T12 CLASIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS

T 12: CLASIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS. CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LAS FAMILIAS ENTEROBACTERIACEAS, MICROCOCACEAS, VIBRIONACEAS Y ESTREPTOCOCACEAS

ÍNDICE

1. INTRODUCCIÓN ................................................................................................................ 12. SISTEMA DE CLASIFICACIÓN UNIVERSAL PARA LAS BACTERIAS: BERGEY'S MANUAL OF DETERMINATIVE BACTERIOLOGY. ........................................................... 13. F. ENTEROBACTERIACEAS ............................................................................................ 3

3.1. ENTEROBACTERIAS. CLASIFICACIÓN ............................................................................................. 33.2. INTERÉS CLÍNICO DE LAS ENTEROBACTERIAS: ACCIÓN PATÓGENA .................................... 53.3. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUÍMICOS. DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO DE LA FAMILIA ENTEROBACTERIACEAS ............................................................................................................... 5

4. GÉNERO VIBRIO, FAMILIA VIBRIONACEAS. ............................................................ 84.1. CONCEPTO Y CARACTERES DEL GÉNERO VIBRIO ...................................................................... 84.2. CLASIFICACIÓN. ESPECIES MÁS IMPORTANTES DEL GÉNERO VIBRIO .................................. 84.3. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUÍMICOS. DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO DE VIBRIO ................................................................................................................................................................. 8

5. GÉNERO STAPHYLOCOCCUS. (F. MICROCOCCACEAS) .......................................... 95.1. CLASIFICACIÓN. ESPECIES MÁS IMPORTANTES DEL GÉNERO STAPHYLOCOCCUS ........... 95.2. ACCIÓN PATÓGENA E INTERÉS CLÍNICO ....................................................................................... 95.3. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUÍMICOS. DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO DE STAPHYLOCOCCUS ........................................................................................................................................ 10

5.3.1. Aislamiento: .................................................................................................................................... 105.3.2. Caracteres bioquímicos: .................................................................................................................. 105.3.3. Diagnóstico bacteriológico de Staphylococcus: .............................................................................. 10

6. GÉNERO STREPTOCOCCUS. (F. ESTREPTOCOCACEAS) ....................................... 116.1. CONCEPTO Y CARACTERES DEL GÉNERO STREPTOCOCCUS. ................................................ 116.2. CLASIFICACIÓN. ESPECIES MÁS IMPORTANTES DEL GÉNERO STREPTOCOCCUS ............ 116.3. ACCIÓN PATÓGENA E INTERÉS CLÍNICO ..................................................................................... 12

6.3.1. Streptococcus del grupo A (S. pyogenes). ....................................................................................... 126.3.2. Streptococcus del grupo D. ............................................................................................................. 126.3.3. Streptococcus del grupo N. ............................................................................................................. 12

6.4. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUÍMICOS. DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO DE STREPTOCOCCUS ........................................................................................................................................... 12

Ensayos Microbiológicos, 1º AC

T 12: CLASIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS.

1 / 12

1. INTRODUCCIÓN

En general, las formas de vida pertenecen a dos reinos

1. Protistas superiores, que corresponden a hongos, protozoos y casi todas las algas que poseen células eucariotas (núcleo verdadero) semejantes a plantas o animales y englobados en estos reinos.

: el animal y el vegetal. Sin embargo, existen formas muy sencillas de vida que no son fáciles de clasificar taxonómicamente. Éste sería el caso de los microorganismos. Algunos de ellos presentan caracteres del reino animal, como su capacidad de movimiento, producción de energía, etc, mientras que otros microorganismos se asocian a vegetales, porque presentan clorofila y obtienen energía a partir de la luz por fotosíntesis, tal y como lo hacen las plantas verdes. Precisamente, por estas similitudes y diferencias con ambos reinos, ha sido necesario adoptar decisiones arbitrarias que han permitido poder clasificar taxonómicamente los microorganismos. Todo comenzó con Darwin, en 1859, cuando consideró a los microorganismos como seres vivientes que no tenían porque pertenecer claramente a uno u otro grupo. Posteriormente Haeckel, en 1866, fue más allá, y habló de un tercer reino denominado protista que incluía seres vivos con características animales y vegetales y cuya organización era demasiado sencilla. A partir de aquí, y según el grado de complejidad de sus estructuras celulares, los protistas se dividieron en:

2. Los protistas inferiores, que incluyen las bacterias y el grupo de algas cianofíceas, que se caracterizan por ser células procariotas.

