Ao de la Diversificacin Productiva y del fortalecimiento de la EducacinUNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAOFACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL Y DE RECURSOS NATURALESIDENTIFICACION DE PROTEINAS MEDIANTE EL RACTIVO DE BIURETBasilio Rojas Mnica CarolineContreras Reynaga Kevin IrwingHinostroza Antonio EdilbertoHonores Suarez Milagros SheillaMendoza Guevara Julia GianellaPintado Pilco Jean Pierre Ruiz Castillo, Lizeth Paola PROFESOR: HERMAN AYALA VERAASIGNATURA: BIOQUIMICASEMESTRE: 2015-VCICLO: IVGRUPO HORARIO : 90-G Viernes: 3-6 pmMESA : 1FECHA DE ENTREGA: 27 de Febrero del 2015

Reconocimiento de protenas mediante el reactivo de BiuretI.-Marco Terico

Son macromolculas orgnicas, constituidas bsicamente por carbono (C), hidrgeno (H), oxgeno (O) y nitrgeno (N); aunque pueden contener tambin azufre (S) y fsforo (P) y, en menor proporcin, hierro (Fe), cobre (Cu), magnesio (Mg), yodo (I), etc.Estos elementos qumicos se agrupan para formar unidades estructurales llamados aminocidos, a los cuales podramos considerar como los "ladrillos de los edificios moleculares proteicos".Se clasifican, de forma general, en Holoproteinas y Heteroproteinas segn estn formadas respectivamente slo por aminocidos o bien por aminocidos ms otras molculas o elementos adicionales no aminoaciditos.1

AMINOACIDOSSon las unidades estructurales que constituyen las protenas. Todos los aminocidos que se encuentran en las protenas, salvo la prolina.2Un aminocido es una molcula orgnica con un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo (-COOH). Los aminocidos ms frecuentes y de mayor inters son aquellos que forman parte de las protenas. Dos aminocidos se combinan en una reaccin de condensacin entre el grupo amino de uno y el carboxilo del otro, liberndose una molcula de agua y formando un enlace amida que se denomina enlace peptdico; estos dos "residuos" de aminocido forman un dipptido. Si se une un tercer aminocido se forma un tripptido y as, sucesivamente, hasta formar un polipptido. Esta reaccin tiene lugar de manera natural dentro de las clulas, en los ribosomas.3

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CLASIFICACIN DE LAS PROTENAS. Las protenas se clasifican en dos clases principales atendiendo a su composicin. Las protenas simples u Holoproteinas son las que estn compuestas exclusivamente por aminocidos. Las protenas conjugadas o Heteroproteinas son las que estn compuestas por aminocidos y otra sustancia de naturaleza no proteica que recibe el nombre de grupo prosttico. Las protenas conjugadas pueden a su vez clasificarse en funcin de la naturaleza de su grupo prosttico. As, se habla de glucoprotenas, cuando el grupo prosttico es un glcido, lipoprotenas cuando es un lpido, metaloprotenas cuando es un ion metlico, fosfoprotenas cuando es un grupo fosfato, etc. Otro criterio de clasificacin de las protenas es la forma tridimensional de su molcula. Las protenas fibrosas son de forma alargada, generalmente son insolubles en agua y suelen tener una funcin estructural, mientras que las protenas globulares forman arrollamientos compactos de forma globular y suelen tener funciones de naturaleza dinmica (catalticas, de transporte, etc.)4ESTRUCTURA PRIMARIA

La estructura primaria es la secuencia de aminocidos de la protena. Nos indica qu aminocidos componen la cadena polipeptdica y el orden en que dichos aa. Se encuentran. Lafuncinde una protena depende de su secuencia y de la forma que sta adopte.

ESTRUCTURA SECUNDARIA

La estructura secundaria es la disposicin de la secuencia de aminocidos en el espacio. Los aa., a medida que van siendo enlazados durante lasntesis de protenasy gracias a la capacidad de giro de sus enlaces, adquieren una disposicin espacial estable, laestructura secundaria.

