactivo

Reactivo

Tratamiento para sífilis tardía

Reactivo

Punción lumbarpara VDRLde líquidocefalorraquídeo

Repetir

Falso positivo

Evolucióndesconocida

No sífilis

FTA-ABS

VDRL o RPR

Sospecha clínica FTA-ABS Falsopositivo

Reactivo No Reactivo

No Reactivo

Si

No Reactivo

Reactivo

No reactivoReactivo

Reactivo

SEROLOGICAS (V.D.R.L.)

1. SEROLOGICAS (V.D.R.L.).• COMPONENTES:

– Lecitina– Cardiolipina– Colesterol– Buffer

REACTIVO DE V. D. R. L.

Antígeno no Treponémico

1. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS.El antígeno de V.D.R.L. no es necesario preparar todo el frasco de 500 pruebas, por que una ves preparado tiene una duración máxima de 48 horas.Ejemplo:1) 1 ml. solución buffer salina, 20 gotas

antígeno (P/ 50 pruebas) 2) 0.5 ml. solución buffer salina 10 gotas

antígeno (P/25 pruebas) 3) 0.25 ml. solución buffer salina 05 gotas

antígeno (P/12 pruebas) Muestra:

–Suero o plasma–ANTIGENO– 20 l para cada prueba

PRUEBA V.D.R.L. CUALITATIVO

PROCEDIMIENTO:

1.Extraer sangre venosa 2 ml. aproximadamente con anticoagulante o sin anticoagulante.

2.Centrifugar cuidadosamente a 2,500 r.p.m. por 5 minutos.

3.Inactivar el suero a 56 por 30 minutos en baño María.(VDRL)

4. Tomar el suero inactivado 50 l. en una superficie plano con anillo y una gota de antígeno preparado con una aguja calibre Nº l8.

5. Homogeneizar y colocar la lámina en un rotador eléctrico por 4 minutos a l80 Rpm.

6. Lectura al microscopio con lente de 40 x.

180 r p m

METODOLOGIA - REPORTE DE RESULTADOS

• REPORTE DE RESULTADOS• Reactivo: Grumos medianos a grandes• Reactivo Débil: Grumos pequeños con partículas de antígeno libre.• No Reactivo: Sin grumos (antígeno libre)

( + ) ( - )

PRUEBA DE V.D.R.L. CUANTITATIVO

1.Numerar 5 tubos y colocar en tubos del 1º al 5º 0.5 ml. de suero fisiológico.

2.En el 1º tubo colocar 0.5 ml de suero problema, homogeneizar y tomar 0.5 ml para el 2º tubo, homogeneizar y tomar 0.5 para el tercer tubo y así sucesivamente hasta el 5º tubo.

3.De esta manera tenemos que las diluciones del suero están en orden creciente, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 diluciones.

4.Tomando el contenido de cada tubo, realizar el mismo procedimiento que para una prueba cualitativa.

5.Adicionar 01 gota de antígeno a cada uno de los círculos del 1º al 5º , homogeneizar y rotar por 8 minutos.

6.La lectura sigue los mismos parámetros que para la prueba cualitativa.

7.Reportar el título en términos de la más alta dilución en que se produzca un resultado reactivo (Reactivo débil) .

SUERO FISIOLOG.

0.5

SUERO HSUERO F

1 2 3 4 5

0.5 ml

HOMOGENIZAR Y RETIRAR PARA EL TUBO 1, 0.5 ml. Y PARA T. 2 ,3 Y ASI SUCESIVAMENTE

SEROLOGICAS ( R.P.R. )

COMPONENTES

• Cardiolipina– Lecitina– Colesterol– EDTA– Acetil colina– Carbón

R. P. R. (REAGINA PLASMATICA RAPIDA).

( Antígeno no Treponémico)

PRUEBA R.P.R. CUALITATIVO

Preparación de la Prueba:• La suspensión del antígeno se presenta listo para su uso, solo requiere que antes de su

procesamiento debe estar a temperatura ambiente y homogeneiza bien antes de su uso.

Procedimiento:• Pipetear una gota de suero o plasma en el centro del dispositivo que trae el equipo.• Dejar caer una gota de reactivo (antígeno) y homogeneizar con la espátula descartable.• Llevar al rotador eléctrica, durante 8 minutos a 100 r.p.m.

