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Universidad Nacional del Nordeste - Facultad de Medicina - Microbiologiacutea e Inmunologiacutea

Recogida transporte y procesamiento general de las muestras en el laboratorio de Microbiologiacutea

INTRODUCCIOacuteN La actividad que desarrolla el laboratorio de microbiologiacutea estaacute orientada esencialmente al diagnoacutesti-co de las enfermedades infecciosas Una parte importante de esa actividad consiste en el aislamiento la identificacioacuten y la determinacioacuten de la sensibilidad a los antimicrobianos de los microorganismos causales de estas enfermedades Otra parte importante de la actividad de un laboratorio de microbiologiacutea consiste en la deteccioacuten de anticuerpos antiacutegenos y aacutecidos nucleicos en diversas muestras (sangre liacutequidos esteacuteriles orina etc) teacutecnicas que resultan muy uacutetiles en el diagnoacutestico precoz de determinadas enfermedades infec-ciosas La gran diversidad de muestras cliacutenicas y de meacutetodos diagnoacutesticos aplicables son dos aspectos que diferencian el laboratorio de microbiologiacutea de otros laboratorios cliacutenicos CONSIDERACIONES CLIacuteNICAS El primer paso del diagnoacutestico microbioloacutegico comienza con la obtencioacuten de la muestra cliacutenica ade-cuada Para ello es preciso conocer los posibles agentes etioloacutegicos de las enfermedades infecciosas y los mecanismos patogeacutenicos de los mismos La muestra debe ser representativa del proceso infeccioso que se pretende diagnosticar teniendo siempre en cuenta que en determinadas infecciones muestras no relacionadas directamente con la focalidad cliacutenica pueden tener tambieacuten un buen rendimiento microbioloacutegico El siacutendrome cliacutenico y los posibles agentes etioloacutegicos implicados condicionan no soacutelo el tipo de mues-tra a enviar sino tambieacuten su procedimiento de obtencioacuten y el transporte al laboratorio En la tabla 1 se resumen los distintos tipos de muestras adecuadas en funcioacuten de las infecciones maacutes comunes Igualmente la informacioacuten cliacutenica es la que permite al laboratorio aplicar las teacutecnicas diagnoacutesticas disponibles de manera maacutes eficiente Por ello es fundamental que el microbioacutelogo esteacute en estrecha comunicacioacuten con los meacutedicos cliacutenicos y que participe activamente en el proceso diagnoacutestico del paciente A su vez el laboratorio de micro-biologiacutea debe poner a disposicioacuten de los cliacutenicos toda la informacioacuten necesaria sobre las posibilidades diagnoacutesticas que el laboratorio ofrece Para ello debe elaborar y distribuir la cartera de servicios dis-ponible Al tomar una muestra para estudio microbioloacutegico hay que tener en cuenta si la misma proviene de una zona superficial con flora normal o de una profunda con o sin conexioacuten con el exterior En estos dos uacuteltimos casos hay que evitar la contaminacioacuten con flora normal Tabla 1- Muestras cliacutenicas recomendadas para el diagnoacutestico microbioloacutegico de las infeccio-

nes maacutes comunes

Tipo de infeccioacuten Muestra Comentarios Bacteriemia Hemocultivos Infecciones cardiovasculares y asociadas a dispositivos intravasculares (IV) Endocarditis HemocultivosVaacutelvulaVerrugas Infeccioacuten del cateacuteter Cateacuteter IV piel pericateacuteter conexioacuten del

cateacuteter

Pericarditis Liacutequido pericaacuterdico Sistema nervioso central Meningitis LCR Abscesos cerebrales Aspirados de abscesos

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Tabla 1 (Continuacioacuten)- Muestras cliacutenicas recomendadas para el diagnoacutestico microbioloacutegico de las infecciones maacutes comunes

Tipo de infeccioacuten Muestra Comentarios

Tracto respiratorio Faringoamigdalitis Exudado fariacutengeo A todo nintildeo con siacutentomas Sinusitis Aspirado sinusal No vaacutelidos los exudados

nasales Otitis media Timpanocentesis Otitis croacutenica y falla de trata-

miento Otitis externa Exudado oiacutedo externo Poco recomendado Neumonia Esputo muestras obtenidas por

fibrobroncoscopia puncioacuten transto-raacutecica aspirativa puncioacuten transtra-queal broncoaspirado

El esputo es la muestra me-nos representativa excepto en micosis y tuberculosis

Empiema y abscesos pulmona-res

Liacutequido pleural aspirados de abs-cesos

Coqueluche Virosis respiratorias

Nasofariacutengeo

Portacioacuten Hisopado nasal Deteccioacuten de S aureus Infecciones oculares Conjuntivitis Exudado conjuntivalraspado Queratitis Raspado corneal Endoftalmitis Liacutequido intraocular Infecciones gastrointestinales Diarrea HecesBiopsia intestinal

Aspirado duodenal

Infecciones intraabdominales Peritonitis Liacutequido peritoneal Abscesos intraperitoneales y abscesos viscerales

Aspirados de abscesos

Colecistitis Liacutequido biliar Tracto urinario Infeccioacuten urinaria Orina (miccioacuten media sonda) Orina obtenida mediante puncioacuten

suprapuacutebica Diagnoacutestico de bacte-riuria por anaerobios y de ITU en nintildeos

Tracto genital Uacutelceras genitales Raspado de la uacutelcera Noacutedulos genitales Aspirado del noacutedulo Uretritis Exudado uretral Vulvovaginitis Exudado vaginal Deteccioacuten de Sagalactiae

(tambieacuten exudado rectal ) Cervicitis Exudado endocervical Prostatitis Secrecioacuten prostaacutetica Acompantildeada de orina pre y

post masaje prostaacutetico

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Tipo de infeccioacuten Muestra Comentarios Piel y tejidos blandos Impeacutetigo foliculitis erisipela celulitis uacutelceras infecciones gangrenosas abscesos cutaacute-neos heridas y quemaduras

Preferiblemente aspirados tomados con jeringa y biopsias de tejido

No se recomien las muestras tomadas con hisopos

Hueso y articulaciones Artritis Liacutequido sinovial Acompantildear de hemocultivo Osteomielitis Biopsia oacutesea o exudado de fiacutestula Acompantildear de hemocultivo