Existen dos tipos de estructura secundaria:La (alfa)-hliceLa conformacin beta

Esta estructura se forma al enrollarse helicoidalmente sobre s misma la estructura primaria. Se debe a la formacin de enlaces de hidrgeno entre el -C=O de un aminocido y el -NH- del cuarto aminocido que le sigue.

-Web 4En esta disposicin los aa. No forman una hlice sino una cadena en forma de zigzag, denominada disposicin en lmina plegada.Presentan esta estructura secundaria la queratina de la seda o fibrona.

ESTRUCTURA TERCIARIA

La estructura terciaria informa sobre la disposicin de la estructura secundaria de un poli pptido al plegarse sobre s misma originando una conformacin globular.En definitiva, es la estructura primaria la que determina cul ser la secundaria y por tanto la terciaria.

Esta conformacin globular facilita la solubilidad enaguay as realizarfuncionesdetransporte, enzimticas, hormonales, etc.Esta conformacin globular se mantiene estable gracias a la existencia de enlaces entre losradicales Rde los aminocidos. Aparecen varios tipos de enlaces:

Elpuente di sulfuroentre los radicales de aminocidos que tiene azufre. Lospuentes de hidrgeno Lospuentes elctricos Lasinteracciones hidrfobas.

ESTRUCTURA CUATERNARIA

Esta estructura informa de la unin, mediante enlaces dbiles (no covalentes) de varias cadenas polipeptdica con estructura terciaria, para formar un complejo proteico. Cada una de estas cadenas polipeptdica recibe el nombre deprotmero.El nmero de protmeros vara desdedoscomo en lahexoquinasa,cuatrocomo en lahemoglobina, o muchos como la cpsida delvirusde la poliomielitis, que consta de 60 unidades protecas.5PROPIEDADESEspecificidadLas propiedades de las protenas dependen de la estructura tridimensional en el medio acuoso, es decir, de los aminocidos que se disponen en su superficie, que son los que constituyen el centro activo; tambin de los aminocidos que se disponen hacia el interior, ya que son los que dan rigidez y forma a la protena.Cada protena tiene una conformacin segn su estructura primaria. As, un pequeocambioen la secuencia de aminocidos provoca cambios en la estructura primaria, secundaria, terciaria, y por tanto prdida de la actividad biolgica.

-Web 5SolubilidadLas protenas globulares son solubles en agua, debido a que sus radicales polares o hidrfilos se sitan hacia el exterior, formando puentes de hidrgeno con el agua, constituyendo una capa de solvatacin. Esta solubilidad vara dependiendo del tamao, de la forma, de la disposicin de los radicales y del pH.DesnaturalizacinPrdida de la estructura tridimensional o conformacin, y por tanto tambin de la actividad biolgica. Se produce al variar latemperatura,presin, pH, electronegatividad, etc. Esto provoca la rotura de los puentes de hidrgeno que mantienen las estructuras secundaria y terciaria, y las protenas se convierten en fibras insolubles en agua. Si las condiciones son suaves, el proceso es reversible, y si el cambio es ms drstico, es irreversible.6REACTIVO DE BIURETEl reactivo de Biuret est hecho de hidrxido de potasio y sulfato de cobre hidratado, junto con tartrato de sodio y potasio. Tartrato de sodio y potasio se aadi a lo complejo y estabilizar el reactivo ion cprico cambia de azul a violeta en presencia de protenas, azul a rosa cuando se combina con polipptidos de cadena corta.No todas las pruebas de Biuret requieren el reactivo de Biuret. El reactivo se utiliza comnmente en un ensayo de protenas de Biuret, un ensayo colorimtrico se utiliza para determinar la concentracin de protenas-tales como UV-VIS a 540 nm de longitud de onda.La prueba de Biuret es una prueba de producto qumico utilizado para la deteccin de la presencia de enlaces peptdicos. En la presencia de pptidos, un ion de cobre forma complejos de coordinacin de color violeta en una solucin alcalina. Varias variantes de la prueba han sido desarrolladas, tales como el ensayo de BCA y el ensayo de Lowry modificado.La reaccin de Biuret se puede utilizar para evaluar la concentracin de protenas debido a los enlaces peptdicos se producen con la misma frecuencia por cada aminocido en el pptido. La intensidad del color, y por lo tanto la absorcin a 540 nm, es directamente proporcional a la concentracin de protena, de acuerdo con la ley de Beer-Lambert.

