UNIVERSIDAD DE IXTLAHUACA C.U.I. INCORPORADO A LA UAEM.LICENCIATURA EN QUMICO FARMACUTICO BILOGOLABORATORIO INTEGRAL DE FARMACOLOGIAREPORTEProtocolo de investigacinComparacin de los efectos hipoglucemiantes de los frmacos Metformina y Glibenclamida en ratones con diabetes mellitus CATEDRTICO: M. en SHO. Juan Jaime Guerrero Daz del CastilloALUMNOS:Lpez Becerril Anayeli Pia Robles JessicaReyes Rios GenaroSnchez Ruiz CristelVallejo Gonzlez Csar GRUPO: 702

Ttulo: Comparacin de los efectos hipoglucemiantes de los frmacos Metformina y Glibenclamida en ratones con diabetes mellitus.Objetivo: comparar los efectos hipoglucemiantes de los frmacos Metformina y Glibenclamida en ratones con diabetes mellitus.IntroduccinIntroduccinLa Organizacin Mundial de la Salud (OMS) define la Diabetes Mellitus (DM) como un desorden metablico caracterizado por hiperglucemia crnica con alteraciones en el metabolismo de los hidratos de carbono, las grasas y las protenas derivado de defectos en la secrecin de insulina, en su accin, o en ambas.1

La DM tipo 2 (DM2) es una enfermedad progresiva en la cual la produccin de insulina disminuye segn progresa aquella, pero en los estadios iniciales el hecho patolgico ms significativo es la resistencia a la insulina. sta se desarrolla a partir de defectos genticos desconocidos combinados con factores ambientales, principalmente la obesidad y los hbitos sedentarios. Segn progresa la enfermedad la resistencia a la insulina permanece relativamente estable y la produccin de la misma disminuye progresivamente. 2

En Mxico, la cantidad de diabticos es del 7-12%, cifra semejante a la de algunos otros pases.3,4 El tratamiento de la diabetes mellitus se basa en cuatro aspectos fundamentales: educacin, dieta, ejercicio y frmacos.5,6 El tratamiento farmacolgico ms comn de diabetes mellitus es con agentes hipoglucemiantes orales (sulfonilureas y biguanidas) y/o insulina.7,8,9,10

Biguanidas (Metformina)

Mecanismo de accin: Tiene un efecto antihiperglucemiante por actuar a nivel extrapancretico, aumentando la sensibilidad a la insulina en tejido heptico y tejidos perifricos. En el hgado, reduce la produccin basal de glucosa al disminuir la glucogenlisis (degradacin del glucgeno a glucosa) y la gluconeognesis (sntesis de glucosa). En tejidos perifricos, especialmente a nivel del msculo, aumenta la captacin y utilizacin tisular de la glucosa. Tambinretrasa la absorcin intestinal de glucosa.11

Indicaciones: Est indicada en el tratamiento de la DM2, especialmente en pacientes con sobrepeso, cuando la dieta prescrita y el ejercicio por s solos no sean suficientes para un control glucmico adecuado. Puede utilizarse en monoterapia o en combinacin con otros antidiabticos orales o insulina.12

Eficacia: Su eficacia es similar a la de las sulfonilureas, consiguiendo reducciones de la HbA1c entre 1.5 y 2%, pero sin producir aumento de peso ni hipoglucemias, asocindose adems a reducciones de presin arterial, triglicridos y lipoprotenas de baja densidad (LDL).13Un 85% de los pacientes consiguen la mxima reduccin de HbA1c (2%) con dosis de 2000 mg, sin obtenerse reducciones adicionales cuando se llega a los 2500 mg.13

Efectos adversos: El efecto secundario ms frecuente es la diarrea (30%), que es dosis-dependiente, suele remitir al reducir la dosis del frmaco y mejora con el paso del tiempo. El efecto secundario ms grave, aunque muy poco frecuente, es la acidosis lctica con una incidencia de 0.01-0.067 casos por 1000 pacientes/ao y una mortalidad del 50%. La mayora de casos se han dado en individuos con insuficiencia renal o respiratoria, en los que la metformina estaba claramente contraindicada.14

Contraindicaciones: Est contraindicada en casos de insuficiencia renal (creatinina srica > 1.4 mg/dl), insuficiencia respiratoria o cardiaca crnicas, en insuficiencia heptica, en el embarazo y durante la lactancia. Tampoco debe usarse en casos de desnutricin importante (dficits de vitamina B12 y cido flico). Su utilizacin no es muy aconsejable en pacientes ancianos (mayores de 80 aos) y slo debe prescribirse si el aclaramiento de creatinina es superior a 60 ml/min/ 1.73 m2 (la creatinina srica no es una medida fiable de la funcin renal en las personas de edad avanzada).14