RECOGIDA Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Toda la informacioacuten diagnoacutestica que puede generar el laboratorio de microbiologiacutea depende en gran medida de la muestra enviada Esta no soacutelo tiene que ser la adecuada sino que ademaacutes debe cumplir unos requisitos que aseguren su idoneidad y en consecuencia la calidad de nuestro trabajo La idoneidad de las muestras enviadas depende del cumplimiento de una serie de medidas o reglas referentes a procedimiento de obtencioacuten cantidad enviada y transporte raacutepido y adecuado al labora-torio Todas las normas y recomendaciones sobre estos aspectos se encuentran detalladas en el documen-to teacutecnico Las consecuencias de una muestra mal tomada yo mal enviada pueden suponer un fraca-so en el aislamiento del agente etioloacutegico o el aislamiento de posibles microorganismos contaminan-tes que pueden generar tratamientos innecesarios o inadecuados Para asegurar la idoneidad de las muestras que recibe el laboratorio de microbiologiacutea debe elaborar un manual claro y conciso de las normas de recogida y transporte de las mismas Dicho manual debe distribuirse en controles de enfermeriacutea consultas y demaacutes dependencias hospitalarias y ambulatorias en las que se asista a los pacientes Las muestras deben estar correctamente identificadas con el nombre del paciente y tipo de muestra y se acompantildearaacute siempre de una hoja de solicitud de anaacutelisis microbioloacutegico Se debe comprobar siempre que el contenedor de la muestra es adecuado y en caso contrario se procederaacute a rechazarla Seriacutea deseable que se hicieran constar en la peticioacuten datos cliacutenicos de intereacutes

TOMA DE MUESTRAS MAS FRECUENTES EN LA PRAacuteCTICA CLINICA HEMOCULTIVO A MATERIAL NECESARIO

Frascos de hemocultivo Ligadura de goma Jeringas y agujas de puncioacuten endovenosa Gasas esteacuteriles Guantes de goma esteacuteriles Alcohol etiacutelico o isopropiacutelico al 70 Solucioacuten Yodada

B OBTENCION DE LA MUESTRA

Retirar los tapones externos de los frascos Desinfectar los tapones de goma con alcohol iodado o con iodoacuteforo dejaacutendolo secar al menos un

minuto Localizar por palpacioacuten la vena que se va a puncionar Debe utilizarse una vena distinta para

cada extraccioacuten Realizar la desinfeccioacuten con alcohol una zona de piel de unos 10 cm de diaacutemetro Se comenzaraacute

por el centro y se iraacuten haciendo ciacuterculos conceacutentricos hacia el exterior Repetir el paso anterior pero con el alcohol iodado dejaacutendolo secar durante un minuto

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Extraer la sangre sin tocar en ninguacuten momento el campo desinfectado Si fuera necesario palpar nuevamente la vena se utilizaraacuten guantes de goma esteacuteriles o se desinfectaraacuten los dedos de la misma manera que la piel del paciente

Introducir la sangre en los frascos evitando que entre aire en el frasco para cultivo en anaerobio-sis La ventilacioacuten se realizaraacute en el laboratorio de Microbiologiacutea Mover los frascos para que la san-gre y el medio de cultivo se mezclen Introducir los frascos a 37ordmC C VOLUMEN DE LA MUESTRA La cantidad de sangre a introducir en cada frasco viene determinada por el modelo utilizado en cada hospital entre 15-20 ml por toma en adultos (A) y 1-5 ml en nintildeos (B)

C B A

Como norma general es adecuado que la sangre mantenga una proporcioacuten 110 con el medio de cultivo Es decir para un frasco de 100 ml introducir 10 ml de sangre En caso de neonatos y nintildeos pequentildeos en que no se pueden obtener voluacutemenes grandes de sangre es suficiente una cantidad de 1-3 ml que se introduce en un solo frasco (C) D NUacuteMERO DE MUESTRAS Tres hemocultivos por paciente previos al tratamiento antimicrobiano El intervalo entre las extraccio-nes debe ser superior a una hora cuando sea posible pero cuando exista una gran urgencia en iniciar el tratamiento este intervalo puede acortarse hasta 15 minutos utilizando diferentes venas o arterias para la extraccioacuten En caso de bacteriemia y endocarditis subaguda las extracciones se reparten en 24 horas y en caso de que sean los hemocultivos negativos obtener tres muestras maacutes al diacutea si-guiente E TRANSPORTE Deben enviarse al laboratorio lo antes posible Hasta su enviacuteo mantener a 35-37ordmC cuando esto no sea posible mantener a temperatura ambiente Nunca debe refrigerarse ni congelarse F OBSERVACIONES Cuando no haya venas accesibles puede realizarse la extraccioacuten de sangre arterial No son adecua-das las muestras procedentes de cateacuteter solamente en caso de que se sospeche infeccioacuten del propio cateacuteter y se complica su retirada se recomienda tomas del brazo opuesto y otras del brazo del cateacute-ter para saber si es intra o extraluminal En caso de sospecha de determinados microorganismos (Brucella spp Neisseria gonorrhoeae etc) ponerse en contacto con el laboratorio de Microbiologiacutea UROCULTIVOS 1 ORINA OBTENIDA POR MICCIOacuteN MEDIA A MATERIAL NECESARIO

Gasas esteacuteriles Jaboacuten neutro Recipiente de boca ancha con tapa de cierre hermeacutetico y esteacuteril Bolsas de plaacutestico o colectores esteacuteriles para nintildeos

B OBTENCION DEL PRODUCTO La muestra idoacutenea es el chorro medio de la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multipli-cacioacuten de bacterias durante la noche Teacutecnicas para mujeres

La paciente debe quitarse la ropa interior Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute con

una toalla limpia

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Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento hasta que se haya recogido la orina

Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se repetiraacute el proceso un total de 4 veces

Enjuagar cuidadosamente con agua hervida y enfriada para eliminar los restos de jaboacuten Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y sin

interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente El frasco debe sujetarse para que no tome contacto con pierna vulva o ropa del paciente Los

dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie interior Teacutecnica para hombres

Lavado de las manos con agua y jaboacuten Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo

momento hasta que se haya recogido la orina Limpiar el glande con jaboacuten neutro Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida y

enfriada Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25

mililitros para sin interrumpir la miccioacuten recogerse el resto de la orina en el recipiente esteacuteril Teacutecnica para nintildeos

En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos al acecho esperando que el paciente orine y descartando la primera y la uacuteltima porcioacuten de la orina y recogiendo el chorro medio

Aunque no es lo recomendado en nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina podraacute recogerse en colectores o bolsas esteacuteriles especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma

Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben retirarse y

enviarse al laboratorio para su procesamiento Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una nueva bolsa

C VOLUMEN MIacuteNIMO DE LA MUESTRA Es suficiente un volumen de orina de 5-10 ml D TRANSPORTE La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe refrige-rarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el transporte garan-tizaacutendose el que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma E OBSERVACIONES

En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas oportunas

Para la investigacioacuten de anaerobios es necesario que la orina se obtenga por puncioacuten suprapuacutebi-ca

