Optimización para la extracción de BIOQUIMICA antocianinas ...

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BIBLIOTECA DE FARMACIA Y BIOQUIMICA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA Optimización para la extracción de antocianinas en Vaccinium corymbosum L. (Arándano), Noviembre 2015.TESIS I AUTORES: o BURGOS AGUILAR MARTHA PAOLA o IBAÑEZ AHUANARI ERWIN ALEXANDER ASESOR: Mg. Q.F. Roger Antonio Rengifo Penadillos TRUJILLO PERÚ 2016 Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

“Optimización para la extracción de

antocianinas en Vaccinium corymbosum

L. (Arándano), Noviembre 2015.”

TESIS I

AUTORES:

o BURGOS AGUILAR MARTHA PAOLA

o IBAÑEZ AHUANARI ERWIN ALEXANDER

ASESOR:

Mg. Q.F. Roger Antonio Rengifo Penadillos

TRUJILLO – PERÚ

2016

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Dedicatoria A Dios:

Por habernos dado sabiduría, fortaleza,

salud, coraje, y no dejarnos solos en los

momentos difíciles, y habernos permitido

llegar a la meta en este trabajo de

investigación

A Nuestros Padres:

Porque ellos han dado razón a

nuestra vida, por sus consejos, su

apoyo incondicional y su

paciencia.

Los Autores.

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AGRADECIMIENTO

A nuestros maestros

De la facultad de Farmacia y Bioquímica que

con este andar por la vida influyeron con sus

lecciones y experiencias en formarnos como

personas de bien y prepararnos para los

retos que pone la vida, a todos y cada uno de

ellos les dedicamos las páginas de esta tesis.

Los Autores.

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INDICE

DEDICATORIA

AGRADECIMIENTO

RESUMEN .......................................................................................................... i

ABSTRACT ........................................................................................................ ii

INTRODUCCIÓN ............................................................................................... 1

MATERIAL Y METODO ..................................................................................... 6

RESULTADOS ................................................................................................. 13

DISCUSIÓN ..................................................................................................... 16

CONCLUSION ................................................................................................. 19

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ................................................................ 20

ANEXOS………………………………………………...………………...………….23

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RESUMEN

El presente trabajo de investigación tiene por objetivo determinar la

optimización para la extracción de antocianinas en Vaccinium corymbosum L.

(arándanos), procedentes de la ciudad de Virú, Provincia de Virú, La Libertad.

Se procedió a extraer las antocianinas del fruto de arándano con etanol al 20%

y 40% y agua, pH 2 y 4, temperatura de 25°C, 60°C, 75°C y 90°C, tiempo de

30, 60, 120 y 240 minutos, cuantificando las mismas mediante el método de

Giusti&Wrosltad de pH diferencial. Las condiciones óptimas para la extracción

de antocianinas del fruto de Vaccinium corymbosum L. (arándanos),

procedentes de la ciudad de Virú, Provincia de Virú, La Libertad, fue etanol al

40%, pH 2, temperatura de 75°C y un tiempo de 60 minutos; dando una

concentración máxima de 2,377 mg de antocianinas/ L de solvente.

Palabras clave: Vaccinium corymbosum L, arándano, antocianinas, pH

diferencial.

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ABSTRACT

This research aims to determine the optimal conditions for the extraction of

anthocyanins in Vaccinium corymbosum L. (blueberry), from the town of Viru,

Viru province, La Libertad. Proceeded to extract anthocyanins from blueberry

fruit with 20% and 40% ethanol and water, pH 2 and 4, temperature 25°C,

60°C, 75°C and 90°C, time 30, 60, 120 y 240 minutes, quantifying them through

Giusti&Wrosltad differential pH method. The optimum amount of anthocyanins

extracted from Vaccinium corymbosum L. fruit (blueberries ) , from the town of

Viru, Viru province , La Libertad, was 40% ethanol, pH 2, , temperature of 75 °C

and time of 60 minutes; giving a maximum concentration of 2,377 mg

anthocyanins / L solvent.

Keywords: Vaccinium corymbosum L, blueberry anthocyanins, differential pH.

