Centro de Bachillerato Tecnológico Industrial y de Servicios Noº128

Práctica 8. Hongos.

Sub módulo 3: Ejecuta técnicas de identificación de microorganismos con base en las normas.

Equipo 3. Integrantes: Cabral Brandon, González Lesly, Hernández Nayelli, Hernández Alan, Jiménez Fabiola, Lagunas Itzel, Lira Vanesa, Mata Lizbet.

Facilitadora: Ing. Acosta Jessica

Fecha: Inició 18 de Noviembre del 2014, 23 de Noviembre del 2014.

Introducción

Los hongos se diferencian mucho de las plantas y de los animales, razón por la cual pertenecen a otro reino llamado Fungi. Han jugado y juegan un papel muy importante en distintas áreas, como la medicina, la industria y la alimentación. En esta práctica analizaremos distintas muestras de hongos procedentes de múltiples alimentos, tales como la naranja, el café, el pan y queso. Realizaremos morfología de colonia, empleare-mos la tinción de Gram y la de tinta Verde de Malaquita y la tinción algodón lactofenol, cada una nos ayudara a observar algo específico, y finalizaremos con la morfología microscópica.

Resumen

Los hongos pueden crecer en ambientes húme-dos y con suficientes nutrimentos.

En el laboratorio microgiológico, se emplean aga-res con características adecuadas para el creci-miento de estos organismos, como el agar Sabo-rau.

En esta práctica, se inocularon una serie de pla-cas de Petri con medio Saborau con hongos que crecieron en algunos alimentos. Posteriormente se observó el crecimiento de hongos sobre este medio, este lapso es más prolongado que el de las bacterias. Además, se aplicaron las tinciones correspondientes para observar la estructura de los hongos y sus esporas, esto con el fin de iden-tificar el tipo de hongo y sus características morfo-lógicas.

Abstract

Fungi can grow in moist environments with suffi-cient nutrients.

In the microbiological laboratory, agars with suita-ble characteristics are used for the growth of the-se organisms, such as agar Saborau.

In this practice, a series of petri dishes were ino-culated with medium Saborau with fungus that grew in some foods. Subsequently, fungal growth on this medium was observed, this lapse of time is longer than the lapse of bacteria. Also, the corres-ponding stains were applied to observe the struc-ture of fungus and their spores, this in order to identify the type of fungi and their morphological characteristics.

Materiales y métodos

Preparación del medio

Materiales

MatrazEspátulaAgitadorMechero de BunsenManguera de látexGuante de asbestoVidrio de relojBalanza granataria

Reactivos

Agar SaborauAgua

Procedimiento

1-Diluir la cantidad necesaria de Agar Saborau en agua destilada suficiente para 4 placas de Petri.

2-Agitar el matraz y ponerlo a calentar en el me-chero de Bunsen, empleando el guante de asbes-to.

3-Calentar hasta diluir la mezcla y que quede de un tono cristalino.

4-Envolver las placas de Petri y colocar una cu-bierta al matraz Erlenmeyer con el agar.

5-Colocar los instrumentos en la olla de presión y esterilizar a 15 libras de presión por 15 minutos.

6-Sacar los instrumentos de la olla de presión.

7-Montar un triángulo de seguridad con tres me-cheros de Bunsen encendidos.

8-Preparar las placas y el matraz para el vaciado.

9-Dentro del triángulo de seguridad, vaciar 20 ml de agar Saborau en cada placa de Petri.

10-Etiquetar las placas y dejarlas solidificar.

Incoculación

Materiales

4 placas de Petri con medio SaborauAsas de platino3 mecheros de Bunsen3 Mangueras de látex

Reactivos

Muestras de hongos (naranja, queso, pan, café)

Procedimiento

1-Colocar un triángulo de seguridad de mecheros de Bunsen.

2-Dentro del triángulo de seguridad, tomar una muestra de hongos e inocular cada una de estas en las placas de Petri empleando el método de estriado de crecimiento.

3-Etiquetar las placas y colocarlas en la incubado-ra a 36° por varios días hasta observar crecimien-to de hongos.