Para la buacutesqueda de micobacterias la orina se recoge de la forma descrita anteriormente durante tres diacuteas consecutivos En este caso el volumen de orina debe ser 100-150 ml y se elegiraacute preferentemente la primera miccioacuten de la mantildeana Cuando se sospecha la presencia de hongos y virus el volumen de orina seraacute superior a 20 ml y en el caso de paraacutesitos se recogeraacute la orina de 24 horas 2 ORINA VESICAL Es la orina obtenida por puncioacuten suprapuacutebica o por citoscopia La pun-cioacuten suprapuacutebica requiere un buen conocimiento de la teacutecnica y de las precauciones que hay que adoptar con rigurosa asepsia descartando problemas de hemostasia y con la vejiga palpable y previa desinfeccioacuten y anestesia local se punciona eacutesta a 15 cm de la siacutenfisis pubiana en la

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liacutenea media estando el paciente en decuacutebito supino con una jeringa de 10 ml y con aguja larga (ca-libre 19) se aspira el contenido vesical En caso de orina obtenida por puncioacuten suprapuacutebica se enviaraacute al laboratorio lo antes posible en la misma jeringa de la extraccioacuten tras expulsar el aire de su interior y con la aguja pinchada en un tapoacuten de goma esteacuteril indicando en volante adjunto procedencia de la muestra o teacutecnica empleada para su recogida (dato importante a la hora de valorar el recuento de colonias) Indicaciones Evidencia cliacutenica del cuadro urinario con recuentos bajos o nulos neonatos y lactantes cateterizacioacuten contraindicada o dificultosa buacutesqueda de anaerobios y urocultivos repetidos con dos o maacutes bacterias HECES A MATERIAL NECESARIO

Recipiente de boca ancha para recoger las heces tipo orinal baciacuten o chata No es necesario que esteacute esteacuteril soacutelo es preciso que esteacute limpio No contendraacute restos de jabones detergentes desinfec-tantes o iones metaacutelicos

Recipiente esteacuteril de boca ancha y cierre hermeacutetico para enviar la muestra Puede ser vaacutelido el empleado para recoger orinas aunque es preferible utilizar un recipiente que tenga espaacutetula para tomar la muestra de las heces

Medios o sistemas de transporte para heces Se emplean soacutelo si la remisioacuten de la muestra se retrasa y los distribuye el laboratorio de Microbiologiacutea Existen sistemas comerciales para bacterias (Cary-Blair o modificaciones o solucioacuten de glicerol tamponado) o para paraacutesitos con el fin de fijarlos [PVA (alcohol poliviniacutelico 10 de formalina) SAF (acetato soacutedicoaacutecido aceacuteticoformalina) MF]

Espaacutetulas cucharillas o depresores B OBTENCIOacuteN DE LA MUESTRA

Si son formadas o pastosas se toma una porcioacuten del recipiente donde hayan sido emitidas y se transfieren al sistema elegido para el enviacuteo al laboratorio Se seleccionan zonas donde haya sangre moco o pus

No son vaacutelidas las muestras contaminadas con orina No debe utilizarse para la recogida papel higieacutenico porque suelen tener sales de bario que inhiben algunas bacterias enteropatoacutegenas C VOLUMEN MIacuteNIMO Heces formadas o pastosas al menos 1 oacute 2 gr para virologiacutea antildeadir de 2 a 4 gr maacutes Muestras del tamantildeo de una nuez son muy adecuadas pues permiten realizar la mayoriacutea de las investigaciones posibles Heces liacutequidas entre 5 y 10 ml D TRANSPORTE Para el estudio bacterioloacutegico es suficiente enviar la muestra en un recipiente esteacuteril si se va a procesar en el plazo de 1 oacute 2 horas despueacutes de su emisioacuten En caso contrario se remite en un sistema de transporte para bacterias En ambos casos se mantiene en refrigeracioacuten hasta el procesamiento para evitar el sobrecrecimiento de la flora normal que puede enmascarar o destruir a los enteropatoacutegenos El friacuteo puede afectar la viabilidad de Shigella spp Es preferible enviar las muestras para estudio viroloacutegico sin medio de cultivo pues este diluye las partiacuteculas virales disminuyendo la sensibilidad Si su enviacuteo se retrasa mucho es necesario utilizar un medio de transporte Se enviaraacuten en recipientes colocados en hielo Para el estudio de paraacutesitos es uacutetil ademaacutes enviar una muestra pequentildea en un medio fijador Una parte en dos de fijador de alcohol poliviniacutelico E OBSERVACIONES

Las muestras para coprocultivo deberaacuten tomarse antes de la administracioacuten de antimicrobianos o agentes antidiarreicos Es conveniente tambieacuten evitar sobre todo para estudios parasitoloacutegicos la utilizacioacuten previa de antiaacutecidos y laxantes oleosos asiacute como de los compuestos habitualmente utiliza-dos para estudios radioloacutegicos digestivos (bario bismuto)

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Indicar siempre el juicio diagnoacutestico de presuncioacuten y si el paciente es menor de un antildeo Solicitar las investigaciones especiales expliacutecitamente (C difficile C perfringens S aureus etc) Si con la primera muestra no se detecta la presencia de enteropatoacutegenos es necesario enviar en

los diacuteas siguientes dos tomas adicionales En general para los estudios parasitoloacutegicos se deben enviar tres muestras tomadas en diferentes diacuteas HISOPADO FARINGO-AMIGDALINO A MATERIAL NECESARIO

Bajalenguas Hisopo de algodoacuten con o sin medio de transporte

B TEacuteCNICA Bajo visioacuten directa con la ayuda de un depresor lingual se tocaraacute con el hisopo en todas las partes con exudado membranas o inflamacioacuten Se deben frotar las criptas tonsilares y la faringe posterior No tocar nunca la mucosa oral lengua o uacutevula C NUacuteMERO DE MUESTRAS YO VOLUMEN Basta con un hisopo D TRANSPORTE Y CONSERVACIOacuteN No requiere medidas especiales para su transporte y conservacioacuten E OBSERVACIONES Se investigaraacute rutinariamente la presencia de estreptococos beta-hemoliacutetico del grupo A (S pyoge-nes) En las sospechas de difteria deberaacuten mandarse porciones de membrana un hisopo fariacutengeo y un hisopo nasofariacutengeo por viacutea pernasal ESPUTO En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria no es una muestra representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pre-tenda detectar y valoracioacuten adecuada del resultado A MATERIAL NECESARIO

Frasco esteacuteril de boca ancha y cierre hermeacutetico Suero fisioloacutegico esteacuteril y nebulizador

B TEacuteCNICA O METODOLOGIacuteA DE LA OBTENCIOacuteN DEL PRODUCTO

Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferente-

mente matinal De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el

esputo con nebulizaciones de suero fisioloacutegico esteacuteril (15 ml durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje postural o fisiote-rapia respiratoria C VOLUMEN MIacuteNIMO De 2 a 10 ml si es posible D TRANSPORTE Y CONSERVACION Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en heladera a 4ordmC E OBSERVACIONES

Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

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No es uacutetil para anaerobios No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (maacutes de 25 leu-

cocitos polimorfonucleares por campo de 100X y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo de 100X) LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIDEO A MATERIAL NECESARIO

Pantildeos esteacuteriles Guantes esteacuteriles Gasas esteacuteriles Alcohol etiacutelico o isopropiacutelico al 70 Povidona yodada Anesteacutesico local Jerinas de 5-10 ml Agujas de puncioacuten IM Troacutecares de puncioacuten lumbar de varios tamantildeos Tubos limpios y esteacuteriles Sistemas de presioacuten de LCR de un solo uso

B OBTENCIOacuteN DE LA MUESTRA Se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios interverte-brales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de uso 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la apli-cacioacuten del antiseacuteptico se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo las nor-mas de la maacutes estricta asepsia

Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido cefalorraquiacute-deo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca Generalmente el primero para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a Microbiologiacutea C VOLUMEN MIacuteNIMO

Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 ml aunque es preferible disponer de voluacutemenes superiores

Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 ml adicionales maacutes por cada uno de los estudios siendo deseable llegar a los 10 ml Para estudio de virus se necesita al menos 1 oacute 2 ml maacutes D TRANSPORTE El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrige-rarse pues se puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una investigacioacuten se envia-raacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en hemocultivo de anaerobios Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24 horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

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E OBSERVACIONES Como la meningitis suele surgir por un proceso bacterieacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente hemocul-tivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias habituales micobacterias anaerobios hongos o virus) EXUDADOS VAGINALES A MATERIAL NECESARIO

Camilla ginecoloacutegica Espeacuteculo esteacuteril Hisopos de alginato caacutelcico o Dacroacuten con medio de transporte

B TEacuteCNICA

Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es necesa-rio para lubricar utilizar agua templada)

Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su defecto del fondo del saco vaginal posterior (Veacutease figura)

Repetir la operacioacuten con el segundo hisopo C NUacuteMERO DE MUESTRAS YO VOLUMEN Se obtendraacuten dos hisopos uno destinado al estudio microscoacutepico y otro al cultivo D TRANSPORTE Y CONSERVACIOacuteN El enviacuteo de la muestra debe ser inmediato siempre que sea posible Cuando la muestra pueda procesarse antes de 15 minutos deberaacuten emplearse hisopos con medio de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacuten a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas E OBSERVACIONES Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealitycum deberaacute enviarse muestra endocervical Para completar el diagnoacutestico de vaginosis si la toma no se realiza en el servicio de Microbiologiacutea es imprescindible realizar en el momento de la misma la determinacioacuten del pH vaginal la produccioacuten de aminas volaacutetiles por la adicioacuten de KOH al 10 y observar caracteriacutesticas del flujo todos estos datos se consignaraacuten en el informe No deben utilizarse en los diacuteas previos a la recogida de la muestra soluciones antiseacutepticas vaginales oacutevulos ni pomadas EXUDADOS ENDOCERVICALES A MATERIAL NECESARIO

Camilla ginecoloacutegica Espeacuteculo esteacuteril Hisopos secos sin medio de transporte (para limpieza de exoceacutervix) Hisopos de alginato caacutelcico o Dacron con medio de transporte tipo Stuart-Amies Hisopos con medios de transporte especiacuteficos para

Mycoplasma y Chlamydia B TEacuteCNICA

Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica introduciraacute suavemente el espeacuteculo sin lubricar (o lubricado con agua templada)

Se limpiaraacute el exoceacutervix de secreciones vaginales con un hisopo seco

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Bajo visioacuten directa se comprimiraacute cuidadosamente el ceacutervix con palas del espeacuteculo y se introduci-raacute un hisopo en el canal endocervical con un suave movimiento de rotacioacuten

Se repetiraacute la operacioacuten con el segundo hisopo C NUacuteMERO DE MUESTRAS YO VOLUMEN Deberaacuten recogerse dos hisopos uno destinado al examen microscoacutepico y otro al cultivo Para investigacioacuten de Mycoplasma y Chlamydia se recogeraacuten dos hisopos maacutes con medios de trans-porte especiacuteficos D TRANSPORTE Y CONSERVACIOacuteN El enviacuteo de la muestra debe ser inmediato siempre que sea posible Cuando la muestra no pueda procesarse antes de 15 minutos deberaacuten emplearse hisopos con medio de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacuten a temperatura ambiente o preferentemente en estufa a 35-37ordmC hasta su procesamiento que seraacute siempre que sea posible antes de 3 horas No puede garantizarse la viabilidad de Neisseria gonorrhoeae transcurridas 6-8 horas E OBSERVACIONES Debe evitarse el uso de hisopos de algodoacuten ya que contienen aacutecidos grasos instaurados que pueden inhibir el crecimiento de Neisseria gonorrhoeae EXUDADOS URETRALES A MATERIAL NECESARIO

Hisopos uretrales finos con varilla de alambre no excesivamente flexible de alginato caacutelcico o Dacron con medio de transporte tipo Stuart-Amies

Gasas esteacuteriles B TEacuteCNICA

Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles Introducir el hisopo suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta penetrar unos 2 cm dentro

de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia trachomatis) Repetir operacioacuten con un segundo hisopo Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave de la uretra

contra la siacutenfisis del pubis a traveacutes de la vagina C NUacuteMERO DE MUESTRAS YO VOLUMEN Deberaacuten enviarse dos hisopos uno destinado al examen microscoacutepico y otro al cultivo D TRANSPORTE Y CONSERVACIOacuteN Debe ser inmediato Cuando no puedan procesarse las muestras antes de 15 minutos se utilizaraacuten hisopos con un medio de transporte Stuart-Amies que se mantendraacuten a temperatura ambiente o preferentemente en estufa a 35-37ordmC Las muestras se procesaraacuten siempre que se pueda antes de 3 horas y como maacuteximo en un plazo de 6-12 horas E OBSERVACIONES La muestra ha de recogerse preferentemente antes de la primera miccioacuten de la mantildeana si no es posible se deberaacute esperar al menos una hora tras la uacuteltima miccioacuten para recogerla

RECEPCIOacuteN Y PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS

EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una vez que la muestra se recibe en el laboratorio de microbiologiacutea el manejo de la misma incluye 1 Recepcioacuten de la muestra consiste baacutesicamente en determinar si la muestra cumple o no los re-quisitos de calidad necesarios para ser procesada Estos requisitos incluyen la correcta identificacioacuten de la muestra la valoracioacuten sobre si existe una cantidad adecuada para el estudio solicitado y la

