TEMA 14. Prácticas (resumidas)

2º Bachillerato - BiologíaBonifacio San MillánIES Muriedas

RECONOCIMIENTO DE AZÚCARES REDUCTORES

FUNDAMENTO

PROCEDIMIENTO: Añadir a diluciones, reactivos de Fehling A y B Calentar baño María

Reacción de Fehling “ojo, simplificada”

+ rojo ladrillo (cambio de color) - azul verdoso (no cambio de color)

R-CHO + 2CuO R-COOH + Cu2O

(Cu 2+) al reducirse pasa a (Cu +)

IDENTIFICACION DEL ALMIDÓN CON LUGOL

FUNDAMENTO: proceso físico: El efecto óptico del yodo cuando se introduce o

fija en las hélices de la amilosa y la amilopectina, proceso que solo ocurre en frío.

PROCEDIMIENTO Pipeteamos 3ml .

(+) : Contiene almidón, virará a color violeta o azul oscuro

( - ): No contiene almidón no cambiará de color IMPORTANTE: COMBINANDO LAS DOS PRÁCTICAS ANTERIORES PODEMOS

IDENTIFICAR DIFERENTES MUESTRAS DE: EJ. GLUCOSA (MONOS. REDUCTOR), SACAROSA (DISACÁRIDO NO REDUCTOR), ALMIDÓN (TODOS

LOS POLISACÁRIDOS SON NO REDUCTORES).

DIGESTION DE ALMIDÓN CON AMILASA SALIVAL (PTIALINA)

FUNDAMENTO: Hidrólisis enzimática ALMIDÓN --- enzimas desramificadores +

amilasa ----> MAL TOSA ---- maltasa ----> GLUCOSA

PROCEDIMIENTO: Un poco de almidón en un tubo de ensayo. Añadimos un poco de saliva (contiene amilasa) Para agilizar el proceso, calentamos a menos de37ºC Dejamos reposar el tubo, agitándolo de vez en cuando.

5´ Reacción de Fehling A y 1 ml de Fehling B.

IMPORTANTE: EL REACTIVO FEHLING NOS PERMITE COMPROBAR QUE SE HA PRODUCIDO LA HIDRÓLISIS, YA QUE EL ALMIDON NO PRESENTA PODER REDUCTOR, PERO UNA VEZ SE HA PRODUCIDO LA HIDRÓLISIS, TENDREMOS GLUCOSAS LIBRES QUE, COMO TODOS LOS MONOSACÁRIDOS, SI PRESENTAN PODER REDUCTOR. EL COLOR SERÁ, EN CONSECUENCIA, ROJO LADRIOLLO (REACCIÓN POSITIVA).

OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS

(Células vegetales)

FUNDAMENTO: Preparación microscópica con colorante de

contraste (azul de metileno o verde de metilo) que tiñen fuertemente el núcleo y las paredes celulares.

PROCEDIMIENTO: Membrana de hojas interna de la cebolla+ porta+

agua Escurrir el agua + verde de metilo acético o

azul de metilenos, 5´. Lavar con el cuentagotas Cubreobjetos Observación al microscopio (diferentes aumentos)

Citoplasma

Membrana

Núcleo

OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS(Células animales) FUNDAMENTO:

Preparación microscópica con colorante de contraste (azul de metileno o verde de metilo) que tiñen fuertemente el núcleo con menos color el citoplasma (granuloso).

PROCEDIMIENTO: Raspado del interior del carrillo+ porta (extensión) Calentar + verde de metilo acético o azul de

metilenos, 3´. Lavar con el cuentagotas Cubreobjetos Observación al microscopio (diferentes aumentos)

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA: la catalasa

FUNDAMENTO: factores que afectan a la actividad enzimática

catalasa 2 H2O2 2 H2O + O2

PROCEDIMIENTO: 6 cubos de patata (contiene catalasa) de 0,5 cm en tubos. Añade al tubo 1: 2 ml de agua. Someter tubos (2,3,4,5,6) a calor, frio, vinagre, HCl y

NaOH respectivamente. 5´. Añade 2 ml de agua oxigenada a los 6 tubos Completa tabla: Columnas:

1ª.Tubo 2ª.Tratamiento 3ª.Resultado 4ª. Explicación (¿desnaturalización?)

burbujas reacción +

ESTUDIO DE LA MITOSIS EN CÉLULAS

DE LA RAÍZ DE CEBOLLA

FUNDAMENTO: Observación de meristemos en mitosis. La orceína A

reblandece las membranas celulares y la B tiñe los cromosomas de morado.