Análisis de colonias y tinciones

Materiales

4 placas de Petri con cultivos de hongos

Asas de platino

Mecheros de Bunsen

Mangueras de látex

Cinta adhesiva

Reactivos

Cristal VioletaYodo-LugolSafraninaAlcohol cetonaAceite de inmersiónAguaAzul de algodón de lactofenolVerde Malaquita

Procedimiento

1-Aplicar la tinción de Gram:

Colocar una gota de agua en un por-taobjetos.Tomar una muestra de una colonia con el asa platino.Diseminar la muestra sobre el por-taobjetosDejar secar el portaobjetos.Fijar la muestra pasando el portaobje-tos tres veces por la llama del meche-ro de Bunsen.Agregar una gota de cristal violeta, esperar 1 minuto y enjuagar con agua.Agregar una gota de Yodo-Lugol, esperar 1 minuto y enjuagar con agua.Agregar una gota de alcohol cetona, esperar 30 segundos y enjuagar con agua.Agregar una gota de safranina, espe-rar 30 segundos y enjuagar con agua.Colocar una gota de aceite de inmer-sión en el portaobjetos y cubrir con un cubreobjetos.Observar la muestra en el microsco-pio a 100x

2-Aplicar la tinción de Verde de Malaquita

Colocar una gota de agua en un portaob-jetos.Agregar una gota de Verde Malaquita, esperar 5 minutos y enjuagar con agua.Agregar una gota de safranina, esperar 1 minuto y enjuagar con agua.

Colocar una gota de aceite de inmersión en el portaobjetos y cubrir con un cu-breobjetos.Observar en el microscopio a 100x

3-Para observar esporas:

Colocar una gota de agua en un portaobjetos.

Colocar un trozo de cinta adhesiva en el extremo de un asa de platino y tomar una muestra de un hongo.

Poner la cinta adhesiva sobre el portaobjetos.

Observar en el microscopio a 40x

Resultados

Se obtuvieron los siguientes resultados:

Morfología de hongos

Medio Color Forma Su-per-ficie

Borde Nú-mero

Saborau 1 Negro Punti-forme

Con-vexa

Irre-gular

21

Saborau 2 Blanco Circu-lar

Con-vexa

Re-don-deado

1

Saborau 3 Negro Irregu-lar

Con-vexa

Irre-gular

9

Saborau 4 Negro Punti-forme

Con-vexa

Irre-gular

15

Medio Tipo Esporas

Saborau 1 Levadura Puntos rojizos

Saborau 2 Levadura Puntos verdes

Saborau 3 Moho Puntos morados

Saborau 4 Levadura ________

Conclusiones

Cabral Brandon:

González Lesly: Como conclusión yo obtengo

que las antibióticos usados tienen diferentes pro-

piedades, así como las bacterias que se inocula-

ron ya que el hijas de ellas si crecían dentro del

halo y otras de ellas no, se puede determinar que

esto es gracias a la eficacia que tienen los anti-

bióticos usados, respecto a las bacterias inocula-

das, algunos de los si presentaban su halo con un

diámetro extenso así como otras presentaban un

halo pequeño. En pocas palabras de llega a la

conclusión de que no todos los antibióticos en los

que confiamos cuando nos encontramos enfermo,

actúan de la misma manera y tienen la misma

eficacia que otro.

Hernández Nayelli: Nos dimos cuenta de los diferentes tipos de hongos que solo en algunos cultivos, estos se cultivaron asi como también el bastante tiempo que estos tardaron en cultivarse.

La importancia de los halos de inhibición que también nos damos cuentas de su función y que si funcionan contra estos.

Muy importante la higiene ya que se está traba-jando con hongos, ya que son alimenticios lo úni-co que se puede provocar si no se trata con cui-dado es comezón pero si esto se realiza mal pue-de llegar a enfermarse así como tratar todo esto dentro del triángulo de seguridad.

Hernández Alan: Los hongos son organismos eucariotas que intervienen en una gran cantidad de procesos de simbiosis, además de que algu-nos degradan la materia orgánica.

Los hongos pueden ser macroscópicos o micros-cópicos, estos últimos se presentan como levadu-ras, con formas esféricas que cuentan con peque-ñas protuberancias conocidas como gemas, y mohos, hongos filamentosos que liberan esporas.

Algunos hongos representan riesgos potenciales para la salud y ocasionan enfermedades y patolo-gías muy graves en los seres humanos, a pesar de esto, algunos hongos aportan beneficios, como los hongos del género Penicillum que pro-ducen el antibiótico conocido como Penicilina, e intervienen en el equilibrio entre los ecosistemas.

