Práctica Nro 6 Diagnostico de Las Principales Micosis Oportunistas
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8/9/2019 Prctica Nro 6 Diagnostico de Las Principales Micosis Oportunistas
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PRCTICA NRO 6: DIAGNSTICO DE LAS PRINCIPALES
MICOSIS OPORTUNISTAS
OBJETIVO:
Al finalizar la prctica el estudiante estar en la capacidad de:
Establecer las diferencias macroscpicas y microscpicas de los
diferentes agentes de micosis oportunistas.
Las micosis oportunistas son infecciones fngicas que se presentan en
pacientes inmunocomprometidos, causadas por hongos que ien como
saprfitos en la naturaleza o en caidades de seres humanos.
!ualquier hongo saprfito, que sea termotolerante, puede transformarse en
patgeno secundario en el hu"sped inmunocomprometido.
Entre los principales agentes causales de micosis oportunistas se
encuentran:
Candida sp
Cryptococcus neoformans
Aspergillus sp
Zygomicetos
Pneumocystis jirovecci
Penicillium sp
CANDIDOSIS:
#icosis primaria o secundaria ocasionada por leaduras endgenas y
oportunistas del g"nero Candida, que pueden afectar piel, mucosas, estructuras
profundas y rganos internos.
DIAGNSTICO: $er esquema diagnstico en prctica de micosis
superficiales.
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CRIPTOCOCOSIS:
Es una micosis que afecta tanto a hombres como a animales, es
ocasionada por las tres ariedades de la leadura capsulada Cryptococcus
neoformans:
C. neoformans var. grubii, serotipo A
C. neoformans var. neoformansserotipo % y !
C. neoformans var. gattiserotipo &
Las ariedades grubii y neoformanshan sido aisladas de la naturaleza en
casi todo el mundo, en asociacin con e'crementos de aes, especialmente
palomas. La ariedad Gatti ha sido aislada de la naturaleza en asociacin con
detritos, flores y oquedades de numerosos rboles, entre ellos, los eucaliptos,
acacias, ficus y almendros.
El hombre adquiere la enfermedad por la inhalacin de blastoconidias poco
capsuladas ()*+ m- presentes en el ambiente. En el hospedero este patgeno
desarrolla una cpsula polisacrida protectora. e establece un foco primario
pulmonar que puede ser asintomtico en hospederos inmunocompetentes o
diseminada en inmunocomprometidos. Las presentaciones cl/nicas ms
frecuentes de la criptococosis son la meningitis y la meningoencefalitis, aunque en
menor frecuencia se pueden obserar lesiones en /sceras, hueso, piel, ri0on y
prstata.
La criptococosis es de distribucin mundial, afecta a ambos se'os y todas
las edades, aunque es poco frecuente en ni0os, y aquellos con enfermedad de
base que comprometan tanto la inmunidad celular como la humoral.
DIAGNSTICO
Muestra:
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L!1
Esputo, laado broncoaleolar
2rina
&iopsias
angre, m"dula sea
E'udado de ulceras, material purulento ecrecin prosttica.
Examen directo:
2bseracin entre lmina y laminilla
3inta china o nigrosina
!oloraciones histolgicas (4E, 5A, plata metenamina, mucicarmina de
#eyer, Azul de Alcin-
Al realizar una tincin negatia con la tinta china, se obseran
blastoconidias proistas de una pared bien definida y una cpsula refringente, con
o sin gemacin, redondas u oaladas de 6*7 m de dimetro y hasta de 8)*)9
m, dependiendo del tama0o de la cpsula (igura 69-. En las preparaciones en
fresco, para obserar la cpsula, se ba;a el condensador, se cierra el diafragma y
se obsera con poca luz.
igura 69: Leaduras encapsuladas de Cryptococcusneoformans (f lechas azules-. 3inta china.http:
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En los estudios histopatolgicos, la intensidad de la respuesta inflamatoria
a a depender del rgano y de las caracter/sticas del hospedero. 4ay formacin de
granulomas con necrosis.
Cultivo:
e realiza en Agar abouraud u otros medios de cultio sin ciclohe'imida,
ya que inhibe su crecimiento. e incuba a una temperatura de +) a +@ !,
temperaturas mayores o iguales a 69 ! inhiben su crecimiento. La colonia se
desarrolla en 6B horas, son blancas o amarillentas, lisas y brillantes, a los cinco
d/as toman un aspecto mucoide que recuerdan el aspecto de la leche
condensada. 5or ser el C. neoformans el nico g"nero que utiliza la enzima
fenolo'idasa, crece en medios con semillas pulerizadas de Guizotia abyssinica
(medio de taib o agar de semillas de niger o agar cido cafeico-, donde adopta
un color ocre. 3ambi"n se puede sembrar en un medio a base de semillas de
girasol.
