Practica 14 cobalto

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“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 1 UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA Profesor: Bioq. Farm. Carlos García MSc. Alumna: Fernández Valarezo Gisela Katherine Curso: Quinto Paralelo: A Grupo N° 5 Fecha de Elaboración de la Práctica: Lunes 1 de Septiembre del 2014 Fecha de Presentación de la Práctica: Lunes 8 de Septiembre del 2014 PRÁCTICA N° 14 Título de la Práctica: Intoxicación por cobalto Animal de Experimentación: Rata. Vía de Administración: Intraperitonial Volume n administrado: 20 ml Tiempos: o Inicio de la práctica: 07: 50 am o Hora de administración del toxico al cobayo: 08:11 am o Deceso del animal: 08:39 am (28 minutos) o Inicio del baño maría: 09:30 am o Finalización del baño maría: 10:00 am o Final de la práctica: 10:30 am OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA 1. Observar la reacción que presenta el rata ante la Intoxicación por cobalto. 2. Observar cuidadosamente las manifestaciones y controlar el tiempo en que actúa el toxico. 3. Adquirir la destreza para realizar y reconocer la positividad de las reacciones de identificación.

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UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD

CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA

LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA

Profesor: Bioq. Farm. Carlos García MSc.

Alumna: Fernández Valarezo Gisela Katherine

Curso: Quinto Paralelo: A

Grupo N° 5

Fecha de Elaboración de la Práctica: Lunes 1 de Septiembre del 2014

Fecha de Presentación de la Práctica: Lunes 8 de Septiembre del 2014

PRÁCTICA N° 14

Título de la Práctica: Intoxicación por cobalto

Animal de Experimentación: Rata.

Vía de Administración: Intraperitonial

Volumen administrado: 20 ml

Tiempos:

o Inicio de la práctica: 07: 50 am

o Hora de administración del toxico al cobayo: 08:11 am

o Deceso del animal: 08:39 am (28 minutos)

o Inicio del baño maría: 09:30 am

o Finalización del baño maría: 10:00 am

o Final de la práctica: 10:30 am

OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA

1. Observar la reacción que presenta el rata ante la Intoxicación por cobalto.

2. Observar cuidadosamente las manifestaciones y controlar el tiempo en que actúa el

toxico.

3. Adquirir la destreza para realizar y reconocer la positividad de las reacciones de

identificación.

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MATERIALES

o Jeringa de 10 cc

o Varilla

o Espátula

o Probeta

o Campana

o Panema

o Papel filtro

o Embudo

o Fosforo

o Pinzas

o Cocineta

o Porta tubo

o Tabla de disección

o Cronómetro

o Perlas de vidrio.

o Equipo de disección

o Bisturí

o Vasos de precipitación 200 y

500 ml.

o Equipo de destilación.

o Tubos de ensayo

o Pipetas

o Guantes de látex

o Mascarilla

o Mandil

o Gorro

SUSTANCIAS

Cloruro Férrico 10 ml o 200 gotas.

(FeCl3)

Sulfocianuro de Potasio KS(CN)

Ferrocianuro de Potasio

K4Fe(CN)6

Sulfuro de hidrogeno (SH2).

Agua destilada (H2O).

Hidróxido de amoni ( NH4OH)

Sulfato de amonio (NH4)2SO4

Acetato de etilo (CH3-COO-CH2-

CH3)

EQUIPO:

Balanza.

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PROCEDIMIENTO

1. Limpiar y desinfectar la mesa de trabajo.

2. Colocamos a la rata en el panema.

3. Tener todos los materiales a utilizar listos.

4. Administramos a la rata, 20 ml de solución saturada de (nitrato de cobalto) por

vía intraperitoneal, anotamos el tiempo y observamos las manifestaciones.

5. Observamos los efectos que produce en la rata.

6. Después de 28 minutos de la administración inicial del toxico se llegó a la

muerte del animal.

7. Procedimos a la apertura de la rata con la ayuda del equipo de disección.

8. Observamos el estado de las vísceras.

9. En un vaso de precipitación recolectamos los líquidos que vertían de animal y

colocando las vísceras (picadas lo más finas posibles).