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I. INTRODUCCIÓN

El empleo de las plantas medicinales con fines curativos es una práctica que se

ha utilizado desde tiempos remotos. Desde hace décadas los remedios

naturales, y sobre todo las plantas medicinales fueron el principal e incluso el

único recurso de que disponían los médicos. Esto hizo que se profundizaran el

conocimiento de las especies vegetales que poseen propiedades medicinales y

ampliar su experiencia en el empleo de los productos que de ella se extraen 1.

A diferencia de otros organismos las plantas destinan una cantidad significativa

del carbono asimilado y de la energía a la síntesis de una amplia variedad de

moléculas orgánicas que no parecen tener una función directa en procesos

fotosintéticos, respiratorios, asimilación de nutrientes, transporte de solutos o

síntesis de proteínas, carbohidratos o lípidos. El consumo de frutas y verduras

ha demostrado su efectividad en la prevención de algunas enfermedades en

los seres humanos y en los animales1, 2.

La planta del arándano es un arbusto, de tipo perenne, de crecimiento lento y

con una altura de 10 a 20 cm. Es nativa del este de Estados Unidos, aunque se

han introducido plantas silvestres en la Costa del Pacífico. Los tallos de la

planta son rastreros, delgados y presentan una longitud hasta de un metro.

Éstos recorren la superficie donde se cultiva formando una estera gruesa. A

partir de las yemas axilares de estos tallos rastreros, surgen ramas verticales

rectas que tienen una altura de 5 a 7 cm3, 4.

Las hojas son ovales, alternas, coriáceas, de color verde claro, con los

márgenes finamente dentados, caducas y con peciolo corto. Contienen

sustancias que reducen el contenido de glucosa en la sangre, son ricas en

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flavonoides derivados de la quercetina, los cuales son compuestos con

múltiples efectos positivos debido a su acción antioxidante y eliminadora de

radicales libres, lo cual indica que la tisana de hojas de arándano es buena

para evitar el deterioro prematuro de la piel. Útiles en el tratamiento de

problemas intestinales. En estado fresco, las hojas tienen aproximadamente 64

miligramos de vitamina C, y como tres veces más cuando están secas5.

Las flores son insignificantes, de color verde rosado con cinco pétalos y

sépalos, se producen aisladas o de dos en dos axilares en racimos colgantes.

El fruto es una baya de color negro azulado de sabor agradable y agridulce6.

El arándano americano, conocido también como arándano rojo americano o

mirtilo americano, es el fruto del Vaccinium macrocarpon (llamado en inglés

cranberry). Su fruto tiene por lo general de 1 a 2 centímetros de diámetro, pesa

de 1 a 2 gramos y se distingue por su intenso color rojo carmesí. Existen 3

especies que tienen importancia: Vaccinium angustifolium (arándano bajo o

“lowbush " ), Vaccinium ashei Reade (arándano ojo de conejo o "rabbiteye") y

Vaccinium corymbosum L. (arándano alto o "highbush"). Éste último es una

baya casi esférica, que dependiendo de la especie y cultivar puede variar en

tamaño de 0,7-1,8 cm de diámetro y posee un color azul metálico7,8.

El pigmento que le confiere el color azul al fruto (la antocianina), interviene en

el metabolismo celular humano disminuyendo la acción de los radicales libres,

asociados al envejecimiento, cáncer, enfermedades cardíacas y Alzheimer.

También tiene propiedades como astringentes, antisépticas, antidiarreicas,

hipoglucemiantes.7

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Los constituyentes fitoquímicos presentes en el zumo del arándano son

diversos, tales así, que se ha demostrado la presencia de flavonoles, los cuales

tienen parte responsable en la coloración del fruto y el zumo; entre los

principales tenemos, hiperósido, quercetina, miricetina, quercitrina, avicularina.

8

Cabe resaltar también la presencia de ácidos fenólicos, los cuales son

responsables también de potentes efectos benéficos para la salud, así tenemos

el ácido benzoico, clorogénico, 4-hidroxicinámico, 3,4-dihidroxibenzoico,

vaníllico, cafeico.8

Dentro de la gran gama de metabolitos secundarios presentes en el zumo del

arándano, se reconoce a los antocianósidos o antocianinas, los cuales, al igual

que los flavonoles, le brindan la coloración al fruto y al zumo.8

Las antocianinas son un grupo de pigmentos de color rojo, hidrosolubles,

ampliamente distribuidos en el reino vegetal. Químicamente las antocianinas

son glucósidos de las antocianidinas, es decir, están constituidas por una

molécula de antocianidina, que es la aglicona, a la que se le une un azúcar por

medio de un enlace β-glucosídico.9

La estructura química básica de estas agliconas es el iónflavilio, también

llamado 2-fenil-benzopirilio, que consta de dos grupos aromáticos: un

benzopirilio (A) y un anillo fenólico (B). De todas las antocianidinas que

actualmente se conocen (aproximadamente 20), las más importantes son la

pelargonidina, delfinidina, cianidina, petunidina, peonidina y malvidina, nombres

