Trabajo Práctico

Sistema Reproductor en Mamíferos

Cambios en la Fisiología Ovárica-Uterina durante el ciclo estral

Ciclos Reproductivos

Sucesión periódica de ciertos procesos o etapas de la fisiología ovárica que se dan como consecuencia de variaciones hormonales y se manifiestan en cambios morfo-funcionales en los órganos reproductivos femeninos (vagina, útero, oviductos).

Tipos de ciclos en mamíferos

En primates

La hembra es receptiva durante todo el ciclo.

Finaliza con la necrosis del endometrio

Menstrual Estral

En la mayoría de los mamíferos

La hembra sólo es receptiva durante un período del ciclo (celo o estro).

No hay necrosis del endometrio.

Clasificación de las Especies según su ciclo estral

Especies Monoéstricas: 1 ciclo por año con una fase de anestro prolongada. Ej: perra.

Especies Poliéstricas: 2 o + ciclos por año.Continuas: Ciclos estrales durante todo el

año. Ej: vaca, cerda, rata, ratona.

Estacionales: Ciclos sólo se producen en una estación determinada del año. Ej: oveja, cabra, yegua.

C I C L O E S T R A L

PROESTRO ESTRO METAESTRO

DIESTRO

Foliculogénesis

Crecimientorápido

Maduración

Ovulación Comienza a

las 10 hsPost-pico de

LH

Luteogénesis inicial

Luteogénesis

maduraLuteólisis

Proestro Estro Metaestro Diestro

Regulación hormonal eje HH-Ovario

Etapas del Ciclo Estral

Proestro: periodo de crecimiento folicular que se inicia con la regresión del cuerpo lúteo y culmina con la aparición del estro (FSH)

Estro: periodo de receptividad sexual, al final del cual se produce la ovulación (LH )

Metaestro: periodo de desarrollo inicial del cuerpo lúteo que comienza al final del estro (PG)

Diestro: periodo de actividad del cuerpo lúteo

maduro posterior a la ovulación y finaliza con la lúteolisis (PG y E)

Manifestación externa CELO

Cambios conductuales aumentan posibilidad de apareo

Duración total del ciclo estral en ratón: 4-5 días

Ciclo Ovárico en Roedores

Factores que modifican el ciclo estral

Estado hormonal/hormonas exógenas Disruptores endocrinos

Contaminantes Tóxicos (pesticidas, herbicidas) Drogas de uso y abuso (psicofármacos, alcohol,

cocaína) Estado Nutricional Estrés Cambios ambientales (temperatura, fotoperíodo) Intervenciones quirúrgicas de órganos reproductores

Objetivos del TP

Conocer el ciclo estral en mamíferos usando un modelo experimental de hembras de ratón

Observar e interpretar los cambios en el ciclo estral y en el aparato ovárico- uterino-vaginal durante el ciclo estral

Estudios y Procedimientos del Trabajo Práctico

Primer Paso:Pesar los animales (peso corporal total en

mg)

Estudio del Ciclo estral del ratón por la técnica de Citología Vaginal:

Extracción del Frotis Vaginal Fijación y Coloración Observación al Microscopio Determinación del estado del ciclo por

cuantificación de los tipos celulares: Identificar y esquematizar los tipos celulares

según sus características morfológicas calcular %

Fijación y coloración1) Fijación en metanol 1 min. (campana)

2) Pasaje por alcohol 50% 1 min.

3) Lavado con agua destilada 1 min.

4) Coloración con hematoxilina 10 min.

5) Lavado con agua corriente 30 seg.

6) Pasaje por agua destilada 1 min.

7) Pasaje por alcohol 70% 1 min.

8) Coloración con Orange G 6 min.

9) Pasaje por alcohol 70% 1 min.

10) Coloración con Eosina 30 seg.

11) Pasaje por alcohol 70% 1 min.

Principales células reconocibles en un Frotis Vaginal

Superficiales

Parabasales

Leucocitos

Queratinizadas

Intermedias

Citología Vaginal en los estadíos del ciclo

Proestro Estro Metaestro Diestro

Parabasales 30% -- pocas 60-70%

Intermedias 60% Pocas 30% 30%

Superficiales Pocas 30% 30% pocas

Queratinizadas -- 70% 30% ---

Leucocitos-- -- Pocos

(ojo)Muchos

(ojo)

Células epiteliales parabasales (PB) e intermedias (IN)Eritrocitos y neutrófilos (+)

PROESTRO

PB

IN

+

Celulas Superficiales (SP) y Queratinizadas (Q).

