AISLAMIENTO DE LASPROTEÍNAS

TcTASV EN Tripomastigotes de Trypanosoma cruzi

Trypanosoma cruzi:– Enfermedad de Chagas– En el mundo hay entre 7 y 8

millones de personas infectadas por Trypanosoma cruzi (OMS, 2014) 

Tx:– Benznidazol y Nifurtimox– Fase crónica– Efectos secundarios graves (Berna,

2011).

INTRODUCCIÓN

NO EXISTE VACUNA PARA TRATAMIENTO Y/O PREVENCIÓN

ANTECEDENTESGarcía, et al., (2010) TcTASV: A Novel Protein Family in Trypanosoma cruzi Identified from a Subtractive Trypomastigote cDNA Library.

Enriquecidas por Ala, Ser y Val.

TcTASV

Tres subfamilias (A, B y C)

18 kDa, 27 kDa y 36 kDa.

Péptido señal de 57 al 72 aminoácidos

Genes ortólogos

ANTECEDENTES

Bernabó G, et al. (2013) TcTASV-C, a Protein Family in Trypanosoma cruzi that Is Predominantly Trypomastigote-Stage Specific and Secreted to the Medium.

~ 60 kDa en tripomastigotes.

Potencial de anclaje por glicosilfosfatidilinositol (Ser y Trh).

TcTASV-C sobrenadante en medio de cultivo

• La enfermedad de Chagas es curable cuando es detectada dentro de los

primeros meses de infección.

• TcTASV es una familia de proteínas recientemente descritas en cepas de

tripomastigotos que puede estar implicada en las estrategias de

supervivencia y/o la evasión del sistema inmune.

JUSTIFICACIÓN

Las proteínas TcTASV pueden ser un blanco específico para el desarrollo

de nuevas técnicas de diagnóstico en los primeros meses de infección del

parásito o de posibles vacunas de DNA que induzcan la síntesis de

anticuerpos específicos de tripomastigotos.

JUSTIFICACIÓN

• GENERAL

Aislar las proteínas TcTASV en tripomastigotos de Trypanosoma cruzi

• ESPECÍFICO

Aislar la subfamilia TcTASV-A

Aislar la subfamilia TcTASV-B

Aislar la subfamilia TcTASV-C

OBJETIVOS

ESTRATEGIA EXPERIMENTAL

Detergente no iónico (Tritón x-100)

Antiproteasas citosólicasTripomastigotos

Sonicación

1. Proteína quinasa A (PKA)2. Anticuerpo monoclonales:

Anti-fosfoserina [7F12, 1C8(IgM)]. Anti-fosfotreonina (1E11).

 Alexis Biochemicals (San Diego, CA)

Inmunoprecipitación Cromatografía por Inmunoafinidad

Subfamilia A—18 kDa Subfamilia B—27 kDa Subfamilia C—36 kDa

Lavar con tampón de lisis frío. Eluir por ebullición 6-8 min en tampón de

muestra (Mads G. et al.,2002)

Espectrometría de masas