Actualmente las bacterias forman un reino propio denominado MONERAS. Durante el siglo XX se ha intentado crear un sistema de clasificación útil y universalmente aceptado para las bacterias. En la actualidad el sistema de clasificación más aceptado a nivel mundial es el Manual de Bergey (Bergey's Manual of Determinative Bacteriology), cuya primera edición apareció en 1923. Ha permitido clasificar todas las bacterias hasta el momento encontradas en un total de 19 secciones

1. Eubacterias gram negativas con pared celular: grupos del 1-16.

subtituladas con nombres comunes de tipo descriptivo y afines, tal y como se indicará a continuación. Aquí van a ser expuestas las más importantes, aunque para más detalle, sería conveniente la consulta de la octava edición de Bergey's Manual (1974). La novena edición del Manual (1994) para identificación (no para clasificación, que sería el Manual Bergey´s de bacteriología Sistemática) clasifica las bacterias en cuatro categorías:

2. Eubacterias gram positivas con pared celular: grupos del 17-29 3. Eubacterias carentes de pared celular: grupo 30 4. Arqueobacterias: grupos 31-35

2. SISTEMA DE CLASIFICACIÓN UNIVERSAL PARA LAS BACTERIAS:

BERGEY'S MANUAL OF DETERMINATIVE BACTERIOLOGY.

Las bacterias se encuentran clasificadas dentro del reino Moneras, donde se incluye un total de 19 secciones.

- Sección V: en dicha sección nos vamos a encontrar el Orden Espiroquetales, con la Familia Espiroquetaceae, que engloba un total de 5 géneros. Aquí sí se encuentran muchas especies patógenas para el hombre

Géneros: Spirochaeta, Treponema, Borrelia, Leptospira y Cristispira

Ejemplo de especies patógenas para el hombre: Treponema pallidum (sífilis), Borrelia recurrentes (fiebres recurrentes), Leptospira spp (leptospirosis).



2 / 12

- Sección VI: en dicha sección se encuentran las bacterias curvadas o espiraladas e incluye la Familia Espiracaceae con los géneros Spirilum y Campylobacter, alguna de cuyas especies se asocia a procesos patógenos del hombre. Además, dentro de dicha sección, existe un total de 4 géneros de afiliación dudosa, no asociados a procesos infecciosos en el hombre.

- Sección VII: en esta sección se incluyen bacilos y cocos aerobios Gram-. Se va a dividir en un total de 5 familias. Nos encontramos con bacterias con gran importancia clínica para el hombre, como el género Pseudomonas, el Género Brucella, agente etiológico de las brucelosis o fiebres de malta en el hombre, o algunas especies del Género Bordetella, como B. pertussis, responsable de la tosferina.

- Sección VIII: en esta sección se encuentran los bacilos Gram- anaerobios facultativos. Está formada por dos importantes familias:

• Familia Enterobacteriaceae • Familia Vibrionaceae

La Familia Enterobacteriaceas está formada por un total de 12 géneros: • Género Escherichia • Género Serratia • Género Salmonella • Género Proteus • Género Shigella • Género Yersinia • Género Enterobacter • Género Edwardsiella • Género Citrobacter • Género Hafnia • Género Klebsiella • Género Erwinia

Estos géneros presentan especies patógenas para el hombre, por ejemplo Salmonella typhi (fiebres tifoideas), Shigella disenteriae (disentería bacilar), Yersinia pestis (peste), etc. La familia Vibrionaceas se caracteriza por presentar forma de coma o bacilo incurvado. Incluye un total de 5 géneros, entre ellos el Género Vibrio, que presenta especies patógenas para el hombre, como por ejemplo la especie Vibrio cholerae, agente etiológico del cólera. Además, en la sección VIII se incluye aproximadamente un total de 9 géneros de afiliación hasta el momento dudosa. Dentro de estos géneros se encuentran especies con interés clínico para el hombre, como es el caso del Género Haemophylus con la especie H. influence, responsable de algunas meningitis en niños.

Sección X: en esta sección se encuentran cocos y cocobacilos Gram- y aerobios. Se incluye la Familia Neiseriaceae con los géneros Neisseria, Branhamella, Moraxella y Acinetobacter, con importancia clínica para el hombre en alguna de s especies como por ejemplo N. meningitidis (meningitis) y N. gonorroheae (gonorrea).

