Conocimientos Basicos Para La Tincion de Papanicolaou i
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Conocimientos básicos para la tinción de citología cervico‐vaginal Cit. Claudia Elizabeth Mares Alatorre. Año 2010
Transcript of Conocimientos Basicos Para La Tincion de Papanicolaou i
Conocimientos baacutesicos para la tincioacuten de
citologiacutea cervico‐vaginal
Cit Claudia Elizabeth Mares AlatorreAntildeo 2010
La vigilancia para la aplicacioacuten de los lineamientos
respecto a la tincioacuten y montaje en los laboratorios de
citologiacutea ceacutervico‐uterina corresponde a la Secretaria de
Salud tanto del nivel federal como estatal en sus
respectivos aacutembitos de competencia
Poliacuteticas de operacioacuten normas y lineamientos
El director o coordinador del laboratorio deberaacute
verificar que el personal encargado de la tincioacuten y
montaje de las muestras citoloacutegicas realice las
actividades correspondientes
El incumplimiento de estas poliacuteticas y normas se
sancionaraacute conforme a la Ley Federal de
Responsabilidades de los Servicios Puacuteblicos
Propoacutesito
Realizar un proceso de calidad el teacutecnico en tincioacuten o el citotecnoacutelogo
capacitado para la tincioacuten y montaje de las muestras citoloacutegicas
Campo de aplicacioacuten
La coloracioacuten descrita se aplica a las laminillas portadoras de muestras de
frotis ceacutervico-vaginal para realizar el diagnoacutestico citoloacutegico
Requisitos para una tincioacuten de calidad
El procesamiento manual de las muestras de frotis cervical fijado
comprende los siguientes sub‐pasos
Reparacioacuten ocasional de las laacuteminas quebradas aceptadas
Preparacioacuten y manejo de la bateriacutea de tincioacuten
Tincioacuten de las muestras
Montaje de las muestras
Distribucioacuten de las laacuteminas en las bandejas
La teacutecnica seraacute exitosa si
bull Todas las laacuteminas aceptadas son procesadas en el tiempo establecido y se
mantiene su integridad (no se quiebran) e identificacioacuten durante el
procesamiento
bull Todas las laacuteminas estaacuten tentildeidas en forma apropiada lo que significa
I Una buena definicioacuten del detalle nuclear
II Una transparencia del citoplasma
III Una diferenciacioacuten celular
bull Todas las laacuteminas estaacuten montadas adecuadamente lo que significa
que el frotis estaacute protegido de la sequedad del aire encogimiento y de
destentildeirse por la oxidacioacuten y ademaacutes proporciona una imagen
transparente en el microscopio
bull Las bandejas para los citotecnoacutelogos estaacuten preparadas
correctamente lo que significa que contienen el nuacutemero de laacuteminas
que corresponde estaacuten libres entre siacute (no pegadas) y colocadas en
el orden correlativo del nuacutemero de registro citoloacutegico
bull Los insumos involucrados en el procesamiento de las muestras se
usan eficientemente
bull El personal se mantiene libre de problemas de salud asociada al
trabajo en la sala de procesamiento de muestras
Los recursos de una sala de
procesamiento manual se clasifica en
a Mobiliario
b Equipos
c Insumos
Aacuterea de tincioacutenCaracteriacutesticas
bull Fiacutesicamente separada de otros espacios
bull Con una excelente ventilacioacuten hacia el exterior ya que debido a los
contaminantes quiacutemicos es un aacuterea de alto riesgo
bull Sentildealizadas las medidas a tomar en caso de siniestro
bull Con regadera anti‐incendios y extintores
bull Campana de extraccioacuten de gases tanto para la tincioacuten como para el
montaje
bull Se recomienda que los insumos sean de buena calidad
bull Contar con un aacuterea de bodega protegida de incendios para los reactivos y
tinciones inflamables
bull La sala debe contar con un sector de lavado equipado con lavadero
Principio del meacutetodo de tincioacuten de
Papanicolaou
La tincioacuten de Papanicolaou es un meacutetodo de tincioacuten
poli-croacutemico que consta de una tincioacuten nuclear y un
contraste citoplasmaacutetico
La tincioacuten de Papanicolaou tiene cuatros pasos
principales
Fijacioacuten (realizada al momento de tomar la muestra)
Tincioacuten del nuacutecleo con la hematoxilina
Tincioacuten del citoplasma con Orange G y EA
Aclaramiento
La tincioacuten de Papanicolaou usa tres
colorantes
bull Hematoxilina
bull OG 6
bull EA 50
Los pasos de la tincioacuten estaacuten entremezclados con
soluciones que hidratan deshidratan y enjuagan las
ceacutelulas
Enjuague
El enjuague se realiza con agua corriente yo agua destilada pero siempre
hay que verificar que el pH del agua se encuentre entre 65 y 7
Hidratacioacuten
La hidratacioacuten antes del colorante de hematoxilina puede ser
bull Gradual usando alcohol en concentraciones decrecientes 80‐70‐50
bull Abrupta sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de
alcohol y al agua directamente
Tincioacuten del nuacutecleo
Existen dos meacutetodos para tentildeir el nuacutecleo
bull Meacutetodo progresivo
Se tintildee el nuacutecleo con la intensidad de color deseada
bull Meacutetodo regresivo
Se sobre‐tintildee con hematoxilina no acidificada luego se
remueve el exceso de tincioacuten con aacutecido clorhiacutedrico diluido
bull Despueacutes de la hematoxilina las laminillas se lavan en agua
Tincioacuten del citoplasma
Orange G 6 es una tincioacuten monocromaacutetica y EA 50 es una tincioacuten
policroma compuesta
Colorante Elementos celulares
Hematoxilina de Harris Afinidad por la cromatina
Tintildee el nuacutecleo
OG 6 Tintildee la queratina
Penetra raacutepidamente al citoplasma
EA 50 Tintildee el citoplasma de las ceacutelulas
escamosas cianofiacutelas y eosinofiacutelas
Nucleacuteolos y cilios
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
La vigilancia para la aplicacioacuten de los lineamientos
respecto a la tincioacuten y montaje en los laboratorios de
citologiacutea ceacutervico‐uterina corresponde a la Secretaria de
Salud tanto del nivel federal como estatal en sus
respectivos aacutembitos de competencia
Poliacuteticas de operacioacuten normas y lineamientos
El director o coordinador del laboratorio deberaacute
verificar que el personal encargado de la tincioacuten y
montaje de las muestras citoloacutegicas realice las
actividades correspondientes
El incumplimiento de estas poliacuteticas y normas se
sancionaraacute conforme a la Ley Federal de
Responsabilidades de los Servicios Puacuteblicos
Propoacutesito
Realizar un proceso de calidad el teacutecnico en tincioacuten o el citotecnoacutelogo
capacitado para la tincioacuten y montaje de las muestras citoloacutegicas
Campo de aplicacioacuten
La coloracioacuten descrita se aplica a las laminillas portadoras de muestras de
frotis ceacutervico-vaginal para realizar el diagnoacutestico citoloacutegico
Requisitos para una tincioacuten de calidad
El procesamiento manual de las muestras de frotis cervical fijado
comprende los siguientes sub‐pasos
Reparacioacuten ocasional de las laacuteminas quebradas aceptadas
Preparacioacuten y manejo de la bateriacutea de tincioacuten
Tincioacuten de las muestras
Montaje de las muestras
Distribucioacuten de las laacuteminas en las bandejas
La teacutecnica seraacute exitosa si
bull Todas las laacuteminas aceptadas son procesadas en el tiempo establecido y se
mantiene su integridad (no se quiebran) e identificacioacuten durante el
procesamiento
bull Todas las laacuteminas estaacuten tentildeidas en forma apropiada lo que significa
I Una buena definicioacuten del detalle nuclear
II Una transparencia del citoplasma
III Una diferenciacioacuten celular
bull Todas las laacuteminas estaacuten montadas adecuadamente lo que significa
que el frotis estaacute protegido de la sequedad del aire encogimiento y de
destentildeirse por la oxidacioacuten y ademaacutes proporciona una imagen
transparente en el microscopio