10. Adicionamos a las vísceras 50 perlas de vidrio, 2 gramos de clorato de potasio y

ácido clorhídrico concentrado 25 ml y lo llevamos a baño maría por 30 minutos.

11. Cinco minutos antes de que se cumpliera el tiempo establecido del baño maría

adicionamos 2 gramos más de clorato de potasio.

12. Una vez finalizado el baño maría dejamos enfriar y filtramos.

13. Con el filtrado luego procedimos a realizar las reacciones de identificación de

cobalto en medios biológicos.

14. Una vez terminada la práctica se limpió todo el material y el área utilizada.

REACCIONES DE RECONICIMIENTO

1. Con los álcalis causticos.- este metal reacciona frente al Hidroxido de Sodio

formando un precipitado azul debido a la formación de una sal básica que por el

calor y el exceso de reactivo se transforma en Co(OH)2 de color rosa, el cual es

insoluble en exceso de reactivo, y por oxidación se vuelve color pardo. Es

soluble frente a las sales amoniacas y en acidos minerales.

El Co(OH)2 es oxidado por el oxígeno de aire transformándose en Co(OH)3 de

color pardo y finalmente negro.

2. Con el NH4OH.- con este reactivo, y en ausencia de sales amoniacas provoca un

precipitado color azul, el mismo que es soluble en exceso de NH3 produciendo

un color pardo-amarllento por formación de un compuesto complejo.

3. con el SH2.- a una pequeña porción de muestra alcalinizada con NH3, se le hace

pesar una corriente de SH2, precipita completamente el SCo de color negro,

fácilmente soluble por el NO3H concentrado y caliente.

4. Con el Fe(CH)6K4.- Con este reactivo, el cobalto origina un precipitado verde

de Fe(CN)6Co2, escasamente soluble en ClH diluido.

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Con el Sulfato de amonio y acetato de etilo.- Las soluciones concentradas de

Cobalto, con estos reactivos en partes iguales, producen un precipitado azulado

y una película rosada que separa las dos fases que se forman.

GRÁFICOS:

Animal de experimentación

Rata

Extraer y Triturar las vísceras,

colocar 50 perlas de vidrio y

2g de KClO3 y 25 ml de HCl

conc. las vísceras del cobayo

y colocarlas en un vaso de

precipitación

Inyectar 20 ml el toxico

(cobalto)

Llevar a baño María por 30

minutos con agitación regular

Observar los síntomas de la

rata luego de la

administración del toxico

hasta la muerte

Una vez finalizado el baño

María, dejar enfriar y filtrar

Colocar a la rata en la tabla

de disección

1

4

8 5

2

7

3

6

Obtener el filtrado para

realizar las reacciones

correspondientes.

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REACCIONES DE RECONOCIMIENTO EN MEDIOS BIOLÓGICOS

CON EL NAOH:

Reacción positivo característico se produjo precipitado

blanco azul, rosa, negro.

CON NH4OH:

Reacción positivo característico rojo pardo amarillento

CON EL SH2

Reacción positivo característico se formó el precipitado negro

Antes

Antes Después

Antes Después

Después

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CON EL Fe(CH)6K4:

Reacción positivo caracterisitco se produjo el

precipitado verde

Con Sulfato de amonio + acetato de etilo

Reacción positivo característico se produjo el

precipitado azul y entre las dos capas una pequeña película rosado

OBSERVACIONES

Hemos observado que al administrar el toxico (nitrato de cobalto) por vía

intraperitoneal la rata presentó nauseas, mareo, vomito, irritación de los ojos,

convulsiones e hipoxia y finalmente a los 13 minutos murió.

Antes Después

Antes Después

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CONCLUSION

Al culminar esta práctica pudimos darnos cuenta que el cobalto es una sustancia

altamente tóxica, debido a que actuó rápidamente causando convulsiones e hipoxia que

produjeron la muerte del animal en un periodo de 28 minutos después de la

administración de 20 ml de toxico y posteriormente se realizó las reacciones de

identificación en las que pudimos constatar la presencia de cobalto en el filtrado

obtenido de la decocción de las vísceras.

RECOMENDACIONES

Realizar la asepsia del área de trabajo.

Utilizar el equipo de protección adecuado: bata de laboratorio, guantes,

mascarilla, zapatones si es necesario.

Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio.

Utilizar la cámara de gases para realizar las pruebas y evitamos así

intoxicaciones.

Tener material para la toma de cada reactivo y evitar contaminación de los

reactivos que pueden llevar a un error en las reacciones.

CUESTIONARIO

¿QUÉ ES EL COBALTO?

El cobalto es un metal ferromagnético, de color blanco azulado. Su temperatura de

Curie es de 1388 K. Normalmente se encuentra junto con níquel, y ambos suelen formar parte de los meteoritos de hierro. Es un elemento químico esencial para

los mamíferos en pequeñas cantidades. El Co-60, un radioisótopo de cobalto, es un importante trazador y agente en el tratamiento del cáncer.

El cobalto metálico está comúnmente constituido de una mezcla de dos formas alotrópicas con estructuras cristalinas hexagonales y cúbica centrada en las caras siendo

la temperatura de transición entre ambas de 722 K.

¿CUALES SON LOS EFECTOS DEL COBALTO SOBRE LA SALUD?

El Cobalto está ampliamente dispersado en el ambiente de los humanos por lo que estos pueden ser expuestos a él por respirar el aire, beber agua y comer comida que contengan

Cobalto. El Contacto cutáneo con suelo o agua que contenga Cobalto puede también aumentar la exposición.

El Cobalto no está a menudo libremente disponible en el ambiente, pero cuando las

partículas del Cobalto no se unen a las partículas del suelo o sedimento la toma por las plantas y animales es mayor y la acumulación en plantas y animales puede ocurrir.

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El Cobalto es beneficioso para los humanos porque forma parte de la vitamina B12, la

cual es esencial para la salud humana. El cobalto es usado para tratar la anemia en mujeres embarazadas, porque este estimula la producción de glóbulos rojos.

De cualquier manera, muy alta concentración de Cobalto puede dañar la salud humana.

Cuando respiramos elevadas concentraciones de Cobalto a través del aire experimentamos efectos en los pulmones, como asma y neumonía. Esto ocurre

principalmente en gente que trabaja con Cobalto.

Cuando las plantas crecen sobre suelos contaminados estas acumularán muy pequeñas partículas de Cobalto, especialmente en las partes de la planta que nosotros comemos, como son los frutos y las semillas.

Los suelos cercanos a minas y fundiciones pueden contener una alta cantidad de

Cobalto, así que la toma por los humanos a través de comer las plantas puede causar efectos sobre la salud.

Los efectos sobre la salud que son el resultado de la toma de altas concentraciones de

Cobalto son:

Vómitos y náuseas Problemas de Visión

Problemas de Corazón Daño del Tiroides

Efectos sobre la salud pueden también ser causado por radiacción de los Isótopos radiactivos del Cobalto. Este causa esterilidad, pérdida de pelo, vómitos, sangrado,

diarréas, coma e incluso la muerte. Esta radiacción es algunas veces usada en pacientes con cáncer para destruir tumores. Estos pacientes también sufren pérdida de pelo,

diarréas y vómitos.

¿CUÁLES SON LAS APLICACIONES DEL COBALTO?

Aleaciones entre las que cabe señalar súper aleaciones usadas en turbinas de gas de

aviación, aleaciones resistentes a la corrosión, aceros rápidos,

y carburos cementados y herramientas de diamante. Herramientas de corte

en procesos de fabricación para fresadoras.

Imanes (Alnico, Fernico, Cunico, Cunife) y cintas magnéticas.

Catálisis del petróleo e industria química.

Recubrimientos metálicos por deposición electrolítica por su aspecto, dureza y

resistencia a la oxidación.

Secante para pinturas, barnices y tintas.

Recubrimiento base de esmaltes vitrificados.

Pigmentos (cobalto azul y cobalto verde).

Electrodos de baterías eléctricas

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Cables de acero de neumáticos.

El Co-60 se usa como fuente de radiación gamma en radioterapia, esterilización de

alimentos (pasteurización fría) y radiografía industrial para el control de calidad de

metales (detección de grietas).

BIBLIOGRAFÍA

Toxicología Médica Dr. Phil, Dr. Med. H. Funher. Editorial Científico-Médico.

