Perfil mutacional de los carcinomas pulmonares no microcíticos

diagnosticados en el Hospital Carlos Haya de Málaga

D. Bautista, E. Prieto, M. Martínez, R. Fernández, A.I. de Hita,

C. Gastelu

Mutaciones de EGFR en el cáncer de pulmón

Mutaciones de EGFR en Cáncer de Pulmón

• 5-20% de los caucasianos con NSCLC, 20-40% de asiáticos

• Determinación por

– Secuenciación directa

– PCR a tiempo real (DxS TheraScreen) • 90% en el ATPbinding cleft del dominio tirosina quinasa (activación

constitutiva)

• 5-20% de los caucasicos con NSCLC, 20-40% de asiáticos

• Determinación por

– Secuenciación directa

– PCR a tiempo real (TheraScreen Qiagen, Cobas 4800 Roche)

• 90% en el ATPbinding cleft del dominio tirosina quinasa (activación constitutiva)

ATP

Ras-Raf-MAPK

Proliferation

Pi3K-AKT

Survival

Ligand

Extracellular domain

Trans-membrane domain

Tyrosine kinase domain

Tyrosine phosphorylation

EGFR internalisation

Degradation/recycling

EGFR signals for longer

at the cell membrane

Wild Type EGFR EGFR mutante

La mutacion de EGFR mutation produce un cambio

conformacional que aumenta la activacion

Arteaga 2006, Gadzar et al 2004, Hendricks et al 2006, Sordella et al 2004

18 19 21 20

N-lobe

Transmembrane

region

Extracellular

domain

ATP binding

cleft

C-lobe

A-loop Chelix P-loop

TK

domain

Regulatory

domain

Distribution of mutation types (% of mutations)

Literature review Asian studies Non-Asian studies

Most prevalent mutation types Literature (n=1523) Literature (n=583)

Exon 19 deletion 51% 58%

Exon 21 point mutation L858R 42% 32%

Exon 20 2% 6%

Exon 18 G719A/C 3% 2%

Exon 21 L861Q 1% 1%

La distribucion de las mutaciones activadoras es similar en series asiáticas y occidentales

Some patients had more than one mutation type

• 40% de los NSCLC tienen alterada la vía EGFR/Kras/Braf/PI3K

• Mutaciones en EGFR y Kras

• Mutaciones activadoras o sobreexpresión

• Mutaciones no solapadas o excluyentes

• “Driving mutations”

Mutaciones de EGFR en Cáncer de Pulmón

Agentes Anti-EGFR en Cáncer de Pulmón

• Anticuerpos Monoclonales

– Cetuximab

– Panitumumab

• Inhibidores de la Dimerización

• Inhibidores de la Tirosin-Quinasa

– Erlotinib

– Gefitinib

Small Molecule Tyrosine Kinase Inhibitors

– Target the tyrosine binding domain.

– Block RTK phophorylation and activation.

– Erlotinib (Tarceva® Roche)

– Gefitinib (Iressa® Astra Zeneca)

Tratamiento del Carcinoma Pulmonar de Células No-Pequeñas

Agentes Anti-EGFR en Cáncer de Pulmón

• Sólo algunos pacientes responden a la terapia anti-EGFR

– 10-20% de pacientes caucasicos con NSCLC metastásico

– 40-50% de los pacientes asiáticos • Importancia de selección adecuada de los pacientes • Predictores clínicos de respuesta

– Paciente asiático, mujer, no fumador, adenocarcinoma

– Aparición de efectos tóxicos cutáneos

Necesidad de determinación de mutaciones de EGFR

• Respuesta a la terapia Anti-EGFR

– 80% en mutados

– <10% en WT • Presencia de mutación:

– Mejor supervivencia en tratados con

Inhibidores de EGFR

– Mejor supervivencia general (¿?)

