Obtención de muestras y

transportes de

materiales para estudios

microbiológicos

Que espera el medico del Laboratorio?

Resultados confiables

Información oportuna

Personal calificado

Técnicas adecuadas y modernas

Normas generales para la recogida de muestras

La muestra debe ser representativa del proceso infeccioso evitando contaminantes

Debe ser recogida una cantidad adecuada de muestra para asegurar un examen apropiado

Debe ser tomada con dispositivos estériles y recogida en recipientes estériles y herméticos para su transporte al laboratorio

Transportada lo antes posible al laboratorio

En microbiología se analiza una muestra

clínica, que representa una porción de

material humano, con el fin de determinar la

presencia o ausencia de determinados mos.

Laboratorio de Microbiología

El conocimiento del microorganismo causal de la enfermedad infecciosa es fundamental para su:

Terapéutica

Pronóstico

Epidemiología

Laboratorio de Microbiología

Factores que dificultan el diagnóstico :

Tratamiento previo antimicrobiano

Problemas asociados con el aislamiento

del agente etiológico, a partir de

muestras contaminadas por la flora

microbiana habitual

Laboratorio de Microbiología

Las muestras recogidas de forma inadecuada, sin evitar las contaminaciones, representan el problema más frecuente para el Laboratorio de Microbiología.

Educación del personal medico y de enfermería en la utilización de técnicas correctas en la recogida de las muestras

Personal medico y enfermería: papel muy

importante en la fase preanalítica

Un buen resultado está condicionado por la correcta toma e identificación de muestras

La persona que recoge la muestra es puente de unión entre paciente y laboratorio, y puede informar sobre las distintas variables que pudieran influir en el resultado del análisis

“La extracción, manejo y transporte de las

muestras son factores claves que condicionan la

exactitud de los análisis clínicos de laboratorio y,

por tanto, la calidad de atención al paciente”

Toda muestra recolectada o conservada en forma incorrecta

puede llevar a resultados confusos ya que no permitirá recuperar

a los agentes de un proceso infeccioso, y a su vez, un diagnóstico

equivocado puede conducir al empleo erróneo y/o innecesario de

agentes antimicrobianos.

Los involucrados en la toma de muestra, deben conocer las pautas establecidas por el Laboratorio de Microbiología, cuyo rol es dar información para diagnóstico y toma de conducta terapéutica.

MédicoMicrobiólogo

Paciente

Muestras incorrectas

Transporte inadecuado

Contenedor inadecuadoMuestras no remitidas

Muestras no/mal identificadas

Muestra insuficiente

En el horario de funcionamiento del Laboratorio, las

muestras SE REMITIRAN INMEDIATAMENTE

O no se puede asegurar la viabilidad de los organismos fastidiosos ni prevenir el sobredesarollo de las bacterias acompañantes, y dejará de ser representativa del proceso que

ocurre en el foco estudiado.

En caso de no poder cumplir

con este requisito, se tendrán

en cuenta las PAUTAS DECONSERVACION.

CONSERVACION DE MUESTRASA TEMPERATURA

AMBIENTE:

EN HELADERA (4°C): EN ESTUFA (35°C) *:

- Muestras en medio de transporte

stuart.

- Líquidos de punción.

- Sangre para Lisis –

Centrifugación:

(en tubos especiales)

- Sangre

- Orinas (al acecho, chorro

medio, punción suprapúbica)

- Catéteres

- Coprocultivos en medio de

transporte , sí el lapso de

conservación es mayor de 6 hs.

-Muestras para estudio de

Micobacterias

-Esputos, BAL, S traqueales

- Muestras para estudios

Virológicos

- Muestras en medio liquido de

transporte ( tioglicolato)

*De no ser posible esta forma de

conservación, dejarlas a

temperatura ambiente.

Las muestras deben recolectarse ANTES DE LA

ADMINISTRACION DE ANTIMICROBIANOS.

De no ser

posible lo

anterior,

hay que

tener en

cuenta :

• Con, por lo menos, 48 hs de suspendido o

terminado el mismo. (excepto en el caso de

orinas: NO menos de 5 días)

• Si tuvieran vida media prolongada: esperar más

de 48 hs.

