UNIVERSIDAD ANDINA NESTOR CACERES VELASQUEZ - HISTOLOGIA

TINCION DE GRAM

INTRODUCCION:

La tinción de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Su nombre se debe al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrollo la técnica en 1884, con el objetivo de diferenciarlas considerándose así: bacterias Gram negativas y positivas.

PROPOSITOS:

1. Conocer la utilidad de la tinción de Gram como herramienta para el diagnóstico de algunos procesos bacterianos.

2. Conocer los reactivos usados 3. Conocer el fundamento de la coloración de Gram4. Adquirir conocimientos sobre la realización de esta técnica de coloración.5. Conocer que tiñe la coloración Gram

UTILIDAD: La tinción de Gram tiene valor diagnóstico y puede ser aplicada a diversos y múltiples tipos de especímenes clínicos como líquidos corporales , excreciones, secreciones tejidos, pero su uso es limitado en muestras de materia fecal. La observación de esta tinción permite encontrar características como forma, agrupación, y tamaño de las células bacterianas a partir tanto de muestras clínicas como de cultivos bacterianos.

REACTIVOS:

1. CRISTAL VIOLETA o violeta de genciana: COLORANTE BASICO2. LUGOL DE GRAM : MORDIENTE3. ALCOHOL – ACETONA: DECOLORANTE4. FUSCINA o safranina : COLORANTE DE CONTRASTE

FUNDAMENTO: El cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose a la pared celular bacteriana, con la ayuda del mordiente que refuerza la unión del colorante. Las bacterias Gram positivas debido a su estructura y composición bioquímica de su pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun después del tratamiento con el decolorante conserva el colorante básico, por lo que se observa de color azul oscuro o violeta una vez concluida la tinción. Las bacterias Gram negativas pierden el colorante básico cuando son tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipídico de la pared celular lo que aumenta la permeabilidad celular, dando como resultado la pérdida del complejo cristal violeta- lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste, razón por la cual estas se observan de color rosado una vez concluida la tinción.

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TECNICA:

1. Realizar un extendido delgado de la muestra sobre un portaobjetos(placa) y dejar secar.

2. Fijar el material a estudio a la placa pasándola 2 o 3 veces por la llama de un mechero, evitando su excesivo calentamiento.

3. Cubrir la placa con cristal violeta durante un minuto.4. Lavar con agua corriente.5. Cubrir la placa con lugol de Gram durante un minuto.6. Lavar con agua corriente.7. Cubrir la placa con alcohol-acetona durante 30 segundos.8. Lavar con agua corriente.9. Cubrir la placa con fuscina durante un minuto10. Lavar con agua destilada11. Dejar secar al aire12. Observar

¿TODAS LAS BACTERIAS SON DIFERENCIADAS POR LA TINCION GRAM?

No, por ejemplo las micobacterias no se tiñen debido a su pared muy rica en lípidos pero se pueden identificar con la tinción de Ziehl-Neelsen, o por ejemplo los microorganismos que no poseen pared como los micoplasmas, no resistirían la coloración sino que se observan con la tinción de Hoesch.

EJEMPLOS:

BACTERIAS GRAM POSITIVAS

COCOS (staphylococcus aureus, streptococcus pyogenes/grupo A ,streptococcus pneumoniae o neumococo, etc) BACILOS (bacillus antracis,listeria monocytogenes, clostridium tetani,etc)

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

COCOS (neisseria gonorrhoese o gonococo,meningococo,etc) BACILOS (escherichia coli, salmonella typhi,Vibrio cholerae,klebsiella pneumoniae,etc)

BIBLIOGRAFIA:

http://es.slideshare.net/Altajimenez/tabla-de-bacterias-gram-positivas-y-negativas http://www.ceala.cl/joweb/up/down/labqui/terceros/Microbilog%EDa%20-%20Tinci%F3n%20Gram.pdf http://www.facultadsalud.unicauca.edu.co/Documentos2010/DptoMedInt/Tencion_de_gram.pdf

Elaborado por: Alexis Ramos