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Beta-lactámicos e inhibidores de beta-lactamasas
¿Cómo los evaluamos in vitro?
María Dolores Rojo MartínServicio de Microbiología Hospital Regional Universitario de Málaga
SAMPAC 2019
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INDICE• Espectro y utilidad clínica: actividad frente a BLEE
• Efecto inóculo
• Problemas en el antibiograma: métodos de referencia y sistemas automatizados
• Diferencias EUCAST y CLSI:
Puntos de corte
Concentraciones fijas o no de inhibidores
Relación con nuevas categorías o definiciones
• Conclusiones
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Resistencia frente a AMC y PTZ
Hiperproducción de AmpCcromosómica
Producción OXA-1 Hiperproducción de SHV-1, TEM-1 TEM resistente a inhibidores (IRT)
Presencia de algunas BLEE Alteración de porinas (OmpF y/o
OmpC) AmpC plasmídica Carbapenemasas
BLIBL: amoxicilina/clavulánico (AMC) y piperacilina/tazobactam (PTZ)
Espectro de actividad
Gram positivos Estafilococos (excepto resistentes a meticilina), neumococo, estreptococos, enterococos
Gram negativos Enterobacterias* (BLEE), P. aeruginosa (PTZ), Haemophilus spp, Moraxella spp, Neisseria spp
Anaerobios La mayoría
*AMC, no activo frente a Enterobacterias con AmpC cromosómica; activo frente a H. pylori
Clavulánico y tazobactam “Inhibidores suicidas” de beta-lactamasas de clase A (TEM, SHV, BLEE)No inhiben carbapenemasas clase A (KPC, GES), clase B, C o la mayoría de clase DActividad bactericida tiempo-dependienteSAMPAC 2019
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BLIBL: amoxicilina/clavulánico (AMC) y piperacilina/tazobactam (PTZ)
Ventajas ecológicas
BLIBL actividad frente a Enterobacterias en IIA
Surveillance of antimicrobial resistance in Europe 2017
PTZ actividad frente a Pseudomonas aeruginosa
PTZ (% S) Carbapenemes (%S)
Europa 81,7 82,6
España 91,8 81,6
Microorganismo AMC (%S) PTZ (%S)
Escherichia coli 84,2 92,8
E. coli BLEE 54,3 81,2
Klebsiella pneumoniae 78 81,3
K. pneumoniae BLEE 12,5 69,4%Estudio SMART en España (2016-2017)Cantón R et al. Rev Esp Quimioter 2019;32: 145-155
Presión de selección disminuida sobre BLEE, resistencia a carbapenémicos (CARB), C. difficile
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BLIBL: tratamiento infecciones por Enterobacterias BLEE y AmpC
Inhibidores de beta-lactamasas inhiben BLEE BLIBL activos frente a BLEE (sin otros mecanismos)
Producción de múltiples BLEEAmpCMutaciones proteínas de membrana externa
Reducción de eficaciaBLIBL
BLIIBL Aspectos positivos Aspectos negativos
AMC
No efecto inóculoProbablemente no inferior a CARB en I. urinarias y biliaresNo produce selección de P. aeruginosaAdecuado para terapia secuencial
No disponible para uso I.V. en muchos paísesVariable tasa de resistencia (>40% en BLEE)No activo frente a AmpC
PTZ Probablemente no inferior a CARB en I. urinarias y biliares
Falsa susceptibilidad en algunos sistemas automatizados Efecto inóculo (no relacionado con BLEE)Heterogénea tasa de resistencia (5-30% en BLEE)Más alta en AmpCDudas sobre eficacia en infecciones graves
Rodríguez-Baño J et al. Treatment of infections caused by extended-spectrum-betalactamase-, AmpC-, and carbapenemase-producing Enterobacteriaceae.Clin Microbiol Rev 2018; 31:e00079-17. https://doi.org/10.1128/CMR.00079-17.