bull Las bandejas para los citotecnoacutelogos estaacuten preparadas
correctamente lo que significa que contienen el nuacutemero de laacuteminas
que corresponde estaacuten libres entre siacute (no pegadas) y colocadas en
el orden correlativo del nuacutemero de registro citoloacutegico
bull Los insumos involucrados en el procesamiento de las muestras se
usan eficientemente
bull El personal se mantiene libre de problemas de salud asociada al
trabajo en la sala de procesamiento de muestras
Los recursos de una sala de
procesamiento manual se clasifica en
a Mobiliario
b Equipos
c Insumos
Aacuterea de tincioacutenCaracteriacutesticas
bull Fiacutesicamente separada de otros espacios
bull Con una excelente ventilacioacuten hacia el exterior ya que debido a los
contaminantes quiacutemicos es un aacuterea de alto riesgo
bull Sentildealizadas las medidas a tomar en caso de siniestro
bull Con regadera anti‐incendios y extintores
bull Campana de extraccioacuten de gases tanto para la tincioacuten como para el
montaje
bull Se recomienda que los insumos sean de buena calidad
bull Contar con un aacuterea de bodega protegida de incendios para los reactivos y
tinciones inflamables
bull La sala debe contar con un sector de lavado equipado con lavadero
Principio del meacutetodo de tincioacuten de
Papanicolaou
La tincioacuten de Papanicolaou es un meacutetodo de tincioacuten
poli-croacutemico que consta de una tincioacuten nuclear y un
contraste citoplasmaacutetico
La tincioacuten de Papanicolaou tiene cuatros pasos
principales
Fijacioacuten (realizada al momento de tomar la muestra)
Tincioacuten del nuacutecleo con la hematoxilina
Tincioacuten del citoplasma con Orange G y EA
Aclaramiento
La tincioacuten de Papanicolaou usa tres
colorantes
bull Hematoxilina
bull OG 6
bull EA 50
Los pasos de la tincioacuten estaacuten entremezclados con
soluciones que hidratan deshidratan y enjuagan las
ceacutelulas
Enjuague
El enjuague se realiza con agua corriente yo agua destilada pero siempre
hay que verificar que el pH del agua se encuentre entre 65 y 7
Hidratacioacuten
La hidratacioacuten antes del colorante de hematoxilina puede ser
bull Gradual usando alcohol en concentraciones decrecientes 80‐70‐50
bull Abrupta sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de
alcohol y al agua directamente
Tincioacuten del nuacutecleo
Existen dos meacutetodos para tentildeir el nuacutecleo
bull Meacutetodo progresivo
Se tintildee el nuacutecleo con la intensidad de color deseada
bull Meacutetodo regresivo
Se sobre‐tintildee con hematoxilina no acidificada luego se
remueve el exceso de tincioacuten con aacutecido clorhiacutedrico diluido
bull Despueacutes de la hematoxilina las laminillas se lavan en agua
Tincioacuten del citoplasma
Orange G 6 es una tincioacuten monocromaacutetica y EA 50 es una tincioacuten
policroma compuesta
Colorante Elementos celulares
Hematoxilina de Harris Afinidad por la cromatina
Tintildee el nuacutecleo
OG 6 Tintildee la queratina
Penetra raacutepidamente al citoplasma
EA 50 Tintildee el citoplasma de las ceacutelulas
escamosas cianofiacutelas y eosinofiacutelas
Nucleacuteolos y cilios
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Propoacutesito
Realizar un proceso de calidad el teacutecnico en tincioacuten o el citotecnoacutelogo
capacitado para la tincioacuten y montaje de las muestras citoloacutegicas
Campo de aplicacioacuten
La coloracioacuten descrita se aplica a las laminillas portadoras de muestras de
frotis ceacutervico-vaginal para realizar el diagnoacutestico citoloacutegico
Requisitos para una tincioacuten de calidad
El procesamiento manual de las muestras de frotis cervical fijado
comprende los siguientes sub‐pasos
Reparacioacuten ocasional de las laacuteminas quebradas aceptadas
Preparacioacuten y manejo de la bateriacutea de tincioacuten
Tincioacuten de las muestras
Montaje de las muestras
Distribucioacuten de las laacuteminas en las bandejas
La teacutecnica seraacute exitosa si
bull Todas las laacuteminas aceptadas son procesadas en el tiempo establecido y se
mantiene su integridad (no se quiebran) e identificacioacuten durante el
procesamiento
bull Todas las laacuteminas estaacuten tentildeidas en forma apropiada lo que significa
I Una buena definicioacuten del detalle nuclear
II Una transparencia del citoplasma
III Una diferenciacioacuten celular
bull Todas las laacuteminas estaacuten montadas adecuadamente lo que significa
que el frotis estaacute protegido de la sequedad del aire encogimiento y de
destentildeirse por la oxidacioacuten y ademaacutes proporciona una imagen
transparente en el microscopio
bull Las bandejas para los citotecnoacutelogos estaacuten preparadas
correctamente lo que significa que contienen el nuacutemero de laacuteminas
que corresponde estaacuten libres entre siacute (no pegadas) y colocadas en
el orden correlativo del nuacutemero de registro citoloacutegico
bull Los insumos involucrados en el procesamiento de las muestras se
usan eficientemente
bull El personal se mantiene libre de problemas de salud asociada al
trabajo en la sala de procesamiento de muestras
Los recursos de una sala de
procesamiento manual se clasifica en
a Mobiliario
b Equipos
c Insumos
Aacuterea de tincioacutenCaracteriacutesticas
bull Fiacutesicamente separada de otros espacios
bull Con una excelente ventilacioacuten hacia el exterior ya que debido a los
contaminantes quiacutemicos es un aacuterea de alto riesgo
bull Sentildealizadas las medidas a tomar en caso de siniestro
bull Con regadera anti‐incendios y extintores
bull Campana de extraccioacuten de gases tanto para la tincioacuten como para el
montaje
bull Se recomienda que los insumos sean de buena calidad
bull Contar con un aacuterea de bodega protegida de incendios para los reactivos y
tinciones inflamables
bull La sala debe contar con un sector de lavado equipado con lavadero
Principio del meacutetodo de tincioacuten de
Papanicolaou
La tincioacuten de Papanicolaou es un meacutetodo de tincioacuten
poli-croacutemico que consta de una tincioacuten nuclear y un
contraste citoplasmaacutetico
La tincioacuten de Papanicolaou tiene cuatros pasos
principales
Fijacioacuten (realizada al momento de tomar la muestra)
Tincioacuten del nuacutecleo con la hematoxilina
Tincioacuten del citoplasma con Orange G y EA
Aclaramiento
La tincioacuten de Papanicolaou usa tres
colorantes
bull Hematoxilina
bull OG 6
bull EA 50
Los pasos de la tincioacuten estaacuten entremezclados con
soluciones que hidratan deshidratan y enjuagan las
ceacutelulas
Enjuague
El enjuague se realiza con agua corriente yo agua destilada pero siempre
hay que verificar que el pH del agua se encuentre entre 65 y 7
Hidratacioacuten
La hidratacioacuten antes del colorante de hematoxilina puede ser
bull Gradual usando alcohol en concentraciones decrecientes 80‐70‐50
bull Abrupta sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de
alcohol y al agua directamente
Tincioacuten del nuacutecleo
Existen dos meacutetodos para tentildeir el nuacutecleo
bull Meacutetodo progresivo
Se tintildee el nuacutecleo con la intensidad de color deseada
bull Meacutetodo regresivo
Se sobre‐tintildee con hematoxilina no acidificada luego se
remueve el exceso de tincioacuten con aacutecido clorhiacutedrico diluido
bull Despueacutes de la hematoxilina las laminillas se lavan en agua
Tincioacuten del citoplasma
Orange G 6 es una tincioacuten monocromaacutetica y EA 50 es una tincioacuten
policroma compuesta
Colorante Elementos celulares
Hematoxilina de Harris Afinidad por la cromatina
Tintildee el nuacutecleo
OG 6 Tintildee la queratina
Penetra raacutepidamente al citoplasma
EA 50 Tintildee el citoplasma de las ceacutelulas
escamosas cianofiacutelas y eosinofiacutelas
Nucleacuteolos y cilios
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Requisitos para una tincioacuten de calidad