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comprobacioacuten de las condiciones adecuadas de transporte y conservacioacuten Cada laboratorio debe elaborar y distribuir los criterios de aceptacioacuten y rechazo de las muestras 2 Procesamiento consiste en la preparacioacuten de las muestras la realizacioacuten de tinciones y la inocu-lacioacuten en los medios de cultivo para su posterior incubacioacuten En este proceso es preciso considerar a) el tipo de muestra enviada b) el diagnoacutestico cliacutenico del paciente y c) la peticioacuten solicitada El tipo de muestra enviada determina si requiere o no pretratamiento (centrifugacioacuten homogeneiza-cioacuten) previo a la inoculacioacuten de los medios de cultivo La informacioacuten cliacutenica del paciente es funda-mental para la seleccioacuten de los medios de cultivo a inocular y su posterior incubacioacuten De modo general en funcioacuten del tipo de muestra el laboratorio utiliza unos medios de cultivo prima-rios que permiten el aislamiento de la mayoriacutea de los agentes etioloacutegicos maacutes frecuentes de los distin-tos procesos infecciosos Sin embargo en ocasiones el siacutendrome cliacutenico puede estar causado por microorganismos poco frecuentes cuyo aislamiento requiere el uso de medios de cultivo especiacuteficos yo selectivos no habituales La sospecha de la participacioacuten de alguno de estos microorganismos poco habituales debe comuni-carse al laboratorio Igualmente el laboratorio debe dar a conocer a los cliacutenicos de su institucioacuten queacute microorganismos investiga rutinariamente y cuaacuteles debe especificar en la peticioacuten (cartera de servi-cios o cataacutelogo de pruebas) Todo el trabajo de un laboratorio de microbiologiacutea se convierte en inuacutetil si las muestras cliacutenicas que se reciben para el diagnoacutestico no son de calidad es decir no estaacuten correctamente recogidas y transpor-tadas al laboratorio en las condiciones adecuadas para la determinacioacuten que se solicita El laboratorio de microbiologiacutea debe proporcionar esta informacioacuten a los servicios solicitantes para que tanto la re-cogida como el transporte y la conservacioacuten se hagan de manera apropiada En la tabla 2 se puede consultar con maacutes detalle la muestra de eleccioacuten para cada determinacioacuten microbioloacutegica recipientes transporte y conservacioacuten de cada muestra Como reglas generales cabe indicar las siguientes 1 Antes de recoger la muestra considerar el riesgobeneficio de la recogida de la muestra para el paciente 2 La muestra debe transportarse en envases adecuados con cierres a prueba de fugas La recogida de la muestra deberaacute realizarse en condiciones de maacutexima asepsia evitando contaminaciones am-bientales del personal y del propio enfermo a la muestra y viceversa 3 La muestra debe etiquetarse con el nombre del paciente el servicio solicitante el tipo de muestra y la fecha de recogida En determinados casos seraacute importante precisar la hora de recogida 4 Se recomienda que cada muestra se introduzca en una bolsa de plaacutestico que a su vez se introduci-raacute en otra donde se incluya el volante Asiacute se evita que los posibles derrames de la muestra invaliden el volante de peticioacuten 5 Se debe recoger una cantidad de muestra adecuada a la peticioacuten En ocasiones una escasa canti-dad de muestra puede ser la causa de falsos negativos 6 El material destinado a cultivo no debe estar en contacto con sustancias desinfectantes o anesteacutesi-cas siempre que sea posible 7 La muestra se debe recoger siempre que sea posible antes de iniciar cualquier terapia antimicro-biana 8 Se debe evitar siempre que sea posible el contacto de la muestra con microbiota normal del pa-ciente con el objeto de asegurar que la muestra refleje lo mejor posible el lugar de la infeccioacuten 9 El enviacuteo al laboratorio de microbiologiacutea debe ser lo maacutes raacutepido posible con objeto de asegurar la supervivencia de microorganismos de difiacutecil crecimiento y de evitar el sobrecrecimiento de la micro-biota normal acortar el tiempo de contacto con anesteacutesicos locales o con otras sustancias con accioacuten antimicrobiana utilizadas en la recogida de la muestra

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Tabla 2- Transporte y conservacioacuten de muestras para diagnoacutestico microbioloacutegico

Tiempo y temperatura Muestra Determinacioacuten Envases

TRANSPORTE CONSERVACIOacuteN

Abscesosheridas que-madurasmordeduras

Bacterias jeringa sin aguja lt2 h TA lt24 h TA

Biopsias BacteriasHongos Esteacuteril lt15 min TA lt24 h TA

Cateacutetermaterial proteacutesi-co

BacteriasHongos Esteacuteril lt15 min TA lt24 h 2-8degC

Genital (Secrecioacuten pros-taacutetica)

BacteriasHongos Esteacuteril lt2 h TA lt24 h TA

Genital (cervi-caluretralrectal)

Chlamydia tra-chomatis

Medio transporte chla-midia (cultivo) Hisopo seco (fluores-cencia)

Inoculacioacuten inmediata

Genital (cervi-calrectaluretral)

Bacterias (N gonorrhoeae)

Inoculacioacuten directa sobre medios de cultivo Hisopo con medio trans-porte

lt2 h TA

lt24 h TA

Genital (liacuteq amnioacutetico) BacteriasHongos Transporte de anaero-bios

lt15 min TA lt24 h TA

Genital (uacutelcera) (cual-quier localizacioacuten)

Treponema palli-dum

Campo oscuro Inmediata visua-lizacioacuten

Genital (Uretral) M hominis U urealyticum

Hisopo de dacroacuten Inocular en me-dio transporte de

micoplasmas

lt8 h TA lt36 h 2-8degC

Genital (vaginal) BacteriasHongos Hisopo con medio trans-porte (cultivo) Hisopo seco para Gram

lt2 h TA lt24 h TA

Heces Bacterias Esteacuteril con Cary Blair lt2 h TA lt24 h 2-8degC

Lesiones fuacutengicas (piel pelo untildeas)

Hongos Inoculacioacuten directa sobre medios de cultivo

lt24 h TA

Liacutequidos esteacuteriles Bacterias Frascos de hemocultivos transporte para anaero-bios


Hongos Esteacuteril lt15 min TA lt24 h 2-8degC

Virus Esteacuteril lt15 min 2-8degC lt72 h 2-8degC

Meacutedula oacutesea BacteriasHongos Esteacuterilbotellas de hemocultivos

lt24 h TA lt24 h TA

Ocular (Conjuntival) BacteriasHongos Hisopo con medio de transporte

lt2 h TA lt24 h TA

Ocular (Raspado cor-neal)

BacteriasHongos Inoculacioacuten directa en medios de cultivo


Oiacutedo interno BacteriasHongos Hisopo con medio de transporte Transporte para anaero-bios Tubo esteacuteril

lt2 h TA lt24 h TA

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Tabla 2 (Cont)- Transporte y conservacioacuten de muestras para diagnoacutestico microbioloacutegico