• Si no se pueden suspender: tomar la muestra

justo antes de la siguiente dosis, es decir, en el

valle de la posología.

Todos los materiales se consideran potencialmente infecciosos y deben ser

remitidos ajustándose a las normas de Bioseguridad vigentes.

Por todo lo anteriormente expuesto, SE RECHAZARAN MUESTRAS,

ENTRE OTRAS:

Criterio de

rechazo de

muestras por

el laboratorio:

• Sin rotular, o rotuladas inapropiadamente

o con datos discordantes.

• Derramadas.

• Enviadas sin el medio de transporte

correspondiente o incorrectamente

conservadas.

• Duplicadas en el transcurso de 24hs., sin la

aclaración del médico solicitante que la

justifique. Se exceptúan los Hemocultivos.

• Con agujas o cualquier otro

cortopunzante.

COMPLETAR EL PROTOCOLO DE PEDIDO con la

información específica para poder procesar adecuadamente el

material enviado.

ROTULAR adecuadamente los recipientes

Pedidos laboratoriales (PROTOCOLO DE PEDIDO) Es importante que el médico haga un pedido de análisis de manera correcta de

modo que pueda ayudar al bioquímico a la recuperación rápida de ciertos

microorganismos.

El pedido

laboratorial

debe contar con

los siguientes

datos:

• Nombre, Apellido, edad y sexo del paciente

• Fecha de la toma de muestra.

• Origen y tipo exacto de material

• Estudios solicitados

• Diagnóstico presuntivo

• Tratamiento antibiótico, desde hace cuánto

tiempo

• Nombre y firma del médico responsable.

FRASCOS

VASOS

TUBOSHISOPOSJERINGAS

PLACAS

LIMAS

ASAS

CORTAUÑAS

Utensilios Toma Muestras

BISTURÍS

Vasos

Orinas

Heces

Esputos

Tejidos

Catéteres

Cuerpos extraños

Tejidos

Biopsia

Tubos

Líquidos

Humores

Exudados

Pus

Aspirados

Hisopos

Faríngeos

Nasales

Vulvovaginales

Uretrales

Jeringas

Punción suprapúbica

Abscesos

Humores oculares

Úlceras

Placas (cajas) Uñas

Pelos

Escamas

• Lavado de manos.

• Guantes estériles.

• Limpieza de la piel con alcohol 70º.

• Desinfección con yodopovidona.

Las muestras se pueden recoger

por diversos métodos

empleando una técnica

aséptica. Son los procedimientos que se

emplean para evitar que

microorganismos no deseados

contaminen la muestra clínica

UROCULTIVOS:

• La muestra de elección es la primera orina de la mañana, pero si la urgencia del caso o la situación particular lo justificara, se puede realizar la recolección con una retención mínima de 3 hs.

• En todos los casos: utilizar para la higiene agua hervida enfriada y jabón nuevo.

• Las muestras obtenidas se colocarán siempre en frasco estéril.

•Volumen: no menos de 10 ml para una correcta interpretación del estudio.

•En caso de sospechar infección por anaerobios:

la única muestra válida es por punción

suprapúbica.

•Siempre indicar el método de obtención. Esto

es indispensable para el procesamiento y

evaluación de los resultados.

Remitir las muestra INMEDIATAMENTE al

Laboratorio.

FUERA DEL HORARIO DE RECEPCION:

Conservar muestras en heladera (4°C), como

máximo 24 hs. Para el traslado: colocar el frasco

en un recipiente con hielo. (Especialmente los

días cálidos).

Urocultivo

PROCEDIMIENTO

a) Pacientes que controlan esfínteres:

1)Chorro medio:

1.1 Sexo femenino:

Higienizar los genitales externos, con agua y jabón,

separando los labios mayores.

Enjuagar bien y no secar.

• En el caso de tratarse de pacientes adultas: colocar

tampón vaginal.

