“INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL” ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA GENERAL

PRÁCTICA NO. 14“AISLAMIENTO DE BACTERIAS A PARTIR DE PRODUCTOS BIOLÓGICOS”

OBJETIVO• Conocer algunas técnicas y medios de cultivo para el aislamiento y

cultivo de microorganismos a partir de productos biológicos.

• Reconocer que tipos de medios son los que se utilizan en este práctica y que componentes de su formulación les confieren sus características

La microbiota normal es el conjunto de microorganismos que se localizan de manera normal en distintos sitios de los cuerpos de los seres vivos. Esta microbiota normal está en relación simbiótica comensal con el hospedador, ya que también se obtienen ventajas de ellos tanto como ellos la obtienen del individuo; estos ayudan en la digestión del alimento, producen vitaminas y protegen contra la colonización de otros microorganismos que pueden ser patógenos.

Microbiota normal

El equilibrio entre las comunidades microbianas que conforman la microbiota del tracto gastrointestinal y de la vagina es de vital importancia para la salud del ser humano. Hay pocos parámetros fisiológicos e inmunológicos que no están profundamente afectados por la presencia y naturaleza de la microbiota normal del cuerpo, siendo la resistencia del huésped a las infecciones uno de los factores más prominentes.

Microbiota normal humana

Medios de Cultivo

Medio Mínimo

Medios que presentan la mínima cantidad de nutrientes, capaz de permitir el desarrollo de los microorganismos(Czapek, Medio E, Medio de Knop)

Medio Simple

Medios comunes, que solo tienen un tipo de infusión o extracto además de otros componentes.(Gelosa nutritiva, caldo nutritivo, PDA, etc.)

Medios selectivosSon aquellos que tienen uno o varios componentes en su formulación que inhibe a ciertos grupos de microorganismos permitiendo el crecimiento de otros.(Rosa de Bengala, Agar Verde Brillante, etc.)

Medio rico o enriquecidoSon aquellos que tienen una abundancia en la cantidad, variedad y calidad de los nutrimentos.

Son medios complejos, son adicionados de sangre suero, plasma extractos.

Ejem. ( BHI, Gelosa Sangre, Gelosa Chocolate, etc.)

Medios DiferencialesSon aquellos que permiten distinguir los microorganismos que crecen en ellos por diferencia en una actividad metabólica que en general se pone de manifiesto por una coloración, precipitación o hemólisis.

EMBEs utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales.

Medio selectivo y diferencial

Diferencial: Organismos fermentadores de lactosa.

Selectivo: El azul de metileno, Inhibe Gram (+)

MCCONKEY Medio selectivo y diferencial

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos.

Diferencial: Organismos fermentadores de lactosa. Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro)

Selectivo: La mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de Gram (+) .

SALMONELLA SHIGELLA AGAR Medio selectivo y diferencial

Para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.

Diferencial: debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio..

Selectivo: esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes

AGAR SAL Y MANITOL Medio selectivo y diferencial

Utilizado para el aislamiento y diferenciación de Staphylococcus.

Diferencial: Fermentadores de manitol.

Selectivo: Debido a su alta concentración salina. Los estafilococos coagulasa (+) hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa (-) , presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura.

AGAR GELOSA SANGRE Medio rico y diferencial

La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aún de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

Medio para propósitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos Mo´s.

α γβ

MÉTODOSI. Aislamiento de bacterias de materia fecal

1.- Tomar con el asa estéril una asada de materia fecal y depositarla en cada una de las placas con los medios de cultivo de EMB, MaC y SS.

2.- Aislar por estría cruzada.

3.- Incubar las placas a 37ºc por 24-48 hrs.EMB (S, D)

MaC (S, D)

SS (S, D)

Incubar a 37ºCPor 24-48 hrs

II. AISLAMIENTO DE BACTERIAS DE ORINA

1. Tomar con es asa estéril dos asadas de orina y depositarlas en cada una de las placas con los medios de cultivo de EMB, BHI, MaC y ASM

2. Aislar por estria cruzada.3. Incubar las placas a 37ºC por 24-48 hrs.

BHI (C, R)

ASM (S, D)

Incubar a 37ºCPor 24-48 hrs

EMB (S, D)

MaC (S, D)

III. AISLAMIENTO DE BACTERIAS DE EXUDADO FARÍNGEO

1. Tomar con un hisopo estéril un exudado faríngeo atendiendo a las instrucciones del profesor.

2. Depositar la muestra del hisopo en placas con agar sangre, BHI y ASM.3. Con el asa aislar por estría cruzada 4. Incubar las placas a 37ºC por 24-48 hrs.

Agar sangre (D, R)

ASM (S, D)

Incubar a 37ºCPor 24-48 hrs

BHI (C, R)

lV. AISLAMIENTO DE BACTERIAS A PARTIR DE OTRAS MUESTRAS BIOLÓGICAS.

1. Tomar con un hisopo estéril humedecido en agua una muestra de exudado de oído, piel lesionada, fosas nasales o abscesos.

2. Depositar la muestra del hisopo en placas con BHI, gelosa sangre y agar Stahpyloccoccus-sal-manitol. 3. Con el asa aislar por estría cruzada.4. Incubar las placas a 37ºC por 24-48 hrs.

Gelosa sangre

BHI

ASM

Incubar a 37ºC

Por 24-48 hrs(C, R)

(S, D)

Resultados: Morfología colonialCaracterísticas Eses Orina Faríngeo Nasofaríngeo OticoForma Filamentosa Circular Amiboide Circular AmiboideTamaño 3 mm 2mm 1 mm 3 mm 3 mmColor Rosa claro Roja Blanca Blanca AmarillaBorde Erosionado Entero Ondulado Entero OnduladoSuperficie Lisa Lisa Finamente

granulosaLisa Granulosa

Luz transmitida Traslucida Traslucida Opaca Traslucida OpacaLuz reflejada Brillante Brillante Mate Brillante MateElevación Convexa

planaPulminada Convexa

papiladaConvexa plana

Umbonada

Aspecto Húmeda Humeda Seco Húmeda SecaConsistencia Butirosa Butirosa Butirosa Butirosa ButirosaEfecto en el medio

(-) Lactosa (+) (-) Hemolisis β (-)

Medio de cultivo Mac Mac GS GS GS

Características

Eses Orina Faríngeo Nasofaríngeo

Otico

Gram (-) (-) (+) (+) (-)Forma Bacilos Bacilos Cocos Cocos CocosAgrupación Diplobaci

losAislados Racimos Racimos Racimos

Esporas (-) (-) (-) (-) (-)

Morfología microscópica

• Manafi, M, & W. Kneiffel. 1990 M. métodos rápidos de identificación de Gram positivos, de gram negativos. Aerobias y bacterias anaerobias facultativas. J. Apbl , Bateriol.69:822-827

• Tannock, G. W. (1998). Microbiota normal: nuevos conceptos. Ciencia microbiológica 5: 4-8

BIBLIOGRAFIA