Jimenez Fabiola: Como conclusión respecto a esta práctica se pudo observar cómo se llevaba a

cabo el crecimiento de diferentes tipos de hongos y levaduras que se pueden crear con el tiempo en diferentes tipos de alimentos y el saber cómo se van reproduciendo en los medios de cultivos du-rante algunas horas y los diferentes tipos de hon-gos que son existentes y cada una de sus carac-terísticas. También el observar que resultados se pueden dar a observar una vez que se les han realizado diferentes tipos de tinciones los resulta-dos que presentan.

Lagunas Itzel: Existen muchos tipos de hongos de los cuales algunos son perjudiciales para no-sotros, por tal razón a veces no tomamos en cuenta que han ayudado en la creación de mu-chos antibióticos, el más famoso “La Penicilina”. Por otro lado se encuentran las levaduras, si no existiesen careceríamos de pan y de vino, así como del queso o de la cerveza. Lo que a veces nos parece muy natural.

Lira Vanessa:

Mata Lucero:

Meléndez Araceli: Durante la práctica de morfo-logía de hongos llevamos a cabo la incubación de la bacteria de varios hongos conseguidos por nosotros mismos dejando honguear algunos ali-mentos para poder observar su crecimiento de una manera más favorable mediante su morfolo-gía posteriormente, fue algo en si interesante.

Discusión

Al igual que en la práctica 7 se pusieron en prácti-ca el método de halos de inhibición para así po-der medir la eficacia que tienen los antibióticos que se inocularon, mostrando unos pequeños halos, algunos de los antibióticos inoculados eran más fuerte que los otros ya que presentaban un halos con un diámetro más amplio en cambio los que tenían propiedades más débiles mostraban un diámetro pequeño en su halo. Ninguno de ellos presento un halo perfectamente circular, pero se pudo saber que tanta y cuál de ellos tie-nen mejor eficacia.

Bibliografía

Ferrer X., (2009). La levadura. Noviembre 26, 2014, de UAR Sitio web: http://www.cuinant.com/elllevat1.htm

UEA. (2007). Clasificación de Hongos. Noviembre 26, 2014, de Instituto Nacional de Biodiversidad de Costa Rica Sitio web: http://www.inbio.ac.cr/papers/hongos/clasificacion.htm

Anexos

Clasificación de hongos

De acuerdo con el Diccionario de Hongos (Hawksworth et al, 1995), este reino tiene aproxi-madamente 103 órdenes, 484 familias, 4.979 géneros y unas 80.000 especies descritas. Se divide en cuatro grupos o filos: Asco-mycota, Basidiomycota, Chytridiomycota y Zygomy-cota

 

Ascomycota

Es el grupo más grande. Estos hongos poseen for-mas muy variadas: de copa, botón, disco, colme-na y dedos, entre otras. Agrupa una gran cantidad de hongos patógenos de plantas y animales y aquellos que crecen sobre alimentos, además algunos que se pueden encontrar sobre cuero, tela, papel, vidrio, lentes de cámaras, paredes, etc. La característica principal, además de su forma, es la presencia de estructuras reproductoras mi-croscópicas llamadas ascas, que dan origen a las esporas. Las ascas están formadas por una célu-la especializada con forma de saco en cuyo inte-rior se forman las esporas. A las esporas produci-das por los ascos también se les llama ascospo-ras. Los líquenes pertenecen al reino de los Hon-gos porque tienen el mismo tipo de reproducción y el 99% de las especies conocidas pertenecen al Filo Ascomyco-ta (Ascolíquenes) y solamente 1% al Filo Basidiomycota.

Basidiomycota

Incluye aquellos hongos con forma de sombrilla, de coral,

Dibujo de Ascacon esporas

Dibujo de Basidiocon esporas

las orejas de palo, los gelatinosos, globosos y algunas levaduras, entre otros. También incluye los que tienen aspecto polvoriento o como man-chas y crecen sobre diversas estructuras de las plantas (flores, frutos, hojas, tallo o raíces). Algu-nos tienen importancia económica, como las ro-yas y los carbones.

 A nivel microscópico su característica principal es la presencia de estructuras reproductoras espe-cializadas o basidios, las cuales dan origen a las esporas pero en forma externa, generalmente en grupos de cuatro, aunque en algunas especies pueden encontrarse dos y seis esporas por basi-dio. Las esporas se conocen como basidiósporas.