que derivan de la fuente vegetal de donde se aislaron por primera vez; la

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combinación de éstas con los diferentes azúcares genera aproximadamente

150 antocianinas.10

El color de las antocianinas depende de varios factores intrínsecos, como son

los sustituyentes químicos que contenga y la posición de los mismos en el

grupo flavilio; por ejemplo, si se aumentan los hidroxilos del anillo fenólico se

intensifica el color azul, mientras que la introducción de metoxilos provoca la

formación del color rojo. Las antocianinas son interesantes por dos razones. La

primera por su impacto sobre las características sensoriales de los alimentos,

las cuales pueden influenciar su comportamiento tecnológico durante el

procesamiento de alimentos, y la segunda, por su implicación en la salud

humana a través de diferentes vías.11

Diversos estudios presentan evidencia científica que los extractos ricos en

antocianinas pueden mejorar la agudeza visual, mostrar actividad antioxidante,

atrapar radicales y actuar como agentes quimioprotectores, mostrar capacidad

antibacteriana, antifúngica y antimutagénica. Las antocianinas también juegan

un papel en las propiedades antidiabéticas, tales como control de lípidos,

secreción de insulina y efectos vasoprotectivos mejorando la fragilidad

capilar.12

En la medicina tradicional, el arándano está ganando gran realce, por sus

propiedades antes mencionadas, gracias a su contenido de metabolitos

secundarios entre ellos las antocianinas, es por ello que la presente tesis,

busca determinar la optimización para la extracción de antocianinas Vaccinium

corymbosum L. (arándanos), procedentes de la ciudad de Virú, Provincia de

Virú, La Libertad, para un mejor aprovechamiento, y así ser de gran ayuda para

la población.

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OBJETIVOS

1. Determinar la máxima cantidad de antocianinas, obtenidas a diferentes

condiciones de extracción.

2. Establecer las condiciones a los cuales se procede la optimización de la

extracción

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II. MATERIAL Y METODO

1. MATERIAL

MATERIAL BIOLÓGICO:

1 Kg de fruto de Vaccinium corymbosum L. (arándano) procedentes

de la ciudad de Virú, Provincia de Virú, Región La Libertad,

recolectadas en Noviembre de 2015.

MATERIAL DE LABORATORIO

Material de vidrio

Material de uso común en los Laboratorios de análisis químico.

Material Químico

Reactivos

o Ácido Clorhídrico 0.1 M

o Acetato de Sodio 0.1M

o Ácido Acético 0.2M

Solventes

o Alcohol 96° G.L

o Agua destilada

Equipos

o Balanza Analítica.

o Baño María.

o Espectrofotómetro UV-Visible Genesys 20

o PH metro

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2. METODO

2.1. RECOLECCIÓN DE MUESTRA

El fruto de Vaccinium corymbosum L. (arándano) fué recolectado en

la ciudad de Virú, provincia de Virú. Situada a 68 msnm; estando a

una latitud y longitud de 08°24'56'' S y 78°45'06'' O, respectivamente.

2.2. IDENTIFICACIÓN TAXONÓMICA DE LA MUESTRA

Un ejemplar de la muestra fue llevado al Herbarium Truxillensis

(HUT) de la Universidad Nacional de Trujillo para su identificación y

posterior verificación taxonómica según el sistema filogenético de la

especie, el cual tiene como código de registro N°58210.

2.3. PREPARACIÓN DE LOS SOLVENTES13

Se preparó 100 mL de etanol al 20% y al 40% usando un

alcoholímetro; ambos solventes se ajustaron a pH 2 y pH 4 con

solución de ácido clorhídrico 1N usando un pH metro.