Orina BacteriasHongos Esteacuteril

lt2 h TA (sin conservante)

lt24 h 2-8degC

M hominis U urealyticum

Esteacuteril Inocular en me-dio transporte de

micoplasma

lt8 h TA

Leptospira Esteacuteril lt1 h TA

Orina suprapuacutebica Bacterias Transporte para anaero-bios


Rectal Bacterias Hisopo con medio de transporte

lt2 h TA lt24 h TA

Sangre Hemocultivo Botellas de hemocultivos lt2 h TA lt24 h TA

Tracto respiratorio supe-rior (sinusal)

Bacterias Transporte para anaero-biosEsteacuteril


Tracto respiratorio supe-rior (fariacutengeo)

BacteriasHongos Hisopo con medio de transporte

lt2 h TA lt24 h TA

Tracto respiratorio supe-rior (nasal)


lt2 h TA lt24 h TA

Tracto respiratorio supe-rior (nasofariacutengeo)

Bordetella per-tussis

Hisopo seco de alginato Inmediato2-8degC

Tracto respiratorio infe-rioresputo

BacteriasHongos Esteacuteril lt2 h TA lt24 h 2-8degC

Virus Esteacuteril Transferir a TV lt24 h 2-8degC

+24 h -60-80ordmC

Muestras del tracto respiratorio inferior aspirado bronquial lavado broncoalveolar cepillado por telescopado aspirado traqueal puncioacuten transtoraacutecica aspirativa con aguja ultrafina Abreviaturas TA temperatura ambiente TV medio de transporte de virus SAF acetato soacutedico-formalina FOR 10 formalina MIF mertiolato-ioduro-formalina pref preferentemente Tabla 3- Sistemas de transporte para la investigacioacuten de microorganismos anaerobios

Sistema de transporte Comentarios

Hisopos con sistemas de transporte especiacuteficos para anaerobios

Viales y tubos con atmoacutesfera anaerobia

Contienen un medio de transporte semisoacutelido con un agente reductor y un indicador Cualquier coloracioacuten azul de dicho medio indica exposicioacuten al aire

Bolsas de anaerobiosis La muestra se introduce en el interior de una bolsa impermeable en cuyo interior se introduce un catalizador y un generador de hidroacutegeno y CO2

Jeringa para la obtencioacuten de aspirados (no recomendado por problemas de bioseguri-dad)

Cuando no se dispone de ninguno de los sistemas anteriores o bien la cantidad de muestra es miacutenima puede utilizarse la misma jeringa con la que se ha obtenido Para ello hay que eliminar el aire y taponar la aguja con un tapoacuten de goma

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TOMA DE MUESTRAS PARA ESTUDIO MICOLOacuteGICO La eficacia con la que se realice un diagnoacutestico micoloacutegico correcto estaacute vinculado al grado de per-feccioacuten con el que se conjuguen algunas de las siguientes premisas El primer lugar es el meacutedico cliacutenico (meacutedico general internista infectoacutelogo hematoacutelogo dermatoacutelogo entre otros especialistas) quien sospecha la presencia de una micosis por lo cual debe conocer los siacutentomas y signos de la misma para solicitar al laboratorio la realizacioacuten de los estudios micoloacutegicos pertinentes El micoacutelogo va a ser decisivo en el diagnoacutestico dado que si eacuteste deja de realizar la observacioacuten dire-cta de las muestras (con fresco y coloraciones) o no selecciona para el cultivo los medios apropiados para el aislamiento de ciertas especies de hongos sea por omisioacuten o por no haber sido informado de la impresioacuten cliacutenica del meacutedico solicitante la posibilidad de establecer un diagnoacutestico final correcto puede perderse o quedar gravemente comprometida La micosis planteada asiacute como el estudio micoloacutegico y la seleccioacuten de la muestra a examinar estaraacute guiada por la forma de presentacioacuten cliacutenica Claacutesicamente seguacuten su localizacioacuten anatoacutemica las micosis se pueden dividir en superficiales der-mohipodeacutermicas profundas localizadas y sisteacutemicas Seguacuten el grado de patogenicidad del hongo se pueden dividir en micosis causadas por agentes opor-tunistas por patoacutegenos primarios con comportamiento oportunista o por patoacutegenos primarios Actualmente no debe olvidarse que hongos que no se consideraban patoacutegenos o se encontraban limitado a un solo oacutergano pueden causar enfermedad diseminada en el inmunodeprimnido En este contexto se debe tener en cuenta que el aislamiento de algunos hongos en piel mucosas u otros sectores puede no significar una afeccioacuten localizada sino que por el contrario ser la manifesta-cioacuten de una micosis sisteacutemica diseminada Conceptos generales middot Las muestras deben estar acompantildeadas de su respectiva solicitud en la que deben constar todos los datos solicitados por el laboratorio y los que el meacutedico considere relevante para el estudio middot El tipo de muestra recogida dependeraacute de la micosis sospechada y de su localizacioacuten anatoacutemica middot Los tubos viales frascos (vidrio o plaacutestico) donde se recolecten las muestras deben ser esteacuteriles y con tapoacuten hermeacutetico y correctamente identificadas Tipos de muestras maacutes usuales Las muestras en las que se realiza estudio micoloacutegico con mayor frecuencia son middot Escamas de piel middot Untildeas middot Pelos middot Exudados de lesiones mucosas middot Exudados de heridas noacutedulos subcutaacuteneos absceso subcutaacuteneos entre otros middot Hemocultivos middot Lavado bronquioloalveolar middot Expectoracioacuten middot LCR y otros fluidos bioloacutegicos middot Biopsias de oacuterganos middot Secreciones vaginales middot Coacuternea Muestras para estudio de micosis superficiales Este examen se solicita habitualmente para el diagnoacutestico de micosis superficiales tales como dermatofitosis candidiasis pitiriasis versicolor dermatitis seborreica entre otras Las dermatofitosis corresponden al parasitismo de la piel y sus anexos causada por un grupo de hon-gos queratinofiacutelicos y queratinoliacuteticos denominados dermatofitos Las candidiasis superficiales corresponden a las afecciones de piel y mucosas causadas por especies de levaduras del geacutenero Candida

