CENTRO INTERDISCIPLINARIO DE CIENCIAS DE LA SALUD SANTO TOMÁSDEPARTAMENTO DE FORMACIÓN BÁSICA INTERDISCIPLINARIA

BIOQUÍMICA

MÉTODOS CUALITATIVOS PARA LA DETERMINACIÓN DE BIOMOLECULAS

OBJETIVOS: ♦ Determinar mediante métodos cualitativos la presencia de carbohidratos, lípidos, proteínas y enzimas. ♦ Reconocer la composición química de los reactivos que se utilizan en la identificación de las biomoléculas.♦ Investigar las reacciones que se producen en la identificación de las biomoléculas

MATERIALES: Tubos de ensayos Pipetas Levadura activa Gradillas para tubos de ensayo Almidón Mechero Macerado de pan Pinzas para tubo de ensayo Solución de clara de huevo Reactivo de Fenhilg Solución de grenetina Solución de glucosa al 3% Suero fisiológico Lugol Aceite vegetal Hidróxido de sodio al 10% Grasa animal Sulfato de cobre al 0.5% Suspensión de levadura activa Sudan III o IV Papel filtro Baño de maría Colores Agua destilada Solución reactivo de almidón al 1%

PRÁCTICA # 1DETERMINACIÓN DE CARBOHIDRATOS:

MONOSACÁRIDOS:

PROCEDIMIENTO:

a) En un tubo de ensayo se vierten 5ml del reactivo Fehling A y B y se calienta hasta ebullición. No debe cambiar de color.

b) Se añade al mismo tubo de ensayo 1ml de una solución de glucosa y se calienta hasta ebullición. ¿Qué color aparece? Una turbidez verde indica de 0.1 a 0.3% de azúcar reductor, y un precipitado rojo naranja o rojo ladrillo, indica que la concentración de azúcar supera el 1.5%.

c) Macere un pedacito de muestra y adiciónela a un tubo de ensayo que contiene 5 ml de reactivo de Fehling A y B Caliente hasta

ebullición. ¿Nota algún cambio? Analice sus resultados y saque conclusiones

Prueba para monosacaridos

POLISACÁRIDOS:PROCEDIMIENTO

a) Haga una suspensión acuosa de almidón y vierta en un tubo de ensayo 2 ml de ella.

b) Agréguele a la anterior solución dos gotas de solución de lugol. ¿Qué cambio se experimenta? Anote los resultados.

c) Caliente hasta ebullición esta solución por dos minutos, ¿Se experimenta algún cambio?

d) Deje el tubo de ensayo en reposo hasta que se enfríe. ¿Qué sucede?

e) Deposite dos gotas de lugol en una

solución acuosa de un macerado de pan, ¿Qué sucede? Saque conclusiones

Determinación de Almidón

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MÉTODOS CUALITATIVOS PARA LA DETERMINACIÓN DE BIOMOLECULAS

PRÁCTICA # 2DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS

PROCEDIMIENTO:a) Diluya la clara de huevo en 50ml

de suero fisiológico o en agua. b) A 1ml de la solución anterior se

añaden dos gotas de sulfato de cobre al 0.5% y 1ml de hidróxido de sodio al 10%, ¿Se produce algún cambio?

c) En un tubo de ensayo, coloque 2ml de solución de gelatina sin sabor, y proceda como en el caso anterior. Agregue dos gotas de sulfato de cobre y 1ml de hidróxido de sodio agite y anote los resultados.

Determinación de Proteínas

PRÁCTICA # 3DETERMINACIÓN DE LÍPIDOS:

PROCEDIMIENTO

a) Coloque en un tubo de ensayo 3ml de agua. Agregue una pizca del reactivo Sudan III agite y observe, anote los resultados.

b) En el mismo tubo de ensayo adicione 1ml de aceite vegetal, agite nuevamente y deje en reposo por unos minutos. Luego observe y anote los resultados.

c) En otro tubo de ensayo coloque 2ml de grasa animal y agregue una pizca de Sudan III. Si la grasa está solidificada caliente un poco para derretirla. Agite y anote los resultados, comparándolos con los del tubo anterior. Saque conclusiones.

Determinación de Lípidos

PRÁCTICA # 4DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD

ENZIMATICA:PROCEDIMIENTO

a) En un tubo de ensayo limpio y seco coloque un embudo pequeño con papel filtro. Enjuáguese la boca con suero fisiológico y descarte.

b) Sí es necesario mastique un trocito de parafina y/o chicle y la saliva secretada viértala sobre el embudo, recogiendo la saliva filtrada en el tubo.

c) Coloque, en una serie de 5 a 10 tubos de ensayo, dos gotas de lugol en cada uno.

d) En otro tubo coloque 10mL de suspensión acuosa de almidón y añadale 1ml de saliva y agite.

e) Cada 20 segundos pase 1mL de la mezcla almidón más saliva a cada uno de los tubos de la serie, hasta que no se produzca coloración. Observe la variación de los colores a lo largo de la serie.

f) Caliente a ebullición otra muestra de saliva y repita todo el experimento.

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MÉTODOS CUALITATIVOS PARA LA DETERMINACIÓN DE BIOMOLECULAS

CUESTIONARIO:1. ¿Qué es un azúcar reductor? 2. Cite ejemplos de azucares reductores y no reductores 3. ¿Cuáles son los componentes del reactivo de Benedict? 4. ¿Qué reacción se produce cuando se calienta el tubo de ensayo que contiene

el reactivo de Benedict y glucosa? 5. ¿Cuál es la naturaleza del precipitado de color rojo ladrillo que se forma en la

anterior reacción? 6. ¿Cuál es la composición química del lugol? 7. ¿A qué se debe la desaparición del color azul violáceo de la solución de

almidón cuando se calienta hasta ebullición? 8. ¿Por qué aparece nuevamente el color cuando la anterior solución se enfría? 9. ¿En qué consiste la reacción del Biuret? 10. ¿En qué consiste la reacción xantoproteica? 11. ¿Qué es el Sudan III?

EL REPORTE POR PRÁCTICA DEBE INCLUIR (POR EQUIPO):

OBSERVACIONES

CONCLUSIONES

CUESTIONARIO

BIBLIOGRAFIA: http://academic.uprm.edu/~jvelezg/labmoleculas.pdf