El procesamiento manual de las muestras de frotis cervical fijado
comprende los siguientes sub‐pasos
Reparacioacuten ocasional de las laacuteminas quebradas aceptadas
Preparacioacuten y manejo de la bateriacutea de tincioacuten
Tincioacuten de las muestras
Montaje de las muestras
Distribucioacuten de las laacuteminas en las bandejas
La teacutecnica seraacute exitosa si
bull Todas las laacuteminas aceptadas son procesadas en el tiempo establecido y se
mantiene su integridad (no se quiebran) e identificacioacuten durante el
procesamiento
bull Todas las laacuteminas estaacuten tentildeidas en forma apropiada lo que significa
I Una buena definicioacuten del detalle nuclear
II Una transparencia del citoplasma
III Una diferenciacioacuten celular
bull Todas las laacuteminas estaacuten montadas adecuadamente lo que significa
que el frotis estaacute protegido de la sequedad del aire encogimiento y de
destentildeirse por la oxidacioacuten y ademaacutes proporciona una imagen
transparente en el microscopio
bull Las bandejas para los citotecnoacutelogos estaacuten preparadas
correctamente lo que significa que contienen el nuacutemero de laacuteminas
que corresponde estaacuten libres entre siacute (no pegadas) y colocadas en
el orden correlativo del nuacutemero de registro citoloacutegico
bull Los insumos involucrados en el procesamiento de las muestras se
usan eficientemente
bull El personal se mantiene libre de problemas de salud asociada al
trabajo en la sala de procesamiento de muestras
Los recursos de una sala de
procesamiento manual se clasifica en
a Mobiliario
b Equipos
c Insumos
Aacuterea de tincioacutenCaracteriacutesticas
bull Fiacutesicamente separada de otros espacios
bull Con una excelente ventilacioacuten hacia el exterior ya que debido a los
contaminantes quiacutemicos es un aacuterea de alto riesgo
bull Sentildealizadas las medidas a tomar en caso de siniestro
bull Con regadera anti‐incendios y extintores
bull Campana de extraccioacuten de gases tanto para la tincioacuten como para el
montaje
bull Se recomienda que los insumos sean de buena calidad
bull Contar con un aacuterea de bodega protegida de incendios para los reactivos y
tinciones inflamables
bull La sala debe contar con un sector de lavado equipado con lavadero
Principio del meacutetodo de tincioacuten de
Papanicolaou
La tincioacuten de Papanicolaou es un meacutetodo de tincioacuten
poli-croacutemico que consta de una tincioacuten nuclear y un
contraste citoplasmaacutetico
La tincioacuten de Papanicolaou tiene cuatros pasos
principales
Fijacioacuten (realizada al momento de tomar la muestra)
Tincioacuten del nuacutecleo con la hematoxilina
Tincioacuten del citoplasma con Orange G y EA
Aclaramiento
La tincioacuten de Papanicolaou usa tres
colorantes
bull Hematoxilina
bull OG 6
bull EA 50
Los pasos de la tincioacuten estaacuten entremezclados con
soluciones que hidratan deshidratan y enjuagan las
ceacutelulas
Enjuague
El enjuague se realiza con agua corriente yo agua destilada pero siempre
hay que verificar que el pH del agua se encuentre entre 65 y 7
Hidratacioacuten
La hidratacioacuten antes del colorante de hematoxilina puede ser
bull Gradual usando alcohol en concentraciones decrecientes 80‐70‐50
bull Abrupta sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de
alcohol y al agua directamente
Tincioacuten del nuacutecleo
Existen dos meacutetodos para tentildeir el nuacutecleo
bull Meacutetodo progresivo
Se tintildee el nuacutecleo con la intensidad de color deseada
bull Meacutetodo regresivo
Se sobre‐tintildee con hematoxilina no acidificada luego se
remueve el exceso de tincioacuten con aacutecido clorhiacutedrico diluido
bull Despueacutes de la hematoxilina las laminillas se lavan en agua
Tincioacuten del citoplasma
Orange G 6 es una tincioacuten monocromaacutetica y EA 50 es una tincioacuten
policroma compuesta
Colorante Elementos celulares
Hematoxilina de Harris Afinidad por la cromatina
Tintildee el nuacutecleo
OG 6 Tintildee la queratina
Penetra raacutepidamente al citoplasma
EA 50 Tintildee el citoplasma de las ceacutelulas
escamosas cianofiacutelas y eosinofiacutelas
Nucleacuteolos y cilios
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
La teacutecnica seraacute exitosa si
bull Todas las laacuteminas aceptadas son procesadas en el tiempo establecido y se
mantiene su integridad (no se quiebran) e identificacioacuten durante el
procesamiento
bull Todas las laacuteminas estaacuten tentildeidas en forma apropiada lo que significa
I Una buena definicioacuten del detalle nuclear
II Una transparencia del citoplasma
III Una diferenciacioacuten celular
bull Todas las laacuteminas estaacuten montadas adecuadamente lo que significa
que el frotis estaacute protegido de la sequedad del aire encogimiento y de
destentildeirse por la oxidacioacuten y ademaacutes proporciona una imagen
transparente en el microscopio
bull Las bandejas para los citotecnoacutelogos estaacuten preparadas
correctamente lo que significa que contienen el nuacutemero de laacuteminas
que corresponde estaacuten libres entre siacute (no pegadas) y colocadas en
el orden correlativo del nuacutemero de registro citoloacutegico
bull Los insumos involucrados en el procesamiento de las muestras se
usan eficientemente
bull El personal se mantiene libre de problemas de salud asociada al
trabajo en la sala de procesamiento de muestras
Los recursos de una sala de
procesamiento manual se clasifica en
a Mobiliario
b Equipos
c Insumos
Aacuterea de tincioacutenCaracteriacutesticas
bull Fiacutesicamente separada de otros espacios
bull Con una excelente ventilacioacuten hacia el exterior ya que debido a los
contaminantes quiacutemicos es un aacuterea de alto riesgo
bull Sentildealizadas las medidas a tomar en caso de siniestro
bull Con regadera anti‐incendios y extintores
bull Campana de extraccioacuten de gases tanto para la tincioacuten como para el
montaje
bull Se recomienda que los insumos sean de buena calidad
bull Contar con un aacuterea de bodega protegida de incendios para los reactivos y
tinciones inflamables
bull La sala debe contar con un sector de lavado equipado con lavadero
Principio del meacutetodo de tincioacuten de
Papanicolaou
La tincioacuten de Papanicolaou es un meacutetodo de tincioacuten
poli-croacutemico que consta de una tincioacuten nuclear y un
contraste citoplasmaacutetico
La tincioacuten de Papanicolaou tiene cuatros pasos
principales
Fijacioacuten (realizada al momento de tomar la muestra)
Tincioacuten del nuacutecleo con la hematoxilina
Tincioacuten del citoplasma con Orange G y EA
Aclaramiento
La tincioacuten de Papanicolaou usa tres
colorantes
bull Hematoxilina
bull OG 6
bull EA 50
Los pasos de la tincioacuten estaacuten entremezclados con
soluciones que hidratan deshidratan y enjuagan las
ceacutelulas
Enjuague
El enjuague se realiza con agua corriente yo agua destilada pero siempre
hay que verificar que el pH del agua se encuentre entre 65 y 7
Hidratacioacuten
La hidratacioacuten antes del colorante de hematoxilina puede ser
bull Gradual usando alcohol en concentraciones decrecientes 80‐70‐50
bull Abrupta sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de
alcohol y al agua directamente
Tincioacuten del nuacutecleo
Existen dos meacutetodos para tentildeir el nuacutecleo
bull Meacutetodo progresivo
Se tintildee el nuacutecleo con la intensidad de color deseada
bull Meacutetodo regresivo
Se sobre‐tintildee con hematoxilina no acidificada luego se
remueve el exceso de tincioacuten con aacutecido clorhiacutedrico diluido
bull Despueacutes de la hematoxilina las laminillas se lavan en agua
Tincioacuten del citoplasma
Orange G 6 es una tincioacuten monocromaacutetica y EA 50 es una tincioacuten
policroma compuesta
Colorante Elementos celulares
Hematoxilina de Harris Afinidad por la cromatina
Tintildee el nuacutecleo
OG 6 Tintildee la queratina
