PRACTICA N 2: TECNICAS DE CONCENTRACION POR SEDIMENTACION Una de las maneras de diagnosticar las parasitosis de localizacin gastrointestinal y glndulas anexas, es mediante la aplicacin de tcnicas coproparasitolgicas de enriquecimiento (de sedimentacin y flotacin), que permiten concentrar huevos, quistes y larvas en el menor volumen de materia fecal, determinar su presencia e identificarlos correctamente. La recuperacin de estas formas parasitarias plantea un problema de difcil solucin a todo microscopista. Si bien es posible preparar frotis fecales a partir de heces frescas o material fecal conservado en SAF o formol, los mtodos de concentracin permiten que los quistes de protozoos y huevos de helmintos no pasen inadvertidos cuando estn presentes en escaso nmero. Tcnicas de Sedimentacin: La sedimentacin de parsitos intestinales en heces se logra por centrifugacin ligera o por gravedad del material fecal, conduciendo a la recuperacin de todos los protozoarios, huevos y larvas, especialmente huevos de tremtodos. Concentra bien estas formas y elimina bastantes detritus orgnicos. Aunque se inactivan las formas mviles de los protozoarios, se mantiene la integridad de los organismos. Es efectivo an en heces con cantidades excesivas de grasas y pueden observarse la mayora de los quistes de protozoarios, as como huevecillos y larvas de helmintos, incluyendo los huevos con oprculo y tiene una eficacia moderada para los huevos de Esquistosoma. La tcnica es til para examinar heces que contienen substancias grasas que interfieren en los mtodos de flotacin. La tcnica de sedimentacin concentra los parsitos presentes en la muestra fecal. La tcnica incluye tamizar primeramente las heces para separar los residuos grandes, tratar con formol para matar y preservar los organismos, y adicionar un solvente como ter o acetato de etilo para disolver las grasas. Sin embargo, durante la sedimentacin, aparte de concentrarse los parsitos, se quedan reunidos tambin algunos otros materiales, abundando los artefactos durante la observacin. Debido a que se usan varios reactivos resulta antieconmica, no obstante su eficacia. Las tcnicas de sedimentacin, se utilizan para la observacin de quistes de protozoos, huevos y larvas de helmintos, pero la desventaja de estas tcnicas consiste en que los preparados contienen ms residuos que los procesados por flotacin. En este caso, el acetato de etilo se usa para extraer los residuos y las grasas de las heces y llevar los parsitos al fondo de la suspensin. Estas tcnicas entonces son recomendadas por ser fciles de realizar, tener baja probabilidad de errores tcnicos y recuperar un amplio rango de organismos. Mtodos fsicos Dilucin minuciosa heces en lquido o solucin de densidad: Inferior a la de los parsitos (Tcnicas de sedimentacin) Superior (Tcnicas de flotacin)

Ventajas: Realizacin muy simple

Precisan poco material Inconvenientes: Procesos largos Exigen mucha manipulacin No aplicables a series grandes de muestras

TCNICA DE BAERMAN MODIFICADA EN COPA POR LUMBRERAS:

Homogeneizar la muestra de heces. Adicionar una copa para sedimentacin con una gasa mojada (o una malla de dimetro calibrados, segn el tamao del parsito que busquemos).Colocar heces sobre la rejilla con la gasa.

Verte por las paredes solucin salina fisiolgica hasta cubrir las heces. Se deja reposar 30 a 45 minutos, se elimina el sobrenadante y extraer el Sedimento.

Observacin al microscopio.

RESULTADOS 1. Se observan huevos embrionados de Hymenolepis nana y quistes tetranucleados de Giardia lamblia. 2. No hay concentracin de estructuras parasitarias.

Ventaja: Con ella se recuperan larvas de Strongyloides y Trofozoitos de Protozoos de las muestras fecales. Inconveniente: No concentra las formas parasitarias y lleva mucho tiempo. Recomendado: Para larvas de Strongyloides y trofozoitos de Balantidium. TCNICA DE SEDIMENTACIN RPIDA: Se emulsionan heces junto a un volumen de agua 10-20 veces superior, en un matraz.

Se filtra a travs de una gasa mojada (o una malla de dimetro calibrados, segn el tamao del parsito que busquemos), a una copa cnica que se llena con agua hasta 2.5 cm del borde. Se agita para suspender uniformemente. Se deja reposar 10 minutos, se elimina el sobrenadante y se vuelve a llenar de agua. Se repite 3- 4 veces hasta que el sobrenadante aparezca claro.

Extraer el Sedimento. Observacin al microscopio.

RESULTADOS 1. Se observan huevos embrionados de Hymenolepis nana y huevos larvados de Trichuris trichura. 2. Presencia de Huevos operculados por su gran densidad. Ventaja: Con ella se recuperan todos los huevos de helmintos, larvas de Nematodos y quistes de Protozoo de las muestras fecales sin distorsin. Inconveniente: No concentra las formas parasitarias y lleva mucho tiempo. Recomendado: Para huevos de trematodos y operculados de cestodos (de gran densidad). TCNICA DE SEDIMENTACIN DE RITCHIE

Mezclar heces con 10 ml de solucin salina. Se filtra a travs de dos capas de gasa quirrgica en un tubo de centrfuga de 15 ml Se centrifuga 5 min. A 1500 r.p.m.. El sedimento se vuelve a suspender y centrifugar en solucin salina. Se lava el sedimento y se mezcla con 10 ml de formalina al 10 % (= formol al 4%), se deja reposar 5 mint. (As se matan y preservan los Protozoos, larvas y mayor parte de huevos).

Se agrega 3 ml de ter (cuidado con las llamas, vapores explosivos), y se coloca un tapn (no soluble en ter). Se invierte y agita con fuerza y centrifugar 1 minuto a 1.500 r.p.m. (Aqu se extraen las grasas de las heces y disminuye el volumen de las mismas). Se quita con cuidado el tapn (Atencin, al salir los vapores de ter pueden arrastras y salpicar de restos fecales). Puede sustituirse el ter por acetato de etilo, que no es inflamable, adems aumenta la obtencin de huevecillos de Himenolepis nana y de quistes de Giardia lamblia. Se invierte totalmente el tubo desde la centrifugadora con un movimiento suave, pero en un solo tiempo. Se mezcla una gota del sedimento fecal y una tintura de Iodo en el portaobjetos. Se coloca un cubreobjetos y se pasa al microscopio, buscndose los parsitos. Tambin debe de observarse sin teir, ya que los quistes se ven mejor de sta manera.

RESULTADOS 1. 2. Se observan quiste tetranucleados de Giardia lamblia. Concentracin de quistes.

Ventaja: Muy til para la concentracin de quistes, huevos y larvas, puede aplicarse a muestras fijadas. Recomendado: Aumenta la obtencin de huevecillos de Himenolepis nana y de quistes de Giardia lamblia.

Eter Restos fecales Formalina

Sedimento (Parsitos)