- Sección XIV: en esta sección se encuentran bacterias en forma de coco y Gram+. • Familia Micrococaceas, con 3 géneros: Género Micrococcus, Género

Staphylococcus y Género Planococcus. Alguno de éstos presenta gran interés clínico para el hombre, como S. aureus.

• Familia Streptococaceas, con un total de 5 géneros, siendo el Género Streptococcus el más importante de todos ellos debido al efecto patógeno para el hombre de alguna de sus especies, como por ejemplo, S. pyogenes.

- Sección XV: en esta sección se encuentran las bacterias bacilares y cocoideas formadoras de endosporas. Incluye la Familia Bacilaceas:

• Género Bacillus • Género Clostridium

De todos estos géneros los más importantes desde un punto de vista clínico son el Género Bacillus [p.e. B. antrhacis (antrax o carbunco)] y el Género Clostridium [p.e., Cl. tetani (tétanos)] y Cl. botulinum (botulismo), etc.



3 / 12

- Sección XVI: aquí se encuentran las bacterias bacilares Gram- no formadoras de esporas. Incluye la Familia Lactobacilaceas con el Género Lactobacillus, que tiene interés en la industria alimenticia y otros géneros como Listeria.

- Sección XVII: en esta sección se encuentran los actinomices y otros microorganismos relacionados. Se incluyen el Orden Actinomicetales, con un total de 7 familias, y otros microorganismos relacionados con esta sección, tales como el Género Corinebacterium. Orden Actinomicetales. Presenta las siguientes familias:

• Familia Actinomicetaceas, con un total de 5 géneros de los que el más importante desde un punto de vista clínico para el hombre es el Género Actinomyces.

• Familia Micobacteriaceas, con el Género Mycobacterium, que presenta gran importancia clínica por su efecto patógeno, p.ej.: Mycobacterium tuberculosis (tuberculosis) y Mycobacterium leprae (lepra).

Dentro de esta sección se encuentran además el Género Corynebacterium con alguna especie patógena para el hombre, p.e. Corynebacterium diptheriae.

- Sección XVIII: en esta sección se encuentran todas las Rickettsias, que son bacterias que presentan ciertas similitudes con virus. En esta sección nos encontramos 2 importantes órdenes: Orden Rickettsiales y Orden Clamidiales. A) Orden Rickettsiales. Incluye las siguientes familias:

• Familia Rickettsiaceas. Importante, desde un punto de vista clínico para el hombre, es el género Rickettsia.

B) Orden Clamidiales. Incluye una sola familia: • Familia Chlamidiaceas, que presenta un solo género, el Género Chlamydia, del que

se han descrito procesos patógenos para el hombre en alguna de sus especies.

- Sección XIX: esta sección la forman micoplasmas, que son bacterias que se diferencian del resto porque no

3. F. ENTEROBACTERIACEAS

presentan pared bacteriana. Aquí se encuentra la Familia Micoplasmaceae con el Género Mycoplasma, del que alguna de sus especies se ha asociado a ciertos procesos patógenos.

Las Enterobacterias corresponden a una gran familia de bacilos o cocobacilos Gram- aerobios y/o anaerobios facultativos, móviles (con flagelación peritrica) o inmóviles, que la última edición del Manual de Bergey's clasifica, junto a la Familia Vibrionaceas, dentro de la Sección VIII. Las Enterobacterias se caracterizan por ser fermentadoras de glucosa con o sin producción de gas (metabolismo oxidativo-fermentativo), suelen ser huéspedes habituales del tracto gastrointestinal del hombre y de los animales, produciendo en muchas ocasiones efectos patógenos de gravedad variable, en otros casos pueden actuar como saprófitos formando parte de la flora gastroinstestinal, aunque también como consecuencia de esto se puede encontrar en el agua y en el suelo. Van a ser bastante resistentes a los agentes externos; de ahí su amplia distribución. En muchos casos, las Enterobacterias se pueden comportar como potencialmente patógenas, es decir, cuando las condiciones del huésped se lo permiten (bajas defensas) originando numerosas infecciones de tipo oportunista

3.1. ENTEROBACTERIAS. CLASIFICACIÓN

. Esta familia interesa en gran medida para análisis microbiológicos porque, además de ser alterantes de determinados alimentos ó incluso patógenos, indican la CALIDAD MICROBIOLÓGICA DE LOS ALIMENTOS. Para ello se realiza un recuento de UFC/g.

