Taller Sobre Aislamiento de Microorganismos Mia
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TALLER SOBRE AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS 1. Explica los métodos que se utilizan para el aislamiento de microorganismos. Métodos para aislar bacterias Las bacterias son esenciales para el apropiado funcionamiento de los ecosistemas. Descomponen los organismos muertos y reciclan materia orgánica transformándola en nutrientes minerales. Aislar bacterias en un cultivo puro ayuda a los investigadores a estudiar y ganar entendimiento sobre las propiedades fisiológicas de ciertos organismos que no es posible recabar en una base de estudio más amplia. Las diferentes bacterias prefieren diferentes condiciones físicas y químicas. Algunas tienen un límite de tolerancia. Por esta razón, se utilizan varios métodos para aislar y estudiar microbios. Placa de diseminación El método de aislamiento por diseminación en placa es un procedimiento en el cual el investigador disemina una mezcla diluida de células sobre una superficie de agar, utiliza una varilla doblada de vidrio esterilizada, de tal forma que cada célula crece en su propia colonia separada. Los cultivos son incubados por un periodo de tiempo específico. En el medio sólido aparece un crecimiento macroscópicamente visible o un grupo de microorganismos, cada colonia representando un cultivo puro. Luego de que las colonias han crecido, son contadas y se calcula el número de bacterias en la muestra original. Placa vertida El procedimiento de placa vertida se utiliza extensivamente con bacterias y hongos y también puede producir colonias aisladas. Se prepara una muestra bacteriológica diluida. El investigadorintroduce una pequeña cantidad dentro de un plato de petri vacío. Se vierte agar derretido dentro del plato de petri que contiene la muestra. El agar y la muestra se mezclan meticulosamente al cubrir el plato e inclinarlo y revolverlo suavemente. Se le da tiempo para que el agar se vuelva gel mientras se asienta sobre la superficie plana. Los platos recubiertos se invierten y se dejan incubar por un periodo de tiempo específico. Las colonias son luego observadas y contadas, y se registra l a información. Placa estriada El método de estrías en placa es el procedimiento clásico para aislar cepas de bacterias. El investigador esteriliza un lazo de alambre con una llama. Luego de enfriarse, el lazo de alambre es colocado en una placa de agar estéril. El investigador sumerge el lazo dentro de la muestra, recogiendo miles de bacterias, y a continuación realiza estrías con el lazo en la superficie de agar. Luego de esterilizar nuevamente el lazo y dejar que se enfríe, el investigador arrastra el lazo a través del recorrido anterior, levantando un grupo de bacterias
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TALLER SOBRE AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
1. Explica los métodos que se utilizan para el aislamiento de microorganismos.
Métodos para aislar bacterias
Las bacterias son esenciales para el apropiado funcionamiento de los ecosistemas.
Descomponen los organismos muertos y reciclan materia orgánica transformándola en
nutrientes minerales. Aislar bacterias en un cultivo puro ayuda a los investigadores a
estudiar y ganar entendimiento sobre las propiedades fisiológicas de ciertos
organismos que no es posible recabar en una base de estudio más amplia. Las
diferentes bacterias prefieren diferentes condiciones físicas y químicas. Algunas tienen
un límite de tolerancia. Por esta razón, se utilizan varios métodos para aislar y estudiar
microbios.
Placa de diseminación
El método de aislamiento por diseminación en placa es un procedimiento en el
cual el investigador disemina una mezcla diluida de células sobre una
superficie de agar, utiliza una varilla doblada de vidrio esterilizada, de tal forma
que cada célula crece en su propia colonia separada. Los cultivos son
incubados por un periodo de tiempo específico. En el medio sólido aparece un
crecimiento macroscópicamente visible o un grupo de microorganismos, cada
colonia representando un cultivo puro. Luego de que las colonias han crecido,
son contadas y se calcula el número de bacterias en la muestra original.
Placa vertida
El procedimiento de placa vertida se utiliza extensivamente con bacterias y
hongos y también puede producir colonias aisladas. Se prepara una muestra
bacteriológica diluida. El investigadorintroduce una pequeña cantidad dentro de
un plato de petri vacío. Se vierte agar derretido dentro del plato de petri que
contiene la muestra. El agar y la muestra se mezclan meticulosamente al cubrir
el plato e inclinarlo y revolverlo suavemente. Se le da tiempo para que el agar
se vuelva gel mientras se asienta sobre la superficie plana. Los platos
recubiertos se invierten y se dejan incubar por un periodo de tiempo específico.