PROCEDIMIENTO: Raicillas de 2-3 mm (sin cofia) Colocar en vidrio de reloj +2-3 ml de orceína A. Calentar suavemente hasta emisión de vapores tenues. Colocarla sobre un portaobjetos + una gota de orceína B, 1

´. Colocar el cubreobjetos (raíz bien extendida). Secar con unas tiras de papel de filtro, 5 o 6. Presionar en

vertical. Observar al microscopio:

(Interfase, Profase, Metafase, Anafase, Telofase)

EL CARIOTIPO HUMANO

FUNDAMENTO: Elaboración de cariogramas.

Cromosomas metafásicos teñidos Colchicina :Para detener la mitosis en metafase Tripsina: hidroliza algunas proteínas Colorante Giemsa: Para teñir los cromosomas.

Distinguir el cariotipo normal de cariotipos alterados. Clasificación: 7 grupos de la A a la G atendiendo

a su longitud relativa y a la posición del centrómero.

PROCEDIMIENTO: Los cromosomas autosómicos se ordenan en orden

decreciente de tamaño, excepto el cromosoma 21 que ahora se sabe que es más pequeño que el 22.

EL CARIOTIPO HUMANO

PROCEDIMIENTO: El brazo largo hacia abajo. Contar los cromosomas y apuntar el número. Autosomas en orden decreciente de tamaños, que

los cromosomas sexuales deber ir por separado. Buscar en orden de tamaño y acrocéntricos. Buscar metacéntricos, submetacéntricos más

grandes. Buscar los 14 cromosomas medianos

submetacéntricos. Buscar alteraciones (más o menos de 46 ). Buscar alteraciones en homólogos (delecciones,

traslocaciones, ...).

EL CARIOTIPO HUMANO

CULTIVO Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

FUNDAMENTO Y PROCEDIMIENTOS: Esterilización y técnicas asépticas 2º Medio de cultivo (genérico o específico): líquido o sólido (agar-

agar) 3º Esterilización y conservación del medio: autoclave y nevera 4ºC

(sin luz) 4º Toma de muestras (ej. bastoncillo) y siembra (asa de siembra) 5º Incubación (estufa), durante periodos de tiempo determinados 6º Aislamiento (toma de muestra monoclonal, de una colonia

únicamente) 7º Resiembra en medio genérico o selectivo (ej. Lactosa, 45 ºC

para E. coli) 8º Pruebas bioquímicas diferenciales (ej. catalasa, indol, …) 9º Tinción (ej. tinción de Gram) 10º. Observación con microscopio (mínimo 1000x) 11º Estudio de sustancias antibacterianas (Halo de inhibición)

CULTIVO Y AISLAMIENTO DE

MICROORGANISMOS

Autoclave

Medio de cultivo (líquido y sólido)

siembra (asa de siembra)

Incubación (estufa)

Tinción (ej. tinción de Gram) y observación

Halo de inhibición

+-

microscopio óptico

TINCIÓN DE GRAM

FUNDAMENTO Colorantes cristal violeta y safranina

las bacterias Gram + se tiñen de morado (fijan el cristal violeta que es el colorante fundamental)

las Gram – se tiñen de rosa con safranina, colorante de contraste (no fijan el cristal violeta).

PROCEDIMIENTO Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor Añadir azul violeta (cristal violeta) ,1´

Todas las células gram + y - se tiñen de color azul-purpura. Agregar lugol (intensifica el cristal violeta)

Lavar con acetona y/o alcohol , elimina el c. violeta de las Gram-

Tinción de contraste agregando safranina. 1-2´ Observar al microscopio óptico a 100x con aceite de inmersión

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