EVALUACIÓN DE POBLACIONES DE Peronospora variabilis EN LOS

VALLES DE BOLIVIA

Giovanna Plata Rosales, Anna Testen, Paul Backman

Ibarra, 2013

Importancia del problema

Uyuni

Síntomas

Objetivo

v  C a r a c t e r i z a r l a s d i f e r e n t e s poblaciones de Peronospora variabilis con el propósito de comparar su s imi l i tud o su d i fe renc ia para seleccionar el sitio ideal para la evaluación de material resistente.

Materiales y Métodos

Materiales y Métodos

v  Recolección de foliolos e n f e r m o s d e t r e s departamentos.

v E n v i ó d e m u e s t r a s deshidratadas. v  17 muestras (5 replicas codificadas con las letras A-E)

Datos de los 17 aislamientos de Peronospora variabilis

Código de Muestra   Lugar  1   BDM2   Cochabamba  2   BDM3   Cochabamba  3   BDM4   Cochabamba  4   BDM5   Cochabamba  5   BDM6   Cochabamba  6   BDM8   Cochabamba  7   BDM9   Cochabamba  8   BDM10   Cochabamba  9   BDM11   Chuquisaca  10   BDM12   Chuquisaca  11   BDM13   Oruro  12   BDM14   Oruro  13   BDM15   Chuquisaca  14   BDM16   Chuquisaca  15   BDM17   Chuquisaca  16   BDM18   Chuquisaca  17   BDM19   Chuquisaca  

Materiales y Métodos

v  Ext racc ión de ADN (DNeasy Plant Mini Kit )

v  PCR semianidada

v  Arrancadores ITS4, ITS6 y el DC6

Materiales y Métodos

Condiciones de reacción de la PCR:

Reactivos Volumen Master Mix 12.5 µl Primer DC6/ITS4 (5µM) ITS6/ITS4

1 µl

Agua libre de nucleasas

5.5 µl

ADN 5.0 µl Volumen total 24.0 µl

Materiales y Métodos Condiciones de ciclaje de la PCR:

Pasos Condiciones Denaturación inicial 95° C por 2 minutos 30 ciclos de: Denaturación 95° C por 20 segundos Hibridación 55° C por 20 segundos Extensión 72° C por 50 segundos Extensión final 72° C por 10 minutos

v Las secuencias obtenidas para los análisis filogéneticos fueron procesadas mediante el ChromasLite (Technelsyum Pty Ltda. v  Alineadas con el programa MUSCLE en MEGA5 y revisada manualmente

Resultados

Reconstrucción filogenética de aislamientos bolivianos de Peronospora variabilis utilizando la región intergénica de los genes ribosomales mediante el método de Maximun Likehood utilizando el programa MEGA 5 utilizando el modelo de sustitución Kimura 2 con distribución gama y un bootstrap de 1000 repeticiones.

Reconstrucción filogenética de aislamientos bolivianos de Peronospora variabilis utilizando el gen citocromo c-oxidasa subunidad 2

Mildiu de la Quinua en Bolivia

Caracollo, Oruro

Uyuni, Potosí

Tiraque, Cbba

Tiraque, Cbba

Caracollo, Oruro

Conclusiones

v  Todos los aislamientos bolivianos corresponden a Peronospora variabilis y reflejan una sola población.

v A pesar de que no se ha detectado diferencia alguna a nivel molecular, bajo condiciones de campo se observan diferencias en la sintomatología las cuales podrían atribuirse a las condiciones ambientales.

v Los materiales generados por el programa de Mejoramiento pueden ser evaluados y seleccionados en cualquiera de los sitios de producción donde se presente el problema.

Conclusiones