Las colonias son luego observadas y contadas, y se registra la información.
Placa estriada
El método de estrías en placa es el procedimiento clásico para aislar cepas de
bacterias. El investigador esteriliza un lazo de alambre con una llama. Luego de
enfriarse, el lazo de alambre es colocado en una placa de agar estéril. El
investigador sumerge el lazo dentro de la muestra, recogiendo miles de
bacterias, y a continuación realiza estrías con el lazo en la superficie de agar.
Luego de esterilizar nuevamente el lazo y dejar que se enfríe, el investigador arrastra el lazo a través del recorrido anterior, levantando un grupo de bacterias
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y realiza otra estría en un área diferente del agar. Este procedimiento se repite
varias veces. Los platos cerrados son incubados por un periodo de tiempo
específico, luego del cual se observa el crecimiento bacteriano.
Placa de exposición
La exposición de un medio estéril al ambiente demuestra la técnica aséptica. El
investigador etiqueta dos placas de agar de nutrientes para una comparación y
observación posterior y se las deja descubiertas. Se permite que una placa de
agar permanezca como está, exponiéndola al ambiente por un corto periodo de
tiempo. La segunda placa es expuesta a una fuente de posibles contaminantes,
tales como un estornudo, tos o dedos colocados en contacto directo con la
superficie de agar. Las placas se cubren, invierten e incuban a temperatura
ambiente por un periodo de tiempo antes de la observación.
2. Qué tipo de microorganismos se pueden aislar en los siguientes medios de
cultivo.
a) Agar cetrimida
b) Agar Eosina azul de metileno (EMB)
c) Agar Mc Conkey
d) Agar Lipman libre de nitrógeno
e) Agar sal manitol
f) Agar Sabourau-Rosa de Bengala-Estreptomicinag) Agar Vogel Johnson
MEDIO DE CULTIVO MICROORGANISMO
Agar cetrimida Medio utilizado para el aislamiento
selectivo de Pseudomonas aeruginosa y
de otras especies del género.
Agar Eosina azul de metileno (EMB) Medio utilizado para el aislamiento
selectivo de bacilos Gram negativos de
rápido desarrollo y escasas exigenciasnutricionales. Permite el desarrollo de
todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae.
Enterococcus spp.
Acinetobacter spp
Salmonella
Shigella
Candida
Escherichia coli
Citrobacter spp Agar Mc Conkey Este medio se utiliza para el aislamiento
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de bacilos Gram negativos de fácil
desarrollo, aerobios y anaerobios
facultativos. Permite diferenciar bacterias
que utilizan o no, lactosa en muestras
clínicas, de agua y alimentos. Todas las
especies de la familia Enterobacteriaceaedesarrollan en el mismo.
Agar Lipman libre de nitrógeno
Agar sal manitol Este medio es utilizado para elaislamiento y diferenciación deestafilococos.Es recomendado para el aislamiento deestafilococos patogénicos a partir demuestras clínicas, alimentos, productoscosméticos y otros materiales deimportancia sanitaria.
También, este medio puede utilizarsepara el cultivo de especies halófilas de
Vibrio, si no se dispone de medios
apropiados (TCBS Medio, Medio Marino,
etc.), aunque algunas especies pueden
no desarrollar.
Agar Sabourau – Rosa de bengala –
Estreptomicina
Para aislamiento y recuento de levaduras
y mohos a partir de diversas muestras.
Agar Vogel Johnson Medio utilizado para la rápida detección
de estafilococos coagulasa positivo
fermentadores de manitol, a partir dealimentos y otros materiales de
importancia sanitaria y clínica.
3. De cada uno de los medios anteriores, indica cuál es el componente que lo hace
selectivo y a que tipo de microorganismos inhibe.
MEDIO DE CULTIVO COMPONENTES MICROORGANISMOS QUE
INHIBE
Agar cetrimida La cetrimida es un detergente
catiónico (compuesto de amonio
cuaternario) que actúa como
agente inhibidor selectivo, libera
el nitrógeno y el fósforo de las
células de casi toda la flora
acompañante, aunque inhibe
también algunas especies de
Pseudomonas.
