Tecnicas coproparasitologicas
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Anexo 4: Técnicas coproparasitoscópicas para la detección e identificación de parásitos
gastrointestinales
Técnica de Flotación-Centrifugación usando solución sobresaturada de azúcar
Preparación de Solución de flotación: solución sobresaturada de azúcar
Combinar 355 mL de agua y 454 de azúcar
Disolver el azúcar en el agua, se puede usar calor indirecto
Después de disolver el azúcar, agregar 10 mL de formol al 40%
Procedimiento:
Mezclar 3 gr. de heces en 42mL de agua, agitar hasta que las heces estén en
suspensión.
Verter la mezcla a través de un capa de gasa colocada en un colador, dentro de dos
tubos de 15 mL de capacidad.
Enjuagar la gasa y el colador y verter el líquido en los tubos.
Centrifugar a 1000 o 1200 rpm por 5 min.
Decantar el sobrenadante y llenar con solución de flotación la mitad del tubo,
remover el sedimento y homogenizar con la solución de flotación usando un
aplicador. Luego agregar más solución de flotación hasta que el tubo este lleno y
forme un menisco.
Colocar una laminilla sobre el menisco e inmediatamente centrifugar a 1000 o 1200
rpm por 3 a 5 min.
Después de centrifugar retirar cuidadosamente la laminilla y colocarla en una
lámina portaobjeto conteniendo una gota de lugol.
Observar en el microscopio a 10x y confirmar a 40x.
Técnica de Baermann modificado en copa
Colocar un colador sobre una copa y llenar con agua la mitad de la copa.
Colocar 5 a 10 gramos de heces sobre una capa de gasa.
Colocar la gasa con la muestra sobre el colador.
Llenar la copa con agua hasta cubrir la muestra. Dejar en reposo 24 horas.
Después de las 24 horas:
Si es para la detección de huevos se recoge, con un gotero, 1 a 2 mL de líquido del
fondo de la copa y se coloca en una placa Petri. Y se observa al microscopio a 4 ó
10x y se confirma a 40x.
Si es para la identificación de larvas se recoge de 1 a 2 mL de líquido, hasta
completar todo el líquido, y se coloca en una placa Petri, luego se observa al
microscopio a 4 0 10x y se confirma a 40x.
Coprocultivo
Disgregar las heces usando un aplicador, para un buen cultivo las heces deben ser
húmedas pero no acuosas, las heces muy secas deben mojarse con agua; si son
acuosas deben añadirse heces estériles, turba o carbón animal hasta obtener la
consistencia correcta.
Esta mezcla se coloca en placas de vidrio y se mantienen en una estufa regulada a
27°C, donde permanecen durante 7 o 10 días, momento en el que las larvas han
alcanzado el estado infectivo. Si no se dispone de una estufa adecuada, puede
dejarse el cultivo a la temperatura del laboratorio durante 10 a 20 días.
Se remueve el cultivo diariamente para favorecer el aireamiento de las capas
profundas y evitar el desarrollo de hongos.
Después del tiempo establecido se recuperan las larvas a través de la técnica de
Baermann modificado en copa.
Esporulación de ooquistes
Se prepara un cultivo sencillo emulsionando una pequeña cantidad de heces en una
solución de dicromato de potasio al 2%.
Se deja que los ooquistes esporulen a temperatura ambiente por 4 a 7 días.
Luego se procede a realizar la técnica de flotación - centrifugación para recuperar
los ooquistes.
Técnica cuantitativa de Kato Katz
Preparación de la solución de glicerina:
Glicerina pura 30 mL
Agua destilada 30 mL
Verde de malaquita al 3% 1 mL
(Solución acuosa)
Mezclar bien en frasco de boca ancha con tapadera e introducir los cuadrados de celofán
para sumergir en esta solución 24 horas o más antes de usar. (El verde de malaquita no
es indispensable en caso que no se cuente con él).
Procedimiento:
Extender el papel periódico sobre la mesa de trabajo.
Identificar el porta-objetos con la muestra a examinar. Colocar sobre éste el
templete de plástico (Un templete de 9 mm X 1 mm entrega 50 mg de heces. El
factor de multiplicación para determinar huevos por gramo será de 20. Un templete
de 6 mm de diámetro X 1.5 mm de grosor entrega 41.7 mg de heces. El factor de
multiplicación será de 24).
Con una espátula de plástico o de madera tomar una cantidad de heces y colocarla
sobre una superficie plana (tapadera del frasco, papel periódico).
Colocar sobre estas heces un cuadrado de tela metálica o nylon que hace las veces
de colador.
Raspar la superficie de la tela con la espátula plástica o palo de chupete tomando
suficientes heces coladas para llenar el agujero del templete. Descartar la espátula si
es de madera.
Remover el templete, descartar éste y la tela en desinfectante y cubrir el redondel
de heces con un cuadrado de celofán empapado en glicerina, con una espátula
plástica o de madera extender la muestra hasta homogenizar en toda el área del
celofán.
Colocar sobre una superficie protegida de insectos (mosca, cucaracha) y agua.
Esperar que aclare. Esto dependerá de la temperatura y humedad del ambiente,
entre 30 min. y 45 min. Si se desea interrumpir el aclaramiento, invertir la lámina
sobre una superficie plana lo necesario hasta continuar el proceso.
Observar al microscopio y realizar el recuento por tipo de huevo de nematodo, en
toda el área del celofán, a 10x y confirmar a 40x.
Multiplicar el número de huevos encontrados por el factor (en este caso 24), para
obtener el número de huevos por gramo de heces (nhpg).