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La pitiriasis versicolor es una afeccioacuten de la piel causada por levaduras del geacutenero Malassezia que se caracteriza por la aparicioacuten de maacuteculas hipohiperpigmentadas con descamacioacuten furfuraacutecea en dicho sector Es ideal que la toma de muestra para este estudio se realice en el laboratorio siendo el especialista quien selecciona la zona mas representativa de la afeccioacuten para realizar la toma En todos los casos el paciente sdeberaacute concurrir sin la colocacioacuten de cremas o talco ya que esto dificulta la observacioacuten de los elementos fuacutengicos Muestras de escamas de piel A- MATERIAL NECESARIO Placas de Petri esteacuteril hoja de bisturiacute B- TEacuteCNICA Se realizaraacute intenso raspado de la piel con hoja de bisturiacute en la zona afectada En lesiones topografiadas en piel glabra (cara cuello brazos piernas pies entre otros) se seleccionaraacute preferentemente las zonas en la que se observen bordes sobreelevados eritematosos y descaman-tes o en la periferia de las lesiones y en aquellos casos en los que presenten ampollas se seccionaraacute el techo de la misma Las escamas de piel recolectadas se colocaraacuten en Placas de Petri esteacuteriles C- NUacuteMERO DE MUESTRAS YO VOLUMEN Es recomendable la recoleccioacuten de material suficiente para la realizacioacuten de laacuteminas para examen directo y para un miacutenimo de 2 tubos de cultivo D- TRANSPORTE Y CONSERVACIOacuteN Si la toma de la muestra no se realiza en el laboratorio debe enviarse dentro de las 24 horas mantenieacutendose a temperatura ambiente E- OBSERVACIONES Se deberaacute tener en cuenta que la sensibilidad del estudio micoloacutegico estaacute directamente relacionado con la cantidad de material obtenido por lo cual la muestra a estudiar debe ser abundante Muestra de untildeas A- MATERIAL NECESARIO Placas de Petri y portaobjetos esteacuteriles bisturiacute de punta fina B- TECNICA La toma de material se realizaraacute colocando la punta del bisturiacute por debajo de la laacutemina ungueal y raspando firmemente tratando de llegar al liacutemite entre la zona sana y la afectada visualizado cliacutenicamente El material se recogeraacute sobre Placas de Petri y portaobjetos esteacuteriles En las onixis en las que predomine la afectacioacuten de la laacutemina externa de la untildea se obtendraacute la muestra mediante raspado intenso de dicha zona C- NUMERO DE MUESTRAS YO VOLUMEN Las mismas consideraciones que en el item anterior D- TRANSPORTE Y CONSERVACIOacuteN Si la toma de la muestra no se realiza en el laboratorio debe enviarse dentro de las 24 horas mantenieacutendose a temperatura ambiente E- OBSERVACIONES El paciente deberaacute concurrir con las untildeas previamente higienizadas mediante cepillado ya que los restos de polvo ambiental dificulta la visualizacioacuten de los elementos fuacutengicos y favorece la contaminacioacuten con hongos ambientales Cuero cabelludo A- MATERIAL NECESARIO Placas de Petri esteacuteril hojas de bisturiacute esteacuteril y pinzas sin dientes esteacuteriles B- TEacuteCNICA Para realizar la toma de material en las tintildeas de cuero cabelludo se recolectaraacuten escamas de la zona alopeacutecica (con peacuterdida de cabellos) mediante raspado intenso con hoja de bisturiacute luego se

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observaraacuten los pelos que esteacuten cliacutenicamente afectados y se extraeraacuten los mismos utilizando las pin-zas En los casos en los que se observen exudados purulentos se realizaraacute la recoleccioacuten del mismo con ansa bacterioloacutegica y se colocaraacute en una laacutemina de vidrio limpia extendiendo suavemente el material evitando los acuacutemulos luego se recolectaraacute material con jeringa esteacuteril si es abundante o con hisopo esteacuteril sin medio de transporte C- NUacuteMERO DE MUESTRAS YO VOLUMEN Las mismas consideraciones que en el iacutetem anterior D- TRANSPORTE Y CONSERVACIOacuteN Si la toma de la muestra no se realiza en el laboratorio debe enviarse dentro de las 24 horas mantenieacutendose a temperatura ambiente Lesiones mucosas A- MATERIAL NECESARIO Laacuteminas de vidrio limpias hoja de bisturiacute hisopo esteacuteril ansa bacterio-loacutegica (descartable o tradicional) suero fisioloacutegico B- TEacuteCNICA Se realizaraacute raspado de la zona afectada con hoja de bisturiacute el material asiacute obtenido se colocaraacute sobre la laacutemina de vidrio y se extenderaacute suavemente con movimientos conceacutentricos se repetiraacute el procedimiento hasta realizar unas 3-4 laacuteminas promedio eacutestas se destinaraacuten para colora-ciones si el material es abundante se colocaraacute entre laacutemina y laminilla para observacioacuten en fresco si es escaso se puede agregar una gota de suero fisioloacutegico para la realizacioacuten del mismo Por uacuteltimo se rasparaacute eneacutergicamente con ansa bacterioloacutegica esteacuteril y se cultivaraacute en los medios adecuados En el caso de que la toma se realice fuera del laboratorio o que no se cuente con alguno de los mate-riales antes mencionados (medios de cultivos ansas bacterioloacutegicas laminillas) se procederaacute de igual forma para la obtencioacuten de laacuteminas para coloraciones y luego se tomaraacuten 2 hisopos esteacuteriles humedecidos con suero fisioloacutegico esteacuteril se pasaraacute 2- 3 veces por la lesioacuten uno de ellos se destina-raacute para cultivos y el otro para el examen en fresco C- NUacuteMERO DE MUESTRAS YO VOLUMEN Es recomendable la realizacioacuten de varias laacuteminas para aumentar las posibilidades diagnoacutesticas D- TRANSPORTE Y CONSERVACIOacuteN Si la toma de la muestra no se realiza en el laboratorio debe enviarse dentro de las 2-4 horas siguientes mantenieacutendose la muestra refrigerada a 4ordmC en este lap-so de tiempo

E- OBSERVACIONES La desecacioacuten de los hisopos impide el procesamiento de la muestra

CRITERIOS DE ACEPTACIOacuteN Y RECHAZO DE LAS MUESTRASTOMA DE DECISIONES El laboratorio de microbiologiacutea debe determinar una vez recibida la muestra en el laboratorio si esta cumple con los requisitos para ser procesada Estos requisitos incluyen entre otros una correcta identificacioacuten tipo de muestra adecuada para la peticioacuten y condiciones adecuadas de transporte y conservacioacuten Es necesario que cada laboratorio establezca y difunda a los servicios peticionarios sus propios requisitos de la aceptacioacuten de una muestra para estudio microbioloacutegico El laboratorio de microbiologiacutea debe disponer tambieacuten de un sistema de registro de estas incidencias en el que figure la muestra implicada la persona que la recepciona el tipo de incidencia la persona con la que se contacta del servicio solicitante y la resolucioacuten de la incidencia (si la muestra no se pro-cesa si finalmente se decide su procesamiento y en queacute condiciones etc) Las incidencias maacutes frecuentes en la llegada de una muestra al laboratorio de microbiologiacutea y las acciones a realizar (toma de decisiones) ante cada caso son las siguientes - Muestra deficientemente identificada no se aceptaraacute una muestra sin identificar mal identificada o en la que no coincidan la identificacioacuten del volante de peticioacuten con la de la muestra En cualquier caso se contactaraacute con el servicio peticionario hacieacutendole conocer la necesidad de que procedan a la co-rrecta identificacioacuten de la muestra Si se puede recoger otra muestra se solicitaraacute nuevamente De-pendiendo de la importancia de la muestra se puede optar a su procesamiento antes de la correcta identificacioacuten con el objeto de que no se deteriore la misma - Muestras derramadas no se aceptaraacuten muestras claramente derramadas y se solicitaraacute una nueva muestra Se procederaacute como en el caso anterior solicitando una nueva muestra En el caso de no ser