Estudio inmunolgico:
5or el estado de inmunodeficiencia de los pacientes y por la escasa
antigenicidad de la cpsula que rodea al hongo, no se han obtenido ant/genos
adecuados para detectar hipersensibilidad retardada en los pacientes.
El diagnstico inmunolgico de criptococosis se establece mediante el uso
de la t"cnica de aglutinacin de part/culas de lte', la cual permite detectar
ant/genos polisacridos capsulares en las muestras cl/nicas.
ASPERGILOSIS
&a;o este t"rmino se incluyen una serie de enfermedades cl/nicamente
diferentes, pero producidas por especies de mohos hialinos septados, del genero
Aspergillus. Este grupo de hongos se caracteriza por tener distribucin mundial y
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ser ubicuos en la naturalezaC sin embargo, se presentan con mayor frecuencia en
ambientes hmedos, asociados con todo tipo de material orgnico como plantas,
tierras, telas, condimentos y filtros de aire acondicionado.
La clasificacin cl/nica de aspergilosis es muy comple;a y e'tensa, seconsideran tres grupos de enfermedades, basados en la asociacin establecida
entre el hongo y el hospedero: Aspergilosis por hipersensibilidad, colonizacin por
Aspergillus y Aspergilosis inasia.
DIAGNSTICO
Muestra:
Escamas, detrito subungueal Esputos, laado broncoaleolar
#aterial purulento o necrtico
&iopsias
4emocultios (raramente positios-
Examen directo:
En fresco, entre lmina y laminilla
D24 al 89*)9 con tinta
Fegro de clorazol E !alcofluor
!oloraciones histolgicas (4E, 5A, plata*metenamina-
Al e'amen directo se obseran hifas hialinas, septadas, con un dimetro de
+*7 m, de pared lisa y gruesa, con ramificaciones dicotmicas en ngulo de 6G. A
eces se obseran clamidoconidias. Las hifas proliferan en el te;ido con arreglo
radial o paralelo a esteC ocasionalmente las hifas e'iben caracter/sticas
morfolgicas at/picas y se en globosas, distorsioonadas y ms amplias que lo
usual, hasta de 8) m de dimetro, con escaso o ningn septo, por lo que pueden
confundirse con las de zigomicetos.
En algunas muestras, especialmente en aquellas proenientes de otitis y
aspergiloma pulmonar y nasal, pueden encontrarse cabezas aspergilares. En los
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casos de aspergiloma, en las caidades pulmonares y de senos (paranasal,
etmoidal y ma'ilar-, se obseran masas o bolas del hongo, constitu/das por hifas
septadas dicotmicas, con proyeccin radiada. Las hifas no inaden la pared de la
caidad o caerna.
En las biopsias de aspergilosis inasora, se obseran numerosas hifas con
tendencia a proyectarse en forma radial. Las hifas, por crecer en la luz de los
asos y perforarlos, se en rodeadas de reas hemorrgicas e infiltrado
inflamatorio constitu/do principalmente por leucocitos polimorfonucleares
neutrfilos y grados ariables de necrosis.
Cultivo:
e realiza en abouraud con y sin antibiticos, Lactrimel o !zapeH. Es un
hongo de crecimiento rpido, + 6 d/as, son de color blanco, erde amarillo, caf"
o ro;izo y puede haber difusin del pigmento al medio de cultio. on de aspecto
aterciopelado, granuloso, pulerulento. Las caracter/sticas tanto macro como
microscpicas dependern de la especie deAspergillus (igura 68-.
igura 68: 5rincipales estructuras morfolgicas del g"nero Aspergillus.
III.uprm.edu
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Estudio inmunolgico:
Las pruebas serolgicas para la determinacin de anticuerpos son tiles en
pacientes al"rgicos y las pruebas de ant/genos lo son en las formas inasias.
5ueden realizarse J%%, Jnmunoelectroforesis, contrainmunoelectroforesis, ELJA y
fi;acin de complemento.
ZIGOMICOSIS:
&a;o este t"rmino se agrupan una ariedad de infecciones oportunistas
producidas por arios g"neros de mohos aceptados, pertenecientes a la clase
Kygomycetes, orden mucorales. on hongos termotolerantes, saprfitos, que se
a/slan con frecuencia de suelos y de materia orgnica en descomposicinC
tambi"n son contaminantes de alimentos y enda;es almacenados en ambientes
hmedos.