Madrid. España

WEBGRAFÍA

http://www.lenntech.es/periodica/elementos/co.htm#ixzz3CVXqPl8A

http://www.estrucplan.com.ar/Producciones/entrega.asp?IdEntrega=1178

http://www.atsdr.cdc.gov/es/phs/es_phs55.pdf

AUTORIA

Bioq. Farm. Carlos García MSc.

FIRMAS DE LOS INTEGRANTES

__________________ __________________

Elizabeth Guzmán Geovanny Ramón

_________________________

Gisela Fernández

GLOSARIO

ELECTRODO.- es un conductor eléctrico utilizado para hacer contacto con una

parte no metálicade un circuito, por ejemplo un semiconductor, un electrolito,

el vacío (en una válvula termoiónica), un gas (en una lámpara de neón), LATÓN:

El latón, es una aleación de Cobre y Zinc que se realiza en crisoles o en un horno de

reverbero a una temperatura de fundición de unos 980 ºC.

RADIOISÓTOPO.- es aquel isótopo que es radiactivo. La palabra isótopo, del griego

"en mismo sitio", se usa para indicar que todos los tipos de átomos de un

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mismo elemento químico se encuentran en el mismo sitio de la tabla periódica.

Los plaguicidas o pesticidas son sustancias químicas empleadas por el hombre para

controlar o combatir algunos seres vivos considerados como plagas (debido a que

pueden estropear los campos y los frutos cultivados). A este proceso se le llama

fumigación.

DISFUNCIÓN: Alteración de una función orgánica: disfunción hormonal. Desarreglo

en el funcionamiento de alguna cosa: se están produciendo disfunciones en los sistemas

informáticos.

ALEACIÓN.- es una combinación, de propiedades metálicas, que está compuesta de

dos o más elementos, de los cuales, al menos uno es un metal.

ANEXOS:

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ALIMENTOS CON CABALTO

El cobalto es uno de los componentes de la vitamina B12 o cobalamina. El cuerpo

requiere una pequeña cantidad de este mineral para un adecuado crecimiento y

mantenimiento y no puede ser sintetizado a partir de una comida dietética simple, por

lo que la vitamina B12 de los alimentos, es esencial para la nutrición humana.

La actividad y la función de cobalto es esencialmente la misma que la vitamina B12,

por lo tanto, lo que significa que el cobalto desempeña un papel importante en el

proceso de la eritropoyesis, un procedimiento en el que se producen las células rojas de

la sangre.

El cobalto tiene varios beneficios para la salud:

-La asociación entre la vitamina B12 y el cobalto ayuda a la función global del cuerpo;

la vitamina B12 es una de las vitaminas del complejo B que ayuda en

el funcionamiento del sistema nervioso y también afecta al funcionamiento de

otros procesos metabólicos del cuerpo.

-Existe una relación entre el cobalto y la vitamina C; esta vitamina impide ciertas

condiciones, tales como el escorbuto, donde se ven síntomas, como la pérdida de

cabello.

-El hierro es uno de los nutrientes más importantes que se necesitan en función del

sexo, salud, y otros factores; el cobalto, junto con otros elementos, pueden desempeñar

un papel en la absorción del hierro.

-El cobalto puede proporcionar estabilidad al proceso cardiovascular y a la función

cardiológica.

Una deficiencia en vitamina B12 es una deficiencia de cobalto, y viceversa; la ingesta

adecuada de alimentos o suplementos ricos en vitamina B12 puede paliar esta

deficiencia. Los adultos necesitan alrededor de 2 mcg. Sin embargo, el exceso de

cobalto, puede causar un exceso de producción de células rojas de la sangre, y dañar los

músculos del corazón, y de la tiroides.

.Requerimientos diarios:

Se desconocen cuáles son las necesidades humanas de cobalto, pero se supone que

deben de ser mínimas.

Una cantidad de 0\’45 a 0\’9 microgramos diarios mantiene la función de la médula

ósea en pacientes con anemia perniciosa.

Se supone que cantidades del orden de 150-600 microgramos/día son suficientes.

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ALIMENTOS RICOS EN COBALTO:

Estos son algunos de los más importantes:

Origen animal: Almejas. Carne. Hígado. Huevos. Leche. Ostras. Pescados.