Etanol

20%

pH 2 100 mL

pH 4 100 mL

Etanol 40% pH 2 100 mL

pH 4 100 mL

Agua destilada pH 2 100 mL

pH 4 100 mL

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2.4. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA13

Se pesaron 50 g de fruto de arándano y se colocaron en un balón

aforado de 250cc, añadiéndose el solvente respectivo, preparado

anteriormente. Se procedió a la extracción de acuerdo a la siguiente

tabla:

SOLVENTE pH T° TIEMPO

Etanol 20%

pH 2

25 °C

30’

60’

120’

240’

60 °C

30’

60’

120’

240’

75 °C

30’

60’

120’

240’

90 °C

30’

60’

120’

240’

pH 4

25 °C

30’

60’

120’

240’

60 °C

30’

60’

120’

240’

75 °C 30’

60’

120’

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9

240’

90 °C

30’

60’

120’

240’

Etanol 40%

pH 2

25 °C

30’

60’

120’

240’

60 °C

30’

60’

120’

240’

75 °C

30’

60’

120’

240’

90 °C

30’

60’

120’

240’

pH 4

25 °C

30’

60’

120’

240’

60 °C

30’

60’

120’

240’

75 °C

30’

60’

120’

240’

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10

90 °C

30’

60’

120’

240’

H2O

pH 2

25 °C

30’

60’

120’

240’

60 °C

30’

60’

120’

240’

75 °C

30’

60’

120’

240’

90 °C

30’

60’

120’

240’

pH 4

25 °C

30’

60’

120’

240’

60 °C

30’

60’

120’

240’

75 °C

30’

60’

120’

240’

90 °C

30’

60’

120’

240’

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2.4.1. ANÁLISIS CUANTITATIVO POR

ESPECTROFOTOMETRIA UV-VIS DE ANTOCIANINAS13

Una alícuota de 1 mL del extracto se diluyó en una fiola de

10mL con soluciones de HCl (pH 1) y acetato de sodio (pH

4,5), por separado. En las soluciones preparadas se

determinó el contenido de antocianinas según el método

Giusti & Wrosltad de pH diferencial, utilizando un

espectrofotómetro UV-VIS Genesys 20, registrando las

absorbancias (por triplicado) a longitudes de onda de 510

nm y 700 nm, expresando el contenido de antocianinas

como cianidina-3-glucósido de acuerdo a la siguiente

formula:

Total antocianinas (mg/L)=A×PM×FD×1000/(ε xl)

Donde:

A (absorbancia) = (A510 - A700) pH 1,0 - (A510 - A700)

pH 4,5;

PM (Peso molecular): 449,2 g/mol para cianidina-3-

glucósido;

FD: factor de dilución

ε(coeficiente de extinción molar para cianidina-3-

glucósido) :26900 M-1.cm-1

1000: factor de conversión de g a mg.

Todos los análisis fueron realizados por triplicado(n = 3)

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2.4.2. ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS13

A los datos obtenidos se les analizará estadísticamente

mediante ANOVA.

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III. RESULTADOS

Tabla 1. Extracción de antocianinas con Etanol 20%.

N° Solvente pH T t concentración

(°C) (min) (mg/L)

1

Etanol 20%

2

25

30 0.137

2 60 0.141

3 120 0.148

4 240 0.162

5

60

30 0.515

6 60 0.806

7 120 1.169

8 240 1.611

9

75

30 2.281

10 60 2.335

11 120 2.307

12 240 2.307

13

90

30 1.785

14 60 1.555

15 120 1.290

16 240 0.936

17

4

25

30 0.025

18 60 0.047

19 120 0.050

20 240 0.052

21

60

30 0.172

22 60 0.302

23 120 0.443

24 240 0.642

25

75

30 0.758

26 60 0.793

27 120 0.840

28 240 0.879

29

90

30 0.830

30 60 0.920

31 120 0.828

32 240 0.709

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Tabla 2. Extracción de antocianinas con Etanol 40%.

