SEMINARIO 8 Aguilar, Rosario Bastos, Luis Marcone, María Inés Martí, María Consuelo Rudi, Juan...

SEMINARIO 8SEMINARIO 8

Aguilar, RosarioAguilar, RosarioBastos, LuisBastos, LuisMarcone, María InésMarcone, María InésMartí, María ConsueloMartí, María ConsueloRudi, Juan ManuelRudi, Juan ManuelSoria, MarielSoria, MarielVaca, AliciaVaca, Alicia

UN NUEVO TIPO DE MUTACIÓN UN NUEVO TIPO DE MUTACIÓN CAUSA UN DEFECTO EN EL CAUSA UN DEFECTO EN EL

SPLICING DEL GEN SPLICING DEL GEN ATMATM

Franco Pagani, Emanuelle Buratti, Cristiana Stuani, Franco Pagani, Emanuelle Buratti, Cristiana Stuani, Regina Bendix, Thilo Dörk & Francisco E. BaralleRegina Bendix, Thilo Dörk & Francisco E. Baralle

Nature Genetics – Volumen 30 – Abril 2002 Nature Genetics – Volumen 30 – Abril 2002

ATAXIA-TELANGIECTASIAATAXIA-TELANGIECTASIA

ATAXIA-TELANGIECTASIAATAXIA-TELANGIECTASIA

Herencia autosómica recesivaHerencia autosómica recesiva 1/40000 – 1/100000 nacidos 1/40000 – 1/100000 nacidos vivosvivos Locus 11q 22 – 23 (1980)Locus 11q 22 – 23 (1980)

Gen Gen ATMATM Proteína Quinasa Serina Proteína Quinasa Serina TreoninaTreonina Traducción de señalesTraducción de señales

Arresto del Ciclo Celular:Arresto del Ciclo Celular:G1, Fase S, G2G1, Fase S, G2

ATMATM

INTRODUCCIÓNINTRODUCCIÓN

GN C A GA / C A G G U A / G A G U C A A / G A C / U

Exo

n 5

´

Pu

nto

de

Ram

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aciò

n

Intr

òn

Sit

io d

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y

Em

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y em

pal

me

3`

Exó

n 3

`

80 100 100 6070 60 80 80 90 100 8080100 100 70 80 45

PremRNA

Frecu

encia d

e A

pariciòn

% Las únicas bases casi invariables son las 5´GU 3`AG

20 – 50 Kb

INTRODUCCIÓNINTRODUCCIÓN

Exón CrípticoExón Críptico

20 21DNADNA

RNARNA

cDNAcDNA

Splicing anormal Exón CrípticoSplicing anormal Exón Críptico

Deleción GTAADeleción GTAA

En el intrón 20, En el intrón 20, a 1870 y 570 pb de los exones a 1870 y 570 pb de los exones vecinos (ex 20 y 21)vecinos (ex 20 y 21)

Situada en una secuencia nucleotídica similar a los Situada en una secuencia nucleotídica similar a los sitios consenso de splicingsitios consenso de splicing

SON NECESARIOS 30 – 40 NUCLEOTIDOS, SON NECESARIOS 30 – 40 NUCLEOTIDOS, EN CADA EXTREMO DEL INTRÓN, PARA EN CADA EXTREMO DEL INTRÓN, PARA

QUE EL SPLICING SEA NORMALQUE EL SPLICING SEA NORMAL

HIPÓTESISHIPÓTESIS

La secuencia de nucleótidos La secuencia de nucleótidos (CAGGTAAGT) del intrón 20, que contiene (CAGGTAAGT) del intrón 20, que contiene la deleción GTAA, pese a estar alejada de la deleción GTAA, pese a estar alejada de 5´ ss y de 3´ ss 5´ ss y de 3´ ss no es neutrano es neutra en el splicing en el splicing

del pre-mRNAdel pre-mRNA

Splicing entre exones 20 y 21Splicing entre exones 20 y 21

Evaluar el splicing entre los exones 20 y 21 Evaluar el splicing entre los exones 20 y 21 en el paciente con A-T y en un individuo en el paciente con A-T y en un individuo

normalnormal

OBJETIVOOBJETIVO


MATERIALES Y MÉTODOSMATERIALES Y MÉTODOS

ARN (Línea celular linfoide HA174)ARN (Línea celular linfoide HA174)

RT-PCR: random primer (ex 20 dir, ex 21 rev)RT-PCR: random primer (ex 20 dir, ex 21 rev)