Lavarse las manos y abrir el frasco. Comenzar a orinar,

manteniendo separados los labios para evitar que el

chorro medio contacte con el periné, descartando la

primera parte de a micción.

Recolectar el chorro medio directamente en el frasco.

Descartar la última parte de la micción.

1)Chorro medio:

1.2 Sexo masculino: Higienizar los genitales con agua

y jabón, retrayendo el prepucio.

Enjuagar bien y no secar.

Lavarse las manos y abrir el frasco.

Comenzar a orinar, manteniendo retraído el prepucio, descartando la primera parte de la micción.

Recolectar el chorro medio, directamente en el frasco.

Descartar la última parte de la micción.

c) Pacientes sondados

c.1-Sondados intermitentes

• Utilizar sonda nueva estéril.

• Recoger frasco estéril.

c.2-Sondados permanentes

• De ser posible, cambiar la sonda por una nueva.

• Clampear (pinzar) la sonda 2-3 hs.

• Desinfectar con yodopovidona o alcohol iodado.

• Punzar con aguja mosquito y jeringa estéril a 10 cm del meato

urinario .

• Colocar el material obtenido en el frasco.NUNCA tomar material de la bolsa de drenaje.

MUESTRAS GENITALES:

Como se trata de muestras que provienen de sitios

que tienen gran cantidad y variedad de flora

comensal, la selección de la misma y el método de

recolección son críticos.

a) Secreción vaginal:

• Colocar el espéculo. NO usar lubricante.

• Utilizar dos hisopos diferentes:

1º Hisopo: recoger secreciones del fondo de saco vaginal. (Se utilizará para

investigar la presencia de Trichomonas, Candida spp., vaginosis por

complejo GAM, determinación del pH y del test de aminas)

2º Hisopo: limpiar el cuello de útero (endocérvix) para que quede libre de

secreciones y mucus vaginales, insertar el hisopo algunos milímetros dentro

del canal cervical y obtener el exudado.(Se utilizará para investigar la

presencia de gonococos, Mycoplasmas, etc)

• Colocarlos en los medios de transporte adecuados.

• Remitir al Laboratorio o conservar a Temperatura ambiente.

• NO refrigerar.

LOCALIZACION PATOGENOS

Vaginal

(epitelio estratificado)

- Candida spp.

- Trichomonas vaginalis

- Complejo GAMM (Gardnerella vaginalis, Anaerobios,

Mobiluncus spp, Mycoplasma spp.: Vaginosis Bacteriana)

- Streptococcus agalactiae

Endocervical

(epitelio columnar)

- Neisseria gonorrhoeae

- Chlamydia trachomatis

- Mycoplasma spp.

- Ureaplasma spp.

- Listeria monocytogenes

c) Muestras uretrales:

De elección para el estudio de las I.T.S. en el hombre.

• Remover la flora externa, retrayendo el prepucio y lavando la

zona con agua hervida enfriada y jabón.

• Recoger el exudado de la uretra con hisopo y colocarlo en

medio de transporte adecuado.

• Con otro hisopo, recolectar más exudado para realizar un

extendido haciéndolo rodar 2 o 3 veces sobre un portaobjeto.

• Si no hubiera secreción, insertar un hisopo 2-3 cm. en la

uretra y repetir la operación.

• Remitirlo INMEDIATAMENTE al Laboratorio.

FUERA DEL HORARIO DE RECEPCIÓN:

Dejarlo a Temperatura ambiente. NUNCA REFRIGERAR.

VIAS RESPIRATORIAS ALTAS:

1) Oído:No se recomienda el hisopado del canal auditivo para el

diagnóstico de infección del oído medio.

El espécimen de elección es el aspirado por punción

timpánica ya que este material es representativo del proceso

infeccioso. Pero, este procedimiento está indicado solo en

pacientes con otitis media crónica que no hayan respondido

al tratamiento con antibióticos.

Procedimiento:

Recolección, transporte y conservación según

Líquidos de Punción.