Sulfonilureas (SU)

Mecanismo de accin: Actan, principalmente, estimulando la secrecin de insulina por las clulas beta-pancreticas, siempre que el paciente mantenga un pncreas mnimamente funcionante. Se han descrito otros beneficios a nivel extrapancretico como la reduccin de la produccin heptica de glucosa o la mejora de la resistencia insulnica en tejidos perifricos, aunque la relevancia clnica de estas acciones no parece evidente.15, 16Los alimentos interfieren en su absorcin (excepto en el caso de glimepirida y gliclazida) 17, por lo que el frmaco se administrar al menos 30 minutos antes de la ingesta.

Indicaciones: Clsicamente, han sido consideradas de eleccin para el tratamiento en monoterapia de los pacientes con DM2 sin sobrepeso, cuando la dieta y el ejercicio fsico por s solos no son adecuados, y en los pacientes con sobrepeso cuando haya intolerancia o contraindicacin para el uso de metformina.17, 18

Eficacia: Son frmacos muy eficaces, consiguiendo reducciones de la HbA1c del 1.5 al 2%.19

Efectos adversos: El principal efecto secundario es la hipoglucemia, ms frecuente con el uso de SU de vida media prolongada (clorpropamida y glibenclamida) y el uso de dosis elevadas. Tambin la favorecen la edad avanzada, la disminucin u omisin de la ingesta, la insuficiencia renal o heptica y, en menor grado, el consumo de alcohol y frmacos que interfieren en su metabolismo y eliminacin.20

El propsito de este estudio fue comparar los efectos hipoglucemiantes de los frmacos metformina y glibenclamida en ratones con diabetes mellitus as como con ratones con hiperglucemia temporal inducida por una carga de glucosa.

Material y reactivos: Balanza granataria Bistur Cnulas para administracin oral Glucmetro Accu-Chek Active Tiras reactivas para glucmetro Metformina Glibenclamida Solucin salinaMaterial biolgico: 6 ratones

2.Se tomo muestra de la glucosa sangunea de cada raton.Diagrama de flujo

1.Se somete a los ratones previamente a la induccin de la diabetes mellitus

5. Se pesaron los ratones en una balanza granataria. Se diluyo en un vaso de precipitados cada uno de los frmacos los cuales fueron Metformina y Glibenclamina ( cada uno se diluyo por separado con agua destilada.3.Se somete a los ratones a un periodo de ayuno de 6 horas.

6.Se tomo la muestra de glucosa sangunea en cada uno de los ratones. (se consideraron los datos de glucosa inicial); se realizaron los clculos para administrar los frmacos por va oral con las dosis correspondientes

7. Se administraron posteriormente los frmacos por va oral. Al ratn 2 se le administro Metformina por va oral, y al primer ratn se le administro Solucin salina 2mg/kg por va oral y al ratn 3 se le administro Glibenclamida.

10. se tomaron muestras sanguneas cada 30 minutos , asi durante 3 horas. se concluyen los resultados.

ResultadosAnimales de experimentacin y diseo del experimento Se trabaj con ratones blancos, adultos, machos de entre 24-29 g. Se hicieron dos grupos de animales: uno de ratones sanos (trabajados durante la segunda sesin) y otro de ratones diabticos (trabajados durante la primera seion, 3 ratones para cada sesin. La diabetes se indujo por administracin de Aloxano intraperitoneal de tres dosis de 75 mg/kg de peso corporal en das alternados.

Durante los das posteriores, se midi la glucemia de los ratones por las maanas antes de la primera comida del da para observar el comportamiento de la glucosa sangunea en los ratones que fueron administrados con el Agente diabetgeno.

La medicin de la glucosa se realizo durante la maana antes de la ingesta de alimentos empleando el Glucmetro Accu-Chek Active.

26/10/201328/10/201330/10/2013

Grupo RatnPeso(g) Nivel de glucosa(mg/dL)Nivel de glucosa(mg/dLNivel de glucosa(mg/dL)

11(Diabetes)25.1113223343

2(sano)28.2------------

23(Diabetes)24.6123239361

4 (sano)27.5-------------

35(Diabetes)24.8110221317

6(sano)29.8------------

Para el primer experimento (Primera sesin) se trabajo con ratones administrados con Aloxano (Diabetes) con libre acceso a su alimento (sin ayuno), mientras que para el segundo experimento (segunda sesin) se trabaj con ratones sanos sometidos a un ayuno previo de 9 horas.