De acuerdo con la última edición del Manual de Bergey's, la Familia Enterobacteriaceas y la Familia Vibrionaceas se encuentran englobadas en la Sección VIII. Concretamente la Familia Enterobacteriaceas se va a clasificar en función de sus caracteres bioquímicos (pruebas



4 / 12

bioquímicas) y sus propiedades antigénicas. Las características más importantes de la Familia Enterobacteriaceae son las siguientes:

• Bacilos o cocobacilos Gram-. • Aerobios y anaerobios facultativos. • De 1 a 4 μm de longitud. • Pueden ser móviles (flagelos peritricos) o inmóviles. • No producen citocromo oxidasa. Oxidasa (-) • Fermentan la glucosa en todos los casos, presentando un metabolismo fermentativo. • Reducen los nitratos a nitritos y, en ocasiones, a nitrógeno atmosférico. • Son capaces de fermentar otros azúcares y alcoholes con la consiguiente producción

de ácidos y, en ocasiones, también gas. (Estudio realizado en medio KIA). • Puede producir gran cantidad de fermentos, como por ejemplo gelatinasas,

descarboxilasas, ureasas, galactoxidasas, desaminasas, etc. • Algunas son capaces de producir SH2 como, por ejemplo, Proteus. • Otras producen indol, como E. coli, lo que facilita su identificación. • Presenta similitudes bioquímicas con otras familias, como por ejemplo Vibrionaceae;

de ahí que se estudien conjuntamente, aunque esta última es oxidasa (+). Así, pues, de acuerdo con todo lo dicho, todas las enterobacterias pueden clasificarse atendiendo a sus propiedades bioquímicas; de hecho en la última edición del Manual del Bergey's se han tomado como base para su clasificación estudios bioquímicos, que han dado lugar a más de 20 géneros con un total aproximado de 100 especies; de acuerdo con esto tenemos:

• Género Salmonella: S. choleraeuis, S. typhi, S. paratyphi, S. enteritidis, etc. • Género Shigella: S. dysenteriae entre las especies más importantes. • Género Escherichía: E. coli, E. blattae (especie nueva). • Género Citrobacter: C. flerundii, entre las especies más importantes. • Género Klebsiella: K pneumoniae, K. terrigena, etc. • Género Enterobacter: E. cloacae, E. aerogenes, etc. • Género Hafnia. • Género Serratia: S. marcescens, S. liquefaciens, etc. • Género Proteus: P. vulgaris, P. miriabilis, etc. • Género Providencia: P. alcalifaciens, etc. • Género Morganella: M. morganíí, la más importante. • Género Yersinia: Y, pestis, Y. enterocolitica, entre las especies más importantes.

Las Enterobacterias siempre fueron clasificadas según su capacidad para fermentar la lactosa, con la consiguiente producción de ácido, en tres grupos:

• Enterobacterias fermentadoras rápidas de lactosa (coliformes): Son microorganismos indicadores de la calidad microbiológica de los alimentos y de

la sanidad. Incluyen los géneros Escherichia, Enterobacter y Klebsiella. • Enterobacterias fermentadoras de lactosa, más lentamente:* poco / no coliformes

Géneros Citrobacter, Serratia, Hafnia, Yersinia y la especie Shigella sonnei. • Enterobacterias no fermentadoras de lactosa (no coliformes), que incluyen los

géneros Salmonella, Shigella, Proteus, Morganella, Providencia y Edwardsiella.

Esta clasificación fue de gran utilidad ya que las enterobacterias patógenas, como por ejemplo Shigella o Salmonella, se incluyen dentro de las no fermentadoras de lactosa, pero existen numerosas excepciones como la Yersinia pestis que es una bacteria que fermenta de forma lenta la lactosa y también es muy patógena para el hombre; de ahí que esta última clasificación no se utilice demasiado desde un punto de vista taxonómico.



5 / 12

3.2. INTERÉS CLÍNICO DE LAS ENTEROBACTERIAS: ACCIÓN PATÓGENA

El interés clínico suscitado por la Familia Enterobacteriaceas estriba en su mayor o menor acción patógena, que va a depender de los siguientes factores:

a) Antígenos estructurales que van a proporcionar a la bacteria propiedades antifagocitarias y de resistencia a agentes antibióticos, así como incrementar su capacidad de adherencia a las células que infecta.

b) Endotoxinas. Son productos tóxicos que no son vertidos

c) Enterotoxinas. Son productos tóxicos que

al medio externo pero son responsables en muchos casos de alteraciones vasculares y fiebre.

son vertidos

Dentro de las Enterobacterias con más interés clínico distinguimos:

• Enterobacterias patógenas o muy patógenas para el hombre (

al medio externo por parte de la bacterias ejerciendo una acción altamente tóxica y directa sobre las células, como por ejemplo la toxina de Shigella o algunas cepas de E. coli.