Las infecciones ms frecuentes producidas por estos hongos, pueden ser
clasificadas de acuerdo con su ubicacin anatmica en rinocerebral, pulmonar,
gastrointestinal, subcutnea y sist"mica, pero tambi"n pueden manifestarse en un
rgano aislado como cerebro, ri0n y corazn.
La mucormicosis es de distribucin mundial, no son factores
predisponentes la edad, el se'o y el tama0o del inculo.
DIAGNSTICO
Muestra:
&iopsias (se debe obtener material abundante y de buena calidad-
3e;idos necrticos
ecreciones
Aspirado de senos nasales y paranasales
Esputos, laado broncoaleolar.
Examen directo:
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En fresco, entre lmina y laminilla
D24 al 89 con o sin tinta
Fegro de clorazol E
!alcofluor
!oloraciones histolgicas (5A, 4E, plata*metenamina-.
e obseran hifas anchas, de @*8G m de dimetro, aceptadas o
infrecuentemente septadas, que se ramifican en ngulo de =9. on de paredes
delgadas y fle'ibles por lo que se doblan y colapsan, dando la apariencia de
falsos septos o de ramificaciones en diferentes ngulos y de cintas ms que de
cilindro.
Las tinciones usuales de las biopsias, tambi"n permiten la isualizacin de
los elementos micticos. e obsera edema y necrosis tisular. El infiltrado celular
es escaso y est constituido principalmente por polimorfonucleares neutrfilos.
Cultivo:
e realiza en agar abouraud sin ciclohe'imida y se incuban a +@ !. El
crecimiento es rpido (8) a 6B horas-, las colonias son eleadas y cubren toda la
superficie del medio de cultio. 5ara demostrar su patogenicidad se deben
realizar cultios repetidos y obserar la presencia del hongo en todos los tubos
sembrados. Las caracter/sticas macro y microscpicas an a depender de la
especie inolucrada.
NEUMOCISTOSIS:
Feumon/a ocasionada por el hongo Pneomocystis jiroveci (P. carinii-. Es
una infeccin cosmopolita oportunista muy bien reconocida y estudiada en los
pacientes infectados con el $J4. La infeccin se adquiere por /a a"rea. En
hospederos inmunodeficientes la infeccin cursa casi siempre con una neumonitis
bilateral con infiltrados intersticiales difusos. La taquipnea con disnea progresia,
la tos seca y la cianosis son los s/ntomas habituales. %esde el pulmn el hongo
puede diseminarse a otros rganos como ganglios linfticos, bazo, h/gado,
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corazn, medula sea y con menor frecuencia a cerebro, pncreas, timo, tiroides,
retina, coroides, o/do y piel, entre otros.
DIAGNSTICO
Muestra.
Laado broncoaleolar
!epillado bronquial
Esputos inducidos
&iopsias
Examen directo:
?iemsa, right %iff*MuiH
5lata*metenamina
Azul de toluidina 2
!alcofluor
e obseran trofozo/tos (ascosporas- y quistes (ascas- de P. jiroveci (P.
carinii-. Los trofozo/tos tienen un dimetro de 8*+ m, su ncleo es redondeado y
su citoplasma es de contornos irregulares. Los quistes constituyen solo el 8 de
los microorganismos, tienen 6*@ m de dimetro y su forma ar/a de redonda aooide, obserndose tambi"n formas colapsadas. 5oseen una gruesa pared
celular y estn proistos de una u ocho ncleos dependiendo de su estado de
maduracin.
El cuadro histolgico t/pico en cortes te0idos con 4E se caracteriza por un
e'udado intra*aleolar eosinfilo, espumoso, con aspecto de panal de abe;as, lo
cual se considera diagnstico an en ausencia de la demostracin de P. jirovecci
(P. carinii- mediante coloraciones especiales. En preparaciones te0idas con 5lata*metenamina, se aprecian claramente quistes y trofozo/tos.
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Cultivo:Aun no se ha podido recuperar en cultio.
Otros mtodos diagnsticos: Amplificacin del A%F por 5!1.
igura 68: Muistes de Pneumocystis jiroveci en pulmn (flechas-.
!oloracin histological 5lata*metenamina. %isponible en:
student.ccbcmd.edu
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ACTIVIDAD PRCTICA
%ibu;e las estructuras obseradas al microscopio de los principales agentes
de micosis oportunistas.
Candida spp Aspergillus spp
Cryptococcus
neoformans4ifas no septadas