N° Solvente pH T t concentración

(°C) (min) (mg/L)

1

Etanol 40%

2

25

30 0.149

2 60 0.158

3 120 0.162

4 240 0.168

5

60

30 0.487

6 60 1.310

7 120 1.839

8 240 2.211

9

75

30 2.360

10 60 2.377

11 120 2.154

12 240 1.811

13

90

30 2.007

14 60 1.814

15 120 1.576

16 240 1.024

17

4

25

30 0.023

18 60 0.035

19 120 0.048

20 240 0.097

21

60

30 0.258

22 60 0.340

23 120 0.494

24 240 0.822

25

75

30 1.065

26 60 1.142

27 120 1.266

28 240 1.348

29

90

30 1.748

30 60 1.821

31 120 1.669

32 240 1.286

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Tabla 3. Extracción de antocianinas con Agua.

N° Solvente pH T t concentración

(°C) (min) (mg/L)

1

H2O

2

25

30 0.131

2 60 0.134

3 120 0.145

4 240 0.150

5

60

30 0.377

6 60 0.686

7 120 1.070

8 240 1.542

9

75

30 2.272

10 60 2.314

11 120 2.183

12 240 1.817

13

90

30 1.512

14 60 1.278

15 120 0.989

16 240 0.540

17

4

25

30 0.019

18 60 0.021

19 120 0.022

20 240 0.024

21

60

30 0.084

22 60 0.164

23 120 0.220

24 240 0.299

25

75

30 0.377

26 60 0.388

27 120 0.409

28 240 0.432

29

90

30 0.459

30 60 0.476

31 120 0.435

32 240 0.330

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IV. DISCUSIÓN

Los colorantes naturales presentan demanda considerable en la industria

alimentaria, cosmética y farmacéutica para reemplazar a los colorantes

sintéticos, debido a su naturaleza química, inocuidad y funcionalidad. Entre

estos colorantes naturales se encuentran las antocianinas que se distribuyen

ampliamente en el reino vegetal y están presentes en raíces, tallos, hojas,

flores y frutos de las plantas superiores12.

Las características estructurales de las antocianinas, determinan una mayor

estabilidad frente a cambios de pH, temperatura y exposición a la luz, debido a

procesos de copigmentación y asociación intermolecular e intramolecular que

se desarrollan en el medio, convirtiendo a estos compuestos en fuentes

potenciales de colorantes naturales, sustancias activas de alimentos

funcionales, nutracéuticos y medicamentos12, 14.

En relación a la extracción, el método usual de extracción es la extracción

sólido-líquido. El carácter polar de la molécula de antocianina permite su

solubilidad en variados solventes, tales como alcoholes, acetona y agua. Su

estabilidad es afectada fácilmente por modificaciones estructurales con grupos

hidroxilo, metoxilo, glucósidos y grupos acilos14.

El método de extracción debe ser el más adecuado para cada aplicación

concreta. Las condiciones de extracción, tales como relación sólido-líquido,

temperatura, tiempo, tipo y concentración de disolvente influyen en la

estabilidad de las antocianinas, así como también en la concentración de éstos

metabolitos en el extracto. Así, se debe maximizar la extracción de pigmentos,

y limitar la degradación o alteración del estado natural del extracto. El

conocimiento de los factores involucrados en su estabilidad y de los

mecanismos de degradación es sumamente vital para una eficiente extracción,

y uso de las antocianinas como colorantes de alimentos14.

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Si bien es cierto, las antocianinas son altamente hidrofilicas, son moléculas

polares, por la presencia de grupos hidroxilos en su molécula, éstas son

altamente extraídas en soluciones alcohólicas como etanol. El agua del medio

causa degradación de las antocianinas probablemente debido a una mayor

interacción entre el agua y el catión flavilio para formar la pseudobase

inestable8, 12,14.

Al comparar los resultados de la tabla 1, 2 y 3 en lo que respecta al solvente,

se puede notar que la mayor concentración de antocianinas se encuentra en la

tabla 2; donde se utiliza etanol al 40% como solvente.

Al comparar la acción extractora de los solventes queda comprobado que el

medio etanólico favorece una mejor extracción de antocianinas, que el agua.

Cabe resaltar que a mayor concentración etanólica se da un mejor resultado en

la extracción, puesto que existe menor polaridad en el medio.

En cuanto al pH, está siendo favorecido por un medio ácido, en donde existe

una mejor estabilización y protección de la molécula antocianina obteniendo así

una mejor extracción de las mismas. La sensibilidad de las antocianinas a los

cambios de pH se debe a que el núcleo flavilio es deficiente en electrones y por

lo tanto muy reactivo. En el caso de medios con pH por encima de 4, podría

producirse una degradación rápida de las antocianinas, produciendo

hemiacetal y chalcona, ambas inestables; por lo que es probable que gran

parte de éstas (antocianinas) se perdieran en el proceso extractivo12, 14, 15.