Salmonella, Shigella, Yersinia y algunas cepas de E. coli productoras de diarreas.

• Enterobacterias oportunistas (E. coli, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Hafnia, Citrobacter, Proteus, Morganella y Providencia). Este tipo de bacterias suele formar parte de la flora Gram (-) del tubo digestivo como saprófitos y en algunas ocasiones podrían comportarse como patógenos, siempre y cuando aparecieran factores debilitantes en el huésped.

Tabla 1. Efecto patógeno de alguna de las especies más importantes de la Familia Enterobacteriaceae.

3.3. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUÍMICOS. DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO DE LA FAMILIA ENTEROBACTERIACEAS

Para la identificación de los distintos géneros y especies de la Familia Enterobacteríaceas es necesario partir de unas pruebas directas, un aislamiento en medio de cultivo específico y una identificación bacteriana a través de pruebas bioquímicas

a) Tras la recogida de la muestra se realizará una prueba directa que consiste en una tinción de Gram que en casos positivos deberá dar

.

Gram (-)b) Se someterán a un aislamiento a través de medios selectivos que inhiban el

crecimiento de las bacterias Gram (+) permitiendo sólo el crecimiento de ciertas Gram (-) como las Enterobacterias. Entre estos medios nos vamos a encontrar con los siguientes: Medio Levine (eosina azul de metileno), medio agar o caldo McConkey, medio xilosa – lisina desoxicolato (XLD) para patógenos, medio S–S (aislamiento Salmonella – Shigella), medio agar lactosado con púrpura de bromocresol para aislamiento de coliformes, medio caldo bilis y verde brillante para aislar igualmente

.



6 / 12

coliformes, medio agar ENDO, medio agar Hektoen para aislar enterobacterias patógenas, etc.

c) El tercer paso de la identificación de enterobacterias consiste en la realización de pruebas bioquímicas que incluyen las siguientes: prueba de Hugh-Leiffson (O/F, oxidación-fermentación), que permitirá apreciar el metabolismo oxidativo y/o fermentativo (fermentativo para las enterobacterias); prueba en medio KIA (kligler-iron-agar), que permitirá demostrar si el microorganismo problema utiliza la glucosa y/o lactosa, con o sin producción de SH2

En bacteriología es muy frecuente determinar las pruebas bioquímicas a efectos prácticos a través de pruebas multitest de determinación rápida, como por ejemplo, las tiras API; en el caso concreto de enterobacterias son especialmente útiles las tiras 20E, que corresponden a pruebas multitest con un total de

y/o gas; prueba del indol en medio líquido peptonado; prueba de la reducción de nitratos a nitritos en caldos nitratados; prueba de la utilización del citrato, determinación de su movilidad en medio ornitin-movilidad, por ejemplo; prueba de la producción de la Beta-galactoxidasa (ONPG); prueba del rojo de metilo en medio de caldo glucosado; prueba de la determinación de la acetoina (prueba de Voges-Proskauer); y finalmente, la prueba para determinar la producción de desaminasas, que proporciona un carácter diferencial importante.

20 pruebas claves para determinación rápida de enterobacterias.

Figura 2. Tiras API.



7 / 12

Tabla 3. Características bioquímicas diferenciales más importantes de enterobacterias.

Fig. 4. Identificación presuntiva de Salmonella.



8 / 12

4. GÉNERO VIBRIO, FAMILIA VIBRIONACEAS.

4.1. CONCEPTO Y CARACTERES DEL GÉNERO VIBRIO El Género Vibrio son bacilos Gram (-) anaerobios facultativos de morfología curva, no esporulados y móviles gracias a su flagelación lofótrica. Generalmente son oxidasa (+), prueba que va a servir para diferenciarlo de la Familia Enterobacteriaceas. Aguantan muy bien altas concentraciones de cloruro sódico y su crecimiento se facilita en medios alcalinos.

