TINCIONESUnatincinocoloracines una tcnica auxiliar utilizada enmicroscopapara mejorar el contraste en la imagen vista almicroscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias que usualmente se utilizan enbiologaymedicinapara resaltar estructuras en tejidos biolgicos que van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos de microscopios. Los diferentes colorantes pueden ser utilizados para aumentar la definicin y examinar grandes cortes de tejido (resaltando por ejemplofibras muscularesotejido conectivo), poblacionescelulares(por ejemplo clasificando diferentesclulas sanguneas) o incluso para resaltarorganelasdentro de clulas individuales.Mecanismos de Coloracin:La coloracin celular ytejidosson una combinacin de fenmenos fsicos y qumicos de absorcin: los fenmenos fsicos de absorcin, capilaridad y smosis participan en cierto grado. La afinidad de colorantes bsicos por los tejidoscidosy viceversa indican que hay reaccinqumica.Los Colorantes:Son compuestos, orgnicos que contienen radicales cromforos esto es que producencolorygrupode anxocromos que forman sales losgruposnitrito (-NO2) y azo (-N = N) son cromforos. Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-NH2) son grupos anxocromos. Los cromforos imparten lapropiedadcromgena al colorante y los anxocromos permiten que el colorante se una con la fibra o tejido.Preparacin de Frotis Bacteriano para Coloracin:Entes de la tincin las bacterias suelen encontrarse enaguao en otro lquido en un porta objeto limpio y son extendido en una pelcula uniforme y delgada. Se deja que la pelcula seque en elairey los microorganismos son fijados por sustancias qumicas o por elcalormoderado.Tinciones:Es unmtodoutilizado para estudiar microorganismos. (no vivos); en estas tinciones se observamorfologa, estructura y agrupamientos de microorganismos.Tipos de Tincin:Tincin Simple: utiliza un solo colorante.Tincin de Gram:Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado conalcohol, Safranina 30 seg)Tincin cido Resistente:Una vez teidos, conservan su color resistiendo al lavado con cido mineral reducido. En esta tincin las bacterias cido resistentes conservan el colorante primario color rosa o rojo, los dems microorganismos son decolorados por el cido y toman el color azul.Tincin de Giensa:El colorante se aplica a un frotis desangrey se utiliza cuando se sospeche de protozoos en la sangre para observar materias ncleos de laclulas.Tincin de Esporas:Se usa verde de malaquita en contraste con safranina.Tincin de Cpsula:Colorante nigrosuna, aqu se observa microorganismos encapsulados creandoresistencias.Tincin de Flagelos:Se usa mordiente el cual aumenta el tamao delmicroorganismo.Endsporas:Son unos cuerpos resistentes que se producen en el interior dela clulalos cuales contienen los componentes necesarios para conservar la vida.Las esporas pueden situarse en el centro de laclulao en situaciones excntricas cerca de un extremo de la misma.Levaduras:Son esfricas, elpticas y cilndricos, su tamao vara notablemente. Son hongos cuya forma corriente y dominante de crecimiento es unicelular.Las Cpsulas:Son estructuras grueso viscosas gelatinosas que rodean las clulas de algunas especies.Sarcina:Son anaerobios obligados y son extremadamente cido tolerantes que pueden fermentar azcares y crecer apHinferior a 2.Estegnerocomprende 2 especies de bacterias que se dividen en tres planos perpendiculares para producir paquetes de 8 en una clula.Bacillus Cereus:La mayora se encuentra en elsueloo en partculas de polvo en suspensin y son uno de los organismos del gnero Bacillus que pueden ser aislados fcilmente.

Rojo NeutroEl rojo neutro es un colorante que se une a las regiones basfilas del tejido nervioso.Se tien los ncleos de todas las clulas (neuronas y clulas gliales) y la sustancia deNissl (ribosomas libres y asociados a membranas del retculo endoplasmatico rugoso). No se tien los axones, por carecer de ARN en su interior. Al teir de color rojo las clulas, es muy til para contrastar cortes teidos con otras tcnicas como por ejemplo la tcnica A-Cu-Ag (tcnica de plata), donde la degeneracin se tie de color negro. De esta manera el rojo neutro permite reconocer reas especficas del cerebro que han sido afectadas por la degeneracin.NisslEsta tcnica generalmente utiliza como colorante el violeta de cresilo, este colorantees una anilina bsica (cargada en forma positiva) que se une a las regiones basfilas de las clulas del tejido nervioso. Tambin se utiliza el azul de tionina el cual da un color azul-violceo. Tiene mayor contraste que la tcnica con rojo neutro por lo que es la contracoloracin elegida para el estudio de detalles citolgicos y citoarquitectnicos.Hematoxilina-eosinaEs una coloracin topogrfica de rutina ya que permiten distinguir detallesmorfolgicos de clulas y tejidos. Existen mltiples variantes, segn se emplee un tipo u otro de eosina y de hematoxilina (generalmente se emplea la hematoxilina de Harris). Por lo comn, este mtodo siempre consta de una etapa inicial, en la que se colorean los ncleos celulares con la hematoxilina (violeta), y en una fase ulterior de contraste citoplasmtico y de los componentes extracelulares con la eosina (rojo-rosado).InmunohistoqumicaLa inmunohistoqumica es una tcnica utilizada para la localizacin de molculasespecficas en los tejidos mediante el empleo de anticuerpos (protenas del tipo inmunoglobulina G). Es una tcnica que gracias a la oferta comercial de anticuerpos y a la estandarizacin de su protocolo se ha convertido en un mtodo sencillo, rpido y muy potente. Se basa en la gran especificidad y alta afinidad que tienen los anticuerpos para reconocer a molculas y unirse a ellas. Adems, la conjugacin o combinacin de los anticuerpos con enzimas o con sustancias fluorescentes permite detectar molculas presentes en el tejido.