Resultados:• Reacción Negativa.- Está dada por la acumulación de carbono en el centro del círculo.• Positivo Débil.- Se detecta por la acumulación de finos agregados negros circundados

por un área difusa de finos agregados negros.• Reacción Positiva.- Se observa la producción de agregados negros observados

normalmente por todo el círculo de la prueba.

PRUEBA DE R.P.R. SEMICUANTITATIVO

1.Colocar 50 l. de suero fisiológico al 0.9 % del 1º al 5º círculo de la tarjeta

2.Colocar 50 l. del suero problema en el primer círculo, mezcle bien y luego transfiera 50 l. al segundo círculo mezcle bien y transfiera 50 l. al tercero círculo, mezcle bien y transfiera 50 l. al 4º y 5º círculo, mezcle y descarte 50 l. del último círculo.

3.Usando un aplicador, extienda la mezcla en cada círculo comenzando en el 5º y terminando en el 1º círculo.

4.Adicionar 01 gota de antígeno a cada uno de los círculos del 1º al 5º , homogeneizar y rotar por 8 minutos.

5.La lectura sigue los mismos parámetros que para la prueba cualitativa.

6.Reportar el título en términos de la más alta dilución en que se produzca un resultado reactivo (Reactivo débil).

PRUEBA DE R.P.R. SEMICUANTITATIVO

1:2 1:4 1:8 1:16 1:32

suero 50 ul 25 ul 12.5 ul 6.25 ul 3.12 ul

1 2 3 4 5

SUERO FISIOLOG.

Suero fisiolog.50 ulSuero humano 50 ul.

50 ul50 ul100 ul

CUADRO DE TITULACION PARA LA PRUEBA DE R.P.R SEMICUANTITATIVA

DELUCIONES DEL SUERORESULTADO

1:2 1:4 1:8 1:16 1:32

RD N N N N REACTIVO 2 DILS.

R R N N N REACTIVO 4 DILS.

R R R N N REACTIVO 8 DILS.

R R R R N REACTIVO 16 DILS.

R R R R R REACTIVO 32 DILS.

50 ul 25 ul 12.5 ul

6.25 ul 3.12 ul

Leyenda: N = No Reactivo RD: Reactivo Débil R: Reactivo

INTERPRETACION DE RESULTADOS PRUEBAS NO TREPONEMAICAS - I y II

• Un resultado no reactivo sin evidencia clínica:– Puede indicar que no hay infección por treponemas o que el tratamiento fue

efectivo.• Un resultado reactivo puede indicar

– Infección presente o pasada con Treponemas patógenos.– Puede ser una reacción falso positiva, lo cual se detecta mediante una prueba

Treponémica..• Un resultado no reactivo con evidencia clínica:

– Puede observarse en sífilis primaria o en sífilis secundaria por exceso de anticuerpos

• El incremento en cuatro veces el título inicial indica Infección o re-infección y la disminución de cuatro veces el título indica un tratamiento efectivo.

1/21/2 1/41/4 1/81/8 1/161/16 1/321/32

Causas de resultados serológicos falso positivos

• Neumonía neumocócica• Endocarditis bacteriana sub

aguda• Chancroide• Adicción a drogas• Enfermedad del tejido conectivo• Enfermedad cardiaca

reumatoide• Enfermedad por Rickettsia• Malaria• Tripanosomiasis

• Múltiples transfusiones de sangre

• Embarazo• Tripanosomiasis• Adulto mayor• Vacunación• Enfermedad hepática crónica• Adicción a drogas• Enfermedad del tejido

conectivo• Enfermedad cardiaca

reumatoide

PRUEBAS CONFIRMATORIAS PARA SIFILIS

TPHA = Prueba de Hemoaglutinación del Treponema Pallidum (agente causante de la sífilis). El TPHA = es un equipo de diagnóstico para la detección de anticuerpos ESPECIFICOS al treponema Pallidum en suero humano, utilizando las técnicas de Hemoaglutinación. Hemaglutinación pasiva en la cual el suero humano diluido es enfrentado a glóbulos rojos de carnero o pollo sensibilizados con Treponema pallidum. Cuando en la muestra de suero existe anticuerpos contra Treponema se forma una malla de aglutinación.

GRADOS DE AGLUTINACION

• Ausencia de anticuerpos formación de botón

• Presencia de anticuerpos formación

PRUEBAS SEROLÓGICAS Y INTERPRETACION

GRACI

AS!!!...

«Lo que no te mata te hace más fuerte»

MIC

RO

IOLO

GÍA

MÉD

ICA