El cloruro de magnesio y el sulfato
de potasio promueven la
formación de piocianina,
pioverdina, piomelaninay
fluorescencia de P. aeruginosa.
Escherichia coli
Staphylococcus aureus
Stenotrophomonas
maltophilia
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La peptona de gelatina aporta los
nutrientes para el desarrollo
microbiano.
El agar es el agente solidificante
Agar Eosina azul
de metileno (EMB)
Contiene colorantes de azul de
metileno y eosina Y, que inhibenlas bacterias gram-positivas en
cierto grado. . Los colorantes
también actúan como indicadores
diferenciales en respuesta a la
fermentación de la lactosa o la
sacarosa por parte de los
microorganismos.
La peptona es la fuente nutritiva
La lactosa es el hidrato de
carbono fermentable
El agar es el agente solidificante
bacterias gram-positivas como
los estreptococos fecales,
estafilococos
levaduras,
O bien favorecer su
crecimiento con formación de
colonias puntiformes.
Agar Mc Conkey las peptonas, aportan los
nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano
la lactosa es el hidrato de carbono
fermentable
la mezcla de sales biliares y el
cristal violeta son los agentes
selectivos que inhiben el
desarrollo de gran parte de la
flora Gram positiva,
Por fermentación de la lactosa,disminuye el pH alrededor de la
colonia. Esto produce un viraje del
color del indicador de pH (rojo
neutro), la absorción en las
colonias, y la precipitación de las
sales biliares.
Los microorganismos no
fermentadores de lactosa
producen colonias incoloras.
La diferenciación de los
microorganismos entéricos selogra mediante la combinación de
lactosa y el indicador de pH rojo
neutro
Proteus
Enterococcus faecalis
Staphylococcus aureus
Agar Lipman libre
de nitrógeno
Agar sal manitol El extracto de carne y la
pluripeptona, constituyen la
fuente de carbono, nitrógeno,
vitaminas y minerales que
promueven el desarrollo
microbiano.
el manitol es el hidrato de
Escherichia coli
Klebsiella pnemoniae
Proteus mirabili
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carbono fermentable
el cloruro de sodio (que se
encuentra en alta concentración)
es el agente selectivo que inhibe
el desarrollo de la flora
acompañante, y el rojo fenol es elindicador de pH.
Las bacterias que crecen en un
medio con alta concentración de
sal y fermentan el manitol,
producen ácidos, con lo que se
modifica el pH del medio y vira el
indicador de pH del color rojo al
amarillo.
Los estafilococos crecen en altas
concentraciones de sal, y pueden
o no fermentar el manitol. Agar Sabourau –
Rosa de bengala –
Estreptomicina
La dextrosa es la fuente de
energía para el crecimiento de
microrganismos.
La peptona proporciona factores
de crecimiento y la fuente de
nitrógeno.
La presencia de rosa de bengala
en la base, suprime el crecimiento
de bacterias y restringe el tamaño
y la altura de las colonias de
mohos de crecimiento rápido.Esta restricción ayuda en el
aislamiento de mohos de
crecimiento lento y pueden crecer
las levaduras. Con la adición del
rosa de bengala se facilita el
recuento de mohos y levaduras.
El cloranfenicol inhibe el
crecimiento de bacterias
presentes en el medio ambiente y
alimentos.
Escherichia coli
Enterococcus faecalis
Agar VogelJohnson
La tripteína y el extracto delevadura, aportan los nutrientes
necesarios para el adecuado
desarrollo bacteriano.
El manitol es el hidrato de
carbono fermentable.
El telurito, el cloruro de litio y la
alta concentración de glicina, son
los agentes selectivos que inhiben
el desarrollo de la flora
acompañante
el rojo fenol es el indicador de pH.El indicador de pH permite la
Escherichia coli algunas especies de
microorganismos
Gram positivos y
negativos
proteus mirabilis
Enterococcus faecalis
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detección de la fermentación de
manitol, una característica
diferenciadora de la mayoría de
cepas de Staphylococcus aureus
Los estafilococos coagulasa
positivo, fermentan el manitol,produciendo la acidificación del
medio y el viraje del indicador de
pH al color amarillo, y también
reducen el telurito a teluro.