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posible la recogida de una nueva muestra desinfectar externamente el envase o trasvasar la muestra a un contenedor esteacuteril En este caso se indicaraacute en el informe que la muestra estaba derramada y que los resultados deben ser interpretados con la debida precaucioacuten - Transporteconservacioacuten inadecuados si no se cumplen los requisitos de la tabla 2 se solicitaraacute nueva muestra En el caso de muestras que no se puedan volver a recoger (por ejemplo muestras quiruacutergicas) se puede optar por procesarlas informando por escrito al servicio solicitante de la inci-dencia en la recogidatransporte de la muestra y alertando de que los resultados obtenidos deben ser interpretados con la precaucioacuten correspondiente En el caso de que el transporte deficiente invalide totalmente el estudio microbioloacutegico (por ejemplo muestras en formol) no se aceptaraacuten estas mues-tras y se informaraacute al servicio solicitante de la inadecuacioacuten de la muestra MANTENIMIENTO DE MUESTRAS TRAS EL PROCESAMIENTO Es recomendable mantener las muestras conservadas (dependiendo de la muestrapeticioacuten a tempe-ratura ambiente en estufa de 35-37degC en nevera de 2-8degC o congeladas a -20degC oacute a -70degC) un tiempo tras su procesamiento El tiempo de conservacioacuten debe ser aquel que garantice que un problema en el procesamiento o en la interpretacioacuten de los cultivos pueda ser solucionado recuperando la muestra para un nuevo procesa-miento El tiempo miacutenimo oscila entre 1-3 diacuteas Se recomienda guardar tanto las muestras procesadas como las rechazadas (no procesadas) TRANSPORTE DE MUESTRAS POR SUPERFICIE Y POR VIacuteA AEacuteREA Cada vez es maacutes frecuente la realizacioacuten de procedimientos microbioloacutegicos en lugares distantes al de la toma de muestra Aunque es obvio que las muestras bioloacutegicas sean infecciosas o no deben estar correctamente em-paquetadas y etiquetadas para su transporte y enviacuteo se ha hecho necesario el desarrollo de legisla-ciones o guiacuteas especiacuteficas tanto a nivel nacional como internacional debido al aumento del transpor-te de muestras fuera de los recintos hospitalarios y entre los distintos centros sanitarios El Sistema baacutesico de embalaje para el traslado terrestre o aeacutereo de muestras se compone de

Recipiente primario estanco a prueba de filtraciones etiquetado que contiene la muestra El recipiente debe envolverse en material absorbente

Recipiente secundario estanco a prueba de filtraciones que encierra y protege el recipiente primario Se pueden colocar varios recipientes primarios envueltos en un recipiente secundario Se debe usar suficiente material absorbente para proteger a todos los recipientes primarios y evitar cho-ques entre ellos

Recipiente externo de enviacuteo El recipiente secundario se coloca en un paquete de enviacuteo que protege al recipiente secundario y su contenido de los elementos externos tales como dantildeo fiacutesico y agua mientras se encuentra en traacutensito

Sistema baacutesico de embalaje para transporte terrestre o aeacutereo de muestras bioloacutegicas



Tipo de infeccioacuten Muestra Comentarios

Tracto respiratorio Faringoamigdalitis Exudado fariacutengeo A todo nintildeo con siacutentomas Sinusitis Aspirado sinusal No vaacutelidos los exudados

nasales Otitis media Timpanocentesis Otitis croacutenica y falla de trata-

miento Otitis externa Exudado oiacutedo externo Poco recomendado Neumonia Esputo muestras obtenidas por

fibrobroncoscopia puncioacuten transto-raacutecica aspirativa puncioacuten transtra-queal broncoaspirado

El esputo es la muestra me-nos representativa excepto en micosis y tuberculosis

Empiema y abscesos pulmona-res

Liacutequido pleural aspirados de abs-cesos

Coqueluche Virosis respiratorias

Nasofariacutengeo

Portacioacuten Hisopado nasal Deteccioacuten de S aureus Infecciones oculares Conjuntivitis Exudado conjuntivalraspado Queratitis Raspado corneal Endoftalmitis Liacutequido intraocular Infecciones gastrointestinales Diarrea HecesBiopsia intestinal

Aspirado duodenal

Infecciones intraabdominales Peritonitis Liacutequido peritoneal Abscesos intraperitoneales y abscesos viscerales

Aspirados de abscesos

Colecistitis Liacutequido biliar Tracto urinario Infeccioacuten urinaria Orina (miccioacuten media sonda) Orina obtenida mediante puncioacuten

suprapuacutebica Diagnoacutestico de bacte-riuria por anaerobios y de ITU en nintildeos

Tracto genital Uacutelceras genitales Raspado de la uacutelcera Noacutedulos genitales Aspirado del noacutedulo Uretritis Exudado uretral Vulvovaginitis Exudado vaginal Deteccioacuten de Sagalactiae

(tambieacuten exudado rectal ) Cervicitis Exudado endocervical Prostatitis Secrecioacuten prostaacutetica Acompantildeada de orina pre y

post masaje prostaacutetico

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C B A





una toalla limpia

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B TEacuteCNICA








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Treponema palli-dum




micoplasmas



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micoplasma

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+24 h -60-80ordmC









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una toalla limpia

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una toalla limpia

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micoplasma

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lt2 h TA

lt24 h TA




Treponema palli-dum




micoplasmas



lt2 h TA lt24 h TA




lt24 h TA






lt24 h TA lt24 h TA


lt2 h TA lt24 h TA





lt2 h TA lt24 h TA

12







lt24 h 2-8degC



micoplasma

lt8 h TA





lt2 h TA lt24 h TA







lt2 h TA lt24 h TA



lt2 h TA lt24 h TA







+24 h -60-80ordmC









13



14



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lt2 h TA

lt24 h TA




Treponema palli-dum




micoplasmas



lt2 h TA lt24 h TA




lt24 h TA






lt24 h TA lt24 h TA


lt2 h TA lt24 h TA





lt2 h TA lt24 h TA

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lt24 h 2-8degC



micoplasma

lt8 h TA





lt2 h TA lt24 h TA







lt2 h TA lt24 h TA



lt2 h TA lt24 h TA







+24 h -60-80ordmC









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lt24 h 2-8degC



micoplasma

lt8 h TA





lt2 h TA lt24 h TA







lt2 h TA lt24 h TA



lt2 h TA lt24 h TA







+24 h -60-80ordmC









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