MUESTRAS ÓTICAS

OÍDO EXTERNO

MATERIAL NECESARIO: torundas con

medio de transporte,

TÉCNICA: Limpiar con antiséptico el oído

externo, tomar la muestra con torunda o por aspiración del fluido en caso de

abscesos

Nº de muestras: una de cada oído

2) Secreción Nasal:

Esta muestra NO es de utilidad para

estudio de patología del tracto

respiratorio superior.

Puede ser utilizado para estudio de

portación de Staphylococcus aureus y

de Streptococcus B hemolítico (SOLO

en caso de brotes).Procedimiento:

Insertar el hisopo 1 cm en las narinas. Rotarlo

firmemente sobre las membranas y dejarlo 10 – 15

segundos. Colocarlo en medio de transporte semisólido

3) Exudado de Fauces

• En caso de sospecha de Streptococcus

ß hemolíticos

• Observar la zona para localizar áreas de inflamación

con exudados, membranas

o úlceras. En su defecto realizar un hisopado

enérgico de amígdalas, área tonsilar y faringe

posterior.

•Si se desea realizar estudios de portación de S.

aureus y de gérmenes oportunistas en neutropénicos

(por ejemplo por aparición de brotes en Unidades de

internación). Eventualmente, enviar a su vez cultivo

de fosas nasales.

EXUDADO FARINGO-AMIGDALINO

S. pyogenes

Para la evaluación de la muestra es importante saber si:

La neumonía es intra o extrahospitalaria

El paciente está sometido o no a Asistencia Respiratoria Mecánica (ARM)

Es inmunosuprimido

Está recibiendo antibióticos y cuáles son

El proceso pulmonar es crónico. En este caso debería realizarse de rutina la búsqueda de otros microorganismos (micoplasmas, hongos)

VIAS RESPIRATORIAS BAJAS:

VIAS RESPIRATORIAS BAJAS:

El tracto respiratorio superior es la fuente más importante de contaminación para muestras de esputo, secreción traqueal, aspirado nasofaríngeo y lavado bronquial.

El árbol traqueobronquial en personas sanas normalmente es estéril o con muy baja concentración de bacterias

Tanto la cantidad como la frecuencia de colonización se incrementan en pacientes con enfermedad pulmonar crónica, traqueostomía o intubación

El aspirado traqueal: puede utilizarse para la

obtención de muestras en pacientes en Asistencia

Respiratoria Mecánica (ARM).

Las más útiles para diagnósticos de

patógenos del tracto respiratorio inferior,

tanto aerobios como anaerobios son

aquellas obtenidas por punción

(transtraqueal, pulmonar) o por

fibrobroncoscopía con cepillo protegido.

La de mayor sensibilidad y especificidad es la biopsia de

pulmón a cielo abierto, pero por tratarse de un método tan

invasivo se reserva para situaciones especiales.

1-) Esputo

• Enjuagarse la boca al levantarse con solución de bicarbonato, a fin

de disminuir la flora de la boca.

•Recolectar el esputo producto de una espectoración profunda en

envase de plástico estéril, de boca ancha, con cierre hermético.

Remitir INMEDIATAMENTE al Laboratorio.

FUERA DEL HORARIO DE RECEPCION: Conservar en la

heladera NO más de 24 hs. El frío por períodos prolongados atenta

contra la viabilidad de algunos microorganismos y la temperatura

ambiente es perjudicial por el sobrecrecimiento bacteriano.

Se aspira la vía aérea con técnica aséptica

y cánula estéril.

2) Aspirado traqueal:

•Problema: falsos positivos

20%

•Valor limitado

Lavado broncoalveolar (BAL):

• Se lava un segmento pulmonar con líquido estéril. Habitualmente se realiza con SF: 100ml para adultos

• Se aspira la vía aérea con técnica aséptica y cánula estéril.

• Se introduce el endoscopio a través del tubo endotraqueal sin aspirar para evitar contaminación hasta enclavar el extremo en el segmento elegido.

• Se instilan las alícuotas con técnica aséptica y se aspira repitiendo el procedimiento por cinco veces.

• Cada muestra se debe colocar en distintos frascos.

Técnicas cuantitativas con un punto

de corte mayor a 10.000 UCF/ml.