Gel de agarosaGel de agarosa

Masculino heterocigotaMasculino heterocigota para para

- Mutación salto en exón 16 ( 2250G - Mutación salto en exón 16 ( 2250G→→A )A ) - Mutación exón críptico entre exones 20 y 21 - Mutación exón críptico entre exones 20 y 21

PACIENTEPACIENTE


RESULTADOSRESULTADOS

Calle 1 Inserción de 65 nt (exón críptico)Calle 1 Inserción de 65 nt (exón críptico)

Calle 2 Splicing normalCalle 2 Splicing normal


Exón CrípticoExón Críptico

RNA m.

16 dir 22 rev

RT PCR

CDNA

Splicing alelo-específicoSplicing alelo-específico

Evaluar el splicing alelo-específico entre los Evaluar el splicing alelo-específico entre los exones 20 y 21exones 20 y 21

OBJETIVOOBJETIVO



Gel de agarosaGel de agarosa

RT-PCR: random primer (ex 16 dir, ex 22 rev)RT-PCR: random primer (ex 16 dir, ex 22 rev)

El alelo 2250G→A no podrá amplificarse El alelo 2250G→A no podrá amplificarse (salto del exón 16) (salto del exón 16)

ARN ARN



Calle 1 Exón crípticoCalle 1 Exón críptico

Calle 2 Splicing normalCalle 2 Splicing normal

El splicing defectuoso del exón 20 El splicing defectuoso del exón 20 no afecta el splicing regulado por no afecta el splicing regulado por

elementos canónicoselementos canónicos

Observar que el splicing defectuoso del exón Observar que el splicing defectuoso del exón que posee la deleción no produce un que posee la deleción no produce un

transcripto normaltranscripto normal

OBJETIVOOBJETIVO

El splicing defectuoso del exón 20 no afecta El splicing defectuoso del exón 20 no afecta el splicing regulado por elementos canónicosel splicing regulado por elementos canónicos


Los productos amplificados fueron separados en geles Los productos amplificados fueron separados en geles de agarosade agarosa

Se amplificaron por RT-PCR, usando primers específicos, Se amplificaron por RT-PCR, usando primers específicos, los exones 19 al 22los exones 19 al 22

PUROMICINA: es un antibiótico que inhibe la síntesis PUROMICINA: es un antibiótico que inhibe la síntesis proteica, pues su estructura es similar a la terminación proteica, pues su estructura es similar a la terminación aminoacil de un aminoacil ARNt. De esta manera libera las aminoacil de un aminoacil ARNt. De esta manera libera las cadenas de pre-RNA antes de que se complete su síntesiscadenas de pre-RNA antes de que se complete su síntesis


Calle 1 Tratamiento sin puromicinaCalle 1 Tratamiento sin puromicina

Calle 2 Tratamiento con puromicinaCalle 2 Tratamiento con puromicina

El splicing defectuoso del exón 20 no afecta El splicing defectuoso del exón 20 no afecta el splicing regulado por elementos canónicosel splicing regulado por elementos canónicos

CONCLUSIÓNCONCLUSIÓN

El tratamiento con puromicina incrementa la El tratamiento con puromicina incrementa la cantidad relativa del producto que contienecantidad relativa del producto que contiene

la inserción de 65 nt, a partir de la línea celular la inserción de 65 nt, a partir de la línea celular que se obtiene del individuo afectado. que se obtiene del individuo afectado.

De lo contrario, se obtiene poco producto del De lo contrario, se obtiene poco producto del splicing defectuoso, ya que, la inserción posee un splicing defectuoso, ya que, la inserción posee un codon stop que trunca la transcripción antes de codon stop que trunca la transcripción antes de

lo normallo normal

SISTEMA MINIGENESISTEMA MINIGENE

El sistema minigene es una importante El sistema minigene es una importante herramienta para la identificación y análisis in herramienta para la identificación y análisis in

vivo de reguladores como elementos cis- y vivo de reguladores como elementos cis- y factores trans-, que establecen un splicing factores trans-, que establecen un splicing eficiente y regulan el splicing alternativoeficiente y regulan el splicing alternativo


Los usos más comunes de los minigenes son:Los usos más comunes de los minigenes son:

Determinar la variante alélica que afecta la Determinar la variante alélica que afecta la eficiencia del splicing, entre otros usoseficiencia del splicing, entre otros usos