Tabla 4. Diferenciación de la Familia Vibrionaceae con las Familias Enterobacteriaceae y Pseudomonadaceae

4.2. CLASIFICACIÓN. ESPECIES MÁS IMPORTANTES DEL GÉNERO VIBRIO

De acuerdo con la última edición del Manual de Bergey's, el Género Vibrio se encuentra en la sección VIII. Dentro de la familia nos encontramos con 5 Géneros: Vibrio, Aeromonas, Pleisomonas, Photobacterium y Lucibacterium. Dentro del Género Vibrio, que es el más importante de todos, existen en torno a unas 20 especies distintas, de las que la mitad son patógenas para el hombre, como por ejemplo V. cholerae, que es el agente causal del cólera, que provoca en el hombre diarreas graves hasta llegar a la deshidratación, y, si no hay tratamiento, la muerte.

4.3. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUÍMICOS. DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO DE VIBRIO

a) Toma de muestra

b) Examen directo por medio de tinciones. Entre ellas se incluyen una tinción de Gram en la que V. cholerae aparecerá como Gram (-) y con forma de coma; y una extensión en fresco para poder comprobar su movilización observándose mejor esta característica al microscopio de contraste de fases.

, procediéndose de inmediato a su análisis debido a que V. cholerae es muy sensible a los agentes externos y podría con facilidad lisarse.

c) Aislamiento de V. cholerae a partir de medios de cultivo específicos que impedirán el crecimiento de gran parte de microorganismos. Entre estos medios cabe destacar el medio teluritotaurocolato-gelatina-agar (TTGA), donde V. cholerae crecerá formando colonias pequeñas con centro negro debido a la utilización del telurito. También se pueden utilizar agua peptonada alcalina (pH en torno a 9) que en estas condiciones inhibirá el crecimiento de muchas otras bacterias y no de V. cholerae.

d) A partir de las colonias sospechosas se realizará una batería de pruebas bioquímicas; la prueba de la oxidasa va a diferenciarle de la Familia Enterobacteríaceae.

e) Pruebas serológicas, para las que se utilizarán sueros estándares específicos que permitan establecer una caracterización serológica, así como determinar anticuerpos por técnicas de aglutinación.



9 / 12

5. GÉNERO STAPHYLOCOCCUS. (F. MICROCOCCACEAS)

En el Manual de Bergey: La familia Micrococaceas está formada por los géneros Micrococcus, Staphylococcus, Stomatococcus y Planococcus. El género Staphylococcus corresponde a cocos Gram (+), inmóviles, aerobios y anaerobios facultativos, no formadores de esporas y de tamaño entre 0.5 y 2 μm

5.1. CLASIFICACIÓN. ESPECIES MÁS IMPORTANTES DEL GÉNERO STAPHYLOCOCCUS

. Se agrupan en forma de racimos, producen catalasa en su metabolismo y degradan por fermentación los azúcares. Crecen bien en medios generales y son bastante resistentes a muchos agentes externos; de ahí su amplia distribución en la naturaleza. Es frecuente que formen parte de la flora normal de las mucosas y de la piel e, incluso, en procesos infecciosos, tales como intoxicaciones alimentarias, heridas y en general en distintos procesos patógenos.

Dentro del Género Staphylococcus, se pueden distinguir las siguientes especies: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus saprophyticus. S. aureus es con diferencia la especie más patógena, agente etiológico de muchas infecciones. Es reconocido por el pigmento de color amarillo que forma. Bioquímicamente produce coagulasa y fermenta el manitol. En su pared celular se han encontrado en torno a 30 antígenos distintos. S. epidermidis y S. saprophyticus son estafilococos oportunistas, están frecuentemente en el medio ambiente, en la piel y mucosas, ocasionando, sólo en situaciones de debilidad por parte del paciente, casos de patogenicidad. No producen toxinas, no producen coagulasa, no fermentan el manitol y no forman el pigmento amarillo característico de S. aureus.

Tabla 5.1. Características diferenciales del Género Staphylococcus.

5.2. ACCIÓN PATÓGENA E INTERÉS CLÍNICO El efecto más o menos patógeno de S. aureus para el hombre dependerá de:

• Antígenos presentes en la pared: presentan propiedades antifagocitarias

- hemolisinas, lisan con facilidad los

e inducen a la formación de estructuras piógenas, muy características.

• Toxinas: eritrocitos

- enterotoxinas: enterotoxinas, que son responsables de casos de intoxicaciones alimentarias y cuadros de enterocolitis

además de tener efectos tóxicos sobre otras células

• Enzimas (coagulasas, penicilinasas, etc). La coagulasa es capaz de coagular el plasma sanguíneo. Las penicilinasas

Así pues, y en función de la mayor o menor presencia de estos factores de virulencia, S. aureus puede ser o no altamente patógeno para el hombre; de cualquier forma, S. aureus es frecuente en

van a romper el anillo B-lactámico de las penicilinas, creando resistencias frente a estos antibióticos.