Tipos de tcnicas de tincin.Tinciones simples:Se usa un nico colorante, que siempre es de tipo bsico. Se utilizan solamente para incrementar el contraste; todas las clulas absorbern el colorante y quedarn teidas del mismo color. Se fija el espcimen, se aade el colorante y se deja el tiempo adecuado para que se absorba, se retira el exceso de colorante y la preparacin ya est lista para ser observada.Tinciones diferenciales:Se utilizan para distinguir entre tipos de microorganismos. La tcnica de tincin diferencial consta de dos etapas: unatincin simple seguida de una tincin de contraste. En la tincin de contraste se utiliza otro colorante que tie (y por tanto, revela) las clulas no teidas por el primer colorante. Estas tinciones son muy utilizadas en microbiologa.Tinciones especficas:Se utilizan para incrementar el contraste en las clulas microbianas y revelan estructuras particulares, entre las que se incluyen en los flagelos y las cpsulas.Tincin adecuada:En su forma ms simple, el verdadero proceso de tincin puede implicar la inmersin de la muestra en la solucin colorante, seguido del aclarado que es un lavado para eliminar el exceso de colorante y la observacin. Muchos tintes, sin embargo, requieren del uso de unmordiente. Cuando la solucin de colorante en exceso se elimina durante el aclarado, la tincin mordentada permanece.Tincin negativa:Un mtodo sencillo de tincin para bacterias, que adems es un claro caso de cromofobia y que por lo tanto funciona aun cuando los mtodos de tincin positiva fallan, es latincin negativa. Esto puede ser conseguido simplemente extendiendo la muestra en un portaobjetos y aplicando directamente sobre ella una gota denigrosinaotinta chinay cubriendo luego la muestra humedecida con un cubreobjetos. Luego de esto, los microorganismos pueden ser observados fcilmente por medio de microscopa en campo claro como inclusiones claras muy bien contrastadas contra el medio oscuro que las rodea.Tincin indirecta:Se denomina de este modo a las tinciones que hacen uso de un mordiente. Un mordiente habitual es elcido tnico.Tincin directa:Hablamos de tincin directa cuando el colorante interacciona directamente con el sustrato, sin otro tratamiento previo.Tincin Gram:La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes en el laboratorio bacteriolgico. Su utilidad en la prctica de referencias a la morfologa celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos, etc.) se basan justamente en la tincin de GRAM1. Se tie el espcimen con el primer colorante, cristal violeta.2. Se aade el mordiente, yodo.3. Se aplica el agente decolorante, normalmente una solucin de acetona o etanol. En este momento, las bacterias Gram negativas pierden su tincin violeta, pero las Gram positivas retienen el colorante.4. Como colorante de contraste se aade safranina, que tie de rosa las bacterias Gram negativas, previamente decoloradas; mientras que a las bacterias Gram positivas les proporciona un color violeta ms intenso.Tincin: RODAMINA-AURAMINALos cidos miclicos de las paredes celulares de las micobacterias poseen afinidad para los fluorocromos auramina y rodamina. Estos colorantes se fijan a las bacterias, que aparecen de color amarillo o naranja brillante contra un fondo verdoso. El permanganato de potasio, empleado como contraste, evita la fluorescencia inespecfica. Todos los microorganismos cido-alcohol resistentes, incluyendo los esporozoarios parsitos, se tien con estos colorantes.Un aspecto importante de la coloracin rodamina-auramiria es que luego los frotis pueden ser reteidos con la coloracin de Ziehl-Neelsen o Kinyoun directamente sobre la tincin con el fluorocromo, si se elimina antes el aceite de inmersin. De esta forma, los resultados positivos pueden ser confirmados con las coloraciones tradicionales, que adems permiten la diferenciacin morfolgica.

Tincin: NARANJA DE ACRIDINAEl fluorocromo naranja de acridina se une al cido nucleico ya sea en su forma nativa o desnaturalizada. En algunas preparaciones de naranja de acridina, el color de la fluorescencia puede variar, dependiendo del pH y de la concentracin. El naranja de acridina ha sido empleado como colorante vital, que da una fluorescencia verde si el microorganismo est vivo y roja si est muerto. De todos modos, como el colorante se intercala en el cido nucleico, el germen viable se inactivar poco tiempo despus de la tincin.

Colorantes.La mayora de loscolorantesson compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos.Azul de metileno: Elazul de metilenose utiliza para teir clulas animales, para hacer ms visibles sus ncleos. Es tambin utilizado para teir los extendidos de sangre para ser utilizados en citologa y como colorante vital en el recuento dereticulocitos.Azul Nilo: Tie los ncleos de color azul. Tambin puede ser utilizado para teir clulas vivas.Cristal violeta: Elcristal violeta, al ser combinado con un mordiente adecuado, tie lasparedes celularesde color prpura. El cristal violeta es un componente importante en lacoloracin de Gram.Eosina: Laeosinase utiliza ms frecuentemente como contra coloracin de la hematoxilina, impartiendo un color que va del rosado al rojo al materialcitoplasmtico,membrana celular, y algunas estructuras extracelulares. Adems imparte un fuerte color rojo a loseritrocitos. La eosina puede ser utilizada tambin en algunas variantes de la coloracin de Gram, y en muchos otros protocolos de tincin.

Safranina: Lasafraninaes un colorante nuclear. Colorea los ncleos celulares de rojo, y se utiliza principalmente como contracoloracin. Tambin puede ser utilizada para darle una coloracin amarilla al colgeno.

Verde de metilo: Elverde de metilose utiliza frecuentemente en microscopia de campo claro, para teir la cromatina de las clulas y facilitar as su visualizacin.