No debe dejarse a temperatura

ambiente, pues el recuento de

colonias no tendría valor.

COLOCAR DE INMEDIATO EN

HELADERA (4-8 ºC), donde puede

permanecer hasta 24

Lavado broncoalveolar (BAL):

Cribaje de Tuberculosis:

Los 3 esputos.

Esputos de 3 ds sucesivos.

(por la intermitencia en

la eliminación bacilar).

Mejor el primer esputo de la

mañana. Enviar rápidamente

o conservar a 4º C.

LIQUIDOS DE PUNCION:• Desinfección de la zona a punzar.

• Extraer las muestras con jeringa

• Los tubos estériles o frascos utilizados para el

transporte de las muestras deberán; en lo

posible; poseer tapa de rosca para evitar el

derramamiento, volcado ó pérdida de las

mismas.

• En la mayoría de los casos se aconseja

acompañar las mismas con 2 muestras de

sangre para hemocultivo.

A) LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO:

PROCEDIMIENTO

Recolectar el material

(según las pautas ya establecidas)

en por lo menos 2 (dos) tubos secos estériles :

a) para estudio microbiológico

b) para estudio citoquímico

Remitir en forma inmediata al Laboratorio.

Fuera del horario de recepción, dejar los tubos a T

ambiente. NUNCA refrigerar (excepto para

estudio virológico).

B) OTROS LÍQUIDOS DE

PUNCIÓN:

PLEURAL – PERITONEAL -

OTICO – ASCÍTICO –

PERICÁRDICO -

AMNIÓTICO

Se aconseja enviar el mayor

volumen posible de muestra ya

que pueden ser infecciones de

bajo inóculo.

HEMOCULTIVOS:

• Recolectar 2-3 muestras en el lapso de 24hs.

Intervalos dependen de la urgencia de la situación

clínica, 20–30 minutos entre cada una de ellas,

siempre de distintos puntos de punción.

• Ideal: recoger muestra lapso de 1h antes del pico febril,

si este pudiera predecirse. De no ser posible, hacerlo

cuando comienza.

• Realizar extracciones antes de administración de ATB.

Si no puede evitarse, hacerlo antes de la siguiente

dosis.

Procedimiento para Hemocultivos.

Extracción de sangre se debe

realizar cumpliendo las

máximas precauciones de

asepsia.

1. Lavado las manos.

2. Colocar ligadura y campo

estéril.

3. Palpar la vena a puncionar.

4. Antisepsia con alcohol 70% en

zona de piel de 10 cm de diámetro

alrededor del sitio de punción. Se

comenzará por el centro, haciendo

círculos concéntricos hacia el

exterior.

5. Repetir procedimiento utilizando

Yodo povidona al 10%.

6. Dejar actuar 1-2 min, hasta que

seque el antiséptico sobre la piel.

7. Desinfectar tapón de goma del

frasco de hemocultivo con alcohol

70%.

8. Colocarse guantes estériles.

9. Extraer sangre sin tocar en ningún

momento el campo desinfectado.

10. Inyectar directamente la sangre en

frasco. No es necesario cambiar de

aguja.

11. Mover los frascos para que la sangre

y el medio de cultivo se mezclen.

12. Para frascos de Sistemas

Automatizados, en ningún caso se

rotulará o pegará ningún tipo de

etiqueta adhesiva sobre los

códigos de barras de las botellas.

En todos los casos, el volumen a inocular debe

mantener una relación 1/10 con respecto al volumen

de caldo del frasco a utilizar.

Elegir el tipo de frasco (aeróbico, anaerobio, hongos, micobacterias,etc.)

según la situación clínica:

• Enviar las muestras

INMEDIATAMENTE al Laboratorio.

FUERA DEL HORARIO DE RECEPCIÓN: colocar a temperatura ambiente.

NUNCA COLOCAR EN LA HELADERA.

CATETERES:CATETERES REMOVIBLES:

• Previo a la remoción, extraer 1 (una)

muestra de Hemocultivo de vena

diferente a la del catéter. De no

cumplirse con este requisito, la

muestra será RECHAZADA.