-Web 6-Web 7A pesar de su nombre, el reactivo de hecho no contiene Biuret. La prueba se llama as porque tambin da una reaccin positiva a los bonos de tipo pptido de la molcula de Biuret.7

II.-Parte Experimental2.1.- Objetivo general: Reconocer protenas mediante el reactivo de Biuret.2.2.- Materiales y reactivos: De vidrio: 2 Tubos de ensayos 25mL. 4 Pipetas de 10mL. 4 Vaso precipitado de 200ml 1 matraz

De metal: Rejilla Otros: Lapicero Hojas bond Cmara

Reactivos Biuret Muestra 1 Muestra 2

Experimento N1: Objetivo especfico:Reconocer si la muestra 1 es una protena a travs de su reaccin con el reactivo de Biuret. Procedimiento 1. Coger un ml de muestra y colocarla en un tubo de ensayo.1. Agregar 5 gotas del reactivo de Biuret1. Agitar

Observaciones 1. Tener cuidado para evitar ms cantidad de la muestra1. Echar ms reactivo en el caso que demore en reaccionar1. No presenta precipitado, si reacciona. Presenta un color violeta

Experimento N2: Objetivo especfico:Reconocer si la muestra 2 es una protena a travs de su reaccin con el reactivo de Biuret. Procedimiento 1. Coger un ml de muestra y colocarla en un tubo de ensayo.2. Agregar 5 gotas del reactivo de Biuret3. Agitar

Observaciones 1. Tener cuidado para evitar ms cantidad de la muestra2. Diluir la muestra, y colocar dos gotas ms de reactivo para observar mejor la reaccin.3. Si reacciona. Precipita un color violeta y en el fondo del tubo una tonalidad azul cielo.

III.-RESULTADOS

REACCION EN LA MUESTRA 1BIURET

MUESTRA 1+

REACCION EN LA MUESTRA 2

BIURET

MUESTRA 2+

3.1.- Conclusin

La muestra 1 posee contenido proteico, por lo que se sospecha de una protena. La muestra 2 tambin posee contenido proteico, por lo que se sospecha de una protenas.3.2.- Recomendaciones: Cerciorarnos que los materiales estn limpios y secos, es especial los tubos de ensayo y pipeta que son con quienes ms trabajamos. Verificar que los materiales estn en perfecto estado. Al querer identificar una sustancia por el olor, debemos de ventilar hacia nuestro olfato, mas no olerlo directamente del tubo. Cerciorarnos de que los reactivos que se utilizaran estn completos en el laboratorio.

3.3.-Referenciales:

1)http://www.aula21.net/nutricion/proteinas.htm

2)http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qo3/Apuntes/Biuret.pdf

3) http://www.buenastareas.com/ensayos/Desnaturalizaci%C3%B3n-e-Hidr%C3%B3lisis-De-Prote%C3%ADnas/49489.html

4) http://es.slideshare.net/simargue/informe-de-quimica-desnaturalizacion-proteinas

5)http://web.educastur.princast.es/proyectos/biogeo_ov/2BCH/B1_BIOQUIMICA/t15_PROTEINAS/informacion.htm

6) http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-salud/bioquimica-estructural-y-metabolica/materiales-de-clase/Tema%203.%20Proteinas.%20Composicion%20y%20estructura.pdf

7) http://campodocs.com/articulos-utiles/article_104651.html