10 / 12

la mucosa nasal, en la piel (sobre todo en las manos), o en la flora bacteriana normal de la persona sana. Se exige el análisis en todos los alimentos debiendo presentar ausencia de este microorganismo en 25 g de producto.

5.3. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUÍMICOS. DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO DE STAPHYLOCOCCUS

5.3.1. Aislamiento: a) Se necesitará de medios selectivos que faciliten el crecimiento de estafilococos e inhiban

el crecimiento de otros gérmenes contaminantes. Para ello consideraremos el carácter halófilo de Staphylococcus, es decir, S. aureus es capaz de crecer en medios ricos de cloruro sódico; además, es capaz de fermentar el manitol, lo que le distinguirá de otros. Por esto, el medio especialmente utilizado es el medio manitol salado o medio Chapman, que va a impedir el crecimiento de muchísimos otros microorganismos y la fermentación del manitol diferenciará S. aureus del resto de Staphylococcus.

b) Si partimos de muestras no contaminadas se puede utilizar agar sangre que permita observar las características de las colonias, su color y su posible hemólisis.

5.3.2. Caracteres bioquímicos: Los estafilococos presentan un poder fermentativo alto, degradan con facilidad muchos azúcares, como glucosa, sacarosa, fructosa, manosa, etc. Esta actividad fermentativa origina ácidos, como por ejemplo, el ácido láctico, hecho que es detectado mediante la presencia de indicadores de pH

5.3.3. Diagnóstico bacteriológico de Staphylococcus:

para poder comprobar esta fermentación. Con respecto al metabolismo proteico, los estafilococos no producen indol, sí licuan la gelatina (gelatinasa +), son catalasa positivo, lo que les va a diferenciar de Streptococcus, reducen los nitratos a nitritos, crecen muy bien a 37 °C dando colonias relativamente grandes que pueden ser aplanadas y lisas y es frecuente apreciar fenómenos de alfa y beta-hemolisis en medios de agar sangre o agar chocolate, son oxidasa negativo y en general todos ellos son cocos Gram+.

• Toma de muestra con torunda estéril en condiciones de total asepsia. • Estudio microscópico de la muestra mediante tinción de Gram. • Aislamiento y cultivo. Hacer crecer en medio Chapman o manitol salado y agar

sangre. Tras el periodo de incubación, observar las colonias. • Realizar pruebas de identificación, que incluyen pruebas de coagulasa, de

fermentación de glucosa (medio de oxidación fermentación), prueba de la catalasa, prueba de la gelatinasa, prueba de las hemolisinas alfa y beta y prueba de fermentación del manitol.

• Estudio de la sensibilidad a la novobiocina (técnica análoga a antibiograma) para diferenciar S. epidermidis de S. saprophyticus.

Fig. 5.1. Identificación presuntiva de distintas especies del género Staphylococcus.



11 / 12

6. GÉNERO STREPTOCOCCUS. (F. ESTREPTOCOCACEAS)

6.1. CONCEPTO Y CARACTERES DEL GÉNERO STREPTOCOCCUS. De acuerdo con la última edición del Manual de Bergey's, se considera al Género Streptococcus englobado dentro de la Sección XIV. Los estreptococos van a corresponder a cocos Gram + de tamaño relativamente pequeño (entre 1 y 1,5 μm), anaerobios facultativos y que se disponen en pares y sobre todo en cadenas

6.2. CLASIFICACIÓN. ESPECIES MÁS IMPORTANTES DEL GÉNERO STREPTOCOCCUS

. Son catalasa y oxidasa negativa y fermentan la glucosa con la producción consiguiente de ácidos. Muchas especies del Género Streptococcus son saprófitas para el hombre, otras son oportunistas y algunas patógenas. Son muy importantes en el análisis microbiológico ya que son microorganismos indicadores de una posible contaminación fecal, debido a contaminación directa por heces o derivados de contaminación cruzada por los instrumentos utilizados, ya que si las materias primas que entraron estaban contaminadas, la línea de producción se contamina y también los siguientes productos tendrían presencia de Streptococos.