Penetra raacutepidamente al citoplasma
EA 50 Tintildee el citoplasma de las ceacutelulas
escamosas cianofiacutelas y eosinofiacutelas
Nucleacuteolos y cilios
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
bull Todas las laacuteminas estaacuten tentildeidas en forma apropiada lo que significa
I Una buena definicioacuten del detalle nuclear
II Una transparencia del citoplasma
III Una diferenciacioacuten celular
bull Todas las laacuteminas estaacuten montadas adecuadamente lo que significa
que el frotis estaacute protegido de la sequedad del aire encogimiento y de
destentildeirse por la oxidacioacuten y ademaacutes proporciona una imagen
transparente en el microscopio
bull Las bandejas para los citotecnoacutelogos estaacuten preparadas
correctamente lo que significa que contienen el nuacutemero de laacuteminas
que corresponde estaacuten libres entre siacute (no pegadas) y colocadas en
el orden correlativo del nuacutemero de registro citoloacutegico
bull Los insumos involucrados en el procesamiento de las muestras se
usan eficientemente
bull El personal se mantiene libre de problemas de salud asociada al
trabajo en la sala de procesamiento de muestras
Los recursos de una sala de
procesamiento manual se clasifica en
a Mobiliario
b Equipos
c Insumos
Aacuterea de tincioacutenCaracteriacutesticas
bull Fiacutesicamente separada de otros espacios
bull Con una excelente ventilacioacuten hacia el exterior ya que debido a los
contaminantes quiacutemicos es un aacuterea de alto riesgo
bull Sentildealizadas las medidas a tomar en caso de siniestro
bull Con regadera anti‐incendios y extintores
bull Campana de extraccioacuten de gases tanto para la tincioacuten como para el
montaje
bull Se recomienda que los insumos sean de buena calidad
bull Contar con un aacuterea de bodega protegida de incendios para los reactivos y
tinciones inflamables
bull La sala debe contar con un sector de lavado equipado con lavadero
Principio del meacutetodo de tincioacuten de
Papanicolaou
La tincioacuten de Papanicolaou es un meacutetodo de tincioacuten
poli-croacutemico que consta de una tincioacuten nuclear y un
contraste citoplasmaacutetico
La tincioacuten de Papanicolaou tiene cuatros pasos
principales
Fijacioacuten (realizada al momento de tomar la muestra)
Tincioacuten del nuacutecleo con la hematoxilina
Tincioacuten del citoplasma con Orange G y EA
Aclaramiento
La tincioacuten de Papanicolaou usa tres
colorantes
bull Hematoxilina
bull OG 6
bull EA 50
Los pasos de la tincioacuten estaacuten entremezclados con
soluciones que hidratan deshidratan y enjuagan las
ceacutelulas
Enjuague
El enjuague se realiza con agua corriente yo agua destilada pero siempre
hay que verificar que el pH del agua se encuentre entre 65 y 7
Hidratacioacuten
La hidratacioacuten antes del colorante de hematoxilina puede ser
bull Gradual usando alcohol en concentraciones decrecientes 80‐70‐50
bull Abrupta sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de
alcohol y al agua directamente
Tincioacuten del nuacutecleo
Existen dos meacutetodos para tentildeir el nuacutecleo
bull Meacutetodo progresivo
Se tintildee el nuacutecleo con la intensidad de color deseada
bull Meacutetodo regresivo
Se sobre‐tintildee con hematoxilina no acidificada luego se
remueve el exceso de tincioacuten con aacutecido clorhiacutedrico diluido
bull Despueacutes de la hematoxilina las laminillas se lavan en agua
Tincioacuten del citoplasma
Orange G 6 es una tincioacuten monocromaacutetica y EA 50 es una tincioacuten
policroma compuesta
Colorante Elementos celulares
Hematoxilina de Harris Afinidad por la cromatina
Tintildee el nuacutecleo
OG 6 Tintildee la queratina
Penetra raacutepidamente al citoplasma
EA 50 Tintildee el citoplasma de las ceacutelulas
escamosas cianofiacutelas y eosinofiacutelas
Nucleacuteolos y cilios
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
bull Todas las laacuteminas estaacuten montadas adecuadamente lo que significa
que el frotis estaacute protegido de la sequedad del aire encogimiento y de
destentildeirse por la oxidacioacuten y ademaacutes proporciona una imagen
transparente en el microscopio
bull Las bandejas para los citotecnoacutelogos estaacuten preparadas
correctamente lo que significa que contienen el nuacutemero de laacuteminas
que corresponde estaacuten libres entre siacute (no pegadas) y colocadas en
el orden correlativo del nuacutemero de registro citoloacutegico
bull Los insumos involucrados en el procesamiento de las muestras se
usan eficientemente
bull El personal se mantiene libre de problemas de salud asociada al
trabajo en la sala de procesamiento de muestras
Los recursos de una sala de
procesamiento manual se clasifica en
a Mobiliario
b Equipos
c Insumos
Aacuterea de tincioacutenCaracteriacutesticas
bull Fiacutesicamente separada de otros espacios
bull Con una excelente ventilacioacuten hacia el exterior ya que debido a los
contaminantes quiacutemicos es un aacuterea de alto riesgo
bull Sentildealizadas las medidas a tomar en caso de siniestro
bull Con regadera anti‐incendios y extintores
bull Campana de extraccioacuten de gases tanto para la tincioacuten como para el
montaje
bull Se recomienda que los insumos sean de buena calidad
bull Contar con un aacuterea de bodega protegida de incendios para los reactivos y
tinciones inflamables
bull La sala debe contar con un sector de lavado equipado con lavadero
Principio del meacutetodo de tincioacuten de
Papanicolaou
La tincioacuten de Papanicolaou es un meacutetodo de tincioacuten
poli-croacutemico que consta de una tincioacuten nuclear y un
contraste citoplasmaacutetico
La tincioacuten de Papanicolaou tiene cuatros pasos
principales
Fijacioacuten (realizada al momento de tomar la muestra)
Tincioacuten del nuacutecleo con la hematoxilina
Tincioacuten del citoplasma con Orange G y EA
Aclaramiento
La tincioacuten de Papanicolaou usa tres
colorantes
bull Hematoxilina
bull OG 6
bull EA 50
Los pasos de la tincioacuten estaacuten entremezclados con
soluciones que hidratan deshidratan y enjuagan las
ceacutelulas
Enjuague
El enjuague se realiza con agua corriente yo agua destilada pero siempre
hay que verificar que el pH del agua se encuentre entre 65 y 7
Hidratacioacuten
La hidratacioacuten antes del colorante de hematoxilina puede ser
bull Gradual usando alcohol en concentraciones decrecientes 80‐70‐50
bull Abrupta sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de
alcohol y al agua directamente
Tincioacuten del nuacutecleo
Existen dos meacutetodos para tentildeir el nuacutecleo
bull Meacutetodo progresivo
Se tintildee el nuacutecleo con la intensidad de color deseada
bull Meacutetodo regresivo
Se sobre‐tintildee con hematoxilina no acidificada luego se
remueve el exceso de tincioacuten con aacutecido clorhiacutedrico diluido
bull Despueacutes de la hematoxilina las laminillas se lavan en agua
Tincioacuten del citoplasma
Orange G 6 es una tincioacuten monocromaacutetica y EA 50 es una tincioacuten
policroma compuesta
Colorante Elementos celulares
Hematoxilina de Harris Afinidad por la cromatina
Tintildee el nuacutecleo
OG 6 Tintildee la queratina
Penetra raacutepidamente al citoplasma
EA 50 Tintildee el citoplasma de las ceacutelulas
escamosas cianofiacutelas y eosinofiacutelas
Nucleacuteolos y cilios
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
bull Las bandejas para los citotecnoacutelogos estaacuten preparadas
correctamente lo que significa que contienen el nuacutemero de laacuteminas
que corresponde estaacuten libres entre siacute (no pegadas) y colocadas en
el orden correlativo del nuacutemero de registro citoloacutegico
bull Los insumos involucrados en el procesamiento de las muestras se
usan eficientemente
bull El personal se mantiene libre de problemas de salud asociada al
trabajo en la sala de procesamiento de muestras