Chytridiomycota

Grupo formado principalmente por hongos acuáti-cos microscópicos, aunque algunos pueden cre-cer también sobre materia orgánica en descom-posición u organismos vivos como gusanos, in-sectos, plantas y otros hongos. En este caso, las esporas, llamadas "zoosporas", poseen flage-los que les permiten moverse en medios líquidos. 

Zygomycota

Compuesto por hongos microscópicos que pue-den desarrollarse sobre materia orgánica en des-composición, aunque también se pueden encon-trar en el tracto digestivo de algunas especies de artrópodos, como los insectos.

Levaduras

Las levaduras se han definido como hongos mi-croscópicos, unicelulares, la mayoría se multipli-can por gemación y algunas por escisión. Este grupo de microorganismos comprende alrededor de 60 géneros y unas 500 especies. Histórica-mente, los estudios sobre microbiología enológica se han centrado en las levaduras pertenecientes al género Saccharomyces, que son las responsa-bles de la fermentación alcohólica. Anteriormente se creía que sólo ellas participaban en el proceso de producción de alcohol, sin embargo, las dife-rentes levaduras no-Saccharomyces, especial-mente durante la fase inicial de la fermentación, pueden influir en las propiedades organolépticas de las bebidas alcohólicas. El papel de las leva-duras como agentes fermentadores no fue reco-nocido sino hasta 1856 por Luis Pasteur. Las teorías científicas de esa época reconocían la presencia de éstas en la fermentación alcohólica, pero eran consideradas como compuestos quími-

cos complejos, sin vida. Esta era la teoría meca-nística liderada por los químicos alemanes von Liebig y Wöhler. Luis Pasteur, propuso la teoría vitalística y demostró que las células viables de levaduras causan fermentación en condiciones anaerobias; durante la cual el azúcar presente en el jugo es convertido principalmente en etanol y CO2.

Las levaduras son los agentes de la fermentación y se encuentran naturalmente en la superficie de las plantas, el suelo es su principal hábitat encon-trándose en invierno en la capa superficial de la tierra. En verano, por medio de los insectos, polvo y animales, son transportados hasta el fruto, por lo que su distribución se produce al azar. Existe un gran número de especies que se diferencían por su aspecto, sus propiedades, sus formas de reproducción y por la forma en la que transforman el azúcar. Las levaduras del vino pertenecen a varios géneros, cada uno dividido en especies. Las especies más extendidas son Saccharomy-ces ellipsoideus, Kloeckera apiculata y Hanse-niaspora uvarum, las cuales representan por sí solas el 90% de las levaduras utilizadas para la fermentación del vino. Como todos los seres vi-vos, tienen necesidades precisas en lo que se refiere a nutrición y al medio en que viven. Son muy sensibles a la temperatura, necesitan una alimentación apropiada rica en azúcares, elemen-tos minerales y sustancias nitrogenadas, tienen ciclos reproductivos cortos, lo que hace que el inicio de la fermentación sea tan rápido, pero así como se multiplican, pueden morir por la falta o el exceso de las variables mencionadas.

Mohos

Los hongos (moho) son organismos microscópi-cos que viven en la materia animal o vegetal. Ayudan en la descomposición de la materia muer-ta y a reciclar los nutrientes en el medio ambiente. Se encuentran presente prácticamente en todas partes y se les puede encontrar creciendo en materia orgánica como el suelo, los alimentos y la

materia vegetal. Para poder reproducirse, el moho produce esporas, las cuales se propagan a través del aire, el agua o a través de insectos. Estas esporas actúan como semillas y pueden propiciar un nuevo crecimiento de moho si las condiciones son apropiadas.

El moho crece y se multiplica en las condiciones adecuadas, necesitando apenas de la suficiente humedad para hacerlo (por ejemplo en forma de humedad muy alta, condensación, o agua prove-niente de una tubería, etc.) y de la materia orgáni-ca (por ejemplo paneles de techo, paneles de yeso, empapelados, o alfombras de fibra natural). 

Es un hongo que se encuentra tanto al aire libre como en lugares húmedos y con baja luminosi-dad. Existen muchas especies de mohos que son especies microscópicas del reino fungi, que cre-cen en formas de filamentospluricelulares o unice-lulares. El moho crece mejor en condiciones cáli-das y húmedas; se reproducen y propagan me-diante esporas. Las esporas del moho pueden sobrevivir en variadas condiciones ambientales, incluso en extrema sequedad, si bien ésta no favorece su crecimiento normal.

Los tipos de mohos más comunes son:

CladosporiumPenicilliumAlternariaAspergillusMucor