Identificar elementos exónicos e intrónicos que Identificar elementos exónicos e intrónicos que favorecen o reprimen el splicingfavorecen o reprimen el splicing

Determinar el rol de los sitios de splicing en Determinar el rol de los sitios de splicing en establecer el nivel basal de reconociemiento del establecer el nivel basal de reconociemiento del exónexón


La expresión de preRNAs mediante el Sistema La expresión de preRNAs mediante el Sistema Minigene, por transfección transciente, provee un Minigene, por transfección transciente, provee un rápido ensayo para conocer la pérdida de función rápido ensayo para conocer la pérdida de función

y/o el análisis de la pérdida o ganancia de y/o el análisis de la pérdida o ganancia de elementos cis- y/o factores trans- que afectan la elementos cis- y/o factores trans- que afectan la

regulación de la transcripciónregulación de la transcripción

Estudio de la secuencia de Estudio de la secuencia de ATMATM afectada por la deleciónafectada por la deleción

ISPEISPEElemento de procesamiento de splicing del intrónElemento de procesamiento de splicing del intrón

Secuencia del ISPE de ATMSecuencia del ISPE de ATM

Sitios de splice 3’ y 5’ Sitios de splice 3’ y 5’ respectivamenterespectivamente

HOMOLOGASHOMOLOGAS

Estudio de la secuencia de Estudio de la secuencia de ATMATM afectada por la deleciónafectada por la deleción

Complementariedad de bases entre ISPE y snRNA U1Complementariedad de bases entre ISPE y snRNA U1

12 bp fuertemente complementarias

Unión no clásica del snRNA U1

Estudio de la secuencia de Estudio de la secuencia de ATMATM afectada por la deleción afectada por la deleción


La unión del snRNA U1 al ISPE es crucial en el proceso de La unión del snRNA U1 al ISPE es crucial en el proceso de modulación del pre RNAm del intrón 20modulación del pre RNAm del intrón 20

Mutaciones puntuales en ISPE

Sistema de minigen de ATM

Mutagénesis sitio dirigida

RT- PCR

Gel de agarosa

Estudio de la secuencia de Estudio de la secuencia de ATMATM afectada por la deleción afectada por la deleción

CONFIRMACIÓN DE LA HIPÓTESISCONFIRMACIÓN DE LA HIPÓTESIS

Mutaciones puntuales Mutaciones puntuales

en el ISPEen el ISPE

REMOCIÓN COMPLETA DEL INTRÓN

Cierta inclusión del INTRÓN

INCLUSIÓN COMPLETA DEL

INTRÓN5G y 6G5G y 6Gexcepciónexcepción

CONCLUSIONESCONCLUSIONES

Secuencia intrónica (ISPE) distante de los sitios Secuencia intrónica (ISPE) distante de los sitios clásicos de spliceclásicos de splice

Mutaciones puntuales en la secuencia intrónica Mutaciones puntuales en la secuencia intrónica (ISPE), alteran la unión clásica de snRNA U1, (ISPE), alteran la unión clásica de snRNA U1, actuando como el ISPE con la deleción y por lo tanto actuando como el ISPE con la deleción y por lo tanto generando la inclusión del intróngenerando la inclusión del intrón

Activación del exon críptico producida por la de Activación del exon críptico producida por la de una interacción no clásica del snRNA U1 con el ISPEuna interacción no clásica del snRNA U1 con el ISPE

¿La deleción de 4pb o mutación CT ¿La deleción de 4pb o mutación CT rompe la interación entre U1 snRNP rompe la interación entre U1 snRNP

y ATM ISPE?y ATM ISPE?

EMSAEMSA(Electroforetic Movility Shift Assay)(Electroforetic Movility Shift Assay)

Puede determinar si una proteína o mezclas Puede determinar si una proteína o mezclas de proteínas, son capaces de unirse a un de proteínas, son capaces de unirse a un determinado DNA o RNAdeterminado DNA o RNA

Gel Shift Assay, Band Shift Assay o Gel Shift Assay, Band Shift Assay o Gel Retardation AssayGel Retardation Assay

Interacción proteína-DNA o proteína-RNAInteracción proteína-DNA o proteína-RNA

Separación electroforética de una mezcla Separación electroforética de una mezcla proteína-DNA en geles de poliacrilamida o proteína-DNA en geles de poliacrilamida o agarosa, por un período corto de tiempoagarosa, por un período corto de tiempo