Ante ello, según la tabla 2, corroboramos que las antocianinas al ser moléculas

inestables, interactúan mejor en un pH 2, puesto que dichas moléculas se

estabilizan y queda favorecida la extracción de las mismas.

Fan y col. (2008), investigando la optimización de las condiciones de extracción

de antocianinas de batata morada, concluyeron que la mejor extracción es a 80

°C14.

Gorriti-Gutierrez y col. (2009a y 2009b) al estudiar la extracción de antocianinas

a partir de maíz morado concluyeron que la mejor temperatura de extracción es

a 75 °C14.

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Con respecto a la temperatura, las antocianinas se presentan inestables, ya

que a mayor temperatura, existe una mayor degradación de color, la elevación

de la temperatura estaría favoreciendo la extracción al aumentar la solubilidad

de los antocianos y el coeficiente de difusión, pero, Incrementos de

temperatura resultan en pérdida del azúcar glicosilante en la posición 3 de la

molécula y apertura de anillo con la consecuente producción de chalconas

incoloras.14, 15, 16.

Es así que, al analizar los resultados de la presente investigación en la tabla 2,

para el factor temperatura de extracción, las mejores condiciones se obtienen a

75°C.

En el caso del tiempo de extracción, el mejor rendimiento se obtiene cuando el

tiempo de extracción es menor de 1 hora lo que indicaría, que en este tiempo

se alcanzaría el equilibrio entre las fases sólida y líquida12, 14, 16.

Esto queda respaldado con los resultados de la presente investigación en la

tabla 2, para el factor tiempo de extracción, las mejores condiciones se dan a

los 60 minutos (1 hora) y a pH 2.

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V. CONCLUSION

1. Se determinó la optimización para la extracción de antocianinas del fruto

de Vaccinium corymbosum L. (arándanos), procedentes de la ciudad de

Virú, Provincia de Virú, La Libertad, con etanol al 40%, pH 2,

temperatura de 75°C y un tiempo de 60 minutos, obteniendo 2,377 mg

de antocianinas/ L de solvente.

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ANEXOS

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Anexo 1

Identificación de la especie vegetal en el HerbariumTruxillense de Trujillo

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Anexo 2

MUESTRA DE ARÁNDANO

SOLVENTES

ALCOHÓLICOS Y

MUESTRA DE ARÁNDANO

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MUESTRA DE ARANDANO Y

SOLVENTE

BALANZA ANALÍTICA

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BAÑO MARÍA

pH Metro

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ESPECTROFOTÓMETRO UV

– VIS GENESYS 20

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Anexo 3

Análisis estadístico

Post Hoc Tests

MultipleComparisons

DependentVariable:ABS

(I) Horas (J) Horas

Mean Difference (I-

J) Std. Error Sig.

95% ConfidenceInterval

LowerBound UpperBound

LSD 1 2 -,025333* ,000471 ,000 -,02642 -,02425

3 -,057333* ,000471 ,000 -,05842 -,05625

4 -,102000* ,000471 ,000 -,10309 -,10091

2 1 ,025333* ,000471 ,000 ,02425 ,02642

3 -,032000* ,000471 ,000 -,03309 -,03091

4 -,076667* ,000471 ,000 -,07775 -,07558

3 1 ,057333* ,000471 ,000 ,05625 ,05842

2 ,032000* ,000471 ,000 ,03091 ,03309

4 -,044667* ,000471 ,000 -,04575 -,04358

4 1 ,102000* ,000471 ,000 ,10091 ,10309

2 ,076667* ,000471 ,000 ,07558 ,07775

3 ,044667* ,000471 ,000 ,04358 ,04575

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

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Anexo 4

Cálculos para determinar la cantidad de antocianinas en muestras de

Arándano:

2,377 mg de Antocianinas 1000 mL de Solvente

X 100 mL de Solvente

0,2377 mg de Antocianinas 50 g Muestra de Arándano

X 100 g Muestra de Arándano

X = 0,2377 mg de Antocianinas

X = 0,4754 mg de Antocianinas/100 g

de Muestra de Arándano

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