Los recursos de una sala de
procesamiento manual se clasifica en
a Mobiliario
b Equipos
c Insumos
Aacuterea de tincioacutenCaracteriacutesticas
bull Fiacutesicamente separada de otros espacios
bull Con una excelente ventilacioacuten hacia el exterior ya que debido a los
contaminantes quiacutemicos es un aacuterea de alto riesgo
bull Sentildealizadas las medidas a tomar en caso de siniestro
bull Con regadera anti‐incendios y extintores
bull Campana de extraccioacuten de gases tanto para la tincioacuten como para el
montaje
bull Se recomienda que los insumos sean de buena calidad
bull Contar con un aacuterea de bodega protegida de incendios para los reactivos y
tinciones inflamables
bull La sala debe contar con un sector de lavado equipado con lavadero
Principio del meacutetodo de tincioacuten de
Papanicolaou
La tincioacuten de Papanicolaou es un meacutetodo de tincioacuten
poli-croacutemico que consta de una tincioacuten nuclear y un
contraste citoplasmaacutetico
La tincioacuten de Papanicolaou tiene cuatros pasos
principales
Fijacioacuten (realizada al momento de tomar la muestra)
Tincioacuten del nuacutecleo con la hematoxilina
Tincioacuten del citoplasma con Orange G y EA
Aclaramiento
La tincioacuten de Papanicolaou usa tres
colorantes
bull Hematoxilina
bull OG 6
bull EA 50
Los pasos de la tincioacuten estaacuten entremezclados con
soluciones que hidratan deshidratan y enjuagan las
ceacutelulas
Enjuague
El enjuague se realiza con agua corriente yo agua destilada pero siempre
hay que verificar que el pH del agua se encuentre entre 65 y 7
Hidratacioacuten
La hidratacioacuten antes del colorante de hematoxilina puede ser
bull Gradual usando alcohol en concentraciones decrecientes 80‐70‐50
bull Abrupta sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de
alcohol y al agua directamente
Tincioacuten del nuacutecleo
Existen dos meacutetodos para tentildeir el nuacutecleo
bull Meacutetodo progresivo
Se tintildee el nuacutecleo con la intensidad de color deseada
bull Meacutetodo regresivo
Se sobre‐tintildee con hematoxilina no acidificada luego se
remueve el exceso de tincioacuten con aacutecido clorhiacutedrico diluido
bull Despueacutes de la hematoxilina las laminillas se lavan en agua
Tincioacuten del citoplasma
Orange G 6 es una tincioacuten monocromaacutetica y EA 50 es una tincioacuten
policroma compuesta
Colorante Elementos celulares
Hematoxilina de Harris Afinidad por la cromatina
Tintildee el nuacutecleo
OG 6 Tintildee la queratina
Penetra raacutepidamente al citoplasma
EA 50 Tintildee el citoplasma de las ceacutelulas
escamosas cianofiacutelas y eosinofiacutelas
Nucleacuteolos y cilios
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Los recursos de una sala de
procesamiento manual se clasifica en
a Mobiliario
b Equipos
c Insumos
Aacuterea de tincioacutenCaracteriacutesticas
bull Fiacutesicamente separada de otros espacios
bull Con una excelente ventilacioacuten hacia el exterior ya que debido a los
contaminantes quiacutemicos es un aacuterea de alto riesgo
bull Sentildealizadas las medidas a tomar en caso de siniestro
bull Con regadera anti‐incendios y extintores
bull Campana de extraccioacuten de gases tanto para la tincioacuten como para el
montaje
bull Se recomienda que los insumos sean de buena calidad
bull Contar con un aacuterea de bodega protegida de incendios para los reactivos y
tinciones inflamables
bull La sala debe contar con un sector de lavado equipado con lavadero
Principio del meacutetodo de tincioacuten de
Papanicolaou
La tincioacuten de Papanicolaou es un meacutetodo de tincioacuten
poli-croacutemico que consta de una tincioacuten nuclear y un
contraste citoplasmaacutetico
La tincioacuten de Papanicolaou tiene cuatros pasos
principales
Fijacioacuten (realizada al momento de tomar la muestra)
Tincioacuten del nuacutecleo con la hematoxilina
Tincioacuten del citoplasma con Orange G y EA
Aclaramiento
La tincioacuten de Papanicolaou usa tres
colorantes
bull Hematoxilina
bull OG 6
bull EA 50
Los pasos de la tincioacuten estaacuten entremezclados con
soluciones que hidratan deshidratan y enjuagan las
ceacutelulas
Enjuague
El enjuague se realiza con agua corriente yo agua destilada pero siempre
hay que verificar que el pH del agua se encuentre entre 65 y 7
Hidratacioacuten
La hidratacioacuten antes del colorante de hematoxilina puede ser
bull Gradual usando alcohol en concentraciones decrecientes 80‐70‐50
bull Abrupta sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de
alcohol y al agua directamente
Tincioacuten del nuacutecleo
Existen dos meacutetodos para tentildeir el nuacutecleo
bull Meacutetodo progresivo
Se tintildee el nuacutecleo con la intensidad de color deseada
bull Meacutetodo regresivo
Se sobre‐tintildee con hematoxilina no acidificada luego se
remueve el exceso de tincioacuten con aacutecido clorhiacutedrico diluido
bull Despueacutes de la hematoxilina las laminillas se lavan en agua
Tincioacuten del citoplasma
Orange G 6 es una tincioacuten monocromaacutetica y EA 50 es una tincioacuten
policroma compuesta
Colorante Elementos celulares
Hematoxilina de Harris Afinidad por la cromatina
Tintildee el nuacutecleo
OG 6 Tintildee la queratina
Penetra raacutepidamente al citoplasma
EA 50 Tintildee el citoplasma de las ceacutelulas
escamosas cianofiacutelas y eosinofiacutelas
Nucleacuteolos y cilios
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Aacuterea de tincioacutenCaracteriacutesticas
bull Fiacutesicamente separada de otros espacios
bull Con una excelente ventilacioacuten hacia el exterior ya que debido a los
contaminantes quiacutemicos es un aacuterea de alto riesgo
bull Sentildealizadas las medidas a tomar en caso de siniestro
bull Con regadera anti‐incendios y extintores
bull Campana de extraccioacuten de gases tanto para la tincioacuten como para el
montaje
bull Se recomienda que los insumos sean de buena calidad
bull Contar con un aacuterea de bodega protegida de incendios para los reactivos y
tinciones inflamables
bull La sala debe contar con un sector de lavado equipado con lavadero
Principio del meacutetodo de tincioacuten de
Papanicolaou
La tincioacuten de Papanicolaou es un meacutetodo de tincioacuten
poli-croacutemico que consta de una tincioacuten nuclear y un
contraste citoplasmaacutetico
La tincioacuten de Papanicolaou tiene cuatros pasos
principales
Fijacioacuten (realizada al momento de tomar la muestra)
Tincioacuten del nuacutecleo con la hematoxilina
Tincioacuten del citoplasma con Orange G y EA
Aclaramiento
La tincioacuten de Papanicolaou usa tres
colorantes
bull Hematoxilina
bull OG 6
bull EA 50
Los pasos de la tincioacuten estaacuten entremezclados con
soluciones que hidratan deshidratan y enjuagan las
ceacutelulas
Enjuague
El enjuague se realiza con agua corriente yo agua destilada pero siempre
hay que verificar que el pH del agua se encuentre entre 65 y 7
Hidratacioacuten
La hidratacioacuten antes del colorante de hematoxilina puede ser
bull Gradual usando alcohol en concentraciones decrecientes 80‐70‐50
bull Abrupta sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de
alcohol y al agua directamente
Tincioacuten del nuacutecleo
Existen dos meacutetodos para tentildeir el nuacutecleo
bull Meacutetodo progresivo
Se tintildee el nuacutecleo con la intensidad de color deseada
bull Meacutetodo regresivo
Se sobre‐tintildee con hematoxilina no acidificada luego se
remueve el exceso de tincioacuten con aacutecido clorhiacutedrico diluido
bull Despueacutes de la hematoxilina las laminillas se lavan en agua
Tincioacuten del citoplasma
Orange G 6 es una tincioacuten monocromaacutetica y EA 50 es una tincioacuten
policroma compuesta
Colorante Elementos celulares
Hematoxilina de Harris Afinidad por la cromatina
Tintildee el nuacutecleo
OG 6 Tintildee la queratina
Penetra raacutepidamente al citoplasma