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Limitaciones• Pacientes no muy graves (13% UCI), baja mortalidad• Solo bacteriemia por E. coli• Predominio del foco urinario o biliar (70%)• Dosis 4.5 g/ 6 h (dosis alta) >90%de los pacientes
Rodriguez-Baño J et al. β-Lactam/β-lactam inhibitor combinations for the treatment of bacteremiadue to extended-spectrum β-lactamase-producing Escherichia coli: a post hoc analysis of prospective cohorts. Clin Infect Dis 2012; 54:167–74
AMC y PIP/TAZ (si activos in vitro): alternativas a los carbapenémicos en bacteriemias por E. coli BLEE, sobre todocomo terapia definitiva.
Mortalidad y estancia hospitalaria según la terapia
Otros focos de elevado inóculo?? Infecciones graves??? K. pneumoniae???? Elevada CMI??? Dosis más bajas???
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Gutierrez-Gutierrez B et al. A multinational, preregistered cohort study of β-lactam/β-lactamase inhibitor combinations for treatment of bloodstream infections due to extended-spectrum-β-lactamase-producing Enterobacteriaceae. Antimicrob Agents Chemother 2016; 60:4159–69
Mortalidad comparable en en ambos gruposBacteriemia por K. pneumoniae BLEE mayor mortalidad a los 30 díasOR: 2.00 (1.01–3.88), p. 0,04
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Pacientes tratados con PTZ: menor supervivencia que los tratados con meropenem en bacteriemias por BLEEPacientes con riesgo de infecciones invasivas por BLEE, considerar tratamiento inicial con carbapenémicos
LimitacionesDosis 4.5 g/6 h (40%)No infusión extendida
Tamma PD et al. Carbapenem Therapy Is Associated With Improved Survival Compared With Piperacillin-Tazobactam for Patients With Extended-Spectrum β-Lactamase Bacteremia. CID 2015; 60: 1319–25
Terapia empírica: PTZ (103)/CARB (110)Terapia definitiva: CARBK. pneumoniae (68%), E. coli (31%), P. mirabilis (1%)Admisión UCI 34%Infecciones elevado inóculoCMI PTZ elevadas (≥ 4 μg/mL, 99%)
Pronóstico BLIBL/CARBMortalidad a 14 d: 17% vs 8% (P < .05)Mortalidad a 30 d: 26% vs 11% (P < .01)
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Tammma PD, Rodriguez-Baño J. The Use of Noncarbapenem β-Lactams for the Treatment of Extended-Spectrum β-Lactamase Infections. CID 2017:64
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BLIBL Infecciones baja-moderada gravedad Foco urinario o biliar CMI PTZ <4 µg/mL Dosis 4.5 g/ 6 h (o 4.5 g/8 h en perfusión extendida)
CARBAPENEMES Pacientes críticos Elevado inóculo CMI PTZ elevadas Al menos inicialmente
Factores que influyen en la eficacia de BLIBL en I. graves por BLEE
CMI BLIBL
Consecución objetivo PK/PD a dosis estandar
Dosificación: dosis elevada, infusión extendida
Género: E. coli/K. pneumoniae
Tipo de BLEE: blaTEM , blaCTX-M, blaSHV
Gravedad de la infección
Foco de la bacteriemia y control del foco
Efecto inóculo
Tammma PD, Rodriguez-Baño J. The Use of Noncarbapenem β-Lactams for the Treatment of Extended-Spectrumβ-Lactamase Infections. CID 2017:64SAMPAC 2019
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Harris PNA et al.JAMA 2018; 320: 984–94
MERINO TRIAL
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PTZ: tratamiento infecciones por Enterobacterias BLEE????
Utilidad comprometida por el EFECTO INÓCULO???
ESTUDIO DEL EFECTO INÓCULO (EI)Estudio de la susceptibilidad antimicrobiana diferentes inóculos: 105 UFC/mL (estándar) y 107 UFC/mL (elevado)
EI: Incremento ≥ 8 diluciones en la CMI con el inóculo elevado
Bacteria (inóculo estándar) sensible in vitro a Atb Bacteria (alto inóculo) resistente in vitro (in vivo?)