Con estos animales, en ambos experimentos, se formaron 3 grupos de 2 ratones cada uno de la siguiente forma:

Ratn Farmaco administradoVa de administracinDosis

Grupo 11(Diabetes)MetforminaOral

2(sano)Oral

Grupo 23(Diabetes)GlibenclamidaOral

4 (sano)Oral

Grupo 3 (Control)5(Diabetes)Solucin SalinaOral

6(sano)Oral

Discusin de resultados

El efecto de la administracin de Aloxano a los ratones previo a su estudio y la medicin de la glucosa sangunea durante los tres das posteriores a su administracin, mostraron que los niveles de glucosa se encontraban sobre el lmite normal para ratones (80-100 mg/dl) conforme pasaron los das.En los resultados para los ratones tratados con Aloxano, se observa que para el ratn No. 1 tratado con Metformina (una Biguanida), hay un valor de glucemia de 243 mg/dl a los 180 minutos mientras que para el ratn No. 3, administrado con una Sulfonilurea (Glibenclamida), el valor alcanzado despus de 180 min, fue de 123 mg/dl, este ltimo dato, indica un valor hipoglucmico causado por la accin de la Glibenclamida, fenmeno que no se observa con la administracin de Metformina (la Glibenclamida es un secretagogo de insulina, mientras que la Metformina facilita la captacin de glucosa por tejidos). Para los resultados obtenidos con el trabajo con ratones sometidos a una administracin de glucosa, los resultados muestras que para el ratn nmero 4, administrado con Metformina, el valor ms bajo de glucemia (a los 180 minutos) fue de 100 mg/dl, un valor que se encuentra dentro de los valores normales para en ratn (80-100 mg/dl) contrario con la Glibenclamida, se observa un efecto tambin de hipoglucemia muy marcado (80 mg/dl a los 180 minutos) que aunque esta dentro del valor normal, es tambin un efecto similar al producido en los ratones administrados con Aloxano.El mayor efecto en la disminucin en los niveles de glucosa sangunea lo tiene Glibenclamida (Sulfonilurea) seguido de la Metformina (Biguanida.)

La muestra de sangre se realizo con el Glucmetro Accu-Chek Active previamente calibrado segn las instrucciones del manual empleando solucin de glucosa. La muestra se obtuvo por puncin de la porcin distal de la cola del ratn empleando lancetas estriles.

Primer parte de la prctica 31/10/2013Clculos: (son los que estn en la bitcora)Dosis de administracin:Metformina: 40mg/kgGlibenclamida: 0.8mg/kgSolucin salina: 2mg/kgA partir de la tableta Metformina de 850mg se disolvi con agua destilada (30ml).

A partir de la tableta Glibenclamida de 500mg.

Clculos:C1v1=C2V2

v1= C2V2/ C1Ratn Peso(g)Metformina(mL) Glibenclamida(mL) Solucin salina(mL)

127.1Si No No

326.3No Si No

526.2No No Si

RATONES DIABETICOS

Dosis de los frmacos administrados en ratones Diabticos.Ratn Metformina(mL) Glibenclamida(mL) Solucin salina(mL)

10.5XX

3X0.8 X

5XX0.05

Niveles de glucosa antes y despus de la administracin de los frmacos en ratones con Diabetes mellitus.

Ratn No.Nivel de glucosa(mg/dl)

Farmaco Administrado0 min30min60min90min120min150min180min

1 Metformina348327311295282262243

3 Glibenclamida370365316227205185123

5 Sol. Salina325317319315318319317

Segunda parte de la prctica 07/11/2013Diagrama de flujo

Dosis de los frmacos administrados en ratones sanos.Ratn Metformina(mL) Glibenclamida(mL) Solucin salina(mL)

10.5XX

3X0.8 X

5XX0.05

Se administra glucosa (2mg/mL) despus de la administracin de los frmacos Metformina y Glibenclamida.

Niveles de glucosa antes y despus de la administracin de los frmacos en ratones sanos.

Nivel de glucosa(mg/dL)

Ratn No.Farmaco Administrado0min60min90min120min150min180min

2Solucin salina92125133117114111

4Metformina 83118123120120100

6Glibenclamida 9911012011711080

Preparacin de los reactivosMetformina Glibenclamidaaloxano