Universidad Nacional Mayor de San Marcos Facultad de Medicina

Escuela Acadmico Profesional de Nutricin

Curso de Bioqumica

Informe de Laboratorio N1

FOTOCOLORIMETRIA - METODO GRAFICO Y ANALITICO

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE UNA MUESTRA

Grupo B Mesa N 6

Cuti Zanabria Israel Domingo Delgado Jimenez Danesy Maynne

Eslava Juarez Ruth Noemi Fabian Nieto Roky Franklinn

Gallardo Bringas Arely Damarys

Blgo. Marco Antonio Nuez Fonseca

02 de abril

2015

INTRODUCCIN

La fotocolorimetra es la medida de la luz absorbida por una solucin mediante un aparato que es un fotocolormetro. El equipo consta de una fuente de luz artificial, un monocromador que separa exclusivamente luz de una sola longitud de onda (la que sea preferente para la medida), un recipiente o tubo de vidrio (que alberga la solucin a medir), una clula fotoelctrica que transforma la luz trasmitida en corriente elctrica y una unidad de medida de la corriente elctrica o galvanmetro.

Cuando hablamos de fotocolorimetra nos referimos a una tcnica espectrofotomtrica, la cual utiliza la luz para poder medir la concentracin de una sustancia qumica. Se sabe que los electrones en las molculas se encuentran girando en niveles de energa bien definidos. En condiciones normales la molcula no est excitada y los electrones se encuentran en el nivel ms bajo, si la molcula absorbe energa, los electrones pasan del nivel ms bajo a otro de energa ms elevada. En el nuevo estado tanto la molcula como los electrones se encuentran excitados y los tomos y molculas pueden emitir radiacin en todas las regiones del espectro, pero son la ultravioleta, visible e infrarroja los ms usados. Es importante decir que en un espectro de Absorbancia, se absorben diferentes longitudes de onda en distintos grados, es decir, la absortividad vara segn la longitud de onda. Es por ello que se utiliza para la prctica la longitud de onda ptima, medida en la cual se absorbe la mayor cantidad de sustancias presentes en la reaccin y en ella se cumple la Ley de Lambert y Beer.

El fundamento terico que nos permite establecer la relacin entre la absorbancia y la concentracin es la Ley de Lambert y Beer la cual nos dice que la absorbancia est directamente relacionada con las propiedades intrnsecas del componente, con su concentracin y con la longitud de la trayectoria del haz de radiacin al atravesar la muestra. La expresin matemtica es:

A = C. . L

A = Absorbancia de la muestra

C = Concentracin del cromforo

L = Longitud del paso ptico que contiene la muestra

= Absortividad molar. Depende del cromforo en s mismo, de la y de las condiciones de medida (pH, T...). Ya que la absorbancia es adimensional las unidades son concentracin1 longitud-1.

Esta ley nos permite establecer una relacin entre la absorbancia del estndar y la muestra problema, la cual nos da como resultado la siguiente frmula:

Concentracin de la M.P= Abs. de la M.P. X Concentracin del ST. / Abs. del ST.

La anterior frmula es la que nos permitir a travs del mtodo analtico obtener la concentracin de la muestra problema (MP), pero con algunas modificaciones ya que la nueva frmula ser:

Concentracin de la MP =Abs. MP. X Fc X Fd

El factor de calibracin es igual a la Concentracin del ST. / Abs. del ST. y el factor de dilucin es igual a la inversa de la dilucin hecha debido a que la absorbancia del estndar no se encuentra dentro del rango de absorbancia de las dems muestras.

Para el mtodo grfico se trazan coordenadas en un plano cartesiano, en donde el eje de las abscisas corresponde a las concentraciones de las muestras y el eje de las ordenadas corresponde a la absorbancia. Lo que se hace es trazar una lnea recta comenzando desde el cero y se observa si los puntos coinciden o no con la recta. Muchas veces esto no pasa y se da debido a cuan precisa ha sido la dilucin que la persona ha hecho. En este plano tambin se coloca la absorbancia de la muestra problema y se prolonga para saber, segn el grfico, cunto es el valor de la absorbancia aproximadamente. Lo que se busca es que haya correspondencia o al menos proximidad entre la concentracin obtenida de manera analtica y grfica.

Dentro de las aplicaciones de esta tcnica tenemos principalmente la aplicacin bioqumica ya que a travs de este mtodo podemos por ejemplo determinar la glucosa en sangre en un laboratorio de anlisis qumico, el anlisis cuantitativo de protenas, la determinacin de cidos nucleicos, concentracin de rea en la orina etc. En la parte de Bromatologa ayuda a saber el estado sanitario de un alimento conociendo la absorbancia de este. Ayuda tambin en el control de enfermedades y en la prevencin de posibles enfermedades que un alimento puede transmitir. Es por ello que resulta de vital importancia conocer el mtodo da la fotocolorimetra.

OBJETIVOS

Comprender el uso de la fotocolorimetria , mtodo ptico de anlisis que mide la cantidad de luz absorbida por una sustancia coloreada.

De los valores predeterminados; Hallar la longitud de onda con la cual se experimenta mayor absorcin.