La velocidad de la corrida está dada por el La velocidad de la corrida está dada por el tamaño y carga, y en menor medida por la formatamaño y carga, y en menor medida por la forma

Visualización: DNA o RNA marcado con Visualización: DNA o RNA marcado con fluorescentes o radioactivosfluorescentes o radioactivos

EMSAEMSA

EMSAEMSA

Oligonucleótidos de RNA sc de Oligonucleótidos de RNA sc de ATM-ISPE normal, e ISPE con deleción ATM-ISPE normal, e ISPE con deleción (ATM-(ATM-ΔΔ) o con sustitución CT ) o con sustitución CT (ATM-CT) (ATM-CT) con 5’ terminal marcadocon 5’ terminal marcado

Extracto nuclear de HeLAExtracto nuclear de HeLA

CONCLUSIÓN:CONCLUSIÓN:

Sólo el ATM ISPE normal induce Sólo el ATM ISPE normal induce la formación del complejo la formación del complejo Proteína-RNA específicoProteína-RNA específico

EMSAEMSAAnálisis de competiciónAnálisis de competición

Oligonucleótidos ATM-ISPE, ATM-Oligonucleótidos ATM-ISPE, ATM-ΔΔ o ATM-CT, o ATM-CT, no marcados, en excesono marcados, en exceso

ATM ISPE marcadoATM ISPE marcado

Incubación: 25 minutos a T ambienteIncubación: 25 minutos a T ambiente


Las variantes ATM-Las variantes ATM-ΔΔ o ATM-CT o ATM-CT no pueden desplazar al ATM no pueden desplazar al ATM ISPE del complejo proteína-RNAISPE del complejo proteína-RNA

¿Está presente U1 snRNP en el ¿Está presente U1 snRNP en el complejo Proteína-RNA específico?complejo Proteína-RNA específico?

Ensayo de clivaje con RNasa HEnsayo de clivaje con RNasa H

Incubación del extracto nuclear de Incubación del extracto nuclear de HeLa, con Oligonucleótido HeLa, con Oligonucleótido complementario U1 AS (antisense) y complementario U1 AS (antisense) y RNasa HRNasa H

T = 30ºC durante 15 y 30 minutosT = 30ºC durante 15 y 30 minutos

Control negativo: Oligonucleótido Control negativo: Oligonucleótido CAS no relacionadoCAS no relacionado

Análisis de super-movilidadAnálisis de super-movilidad

Se agrega anticuerpo policlonal Se agrega anticuerpo policlonal de conejo anti U1 Ade conejo anti U1 A

Control: anticuerpo policlonal de Control: anticuerpo policlonal de conejo específicoconejo específico


snRNP U1 participa en el snRNP U1 participa en el complejo Proteína-RNA formado complejo Proteína-RNA formado por ATM ISPEpor ATM ISPE


Sólo el ATM ISPE normal induce la formación Sólo el ATM ISPE normal induce la formación del complejo Proteína-RNA específicodel complejo Proteína-RNA específico

Las Variantes ATM-Las Variantes ATM-ΔΔ o ATM-CT no pueden o ATM-CT no pueden desplazar al ATM ISPE del complejo proteína-RNAdesplazar al ATM ISPE del complejo proteína-RNA

snRNP U1 participa en el complejo proteína-RNA snRNP U1 participa en el complejo proteína-RNA formado por ATM ISPEformado por ATM ISPE

Interacción funcional entre Interacción funcional entre U1 snRNA e ISPEU1 snRNA e ISPE

Determinar si la complementariedad entre Determinar si la complementariedad entre mutantes de U1 snRNA, denominadas mutantes de U1 snRNA, denominadas ∆-U1 ∆-U1 y CT-U1, y CT-U1, y las variantes complementarias y las variantes complementarias ATM-ATM-∆ y ATM-CT induce el procesamiento ∆ y ATM-CT induce el procesamiento

normal del intrón in vivonormal del intrón in vivo

OBJETIVOOBJETIVO

Interacción funcional entre Interacción funcional entre U1 snRNA e ISPEU1 snRNA e ISPE

Interacción funcional entre U1 snRNA e ISPEInteracción funcional entre U1 snRNA e ISPE


Amplificación de DNA genómico y preparación de plásmidos pATM-WT, Amplificación de DNA genómico y preparación de plásmidos pATM-WT, pATM-∆ y pATM-CT con minigenespATM-∆ y pATM-CT con minigenes