ESTRO

Q

SP

Células epiteliales parabasales (PB) e intermedias (IN) y neutrófilos (+)

IN

DIESTRO

PB

+

Tabla por grupo

Número de jaula

PB IN SP Q Leucocitos

Fase del ciclo

Número de jaula

Proestro

Estro Metaestro

Diestro Otro

Tabla general

Estudio sobre Ovario y Útero Disección del aparato genital femenino.

Útero Bicorneo

Reconocimiento y observación de las partes bajo lupa:

Ovarios Oviducto Cuernos uterinos Cérvix

Separación de ovarios, oviducto y útero

Ovario

Oviductos

útero

Ayuda experimental: Eliminar toda la grasa del útero, cortar el cervix al ras del útero y separar los ovarios, poner el útero sobre un papel para facilitar la eliminación de la grasa. Pasar a papel de aluminio y pesar. Luego poner en una caja de Petri con solución fisiológica y observar a la lupa.

Estudio del estado Uterino Pesado del útero (mg) Observar y describir aspecto general:

color, irrigación, volumen, grosor y tamaño.

Calcular Índice Útero Somático (IUS)

Número de jaula

Peso Corporal (mg)

Peso Útero (mg)

IUS Estado del Ciclo

IUS = peso útero/ peso corporal x 100

Estudio del estado Ovárico Observar cuerpos lúteos (CL) y folículos (FL) Cuantificar presencia de CL.

Número de jaula

Fase del ciclo

Cantidad de CL

Ayuda experimental: Eliminar la mayor cantidad

de grasa posible de los ovarios para favorecer su visualización. Colocar el

ovario en una caja de Petri con solución fisiológica y

observar bajo la lupa.

Stage Ovary Uterus Vagina Smear

Diestrus

Small follicles only are present with large corpora lutea from the previous ovulation. These secrete for only a very short time unless pregnancy or pseudopregnancy intervene.

Small and anaemic, low motility, lumen small and slit-like. Cells of the uterine mucosa columnar; polymorphonuclear leucocytes in stroma; endometrial glands collapsed, atrophic.

Epithelium thin, mitotic figures infrequent. Leucocytes abundant in stroma, migrate through the epithelium into vaginal lumen.

Stringy mucous in which are entangled many leucocytes and a few nucleated epithelial cells.

Proestrus Some follicles grow rapidly.

Become more vascular, water content increases, organ distends. Contractility more pronounced. Epithelial cells become higher (continuing into estrus). Leucocytes disappear from mucosa. Endometrial glands hypertrophy.

Epithelum thickens, numerous mitoses in inner layers. Old layers of epithelium line the lumen. Leucocytes no longer migrate through the epithelium. Superficial epithelial cells slough off into lumen.

Largely small, round, nucleated epithelial cells, singly or in sheets. None to few leucoytes.

Estrus

Ovulation in the rat is spontaneous and occurs about 10 hours after the beginning of estrus. "Heat" (receptivity) lasts about 13 hours. Usually 10-20 eggs ovulated each time.

gains maximum vascularisation. Epithelial cells reach maximum development. No leucocytes.

Outer layer of epithelial cells become cornified and sloughed into the lumen. In early estrus these cells retain their nuclei, but in later stages no nuclei visible and the cells are irregular, flat, cornified plates. The skin around the vaginal orifice becomes swollen.

Contains hundreds of large cornified cells (squames) with degenerate nuclei. Towards the end of estrus the smear becomes "cheesy" - masses of adherent cornified cells.

MetestrusMany corpora lutea, which secrete only for a very short time, and small follicles.

Epithelium continues vacuolar degeneration and replacement. Leucocytes in stroma. Decrease in size and vascularity.

Deeper layers of the estrous epithelium now line the lumen, the older, superficial layers having become cornified and sloughed off. Reduction of mitotic activity in epithelium. Leucocytes in stroma and migrating through the epithelium into the lumen.

Many leucocytes and a few cornified cells.