Efecto inóculo en un ATB Desaconsejado su uso en infecciones graves con elevado inóculo
PTZ: disminución de la eficacia en infecciones con elevada carga bacteriana
Efecto inóculo: CMI puede depender del nº de bacterias inoculadas en el ensayo
Afecta de manera pronunciada a ATBs beta-lactámicos en cepas que expresan beta-lactamasas
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L. López-Cerero et al. Comparative assessment of inoculum effects on the antimicrobial activity of amoxycillin–clavulanate and piperacillin–tazobactam with extended-spectrum b-lactamase-producing and extended-spectrum b-lactamase-non-producing Escherichia coli isolates.Clin Microbiol Infect 2010; 16: 132–136
AMC no se afecta por el EI
AMCSI
PTZ
HI
PTZSI
AMCHI
PTZ se afecta por el EI en los tres tipos de enzimas en E. coli BLEE y no BLEE
IMPLICACIONES CLÍNICAS????
EI: otros mecanismos no relacionados con la producción de beta-lactamasas
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EFECTO INÓCULO IN VIVO
¿¿Tiene relevancia in vivo??¿¿Clínicamente significativo????
.
ESTUDIOS CLÍNICOS EN HUMANOS: cefazolina en MSSA con EI in vitro, mal pronóstico in vivo
MODELOS ANIMALES: EI in vitro se traduce en farmacodinamia atenuada in vivo de los beta-lactámicos
• PTZ hay una buena correlación in vitro e in vivo con respecto al EI• IMP también reduce su eficacia frente a infección de elevado inóculo• AMC: la presencia de la beta-lactamasa CTX-M-14 reduce la eficacia en infecciones con una alta concentración
Docobo-Pérez F et al. Antimicrob Agents Chemother 2013; 57: 2109–13
Objetivo: comparar la eficacia de AMC, PTZ e IMP frente a diferentes concentraciones en tejidos de E. coli BLEE y no BLEE en modelo de sepsis murina.
EI en beta-lactámicos probablemente clínicamente significativo, aunque se necesitan más estudios clínicos
Lenhard JR, Bulman ZP. J Antimicrob Chemother 2019; 74: 2825–2843
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EFECTO INÓCULO : IMPLICACIONES EN EL ANTIBIOGRAMA
Ligeras desviaciones en el inóculo pueden dar lugar a variaciones significativas de CMI (cefepime y meropenem)EI significativo en BGN multirresistentes, puede afectar a la interpretación categórica
Inóculo recomendado Rango aceptado
CLSI 5 x 105 UFC/ml 2-8 x 105 UFC/ml
EUCAST 5 x 105 UFC/ml 3-7 x 105 UFC/ml
Lenhard JR, Bulman ZP. J Antimicrob Chemother 2019; 74: 2825–2843
EI puede ocurrir en concentraciones próximas a las recomendadas por CLSI y EUCASTCMI de beta-lactámicos puede afectarse por ligeros cambios en el inóculo bacterianoRecomendación laboratorios: utilizar inóculos precisos en el antibiograma
Smith KP, Kirby JE. The Inoculum Effect in the Era of Multidrug Resistance: Minor Differences in Inoculum Have Dramatic Effect on MIC Determination. Antimicrob Agents Chemother 2018; 62:e00433-18. https://doi.org/10.1128/AAC.00433-18.
