INSTITUTO POLITECNICO NACIONALESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

LABORATORIO DE BIOQUIMICA MICROBIANA

Práctica 1 “Transporte de glucosa en levaduras”

Grupo: 5IM1

Sección 1

Equipo 3

Integrantes:

Fecha de entrega: 24-Septiembre-2015

HIPOTESIS

Sí Saccharomyces cerevisiae transporta la glucosa por difusión facilitada, es decir, que necesita una proteína transportadora, entonces el transporte se verá inhibido por la N-etil maleimida.

OBJETIVO

Demostrar y concluir que el transporte que la levadura (Saccharomyces cerevisiae) utiliza para incorporar glucosa es por difusión facilitada.

ANALISIS DE RESULTADOS

Tabla 1. Determinación de Glucosa residual

Absorbancia 540 nm

Matraz numero Tiempo0 min 10 min 20 min 30 min

1 0.366 0.348 0.368 0.3312 0.421 0.172 0.006 0.013 0.349 0.241 0.083 0.0154 0.452 0.388 0.409 0.5155 0 0.002 0.003 0.003

Tabla 2. Curva tipo de glucosa 500 µg/ml

µg de glucosa Absorbancia (540 nm)0 0

100 0.033200 0.128300 0.228400 0.306500 0.432

Gráfica de curva tipo de glucosa

Cálculos:

Se calculó la cantidad de azúcar residual mediante la ecuación de la recta la cual nos dará la concentración en µg

Glucosa residual (mg)Matraz/Tiempo 0´ 10´ 20´ 30´

1 0.4423 0.4223 0.4445 0.40342 0.5034 0.2267 0.0423 0.04673 0.4234 0.3034 0.1278 0.05234 0.5378 0.4667 0.4901 0.6095 0.0356 0.0378 0.039 0.0578

Glucosa residual real (mg)Matraz/Tiempo 0´ 10´ 20´ 30´

1 0.407 0.385 0.405 0.3452 0.468 0.189 0.0033 03 0.388 0.266 0.0088 04 0.502 0.429 0.4511 0.551

x= y+0.03210.0009

x=0.366+0.03210.0009

=442.33µg

1mg ----1000µg

X ----442.33µg x = 0.4423mg

Para obtener la glucosa residual real a los matraces del 1 al 4 se les resto la concentración obtenida del matraz 5 de cada serie de tiempo correspondiente.

(0.4423 – 0.0356) mg = 0.407mg

Glucosa residual real (mg/ml)

Matraz 0´ 10´ 20´ 30´

1 2.035 1.93 2.025 1.72

2 2.34 0.95 0.0165 0

3 1.94 1.33 0.044 0

4 2.51 2.145 2.25 2.75

Glucosa consumida (mg/ml)Matraz 0´ 10´ 20´ 30´

1 0 0.105 0.01 0.3152 0 1.39 2.3235 2.343 0 0.61 1.896 1.944 0 0.365 0.26 0

0 5 10 15 20 25 30 350

0.5

1

1.5

2

2.5

Glucosa consumida en función del tiempo

Matraz 1Matraz 2Matraz 3Matraz 4

Tiempo (min)

Gluc

osa

cons

umid

a (m

g/m

l)

DISCUSIÓN

Para determinar cuál es el mecanismo de transporte que Saccharomyces cerevisiae utiliza para transportar la glucosa al interior de la célula tenemos que analizar los resultados obtenidos.

Glucosa residual en mg/ml:

x=(mgglucosa)(f . d )( 1alicuota

)

x=(0.407mg)(1.5)( 10.3ml

)=2.035mg/ml

Glucosa consumida =

Gulosa tiempo cero – Glucosa tiempo x

(2.035 - 1.93) mg = 0.105 mg/ml

Se realizó una serie de matraces preparados de diferente manera, para analizar los diferentes factores que determinan el tipo de transporte que se realiza.

Se tomó como referencia el matraz No.2 ya que este fue realizado a temperatura ambiente, condición óptima para que S.cerevisiae realice el transporte, esto se debe a que es un microorganismo mesófilico, es decir, que su temperatura óptima de crecimiento es de 25°C a 40°. Al observar el comportamiento del matraz 2 podemos observar el comportamiento “ideal” de la levadura al transportar glucosa.

Matraz 1 (4°C)

Este matraz fue preparado de la misma manera que el matraz número dos, cambiándole sólo una condición, la temperatura.

Como anteriormente se explicó S.cerevisiae es un microorganismo mesófilo, al disminuir la temperatura, a una distinta de la óptima, podemos observar una disminución en la cantidad de glucosa transportada. Esto se debe a en la membrana citoplásmica de este microorganismo hay un disminución en la energía cinética, los fosfolípidos presentes se rigidizan y se modifican las proteínas.

Matraz 3 (DNF)

Al matraz número tres se le agregó 2,4-dinitrofenol (DNF), el cual es un agente desacoplante debido a que el pKa del grupo –OH fenólico esta disociado al pH intracelular pero al acercarse a la membrana interna mitocondrial, se protona aumentando su hidrofobicidad para ingresar, difundiéndose en la membrana por acción de masa, una vez dentro el pH es más alto lo que ocasiona su desprotonación, de esta forma capta el transporte de protones evitando el canal protónico de la fosforilación oxidativa, provocando una inhibición de la síntesis de ATP.

Al analizar el comportamiento de este matraz en la gráfica se puede observar que el uso del 2,4-dinitrofenol no interfirió con el transporte de glucosa y por lo tanto podemos decir que el transporte que realiza S.cerevisiae de la glucosa no es un transporte activo ya que este no requiere de energía, por ello no se ve afectado por la acción de DNF.

Matraz 4 (NEM)

Al matraz número tres se le adicionó N-etil maleimida.

Al analizar la gráfica se puede ver una interferencia con el transporte esto debido a la NEM.

Podemos decir que realizó dicho transporte por difusión facilitada, ya que necesita de una proteína transportadora, al haber un cambio conformacional por la unión de NEM a los grupos sulfihidrilo de las proteínas de la membrana, esta proteína (acarreadora) ya no reconoce a la glucosa.

CONCLUSION

Saccharomyces cerevisiae realiza transporte por difusión facilitada.

BIBLIOGRAFIA