Creación de las variantes ∆-U1 y CT-U1 empleando el clon pG3U1 Creación de las variantes ∆-U1 y CT-U1 empleando el clon pG3U1 (clon parental de U1 snRNA)(clon parental de U1 snRNA)

Co-transfección de células Hep3B con las variantes de los Co-transfección de células Hep3B con las variantes de los minigenes de ATM y conminigenes de ATM y con las mutantes del U1 snRNA (cantidades las mutantes del U1 snRNA (cantidades diferentes)diferentes)

Preparación del RNA total mediante extracción con Preparación del RNA total mediante extracción con ácido guanidino-fenol y transcripción por RT-PCRácido guanidino-fenol y transcripción por RT-PCR

Visualización mediante geles de agarosaVisualización mediante geles de agarosa


+, 0,5 +, 0,5 µg; µg; ++, 1,5 µg, 1,5 µg

La interacción entre pATM-La interacción entre pATM-∆ y pATM-CT con sus ∆ y pATM-CT con sus respectivas variantes complementarias del U1 snRNA respectivas variantes complementarias del U1 snRNA

produce la omisión del exón crípticoproduce la omisión del exón críptico

Interacción funcional entre U1 snRNA e ISPEInteracción funcional entre U1 snRNA e ISPE

La restauración de la complementariedad La restauración de la complementariedad entre U1 snRNA e ISPE genera un splicing entre U1 snRNA e ISPE genera un splicing

normal, es decir, permite la remoción normal, es decir, permite la remoción eficiente de los introneseficiente de los intrones

CONCLUSIÓNCONCLUSIÓN

Conversión de exones en intronesConversión de exones en intrones

OBJETIVOOBJETIVO

Analizar el efecto del ISPE en un contexto diferente Analizar el efecto del ISPE en un contexto diferente


Si la interacción de U1 snRNP con el ISPE Si la interacción de U1 snRNP con el ISPE provoca la correcta remoción de intrones, provoca la correcta remoción de intrones,

entonces su localización en un exón entonces su localización en un exón convertiría secuencias exónicas en convertiría secuencias exónicas en

secuencias intrónicassecuencias intrónicas


ESTRATEGIA EXPERIMENTAL 1ESTRATEGIA EXPERIMENTAL 1

Introducción de la secuencia core del ISPE Introducción de la secuencia core del ISPE en diferentes posiciones del exón 9 del gen en diferentes posiciones del exón 9 del gen CFTR, utilizando una versión modificada del CFTR, utilizando una versión modificada del

minigen minigen globina-fibronectina EDB globina-fibronectina EDB


ANÁLISIS DE LOS PRODUCTOSANÁLISIS DE LOS PRODUCTOS

RT-PCRRT-PCR

mRNAmRNA

RTRT

cDNAcDNA

AmplificaciónAmplificación


OBSERVACIONESOBSERVACIONES

En células transfectadas con En células transfectadas con pCFpCF, el análisis por RT-PCR , el análisis por RT-PCR muestra un predominio de muestra un predominio de inclusióninclusión del exón 9 del exón 9

En células transfectadas con En células transfectadas con pCF-ISPE 5´pCF-ISPE 5´ y en las y en las transfectadas con transfectadas con pCF-ISPE 3´pCF-ISPE 3´ se observa un predominio de se observa un predominio de exclusiónexclusión del exón 9 del exón 9

En células transfectadas con En células transfectadas con pCF-ATM pCF-ATM y en las y en las transfectadas con transfectadas con pCF-ATM CTpCF-ATM CT, se observa un aumento , se observa un aumento importante de importante de exclusiónexclusión del exón 9 con respecto al pCF del exón 9 con respecto al pCF



Co-transfección de las variantes ISPEs con Co-transfección de las variantes ISPEs con su respectivo U1 snRNP complementario su respectivo U1 snRNP complementario

utilizando la línea celular Hep 3Butilizando la línea celular Hep 3B


ANÁLISIS DE LOS PRODUCTOSANÁLISIS DE LOS PRODUCTOS

RT-PCRRT-PCR


OBSERVACIONESOBSERVACIONES

La co-transfección de las dos variantes ISPE La co-transfección de las dos variantes ISPE con sus respectivas U1 snRNP complementarias con sus respectivas U1 snRNP complementarias muestran una inhibición específica de la inclusión muestran una inhibición específica de la inclusión del exón 9del exón 9

La presencia del ISPE en un exón lo convierte La presencia del ISPE en un exón lo convierte en un intrónen un intrón