EA 50 Tintildee el citoplasma de las ceacutelulas
escamosas cianofiacutelas y eosinofiacutelas
Nucleacuteolos y cilios
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Principio del meacutetodo de tincioacuten de
Papanicolaou
La tincioacuten de Papanicolaou es un meacutetodo de tincioacuten
poli-croacutemico que consta de una tincioacuten nuclear y un
contraste citoplasmaacutetico
La tincioacuten de Papanicolaou tiene cuatros pasos
principales
Fijacioacuten (realizada al momento de tomar la muestra)
Tincioacuten del nuacutecleo con la hematoxilina
Tincioacuten del citoplasma con Orange G y EA
Aclaramiento
La tincioacuten de Papanicolaou usa tres
colorantes
bull Hematoxilina
bull OG 6
bull EA 50
Los pasos de la tincioacuten estaacuten entremezclados con
soluciones que hidratan deshidratan y enjuagan las
ceacutelulas
Enjuague
El enjuague se realiza con agua corriente yo agua destilada pero siempre
hay que verificar que el pH del agua se encuentre entre 65 y 7
Hidratacioacuten
La hidratacioacuten antes del colorante de hematoxilina puede ser
bull Gradual usando alcohol en concentraciones decrecientes 80‐70‐50
bull Abrupta sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de
alcohol y al agua directamente
Tincioacuten del nuacutecleo
Existen dos meacutetodos para tentildeir el nuacutecleo
bull Meacutetodo progresivo
Se tintildee el nuacutecleo con la intensidad de color deseada
bull Meacutetodo regresivo
Se sobre‐tintildee con hematoxilina no acidificada luego se
remueve el exceso de tincioacuten con aacutecido clorhiacutedrico diluido
bull Despueacutes de la hematoxilina las laminillas se lavan en agua
Tincioacuten del citoplasma
Orange G 6 es una tincioacuten monocromaacutetica y EA 50 es una tincioacuten
policroma compuesta
Colorante Elementos celulares
Hematoxilina de Harris Afinidad por la cromatina
Tintildee el nuacutecleo
OG 6 Tintildee la queratina
Penetra raacutepidamente al citoplasma
EA 50 Tintildee el citoplasma de las ceacutelulas
escamosas cianofiacutelas y eosinofiacutelas
Nucleacuteolos y cilios
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
La tincioacuten de Papanicolaou tiene cuatros pasos
principales
Fijacioacuten (realizada al momento de tomar la muestra)
Tincioacuten del nuacutecleo con la hematoxilina
Tincioacuten del citoplasma con Orange G y EA
Aclaramiento
La tincioacuten de Papanicolaou usa tres
colorantes
bull Hematoxilina
bull OG 6
bull EA 50
Los pasos de la tincioacuten estaacuten entremezclados con
soluciones que hidratan deshidratan y enjuagan las
ceacutelulas
Enjuague
El enjuague se realiza con agua corriente yo agua destilada pero siempre
hay que verificar que el pH del agua se encuentre entre 65 y 7
Hidratacioacuten
La hidratacioacuten antes del colorante de hematoxilina puede ser
bull Gradual usando alcohol en concentraciones decrecientes 80‐70‐50
bull Abrupta sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de
alcohol y al agua directamente
Tincioacuten del nuacutecleo
Existen dos meacutetodos para tentildeir el nuacutecleo
bull Meacutetodo progresivo
Se tintildee el nuacutecleo con la intensidad de color deseada
bull Meacutetodo regresivo
Se sobre‐tintildee con hematoxilina no acidificada luego se
remueve el exceso de tincioacuten con aacutecido clorhiacutedrico diluido
bull Despueacutes de la hematoxilina las laminillas se lavan en agua
Tincioacuten del citoplasma
Orange G 6 es una tincioacuten monocromaacutetica y EA 50 es una tincioacuten
policroma compuesta
Colorante Elementos celulares
Hematoxilina de Harris Afinidad por la cromatina
Tintildee el nuacutecleo
OG 6 Tintildee la queratina
Penetra raacutepidamente al citoplasma
EA 50 Tintildee el citoplasma de las ceacutelulas
escamosas cianofiacutelas y eosinofiacutelas
Nucleacuteolos y cilios
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
La tincioacuten de Papanicolaou usa tres
colorantes
bull Hematoxilina
bull OG 6
bull EA 50
Los pasos de la tincioacuten estaacuten entremezclados con
soluciones que hidratan deshidratan y enjuagan las
ceacutelulas
Enjuague
El enjuague se realiza con agua corriente yo agua destilada pero siempre
hay que verificar que el pH del agua se encuentre entre 65 y 7
Hidratacioacuten
La hidratacioacuten antes del colorante de hematoxilina puede ser
bull Gradual usando alcohol en concentraciones decrecientes 80‐70‐50
bull Abrupta sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de
alcohol y al agua directamente
Tincioacuten del nuacutecleo
Existen dos meacutetodos para tentildeir el nuacutecleo
bull Meacutetodo progresivo
Se tintildee el nuacutecleo con la intensidad de color deseada
bull Meacutetodo regresivo
Se sobre‐tintildee con hematoxilina no acidificada luego se
remueve el exceso de tincioacuten con aacutecido clorhiacutedrico diluido
bull Despueacutes de la hematoxilina las laminillas se lavan en agua
Tincioacuten del citoplasma
Orange G 6 es una tincioacuten monocromaacutetica y EA 50 es una tincioacuten
policroma compuesta
Colorante Elementos celulares
Hematoxilina de Harris Afinidad por la cromatina
Tintildee el nuacutecleo
OG 6 Tintildee la queratina
Penetra raacutepidamente al citoplasma
EA 50 Tintildee el citoplasma de las ceacutelulas
escamosas cianofiacutelas y eosinofiacutelas
Nucleacuteolos y cilios
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Enjuague
El enjuague se realiza con agua corriente yo agua destilada pero siempre
hay que verificar que el pH del agua se encuentre entre 65 y 7
Hidratacioacuten
La hidratacioacuten antes del colorante de hematoxilina puede ser
bull Gradual usando alcohol en concentraciones decrecientes 80‐70‐50
bull Abrupta sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de
alcohol y al agua directamente
Tincioacuten del nuacutecleo
Existen dos meacutetodos para tentildeir el nuacutecleo
bull Meacutetodo progresivo
Se tintildee el nuacutecleo con la intensidad de color deseada
bull Meacutetodo regresivo
Se sobre‐tintildee con hematoxilina no acidificada luego se
remueve el exceso de tincioacuten con aacutecido clorhiacutedrico diluido
bull Despueacutes de la hematoxilina las laminillas se lavan en agua
Tincioacuten del citoplasma
Orange G 6 es una tincioacuten monocromaacutetica y EA 50 es una tincioacuten
policroma compuesta
Colorante Elementos celulares
Hematoxilina de Harris Afinidad por la cromatina
Tintildee el nuacutecleo
OG 6 Tintildee la queratina
Penetra raacutepidamente al citoplasma
EA 50 Tintildee el citoplasma de las ceacutelulas
escamosas cianofiacutelas y eosinofiacutelas
Nucleacuteolos y cilios
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Tincioacuten del nuacutecleo
Existen dos meacutetodos para tentildeir el nuacutecleo
bull Meacutetodo progresivo
Se tintildee el nuacutecleo con la intensidad de color deseada
bull Meacutetodo regresivo
Se sobre‐tintildee con hematoxilina no acidificada luego se
remueve el exceso de tincioacuten con aacutecido clorhiacutedrico diluido
bull Despueacutes de la hematoxilina las laminillas se lavan en agua
Tincioacuten del citoplasma
Orange G 6 es una tincioacuten monocromaacutetica y EA 50 es una tincioacuten
policroma compuesta
Colorante Elementos celulares
Hematoxilina de Harris Afinidad por la cromatina
Tintildee el nuacutecleo
OG 6 Tintildee la queratina
Penetra raacutepidamente al citoplasma
EA 50 Tintildee el citoplasma de las ceacutelulas
escamosas cianofiacutelas y eosinofiacutelas
Nucleacuteolos y cilios
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Colorante Elementos celulares
Hematoxilina de Harris Afinidad por la cromatina
Tintildee el nuacutecleo
OG 6 Tintildee la queratina
Penetra raacutepidamente al citoplasma
EA 50 Tintildee el citoplasma de las ceacutelulas
escamosas cianofiacutelas y eosinofiacutelas
Nucleacuteolos y cilios
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
