7/31/2019 PRACTICA DE LABORATORIO DE BIOLOGIA UFPS N° 11

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UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDERFACULTAD DE EDUCACION, ARTES Y HUMANIDADES

LICENCIATURA EN BIOLOGIA Y QUIMICA

Realizado por: AIDA LUZ TAPIAS RODRIGUEZMARLY PAOLA CACERES HERRERA

PRÁCTICA N0 11: EXTRACION DEL ADN

DIÁGNOSTICO EVALUATIVO 

Los estudiantes al ingresar al laboratorio de Biología deben realizar un consulta previa de los

conceptos básicos e importancia del ADN en las células vegetales y con anterioridad deben

leer la guía correspondiente a la práctica de laboratorio.

TEN EN CUENTA: Para realizar la práctica de extracción del ADN del laboratorio de biología general se

debe llevar los materiales correspondientes para obtener buenos resultados en la observación.

ANIMO MANTENGA EL INTERÉS EN SU ESTUDIO.

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INTRODUCCIÔN

La extracción del ADN en las células vegetales, en las células de lenteja (Lens esculenta) requiereuna serie de etapas básicas: en primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membranaplasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también lamembrana nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan loslípidos de las membranas celulares y las rompen. La sal evita la unión de las proteínas al ADN.

Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol etílico de 95% (isopropilico), refrigerado.El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en lainterface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN deotros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.

MATERIALES Y REACTIVOS

ESTUDIANTES LABORATORIO

  Hojas de espinaca o en su defecto semillas(trigo, frijol o lentejas)

1 vaso de precipitado 600ml

  Sal (10 gramos) 1 vaso de precipitado 1000ml

  Detergente líquido (50ml) 4 tubos de ensayo

  Ablandador de carnes (jugo de papaya ode piña espeso);o solución para lentes decontacto)

Gradilla y varilla de vidrio

  Licuadora Pipeta de 10ml, mortero

  bolsa para colar café  Alcohol etílico de 95% (isopropilico), refrigerado.

  Un palo de madera (tamaño de chuzo) Esteroscopio, caja de petri

OBJETIVOS

Extraer el ADN de muestras vegetales

Determinar la presencia del ácido desoxirribonucleico (ADN) en algunas especies vegetales.Observar en forma directa las fibras del ADN que componen las células vegetales.

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PROCEDIMIENTO

1. Medir media taza de lentejas(o una cantidad equivalente a 20gr aproximadamente);una pizca de sal y 200ml de agua. Todo esto se coloca en el vaso de la licuadora y seprocesa durante 60 segundos.

2. Finalmente, la mezcla resultante se filtra o se cuela con el colador de tela, paraeliminar cualquier partícula de gran tamaño. Este procedimiento se realiza para obtener un jugo viscoso. Este procedimiento también se puede realizar manualmente con elmortero, si no se cuenta con una licuadora para realizar este paso.

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3. A la mezcla que obtuviste agrégale 30 ml de ablandador de carnes (jugo de piña o delechoza); agrega 30 ml de detergente liquido y revuelva sin formar espuma. (si lo hacesmuy rápidamente NO LOGRAS VER NADA AL FINAL DE LA EXPERIENCIA).

4. Luego deja reposar la mezcla obtenida anteriormente por 10 minutos. Finalmente colocala mezcla en 4 tubos de ensayo y aproximadamente 1/3 del tubo de la muestra.

5. Inclina el tubo de la mezcla y vierte por las paredes del tubo muy lentamente el alcoholetílico al 95% refrigerado de modo que se forme una capa sobre la mezcla anterior de lalenteja. Por medio de un palillo tome la masa blancuzca sobrenadante y el ADN asciendehasta llegar al alcohol.

Resultados obtenidos de la muestra vegetal

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El ADN es una molécula muy larga y tiende agruparse, de ahí la facilidad para retirarla. Elagua con pizca de sal es una mezcla isotónica.

fibras de ADN

Fibras de ADN de color blanco en las lentejas (Lens esculenta)  observadas al estereoscopio en el

aumneto de 35 X.

MARCO TEORICO

El ADN es la “receta de la vida” que se transmite de generación en generación. El gen es la

unidad de la herencia y está compuesto de ADN. Si bien se sabía que las características se podían

transmitir de una generación a otra, Darwin desconocía los mecanismos de la herencia.