La interacción entre ISPE y U1 sn RNP también La interacción entre ISPE y U1 sn RNP también convierte secuencia exónicas en intrónicas en un convierte secuencia exónicas en intrónicas en un contexto heterólogocontexto heterólogo


CONCLUSIONES FINALESCONCLUSIONES FINALES

Se identificó un nuevo mecanismo que provoca A-T y Se identificó un nuevo mecanismo que provoca A-T y que involucra un elemento procesador del splicing que involucra un elemento procesador del splicing intrónico (ISPE) en ATMintrónico (ISPE) en ATM

La deleción GTAA dentro del ISPE interrumpe la La deleción GTAA dentro del ISPE interrumpe la interacción no canónica U1 snRNP y activa un exón interacción no canónica U1 snRNP y activa un exón aberrante, manteniendo los sitios de splicing consenso aberrante, manteniendo los sitios de splicing consenso 5´ y 3´ potenciales adyacentes5´ y 3´ potenciales adyacentes

La deleción ocurre 12 pb río abajo y 53 pb río arriba La deleción ocurre 12 pb río abajo y 53 pb río arriba respecto de los sitios de splicing del exón críptico respecto de los sitios de splicing del exón críptico (esas secuencias ya están presentes en el intrón wild-(esas secuencias ya están presentes en el intrón wild-type)type)

PERSPECTIVASPERSPECTIVAS

Se sabe que Se sabe que U1 snRNPU1 snRNP también está implicada también está implicada en otros eventos del procesamiento de pre-mRNA:en otros eventos del procesamiento de pre-mRNA:

Regulación de la formación del sitio 3´ terminalRegulación de la formación del sitio 3´ terminal

Refuerzo de los bordes intrónicos por unión a tripletes GRefuerzo de los bordes intrónicos por unión a tripletes G

Inhibición del splicing por unión a moduladores Inhibición del splicing por unión a moduladores negativos del splicing de intrones en ROUS sarcoma virusnegativos del splicing de intrones en ROUS sarcoma virus

Splicing tejido específico de los transcriptos del Splicing tejido específico de los transcriptos del elemento P de Drosophilaelemento P de Drosophila


El complejo que forma El complejo que forma U1 snRNPU1 snRNP con la secuencia con la secuencia ISPE debe interferir con los posibles complejos en ISPE debe interferir con los posibles complejos en sitios crípticos de splicing adyacentessitios crípticos de splicing adyacentes

En transcriptos de elementos P de Drosophila, el En transcriptos de elementos P de Drosophila, el reclutamiento de reclutamiento de U1 snRNPU1 snRNP a un sitio que nunca es a un sitio que nunca es utilizado para splicing resulta en una concomitante utilizado para splicing resulta en una concomitante reducción del complejo U1 snRNP/ISPE en el sitio reducción del complejo U1 snRNP/ISPE en el sitio apropiado de slicingapropiado de slicing


Se requiere una distancia crítica entre los sitios 3´ y 5´ de Se requiere una distancia crítica entre los sitios 3´ y 5´ de splicing para definir un exónsplicing para definir un exón

Elementos que contienen sitios de splicing 3´ y 5´ Elementos que contienen sitios de splicing 3´ y 5´ adyacentes (similares al ISPE) pueden representar una señal adyacentes (similares al ISPE) pueden representar una señal de re-splicing que regula y asegura el correcto procesamiento de re-splicing que regula y asegura el correcto procesamiento de intrones largos (Drosophila Ubx) ó comportarse como un de intrones largos (Drosophila Ubx) ó comportarse como un sitio (aceptor y donor) de splicing alternativositio (aceptor y donor) de splicing alternativo

En este contexto, los sitios de pseudo-splicing En este contexto, los sitios de pseudo-splicing frecuentemente encontrados en intrones deben ser frecuentemente encontrados en intrones deben ser considerados no solo como “falsos exones” sino también considerados no solo como “falsos exones” sino también como elementos importantes para el eficiente procesamiento como elementos importantes para el eficiente procesamiento intrónicointrónico

UN NUEVO TIPO DE MUTACIÓN UN NUEVO TIPO DE MUTACIÓN CAUSA UN DEFECTO EN EL CAUSA UN DEFECTO EN EL

SPLICING DEL GEN SPLICING DEL GEN ATMATM

MUCHAS GRACIAS!MUCHAS GRACIAS!

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