AclaramientoEs el paso final de la tincioacuten y produce transparencia celular
Se suele usar Xilol como solucioacuten aclaradora
Montaje
Objetivo del montaje
Es la unioacuten del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el
aacuterea bajo el cubreobjetos para
minus Obtener una muestra cubierta
minus Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del
material celular
minus Sellar evitando asiacute la oxidacioacuten de la muestra
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Caracteriacutesticas del medio de montaje
1 Debe ser soluble en el agente aclarante
2 Debe tener un iacutendice de refraccioacuten que coincida
con la muestra y el cubreobjetos logrando
una imagen lo maacutes transparente posible
3 Debe tener un pH neutro
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Preparacioacuten de soluciones
Fundamentos
Las soluciones son mezclas homogeacuteneas de dos o mas
sustancias
Una solucioacuten es una mezcla de un soluto en un disolvente
entendieacutendose por soluto la sustancia que esta en menor
proporcioacuten y disolvente la sustancia que esta en mayor
proporcioacuten
Existen soluciones solidas liquidas y gaseosas
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Tipos de soluciones
Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de
solucioacuten es necesario conocer la concentracioacuten de nuestra solucioacuten
las cantidades relativas de soluto y disolvente
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Una solucioacuten saturada permite definir con precisioacuten la solubilidad de un
soacutelido en un liquido
La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un liquido Puede expresarse en
bull moles por litro
bull Gramos por litro
bull Porcentaje de solutodisolvente
Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energiacutea porque
las partiacuteculas del soluto y del disolvente se atraen
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Soluciones de concentracioacuten conocida
Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la
cantidad del disolvente o de solucioacuten
Este tipo de soluciones se utilizan en anaacutelisis cuantitativo y dentro de estas
se encuentran
Solucioacuten porcentual
Solucioacuten formal F
Solucioacuten molar M
Solucioacuten normal N
Partes por milloacuten ppm
Fraccioacuten mol X
Solucioacuten titulo T
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
SOLUCIOacuteN PORCENTUAL
El porcentaje normalmente se utiliza para especificar
la concentracioacuten de la solucioacuten preparada al diluir un
liquido puro en otro liquido
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Fundamento
En la teacutecnica de tincioacuten
de Papanicolaou se
utilizan soluciones puras
saturadas y porcentuales
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Preparacioacuten de colorantes
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Hematoxilina de Harris
bull Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris
minus Hematoxilina cristales obscuros 5 g
minus Etanol 100 CH3CH2OH 50 ml
minus Sulfato de amonio y aluminio 100 g
minus Agua destilada 1000 ml
minus Oxido de mercurio (HgO) 25 g
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Hematoxilina
El componente activo es la hemateiacutena (tiene cargas
negativas) que se obtiene de la oxidacioacuten (maduracioacuten)
Una vez que se da la maduracioacuten toma un color
rojo vinoso tonalidad que toman los nuacutecleos
Sulfato de potasio y aluminio
Mordiente Piedra alumbre Color aacutembar claro
Con esta sustancia se da color a la hematoxilina
Suministra cargas positivas que actuacutean como puentes
quiacutemicos para unirse a las cargas negativas de la
hemateiacutena y del aacutecido fosfoacuterico de las cadenas de
DNA nuclear
Graba el color en las ceacutelulas
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
HgO Oxido de mercurio (Rojo o amarillo)
Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIOacuteN
la hemateiacutena (Maduracioacuten)
LA HEMATEINA da la tonalidad a los nuacutecleos
CH3COOH glacial Acido aceacutetico glacial
Diferenciador
Estabiliza el colorante
Previene la oxidacioacuten
Incrementa la precisioacuten de la tincioacuten nuclear
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Orange G 6
Existen al menos dos foacutermulas para la tincioacuten Orange G una de las
cuales es OG 6 y la otra OG modificado
Se detallara a continuacioacuten la foacutermula OG 6
minus Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6
1048707 Cristales de Orange G 10 g
1048707 Agua destilada 100 ml
1048707 Etanol al 95 1000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 015 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Orange G Cristales
Colorante especifico para tentildeir ceacutelulas
queratinizadas
Penetra raacutepidamente al citoplasma
Tintildee el citoplasma del epitelio escamoso simple
maduro y queratinizado
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
bull Eosina Alcohol 50
Existen varias formas para preparar el colorante EA 50
minus Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50
1048707 Eosina amarillenta 10 g
1048707 Pardo Bismark amarillento 10 g
1048707 Verde luz SF amarillento 10 g
1048707 Agua destilada 300 ml
1048707 Etanol al 95 2000 ml
1048707 Acido fosfotuacutengstico 4 g
1048707 Carbonato de litio saturado 20 g
Se prepara partiendo de soluciones madre
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Graba el color en la ceacutelula
Eosina amarillenta
Colorante de fondo o contraste
En unioacuten con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma
Colorea el citoplasma de las ceacutelulas escamosas nucleacuteolos y
eritrocitos
Verde luz SF amarillento
Colorante diferencial
Da tono verde azul a los citoplasmas de
Ceacutelulas intermedias
Ceacutelulas de la capa profunda
Ceacutelulas columnares
Histiocitos
Leucocitos
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Acido fosfotuacutengstico Mordiente
Une el light green con las proteiacutenas de la ceacutelula
Graba el color en la ceacutelula
Vesuvina o Pardo Bismark amarillento
Reactivo de contraste
Determina los colores verde‐azul o rosa de los
citoplasmas
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Alcohol 96
Evita la contaminacioacuten con hongos
Agua destilada
Medio de transporte
Baacutesico para soluciones madre
Disolver reactivos
Como solucioacuten acuosa saturada en combinacioacuten
con el carbonato de litio
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
bull Solucioacuten amoniacal al 05
Preparar una solucioacuten al 5 de hidroacutexido de amonio agregando
5 ml de hidroacutexido de amonio y completar un volumen de 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Solucioacuten de aacutecido clorhiacutedrico al 05
Reactivos Acido clorhiacutedrico 1N Acido clorhiacutedrico 12N
(fumante)
HCL 60 ml 5 ml
Agua destilada Completar a 1000 ml Completar a 1000 ml
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Cuidados a los colorantes
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
1 Verificar que las soluciones esteacuten
rotuladas indicandoA Fecha de preparacioacuten
B Nombre de la solucioacuten
C Titulacioacuten
D Concentracioacuten
E Requisitos para almacenar
F Advertencias para su manejo
G Fecha de vencimiento
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU
Solucioacuten colorante utilizada en laboratorios de histopatologiacutea
para tincioacuten celular seguacuten procedimiento de Papanicolaou
OG-500 Envase con 500 ml Se complementa con la Hematoxilina de Harris
y con el EA-50
OG-1000 Envase con 1000 ml de Papanicolaou
C16H10N2O7S2Na2 PM 452 38
CAS 1936-15-8
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
2 Conservar los colorantes en
A Envases oscuros
B Bien tapados porque son sensibles a la luz
C Se oxidan a temperatura ambiente
D Almacenar las soluciones inflamables en un aacuterea aprobada anti‐fuego