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PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD EN BLIBLFACTORES DE VARIABILIDAD EN LOS RESULTADOS
DIFERENTES METODOLOGÍAS
DIFERENTES EQUIPOS
DIFERENTES CONCENTRACIONES DE INHIBIDORES
DIFERENTES CRITERIOS DE INTERPRETACIÓN
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SISTEMAS AUTOMATIZADOS
Exigencias: exactitud, reproducibilidad, rapidez
Discrepancias en E.coli (blaTEM) frente a PTZ en distintos métodos de referencia: DD, BMD, ADDD: variabilidad del observadorBMD y AD: discordancias del 39% (11 de 28 cepas)
Creely et al. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2013; 32:997–1002
VMEME
MinE
Combinaciones beta-lactámicos/inhibidores beta-lactamasas
MÉTODOS DE REFERENCIA
ISO 20776-2:2007: Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of performance of antimicrobial susceptibility test devices
CE≥ 90%, CC ≥ 90%, VME ≤ 3% (FDA<1,5%) y ME ≤ 3%
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PUNTOS DE CORTE MICRODILUCIÓN
AMCCLSI EUCAST
S I R S R
Enterobacterias ≤8/4 16/8 ≥32/16 <=8 >8
Enterobacterias(ITU no complicada)
- - - <=32 >32
EUCAST: concentración fija de clavulánico (2 mg/L)CLSI: ratio 2:1
2019
PTZCLSI EUCAST
S I R S R ATU*
Enterobacterias ≤16/4 32/4-64/4 ≥128/4 <=8 >16 16
P. aeruginosa ≤16/4 32/4-64/4 ≥128/4 ≤16 >16
Concentración fija de tazobactam (4 mg/L)
*ATU: área de incertidumbre técnica
+Diferente concentración de inhibidor (clavulánico)Diferentes
puntos de corteDIFERENTE
INTERPRETACIÓN=
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Díez-Aguilar MA et al. Performance of EUCAST and CLSI approaches for co-amoxiclav susceptibility testing conditions for clinical categorization of a collection of Escherichia coli isolates with characterized resistance phenotypes. J Antimicrob Chemother 2015; 70: 2306–2310
Distribución de CMI para el total de E. coli
CE: 25,6%160 cepas de E. coliMicrodilución (ISO 20776-1)Clavulánico: ratio 2:1 (CLSI)Clavulánico: 2 mg/L y 4 mg/L (EUCAST)
Criterio S (%) I(%) R(%)
EUCAST (2mg/L) 20,6 - 79,4
CLSI (ratio 2:1) 26,2 13,2 60,6
Agente antimicrobiano(CMI: 8 to 128 mg/L)
Ratio 2:1 Altas concentraciones de clavulánico
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La diferente concentración de clavulánico influye directamente en los resultados de los tests de susceptibilidad, especialmente en BLEEs.
Díez-Aguilar MA et al. Performance of EUCAST and CLSI approaches for co-amoxiclav susceptibility testing conditions for clinical categorization of a collection of Escherichia coli isolates with characterized resistance phenotypes. Antimicrob Chemother 2015; 70: 2306–2310
Distribución de CMI para E. coli BLEE
Una menor concentración de clavulánico resulta en una mayor resistencia a AMC
CE: 95%Ratio 2:1: 90% S2 mg/L 55% R4 mg/L: 95% S
Puntos de corte EUCAST ITU: BLEE 100% S
2 mg/L: sobreestima la resistencia??
¿Qué concentración de clavulánico correlaciona mejor con la clínica?