Obtener el factor de calibracin de una solucin estndar aplicando: concentracin de la muestra estndar/absorbancia estndar.

El alumno desarrollara analticamente la concentracin de una muestra problema con la frmula: Abs = .l.c

Determinar la funcin y el correcto uso del espectrofotmetro.

PROCEDIMIENTO

En cuatro tubos de ensayo se agreg la muestra problema la cual era KMnO4. En el tubo 1 se agreg 1ml de la muestra problema, en el tubo 2 se agreg 2ml y as sucesivamente.

Luego se agreg a cada tubo agua destilada hasta completar los 10ml. Una vez obtenida esta mezcla se procedi a llevarla al espectrmetro para

medir su absorbancia. Despus de obtener la absorbancia de cada tubo, se hall la concentracin

estndar de cada tubo a travs de la formula.

El paso siguiente fue hallar la concentracin de la muestra problema por el mtodo analtico y grafico para poder comprobar la concordancia entre estos dos mtodos: a) Mtodo analtico: Con los datos obtenidos se remplaz en la frmula

espectrofotomtrica la cual es : Paso seguido, se llev al espectrofotmetro la muestra problema; la cual dio una absorbancia mayor al rango de valores de las absorbancias estndares, es por ello que se tuvo que realizar una dilucin (1ml/ 1ml + 1ml H2O). Como resultado el factor de dilucin igual a 2.

C1.V1=C2.V2

[ ]MP= AbsSt.Fc.Fd

b) Mtodo grfico:

1. Se ubic los datos obtenidos en un plano cartesiano (papel milimetrado) con una escala determinada.

2. Luego se grafic una lnea recta desde el cero hasta el punto ms distante de los datos.

3. Al unir los puntos se obtuvo una lnea curva que contrastaba con la lnea recta, la cual era la ideal. Esto sirvi para ubicar la concentracin de la muestra problema, localizndose en las abscisas del plano que parti de la absorbancia de la muestra problema, ubicada en las ordenadas.

4. Para finalizar se multiplic la concentracin de la muestra problema ubicada en el plano por el factor de dilucin obtenido para ver si haba correspondencia entre el valor obtenido analticamente y el obtenido de manera grfica.

RESULTADOS

Mesa/tubo T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8

525nm 0.5 1.0 1.5 2.0 Fc [ ] d MP Fd

1 0.086 0.185 0.25 0.395 5.57 3.063 0.1 10

2 0.082 0.184 0.228 0.364 5.89 3.28 0.5 2

3 0.099 0.190 0.280 0.375 5.34 3.310 0.2 5

4 0.088 0.159 0.252 0.324 6.02 3.1 0.2 5

5 0.099 0.179 0.234 0.376 5.31 2.93 3/10 10/3

6 0.085 0.177 0.253 0.354 5.64 2.53 0.1 10

7 0.075 0.161 0.271 0.362 5.915 3.519 0.2 5

INTERPRETACIN DE RESULTADOS

Sabiendo que la finalidad de la prctica es conocer la concentracin de la muestra problema que en nuestro caso fue un valor de 3,28 aplicando el mtodo analtico y 1.64 con el mtodo grfico, el cual al ser multiplicado por el Fd = 2 resulta que el valor de este ltimo se aproxima al mtodo analtico. Por lo tanto se puede decir que por ambos mtodos es factible averiguar la concentracin de permanganato aunque siempre pueden existir errores, principalmente en el momento de pipetear y mezclar.

CONCLUSIONES

Se demostr en la prctica que la longitud de onda ideal para obtener una mayor absorbancia en la MP dada es la de 525 nm, descartando de esta manera la idea de que a mayor longitud de onda mayor absorbancia.

Gracias a la absorbancia obtenida de una solucin es que podemos saber la concentracin de ella y esto tiene una gran aplicacin principalmente en las muestras biolgicas.

Saber tambin que se necesita la longitud de onda ptima para que la absorcin sea la mxima y pueda existir la relacin entre la concentracin y la absorbancia.

Reconocer el valor de la fotocolorimetra en el anlisis de los alimentos en cuanto al estado sanitario de estos.

RECOMENDACIONES

Segn lo observado, podemos destacar lo siguiente:

Los tubos deben estar bien lavados. Cada pipeta debe ser usada para cada sustancia, una para KMnO4 y otra

para el agua destilada. Tener en cuenta el menisco de los lquidos, la parte cncava al ras de la

marca (medida deseada). Agitar bien los tubos con el contenido.

Todas estas recomendaciones son necesarias para una buena lectura de absorbancia y margen de error mnimo.

BIBLIOGRAFA

Espectrofotometra. https://qcabiologica.files.wordpress.com/2009/11/tp-1-espectrofotometrc3ada.pdf

Fotocolorimetra. http://www.academia.edu/4264776/FOTOCOLORIMETRIA_ carlos_lavarez

Aplicaciones de la espectrofotometra. https://books.google.com.pe/books?id=0NpJlN95G

Espectrofotometra.https://www.ucursos.cl/usuario/2775c7595e300ed228a801eb8341e457/mi_blog/r/Espectrofotometria__Uv___Visible2012.pdf