El ADN tiene ciertas propiedades por las que es importante en la evolución: I) almacena

información, II) es una molécula estable, por lo que no cambia (muta) con mucha frecuencia y III)

de vez en cuando ocurren pequeños cambios en el ADN que dan lugar a la variación necesaria

para que se produzca la selección natural.

En las plantas, los animales y los hongos, el ADN se encuentra mayormente en el núcleo de las

células.

Para extraer el ADN de las células vegetales hay que romper la fuerte pared celular exterior y

emulsionar los lípidos de la membrana plasmática y la envoltura nuclear.

El detergente rompe las uniones entre lípidos. Los iones de sodio de la sal neutralizan el ADN, que

sale de la célula.

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El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él,

hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas que

fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN.

Para realizar una extracción pura ocurrirá que el detergente contiene lauril sulfato de sodio, el cual

limpia los trastes removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de la misma manera en elprotocolo de extracción de ADN, separando las grasas (lípidos) y las proteínas que constituyen las

membranas que rodean la célula y el núcleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN

es liberado de la célula

El calor suaviza los fosfolípidos (grasas) en las membranas que rodean la célula y el núcleo.

También desactiva (desnaturaliza) a las enzimas desoxirribonucleicas (ADNasas) las cuales, si

están presentes, pueden cortar el ADN en pedazos tan pequeños que lo haría imposible de ver. Si

las enzimas se desnaturalizan y el ADN se desenrolla, éste pierde su forma y se vuelve inactivo.

Las enzimas se desnaturalizan a 60° Celsius y el ADN se desnaturaliza a 80° Celsius.

Los zumos de piña y papaya contienen un enzima, la papaína, la solución ablandadora de carne

también actúa como una enzima, que contribuye a eliminar las proteínas que puedan contaminar el

 ADN. La solución ablandadora de carne actúa como una enzima.

El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto. Además de

permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son

dejados en la solución acuosa.

Los científicos deben ser capaces de separar suavemente el ADN de sustancias no deseadas que

se encuentran en las células, evitando que el ADN se desnature (que se rompa).

El material que se necesita para ello es fácil de encontrar y el procedimiento es sencillo .Cada uno

de los ingredientes tiene su propia función. La solución de sal y jabón sirve para romper la

membrana plasmática y nuclear e incluso la pared celular. El líquido de lentejas elimina las

proteínas que degradan el ADN. El alcohol etílico sirve para precipitar el ADN.

El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En él están escritas las instrucciones que

deben seguir las células para construir un organismo y mantenerlo vivo. Todas las células que

forman un individuo contienen una copia idéntica de ADN. Cada una de ellas, sin embargo, lee una

parte de estas instrucciones y por eso hay células con diferentes formas y funciones.

El ADN está presente en los indicios biológicos como sangre, semen, saliva, hueso, pelo, etc.

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El Salting- out es uno de los métodos de extracción de ADN más utilizados por su fácil

implementación, baja toxicidad de los reactivos y permite la visualización del ADN.

ACTIVIDAD PEDÁGOGICA

1. ¿Por qué es importante la sal en el proceso de la extracción de ADN?

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2. ¿Por cuánto tiempo se debe reposar la mezcla obtenida?

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3. Con sus propias palabras diga la importancia que tiene la extracción del ADN.

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4. ¿Cuál es la función más importante del ADN?

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5. Realizar el apareamiento de la columna (A) con la columna (B).

COLUMNA A

Se forman entre las bases nitrogenadasde adenia, guanina, citosina y timina por enlaces covalentes de tipo fosfodiester.

Es la abreviatura del ácidodesoxirribonucleico. Constituye elmaterial genético de los organismos. Yes una molécula que se encuentra entodas las células de los seres vivos y seencarga de codificar todo lo que nosotrosformamos o somos, desde nuestrocolor del pelo hasta las proteínas quetenemos en nuestra sangre.

Es uno de los métodos de extracción de ADN más utilizados por su fácilimplementación, baja toxicidad de losreactivos y permite la visualización del

 ADN.

Son bases nitrogenadas que estánformadas por -D desoxirribosa y un ionfosfato.

Se utiliza para romper la membranaplasmática y nuclear e incluso la pared

celular.

COLUMNA B

A, G, C, T

POLINUCLEÒTIDOS

SAL Y JABON

SALTING-OUT

ADN

 

PAGINAS WEB

EXTRACCIÓN DE ADN. (En línea). Disponible en internet en:http://www.educa.madrid.org/web/ies.antoniogala.mostoles/dep_bio_archivos/EXTRACCION_DE_ 

 ADN.pdf