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Leverstein-van Hall MA et al. Consequences of switching from a fixed 2:1 ratio of amoxicillin/clavulanate (CLSI) to a fixed concentration of clavulanate (EUCAST) for susceptibility testing of Escherichia coli.J Antimicrob Chemother 2013; 68: 2636–40
Incremento % R a AMC en E. coli (19%-31%,P<0.0001)Mejor correlación con la evolución clínica
CLSI EUCAST
Distribución CMI E. coli. Phoenix: CLSI a EUCAST
Microdilución EUCAST (2 mg/L): mayor resistencia que difusión de discos y Etest (ratio 2:1)
Relación entre la CMI para E. coli por Phoenix (2 mg/L) y Etest (ratio 2:1) con la evolución clínica
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Diez-Aguilar M et al. Susceptibility testing and detection of β-lactam resistance mechanisms in Enterobacteriaceae: a multicentre national proficiency Study. International Journal of Antimicrobial Agents 2018; 51: 612–619
Laboratorios clínicos: CLSI (53,3%), EUCAST (46,7%)MicroScan Walkaway (61,7%), VITEK 2 (31,7%)
AMCVME (n=25, 8%)
EUCAST
E. coli ATCC 35218TEM-1 (CMI: 4/2-16/8 µg/mL)
(VME 92.6%)
APLICACIÓN CRITERIOS EUCAST FALSAS SUSCEPTIBILIDADESNo hay categoría I, variación en una dilución: cambio R a SRecomendación: concentración fija de clavulánico (2mg/L); Sistemas automatizados: ratio 2:1 clavulánico (CLSI)No detección de mecanismos de resistencia: 33% laboratorios no detectaron TEM-1 en E coli ATCC 35218
PTZCC (54.3%),
MinE (n=79, 45,7%)CLSI
E. aerogenesTEM-24 + pérdida de porinas
R en lugar de I
CLSI/EUCAST: concentración fija tazobactam (4mg/L); Sistemas automatizados 1 mg/L, 8 mg/L, ratio 2:1
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Gianni T et al. Assessment of the PhoenixTM automated system and EUCAST breakpoints for antimicrobial susceptibility testing against isolates expressing clinically relevant resistance mechanisms. Clin Microbiol Infect 2012; 18: E452–E458
EA global 97,3%, CA global 95.2%, VME 2,7%, ME 1,3%, MinE 4,7%
Enterobacterias (n=349) P. aeruginosa (n=110)
EA (%) CA(%) VME(%) ME(%) MinE(%) EA (%) CA(%) VME(%) ME(%) MinE(%)
AMC 328 (94) 318 (91.1) 8 (3,4) 23 (20,2) -a - - - - -
PTZ 345 (98.8) 332 (95.1) 0 3 (1,4) 14 (4) 110 (100) 105 (95.5) 2 (4.0) 3 (5) -a
Inestabilidad del inhibidor de beta-lactamasas Efecto específico de mecanismos de resistencia, como BLEES Potencial fluctuación de ± 1 log2 en ausencia de la categoría I en Enterobacterias
a. No existe la categoría I
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ATU: ÁREA DE INCERTIDUMBRE TÉCNICA
Intervalo de CMI o de diámetro de halo en los que la interpretación es incierta (superposición de organismos sensibles y resistentes)
2019
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ATU: ÁREA DE INCERTIDUMBRE TÉCNICA
2019
Especies ATB CMI (mg/L, ATU)
Diámetro de halo(mm, ATU)
Enterobacterias AMC - 19-20
PTZ 16 17-19
P. aeruginosa PTZ - 18-19
TRATAMIENTO DE LAS ATU EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
Comprobar posibilidad de detección de ATURepetir el testUtilizar otro método alternativoInformar los resultados en la ATU como “R” Discutir los resultados con el clínico
SAMPAC 2019
![Page 26: Presentación de PowerPoint · Limitaciones •Pacientes no muy graves (13% UCI), baja mortalidad •Solo bacteriemia por E. coli •Predominio del foco urinario o biliar (70%) •Dosis](https://reader031.fdocuments.ec/reader031/viewer/2022011814/5e57c5ea4d6e4f447115a3a6/html5/thumbnails/26.jpg)
CONCLUSIONES
BLIBL opción terapéutica en infecciones de baja-moderada gravedad, foco urinario o biliar
Partir de inóculos precisos para realizar el antibiograma de estos agentes
Necesidad de armonizar criterios para puntos de corte (EUCAST)
Concentraciones de inhibidor en los paneles se deben ajustar a los criterios utilizados
Utilizar periódicamente cepas de control de calidad para controlar la exactitud de los
resultados.
Los laboratorios de Microbiología deben conocer las áreas de incertidumbre y actuar para
asegurar en la medida de lo posible la exactitud del antibiograma y su correcta interpretación.
Área de antibiograma en el laboratorio donde se controlen todas las especificaciones
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¡Muchas gracias!
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