Quesos. Riñones. Vísceras de animales.

Origen vegetal: Cebolla. Cereales integrales. Cerezas. Diente de león. Germen de

trigo. Trigo sarraceno. Legumbres. Levadura de cerveza. Peras. Plantas verdes. Soja.

Frutos secos: Avellanas. Nueces.

Enfermedades en las cuales su uso puede hacerse aconsejable:

Estas son algunas de las enfermedades en las que el uso del cobalto, puede estar

indicado:

Anemias.

Diabetes.

Espasmos digestivos.

Infertilidad.

Migrañas.

Neuralgia.

Neuritis.

Trastornos en las células rojas de la sangre.

Trastornos del hígado.

Trastornos del sistema nervioso neurovegetativo o simpático.

Trombosis.

Conclusión

El cobalto es un mineral esencial para nuestro organismo. Su símbolo es Co y su

número atómico 27. Su absorción es bastante fácil ya que está ampliamente

disperso en el ambiente; al respirar, beber agua, comer o incluso tocar el suelo,

aumenta la exposición al mismo. Se almacena, en mayor cantidad, en las células

rojas de la sangre y, en menor cantidad en los riñones, el bazo, el hígado y

elpáncreas. Es un componente fundamental de la vitamina B12, en un 4% de su

formación y ésta es su única función en el organismo.

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ALUMINIO

Sobre todo en las ígneas, que contienen aluminio en forma de minerales de aluminio

silicato . Cuando estos minerales se disuelven, según condiciones químicas , es posible

precipitar el aluminio en forma de arcillas minerales hidróxidos de aluminio o ambos

.En esas condiciones se forman los bauxitas que sirven de materia prima fundamental en

la producción de aluminio.

El aluminio es un metal plateado con una densidad de 2070g7cm3 a 20ºC (1.56oz/in3 a

68ºF ) . El que existe en la naturaleza consta de un solo isotopo. El aluminio cristaliza

en una estructura cubica centrada en las caras con lados de longitud de 4.0495

angstroms (0.40495 nm). El aluminio se conoce por alta conductividad eléctrica y

térmica , lo mismo que por su gran reflectividad.

El aluminio es estable al aire y resistente a la corrosión por el agua del mar a muchas

soluciones acuosas y otros agentes químicos . Esto se debe a la protección del metal por

una capa impenetrable de óxido. A una pureza superior al 99.95% , resiste el ataque de

la mayor parte de los ácidos pero se disuelven en agua regia .Su capa de óxido se

disuelve en soluciones alcalinas corrosivas es rápida.

El aluminio es anfótero y puede reaccionar con ácidos minerales para formar sales

solubles con desprendimiento de hidrógeno.

El aluminio fundido puede tener reacciones explosivas con agua . El metal fundido no

debe entrar en contacto con herramientas ni con contenedores húmedos.

A temperaturas altas , reduce muchos compuestos que contienen oxigeno sobre todo los

óxidos metálicos . Estas reacciones se aprovechan en la manufactura de ciertos metales

y aleaciones.

Su aplicación en la construcción representa el mercado más grande de la industria del

aluminio . Militares de casas emplean el aluminio en puertas cerraduras ,

ventanas,pantallas, boquillas y canales de desague. El aluminio es también uno de los

productos más importantes en la construcción industrial . El transporte constituye el

segundo gran mercado . Muchos aviones comerciales y militares están hechos casi en su

totalidad de aluminio . En los automóviles el aluminio aparece en los interiores y

exteriores como molduras , parrillas , llantas , acondicionadores de aire , transmisiones

automáticas y algunos radiadores bloques de motor y paneles de carrocería . Se

encuentra también en carrocerías transporte rápido sobre rieles , ruedas formadas para

camiones , vagones , contenedores de carga y señales de carretera , división de carriles

y alumbrado . En la industria aeroespacial , el aluminio también se encuentra en motores

de aeroplanos , estructuras , cubiertas y trenes de aterrizaje e interiores , a menudo cerca

del 80% del peso del avión es aluminio. La industria de empaques para alimentos es un

mercado en crecimiento rápido.

