SELECCIÓN EMBRIONARIA. Morfológica e invasiva.
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SELECCIÓN EMBRIONARIA.Morfológica e invasiva.
Dr. David Agudo Garcillán
IVI Madrid
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Time lapse
NGS
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Cultivo hasta Blastocisto:
Mejora la selección del embrión, no tenemos que predecir cual llegará a estado de blastocisto.
-Mejora de los resultados.-Permite recomendar SET con mayores tasas de éxito.
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D0Ovocitos blandos Membranas rígidas Granuloso Vesiculado Cuerpos refringentes
Cuerpos necróticos Vacuolas REL
- ClusteringTamañoCP pequeño CP gigante
2 cuerpos polares
- Ovocito elongado
ZIR
Zp gruesa
- ZP fina
CP fragmentado
Ovocitos=¿estimulación?
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Estrategias para mejorar la calidad ovocitaria
Jennifer Couzin-Frankel. Science (March, 2015)
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Selección de espermatozoides clásica y…
GRADO I Ausencia de vacuolas
GRADO II 2 vacuolas (<4%volumen)
GRADO III 1 vacuola grande (>4%volumen)
GRADO IV vacuolas grandes y otras anormalidades morfológicas
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Selección del Blastocisto:
Grado 1 o blastocisto temprano (BT): se empieza a hacer visible el blastocele.Grado 2 o blastocisto cavitado (BC): se visualizan perfectamente las distintas partes del blastocisto.Grado 3 o blastocisto expandido (BE): el blastocisto ha aumentado su tamaño y la zona pelúcida es fina.Grado 4 o blastocisto iniciando eclosión (“hatching”): el blastocisto comienza a salir de la zona pelúcida.Grado 5 o blastocisto eclosionado (“hatched”): el blastocisto ya ha salido de la zona pelúcida.
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+ resultados estables
+ embriones que lleguen a formar blastocistos
+ un buen programa de vitrificación
¿Por qué no hacersiempre transferenciade blastocistos?
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Personal Equipamiento
Condiciones de cultivoestables
Control de calidadCondiciones de laboratorioestables
CONSEGUIR LOS MEJORES EMBRIONES: EL LABORATORIO
¿Es adecuado el cultivo largo para
todos los laboratorios de fecundación in
vitro?
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CINEMATOGRAPHS OF LIVING DEVELOPING
RABBIT-EGGS
Lewis WH, Gregory PW.
Science. 1929 Feb 22;69(1782):226-9.
Nos permite cuantificar los tiempos exactos de división celular y
observar de manera pormenorizada el desarrollo embrionario
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¿Qué pensáis del protagonista?
¿Argumento de la película?
Predicción
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30 horas en cultivo
36 horas en cultivo
2 células
0% fragm
Simétrico
4 élulas
0% fragm
Simétrico
3 células
5% fragm
Asimétrico
? células
Muchos fragmentos
Asimétrico
32 horas en cultivo
34 horas en cultivo
OK
OK
No OK
No OK
Predicción
1ª Criterios de selección
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7 Technical Characteristics
Bright FieldOptics Dark FieldBright Field Bright Field Bright Field
12 individuallyculture
Embryos /PT & Culture 12 group culture16 group culture14 Individually
culture14 individually
culture
Pictures every
10’Embryo imaging Pictures every 5’Pictures every 10’ Pictures every 10’ Pictures every 5’
Capacity – Patients 6/system 1/camera1/camera 6/system 6/system
7Focal Planes 1 1 1 4
ManualData Analyses Real TimeManual Manual Manual
Yes - HybridIntegrated Incubator NoNo Yes - Benchtop Yes - Benchtop
Time laps + morfología2ª estabilidad del cultivo
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3ª marcadores predictivos time-lapse
• Wong, 2010, Cruz, 2012; Hashimoto, 2012Formación de
blastos
• Meseguer, 2011; Hlinka, 2012; Dal Canto, 2012; Meseguer, 2012; Campbell 2013Implantación
• Azzarello, 2012Recien nacido
vivo
• Wong, 2010; Chavez, 2012; Campbell, 2013; Basile, 2014
Contenido cromosómico
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cc2= t3-t2 s2= t4-t3
Zygote t5t4t3t2
t6 BMt8t7
PNF
EB
Primer concepto: Morfocinética
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Hours after ICSI <35.6 h35.6-38.2 h 38.2-40.2 h >40.2 h
Implantation 20.5% *
(n=24/116)33.6 %
(n=39/117)25.6%
(n=30/116)15.5% *
(n=18/117)
* p<0.05
10%
15%
20%
25%
30%
35%
<35 35-38 38-41 >41
% Im
pla
nte
d e
mb
ryo
s
Quartiles for 3 cell stageOptimal range for 3 cell stage
Optimal range
Out of range
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Segundo concepto: Morfodinámica
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División
irregular
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3pn 2pn
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Morphology
included
Grade A Grade B Grade C Grade D Grade E Discarded
excluded
yes no
yes nono yes
A+ A B+ B C+ C D+ D
CC2 5- 12h CC2 5-12h CC2 5-12h CC2 5-12h
yes no yes no yes no yes no
ExclusionCriteria
Direct CleavageUneven BlastomereMn 4c
T5
48-56h
s2
< 0,75h
S2
<0,75h
Based in a Logistic Regression model
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PGS
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Biopsia embrionaria
Blastómera D3PB Trofoectodermo D5
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Partial gain chromosome 2p
Euploid embryo
Complex aneuploidy
Chaotic pattern
Loss of chromosome 13
Gain of chromosome 21
Secuenciación de nueva generación NGS
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Tipo de embrión
Indicación
Calidad embrionaria
MitoScore
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Embriones divididos en cuartiles en función de los valores de mts
MitoScore
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IMPLANTED
NON
IMPLANTED
MitoScore Indicador de estrés energético en el embrión
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Carrier Genetic Test (CGT). ¿Para quién?
Antes del tratamiento con gametos de donantes
❖ Selección de donantes no portadores de la misma mutación que la pareja
que aporta los gametos.
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GCT Match nos permite
emplear cualquier
donante, incluso si es
portador de mutaciones.
Se estima que el 5-8% de
la población no es
compatible.
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Genoma embrionario y mitTranscriptoma embrionarioProteoma embrionarioMetaboloma embrionariomiRNA
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SET con mejores tasas de éxito.
Evitando enfermedades en los recién nacidos.
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¡GRACIAS POR VUESTRA ATENCIÓN!
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