• Si se sospecha infección asociada a la

conexión o a la infusión, enviar para

cultivo la infusión y la tubuladura en

bolsa sellada y rotulada.

1. Lavado de manos.

2. Guantes estériles.

3. Desinfección de zona pericatéter. Dejar secar 60".

4. Retirar el catéter, cuidando que no roce piel.

5. En forma aséptica, cortar 5 cm de la porción

distal (punta) y colocar en tubo seco estéril con tapa

de rosca. Catéteres de mayor longitud serán

rechazadas.

6. Remitir INMEDIATAMENTE al Laboratorio en

frasco estéril o conservar en la heladera 4ºC hasta

12 hs.

Métodos Utilizados en el Lab: Maki y B-B

Procedimiento para CATETERES

REMOVIBLES:

CATETERES NO REMOVIBLES:

• La evaluación de estos catéteres debe realizarse en

forma cuantitativa

• Se debe extraer una muestra de sangre de una vena

periférica diferente de la de inserción del catéter

(HEMOCULTIVO PERIFERICO) y otra de igual

volumen a través del mismo (RETROCULTIVO)

COPROCULTIVO:

Para investigación de patógenos entéricos, remitir

muestra de materia fecal recién emitida

o en medio de transporte adecuado.

•Debe tratarse de heces diarreicas.

(EXCEPTO: para estudio de portación)

• Nunca se recolectará muestra del inodoro y no se debe permitir la

contaminación de la misma con orina.

• Se aceptarán hisopados rectales solo si estos presentan materia fecal y de

pacientes muy comprometidos.

• NUNCA se utilizarán para detección de toxina de Clostridium difficile.

• NO se aceptarán hisopados anales para el estudio de diarreas

Procedimiento

1. Recoger una porción de materia fecal, preferentemente

material mucoso, purulento, sanguinolento.

2. Colocar en frasco estéril.

3. Enviar INMEDIATAMENTE al Laboratorio.

FUERA DEL HORARIO DE RECEPCIÓN:

1.Conservar a Temperatura Ambiente.

2.Si el lapso es mayor de 1-2 hs, refrigerar o colocar en un

medio de transporte. El frío puede afectar la viabilidad de

Shigella spp.

4. Para el estudio de toxinas de Clostridium difficile la

muestra se puede mantener hasta 2 horas refrigerada a

temperatura ambiente

MUESTRAS DE PIEL Y TEJIDOS BLANDOS:

Heridas quirúrgicas - Heridas abiertas - Lesiones

de piel – Abscesos (abiertos

y cerrados) - Quemaduras.

•En estas muestras es crítica la correcta

decontaminación de la piel.

•Siempre indicar si la muestra proviene

de una cavidad abierta o cerrada.

•Describir el sitio anatómico del cual se obtiene.

•De tratarse de heridas, diferenciar entre muestras superficiales y

profundas, siendo estas últimas útiles para cultivo de anaerobios,

si son recolectadas en forma adecuada.

MUESTRAS DE PIEL Y TEJIDOS

BLANDOS:

Recordar que las muestras obtenidas por

punción-aspiración (PAS) deben ser

transportadas y conservadas a temperatura

ambiente.

La jeringa no debe contener aire y la aguja

debe ser obturada con tapón de goma, en

especial ante la probabilidad de infecciones

anaeróbicas.

MUESTRAS OCULARES

Conjuntivitis alérgica

Conjuntivitis viral: adenovirus, enterovirus…

Conjuntivitis bacteriana: Neumococo, H. influenzae, S. aureus, S.

grupo A. Gonococo, Chlamydia tracomatis (hisopo seco)

MUESTRAS OCULARES

MATERIAL: Torundas con medio de transporte o suero salino

TÉCNICA:

Obtener la muestra antes de instilar analgésicos locales, colirios o antibióticos

Con una torunda mojada en suero salino frotar sobre la conjuntiva inferior y especialmente sobre el ángulo interno

Nº DE MUESTRAS: Una para cada ojo

TRANSPORTE: Envío inmediato al laboratorio y conservación a Tª ambiente