En las aplicaciones eléctricas , los alambres y cables de aluminio son los productos

principales , Se encuentra en el hogar en forma de utensilios de cocina , papel de

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aluminio , herramientas , aparatos , portátiles , acondicionadores de aire , congeladores,

refrigeradores y en equipo deportivo como esquíes y raqueta de tenis .

Existen cientos de aplicaciones químicas del aluminio y sus compuestos. El aluminio en

polvo se usa en pinturas, combustibles para cohetes y explosivos como reductor

químico .

EFECTOS DEL ALUMINIO SOBRE LA SALUD.

El Aluminio es uno de los metales más ampliamente usados y también uno de los más

frecuentemente encontrados en los compuestos de la corteza terrestre . Debido a este

hecho , el aluminio es comúnmente conocido como un compuesto inocente . Pero

todavía, cuando uno es expuesto a altas concentraciones este puede causar problemas de

salud . La forma soluble en agua del Al causa efectos perjudiciales , esta partículas son

llamadas iones . Son usualmente encontradas en soluciones de Al. Combinadas con

otros iones, por ejemplo Cloruro de Aluminio .

La toma de Al puede tener lugar a través de la comida, respirarlos y por contacto en la

piel . La toma de concentraciones significantes de Aluminio puede causar un efecto

serio en la salud como:

Daño del SNC

Demencia

Pérdida dela memoria

Apatía

Temblores severos

El aluminio es un riesgo para ciertos ambientes de trabajo como son las minas , donde

se puede encontrar en el agua . La gente que trabaja en fábricas donde el Al es aplicado

durante el proceso de producción puede aumentar los problemas de pulmón cuando

ellos respiran el polvo de Al . El Al puede causar problemas en los riñones de los

pacientes , cuando entra en el cuerpo durante el proceso de diálisis.

EFECTOS AMBIENTALES DEL ALUMINIO :

Los efectos del Al han atraído nuestra atención , mayormente debido a los problemas de

acidificación . El Al puede acumularse en las plantas y causar problemas de salud a

animales que consumen esas plantas . Las concentraciones de Al parecen ser muy altas

en lagos acidificados . En estos largos números de peces y anfibios están disminuyendo

debido a las reacciones de los iones de Al con las proteínas de las agallas de los peces y

los embriones de las ranas .

Elevadas concentraciones de Al no solo causan efectos sobre los peces , pero también

sobre los pájaros y otros animales que consumen peces contaminados e insectos y sobre

animales que respiran el Al a través del aire.

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Las consecuencias para los pájaros que consumen peces contaminados es que la cascara

de los huevos es más fina y los pollitos nacen con bajo peso. Las consecuencias para los

animales que respiran el Al a través del aire son problemas pulmonares, pérdida de peso

y declinación de la actividad. Otro efecto negativo en el ambiente del Al es que estos

iones pueden reaccionar con los fosfatos los cuales causan que el fosfato no esté

disponible para los organismos acuáticos.

REACCIONES DE RECONOCIMIENTO:

Como en los casos anteriores , el material de investigación son las vísceras , a las cuales

se les elimina la materia orgánica y en el líquido se realizan las reacciones de

identificación .

Con el Aluminón: En un medio ligeramente acidificado con ácido acético , en un tubo

de ensayo se añaden dos gotas de reactivo , se calienta a ebullición y se centrifuga . En

presencia del Al se produce una laca color rosa claro . También se puede realizar esta

prueba con medio ligeramente amoniacal o en un medio regulador acético –acetato ,

debiéndose evitar el exceso de colorante .

Al+++ + Colorante +NH3 +Aluminón Laca Rosa

Claro

Con el Carbonato de Sodio . Frente a este reactivo , el aluminio produce un precipitado

blanco gelatinoso de hidróxido de aluminio , insoluble en exceso de reactivo , soluble

en ácidos y álcalis.

Al+++ + 3CO3 Al (OH)3+3CO2

Con los Fosfatos Alcalinos : Los fosfatos alcalinos al reaccionar con el aluminio forman

un precipitado blanco gelatinoso de fosfato de aluminio , insoluble en ácido acético y en

exceso de ractivo , soluble en HCl y en Na(OH).

Al+++ + PO4 PO4Al.4H2O