Dulce María Cordero Cordero

Introducción

Las células T CD4+ CD25+ FOXP3 + son células reguladoras naturales , que se cree cumplen un papel fundamental en la represión de la autoinmunidad y la tolerancia periférica.

Célula T

Aun se desconoce como se regula su supervivencia en la periferia

•CD4+ CD25+ FoxP3+ (naturales o inducibles por citoquinas;actúan por contacto célula-célula pero también dependen de la producción de citoquinas como IL-10 y TGF-b)

Generación de células T reguladoras naturales

TOLERANCIA: (ANERGIA) Es la inducción y mantenimiento de un estadode no respuesta de los LT o LB maduros hacia exo o autoantígenos encontrados en el compartimiento extratímico

Alguna evidencia muestra que los propios péptidos son importantes en la respuesta de manera homeostática de la expansión de células T reguladoras en la periferia.

Mecanismos de regulación de las células reguladoras

Estimulación

FAS

TCR

TREG células con privación de citocinas es causa de muerte, mientras que un consumo de citocinas en células T CD4 son causa de supresión de la apoptosis

La ausencia de esta población de células T provoca una respuesta aguda autoinmune; condición llamada Inmune disregulacióninmunitaria, poliendocrinopatía y enteropatía ligada alcromosoma X(IPEX) en el ser humano y es mortal en ratones .

Diferentes células reguladoras

Las pruebas muestran que los auto-péptidos son homeostáticamente importantes para la expansión de las células TREG en la periferia A pesar de la abundante disponibilidad de péptidos de ayuda , la frecuencia de células TREG siempre es de 10-15% Población CD4 +.

Aumento o disminución de los números TREG se traduciría en un desequilibrio inmunológico

LA IL-2 es un importante factor de supervivencia celular

Objetivo:

Demostrar el papel que juegan las células T reguladoras, y su supervivencia en la periferia

Material y Métodos

Animales de experimentación

•Balb/c

•C57bl/6

•129 Foxp3-Egfp Transgenico

•CB-17

Anticuerpos

Anti-CD3

Anti-CD28

Anti-CD25 Anti-CD25 conjugado con biotina

Fluoroseina isotiocianato conjugado con CD4

Ficoeritrina conjugado con anti-CD25

Ficoeritrina conjugado con anti IL-2

Anti IL-2

ELISA

IL-2

IL-7

IL-4

IL-15

IL-21

Cultivos celulares

Suplemento FCS

100 U/ml penicilina

100 µg/ml estreptomicina

2 m M glutamina

10 m M Hepes

1 m M piruvato de sodio

50 µ M B-mercaptoetanol

Purificación celular

Esplenocitos fueron cultivados 5 a 12 semanas

Incubado con FITC. Conjugado con anti-CD4 y biotina conjugado con anti-CD25

Se purificaron las células CD4 y se separaron del cultivo

Incubación de las celulas alfa biotina

90 a 95 % fueron positivas para CD4 y CD 25

Células muertas y cultivos

Las células muertas fueron medidas mediante citometría de flujo después de 4 días

(a) Viabilidad de células estimuladas por 4 días con anti-CD3 Y anti CD-28 , IL-2 fue añadido

(b) Proliferación de los cultivos celulares, ex vivo o estimulado con citocinas en una concentración de 20 ng/ml

(c) Viabilidad de las células estimuladas con diferentes citocinas

(c) Viabilidad de las células, bloqueando IL-2

(d) Proliferación de células CFSE labeled Foxp3+ Treg

(e) Microscopio confocal análisis de células reguladoras

(f) Células mostrando apoptosis en diferentes estados

Células reguladoras expresando citocinas y recetores de quimiocinas ex vivo

Células reguladoras susceptibles al bloqueo de citocinas apoptosis in vivo

Células estimuladas con diferentes citocinas y su nivel de CD25 y Foxp3

Experimentos de represión de IL-2 en células reguladoras

Conclusiones

•Estos datos tienen importantes implicaciones en la comprensión del comportamiento y la regulación de las células TREG. En este sentido, TREG demostraron que las células son muy sensibles a la apoptosis en ausencia de citocinas.

•Estos datos también revelan que Bim-/ - en ratones se acumulan frecuencias más altas de células TREG mostrando la importancia de la retirada de citocinas en la muerte, la regulación de las células periféricas TREG.

Por otra parte, las células TREG Bim-/ - en ratones no dependen de citocinas para la supervivencia in vitro.

Además de mejorar su supervivencia, las citocinas también mantienen la expresión de CD25 y Foxp3 por lo que las TREG células, mantienen así su potencial de supresión.

Por lo tanto, este estudio pone de relieve el importante papel de las citocinas en la regulación TREG , supervivencia

LTCD4+/CD25+ foxp3+ in vitro inhiben la transcripción de IL2 y la proliferación de otros linfocitos