Literatura Paez et al., Science 2004 Lynch et al.,NEJM 2004 Pao et al.,PNAS 2004 Huang et al., CCR 2004 Tokumo et al., CCR 2005 Mitsudomi et al., JCO 2005 Han et al., JCO 2005 Kim et al., CCR 2005 Cotes-Funes et al., Ann Oncol 2005 Cappuzzo et al, JNCI 2005 Chou et al., CCR 2005 Taron et al., CCR 2005

Takano et al., JCO 2005

Tratamiento del Carcinoma Pulmonar de Células No-Pequeñas

0

10

20

30

40

50

60

70

80

EGFRMut

EGFR WT

% de respuesta tumoral

Necesidad de selección de los pacientes a tratar

77%

12%

Causas de resistencia al tratamiento Anti-EGFR

• EGFR WT

• Mutación de Kras

• Mutación de EGFR T790M (50% de resistencias adquiridas)

• Amplificación de c-met

– 10-20% de resistencia adquirida

– Activación de PI3K a través de vías alternativas

1. T790M

2. Del 19

3. L858R

4. L861Q

5. G719X

6. S768I

7. Ins 20

MUTACIONES DETECTADAS

Detección de mutaciones por PCR a tiempo real Therascreen® Qiagen

-Detecta 29 mutaciones en los exones 18, 19, 20 y 21 de EGFR -A partir de 800 ng de ADN - Sensibilidad 1 %

-Necesita interpretación de los resultados

Detección de mutaciones por PCR a tiempo real cobas® Roche

-Detecta 41 mutaciones en los exones 18, 19, 20 y 21 de EGFR

-A partir de un corte de 5 μm con > 10% de

células tumorales (180 ng) -Sensibilidad 5%

-Análisis automático e informe

0

50

100

150

200

250

2011 2012 2013

Nº de muestras analizadas210

177

43

Número de pacientes analizados n = 430

0

5

10

15

20

25

30

35

AdenocarcinomaC. EscamocelularC. de céls grandesC. Neuroendocrino

Tipo Histológico

0% 6%

0%

94%

11.18% de Adenocarcinomas contienen mutación

Tipo Histológico y Mutaciones detectadas 35 (8.14%)

Tipo Histológico y Mutaciones detectadas

Tipo Histológico Pacientes Analizados

Mutaciones Detectadas

%

Adenocarcinoma 317 33 10.41%

C. Escamocelular 62 0 0%

C. Céls. Grandes 40 2 5%

C. Neuroendocrinos 5 0 0%

Otros (Adenoescamoso, Pleomorfico, NOS)

6 0 0%

Total 430 35 8.14%

0,00%

5,00%

10,00%

15,00%

20,00%

25,00%

30,00%

Mujer Hombre

Sexo

3,81%

25,23%

Porcentaje de mutación en función del sexo

Mutaciones detectadas 35 (8.14%)

Espectro de Mutaciones detectadas

Alteración Mutaciones Detectadas

%

Delección 19 19 54%

L858R 8 23%

Inserción 20 5 14%

L861Q 3 9%

G719X 0 0%

S768I 0 0%

T790M 0 0%

Mutaciones detectadas en nuestro centro n = 35 (8.14%)

Estudio comparativo de sistemas Therascreen® Qiagen

cobas® EGFR Mutation Test Roche

-Análisis en paralelo de: -50 casos retrospectivos, previamente estudiados con Therascreen -52 casos prospectivos por orden de recepción

-A partir de ADN extraido mediante:

-Gentra® Puregene® Tissue Kit Qiagen – Therascreen -cobas® DNA sample preparation kit - cobas

-102 resultados, 7 mutaciones y 95 WT (cobas 2 casos no válidos)

Control de calidad externo

2010: K-ras y EGFR 2011: K-ras, EGFR , BRAF, y HPV 2012: K-ras, EGFR, BRAF 2013: K-ras, EGFR, BRAF

Elisa Prieto Sánchez Carmen Gastelu Cantero Anabel de Hita Santabaya Macarena Martínez Moreno Ricardo Fernández Rubia