E No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes
F Almacenar las soluciones de tincioacuten entre 15degC Y 25degC despueacutes de abrir
el frasco si es almacenado entre 15degC y 25degC es utilizable hasta la
fecha de caducidad indicada
oxidacioacuten Corrosioacuten seca reaccioacuten de un material con el medio
ambiente Reaccioacuten de un material con el oxigeno si este oxido es
estable se formara una capa en la superficie el material aumenta su peso
y volumen
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
3 El tren de tincioacuten se cambiara
A Cada 2000 laminillas tentildeidas
B Cada 6 u 8 semanas
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
4 Bateriacutea de tincioacuten
A Preparar una bateriacutea de tincioacuten exclusiva para las muestras de examen de
Papanicolaou
B Rotular las cubetas
C Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las
cubetas usando un embudo y papel filtro
D La bateriacutea de tincioacuten requiere estar bajo campana de extraccioacuten de
gases
E La bateriacutea de tincioacuten debe encontrarse en una sala con buena
ventilacioacuten
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
5 Si el laboratorio procesa muestras no
ginecoloacutegicas estaacutes deben tentildeirse en
una bateriacutea diferente pera prevenir el
riesgo de contaminacioacuten cruzada
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
6 Se deberaacute realizar dos tipos de
mantenimiento en los colorantes
A Mantenimiento general
minus Filtrar los colorantes cada 8 diacuteas para remover cualquier material celular
que se haya desprendido usando papel filtro
minus Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que esteacuten
libres de sedimentos
minus Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la bateriacutea de tincioacuten
minus Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el
mayor tiempo posible cuando esteacuten en uso para evitar evaporacioacuten
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
B Mantenimiento especiacutefico
minus En la hematoxilina se debe retirar la capa de aspecto metaacutelico
que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracioacuten
minus El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana
minus El HCl al 05 debe ser remplazado diariamente
minus El etanol es altamente higroscoacutepico Es indispensable mantenerlo
bien tapado
higroscoacutepico Todos los compuestos que atraen agua estos
compuestos son utilizados como desecantes
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
minus Los alcoholes para re‐ hidratar y deshidratar usados antes de la tincioacuten del
citoplasma deberiacutean remplazarse semanalmente
minus Descartar los alcoholes de enjuague si estaacuten muy tentildeidos
minus Los alcoholes usados despueacutes de la tincioacuten del citoplasma se cambian
generalmente de un modo rotatorio es decir se descarta el alcohol que sigue
a la tincioacuten y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicioacuten
minus Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el
agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la
contaminacioacuten acuosa del xilol
minus El xilol debe cambiarse si aparece tentildeido con colorantes del citoplasma
Si tiene agua la solucioacuten aparece como lechosa y se puede alterar el
aclaramiento
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Resultados de tincioacuten
Componente Coloracioacuten Funcioacuten
Nuacutecleo Coloracioacuten perfecta Colorante nuclear
Cromatina Color azul o puacuterpura Dar coloracioacuten perfecta a
todos los componentes del
nuacutecleo
Membrana nuclear Color azul o puacuterpura
Nucleacuteolo Color rojo rosado o
naranja
Citoplasma Color eosinoacutefilo yo cianoacutefilo
Color amarillo o naranja si
hay presencia de queratina
Coloracioacuten homogeacutenea
estable y transparente
Colorante citoplasmaacutetico
Permitir la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Observaciones
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Cada inmersioacuten de la canastilla debe durar 1 o 2
segundos
Se efectuacutea suavemente sin llegar a tocar la base de
la cubeta para que no se desprendan las ceacutelulas y
para evitar el quebrar la cubeta o alguna laminilla
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Algunos meacutetodos de tincioacuten proponen el uso de una solucioacuten
amoniacal al 5 tambieacuten se puede utilizar una solucioacuten
saturada de carbonato de litio o agua caliente si el agua es
alta en su concentracioacuten mineral se puede utilizar a
temperatura ambiente
Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH aacutecido
obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento gracias
a la descolorizacioacuten controlada para llegar a una tincioacuten
nuclear que sea oacuteptima
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Para madurar la hematoxilina se puede utilizar
como agente oxidante el oxido de
mercurio o el yodatato de sodio en algunos
manuales indican la utilizacioacuten de 1 ml de
aacutecido aceacutetico por cada 200 ml de colorante
para intensificar la tincioacuten nuclear
24 hrs antes de usar (para la conservacioacuten
del colorante)
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede
agregar 05 g de aacutecido fosfotuacutengstico en una
solucioacuten de 5ml
24 hrs antes de usar
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Si el xilol se nota blanco pero sin
burbujas se pude agregar unas gotas de
alcohol absoluto para que disminuir lo
turbio del xilol
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Para retirar todo el fijador se puede
agregar unas gotas de la solucioacuten de HCL
5 al primer alcohol antes de la
hematoxilina
1ml de acido aceacutetico al ultimo alcohol
antes de la hematoxilina para un
lavado de fondo celular mucoliacutetico y
hemoliacutetico similar al vial de CBL
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Se pueden utilizar concentrados de EA 36
(eosina original en la tincioacuten de
Papanicolaou porque la diferenciacioacuten
entre las ceacutelulas basofilas o acidofilas es
mejor) EA 50 o EA 65
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Eliminacioacuten del fijador
Para iniciar el proceso de tincioacuten nuclear es
necesario eliminar el fijador de las
laminillas que usualmente es en base a
polietilenglicol
Para ello se realiza un lavado con agua
destilada o sumergiendo las laacuteminas en etanol
al 95 seguido por un lavado con agua
destilada
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Evitar problemas con los alcoholes o colorantes
Los carros de tincioacuten deben ser completamente
escurridos entre una y otra cubeta para evitar la
dilucioacuten de los colorantes o la alteracioacuten de los
alcoholes sin llegar al secado del frotis lo que
produciriacutea una coloracioacuten irregular
Se recomienda que el carro de tincioacuten repose por
unos segundos en papel absorbente despueacutes
que ha sido retirado de una cubeta
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor
tiempo posible durante el
proceso de tincioacuten
Las laacuteminas tentildeidas se deben mantener en una
cubeta con xilol hasta el momento del montaje
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
iquestCOMO ES MEJOR
UNA VEZ HECHO EL MONTAJE COLOCAR LAS LAMINILLAS
EN EL HORNO DE SACADO O DEJAR SECAR
Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
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Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la
superficie de trabajo una vez terminada la tincioacuten
de un conjunto de laacuteminas
Lavarse cuidadosamente las manos
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![Tincion Gram y Morfologia Bacteriana LESP [PQCMAOG]](https://static.fdocuments.ec/doc/165x107/5571f19949795947648b641d/tincion-gram-y-morfologia-bacteriana-lesp-pqcmaog.jpg)