Aunque existen distintas clasificaciones a la hora de encuadrar los estreptococos, una de las más utilizadas consiste en el estudio de:

• El tipo de hemólisis. Se basa en la capacidad de romper hematíes alrededor de sus colonias en medio agar sangre o agar chocolate. De acuerdo con esto, tenemos: o γ hemolítico: son no hemolíticos. o α-hemolíticos: hemólisis parcial (decoloración en torno a la colonia). o β-hemolíticos: son llamados estreptococos hemolíticos produciendo halos de

transparencia grandes en torno a su colonia. • Sus caracteres antigénicos. Los antígenos que se encuentran en el Género Streptococcus

se sitúan en su pared celular y en su cápsula• Reacciones serológicas específicas. En general, los estreptococos también pueden

clasificarse en función de su comportamiento antigénico frente a diversas pruebas serológicas de aglutinación, inmunofluorescencia, etc..

.

Además, en esta clasificación se completará con pruebas bioquímicas. El resultado de todo esto es la clasificación en tres importantes grupos:

• Streptococcus Beta hemolíticos• Streptococcus correspondientes al

, que corresponden a los grupos A, B, C, G y F. grupo D

• Streptococcus tipo Viridans.

(enterococo), que pueden ser alfa, Beta y Gamma hemolíticos y grupo D no enterococo.



12 / 12

6.3. ACCIÓN PATÓGENA E INTERÉS CLÍNICO

6.3.1. Streptococcus del grupo A (S. pyogenes). En general, los estreptococos que pertenecen al grupo A son patógenos en su mayoría y van a corresponder al 90% de las infecciones estreptocócicas. Son Beta-hemolíticos muy sensibles a los agentes externos y en general se pueden encontrar con facilidad en la mucosa nasal y faríngea de las personas enfermas y sanas. Su efecto patógeno es debido a la presencia de enzimas, toxinas y antígenos de superficie. Son capaces de producir muchos procesos infecciosos en el hombre, anginas, sinusitis, meningitis, etc. Su nombre se debe a que producen pus

6.3.2. Streptococcus del grupo D.

.

Son estreptococos Alfa, Gamma y en ocasiones Beta-hemolíticos, que resisten muy bien a los agentes externos, incluso a antibióticos. Se van a dividir en enterococos y no enterococos. Los enterococos van a corresponder a S. faecalis (origen humano) y S. faecium (origen vegetal) entre otros. Son saprófitos del intestino del hombre, crecen bien en medios ricos en NaCI. Estos enterococos son los indicadores de contaminación fecal, aparecen por falta de higiene en la manipulación de los alimentos.

6.3.3. Streptococcus del grupo N. Streptococcus del grupo N. Corresponden a los estreptococos lácticos, se utilizan en las industrias lácticas, no patógenos

6.4. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUÍMICOS. DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO DE STREPTOCOCCUS

para el hombre, no hemolíticos, muy resistentes a los agentes externos y fermentadores de lactosa. Ejemplos de grupo son, S. lactis, S. cremosi, etc.

a) Toma de muestra. Se tomarán en condiciones de total asepsia y se obtendrán de la rinofaringe con hisopo estéril. La muestra se analizará lo antes posible

b) Se realizará un frotis de las muestras obtenidas para una tinción de Gram donde, a priori, la presencia de cocos Gram + tendrá una orientación diagnóstica importante que se verificará con otras.

, ya que los estreptococos son muy sensibles a los agentes externos.

c) Aislamiento por cultivos. Partiendo de la muestra se sembrará por agotamiento

d) Pruebas bioquímicas. Se realizarán al menos las siguientes pruebas: prueba de la catalasa, que deberá dar siempre

en placa de agar sangre o chocolate a fin de investigar sus posibles hemólisis.

negativo

e) Haremos crecer a la bacteria problema en medios enriquecidos al 6,5% de NaCI, que permite el crecimiento sólo de

, hecho que le va a diferenciar de cualquier estafilococo; prueba de hemólisis en medio de agar sangre, etc.

enterococos del grupo Df) Identificar los distintos

, el resto no crecen. grupos antigénicos por métodos serológicos (clasificación de

Lancefield). Este método consiste en partir de extractos con estreptococos problema por hidrólisis ácida a 100°C y

g) Pruebas serológicas. Son

enfrentarlos con sueros específicos estandarizados y observaremos dónde se produce la precipitación.

pruebas de carácter inmunológico

muy utilizadas y se basan en la búsqueda de anticuerpos en la muestra frente a toxinas y enzinas. En la actualidad existen unos kits que constan de 5 antígenos estreptocócicos. Es un método de determinación muy rápido.

T12 CLASIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS

Documents

Transcript of T12 CLASIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS