NUEVAS APROXIMACIONES TERAPÉUTICAS CONTRA EL VIRUS

DEL ÉBOLA

José Clerigué Louzado

Laura Córdoba González B. Victoria Fernández García

Estefanía Zhan Zhou Marina Zorita Moreno

Facultad de Farmacia

Universidad Complutense de Madrid

Objetivos • Definir brevemente la enfermedad producida

por el virus del Ébola. • Dar a conocer las nuevas estrategias

terapeúticas de la enfermedad. • Informar del desarrollo de las posibles

vacunas.

Material y métodos:

• Revisión bibliográfica

¿Qué es el Ébola?

Clasificación

Dominio: Virus

Grupo: Virus RNA monocatenario

negativo

Orden: Mononegavirales

Familia: Filoviridae

Género: Filovirus

Especie: Ebolavirus

-Virus RNA monocatenario (–) que causa enfermedad mortal muy poco frecuente Enf. del virus del Ébola (EVE), Ébola (coloquial), Fiebre Hemorrágica del Ébola (FHE). -Descubrimiento 1976 Río Ébola (Rep. Democrática Congo) Brotes esporádicos en África Europa, América…

-Tasa de letalidad 90%. - 5 cepas.

Diagnóstico:

-Descartar: paludismo, fiebre tifoidea, cólera, peste, meningitis, hepatitis, fiebres hemorrágicas víricas, etc.

- Pruebas laboratorio: ELISA, detección Ag, seroneutralización, RT-PCR, cultivo celular. - Muestras pacientes gran peligro biológico CONTROL!

Tratamiento: Fármacos y vacunas en estado experimental para una epidemia sin

precedentes.

- Zmapp (Mapp Bio (Biopharmaceutical)) 3 anticuerpos monoclonales. Probado por primeros infectados.

- Avigan (Toyama Chemical): antiviral para gripe. Inhibe reproducción del virus. Prueba en roedores. Comprimidos.

- TKM-Ebola (Tekmira): probado en médico infectado en Nebraska. Evita la replicación del virus.

- GBV006 (Globavir Biosciences): cóctel de moléculas ya aprobadas individualmente (FDA).

- AVI-7537 (Sarepta Therapeutics): eficaz en monos, 1ª etapa test. - Suero de convalecencia: anticuerpos de individuos curados. - Vacunas: GSK (1ª etapa test humanos), VSV-EBOV, vacuna virus

Ébola/Marburg (probada en humanos, nueva prueba clínica prevista).

Artículo: UE ofrecerá beneficios de medicamento ‘huérfano’ a tratamientos contra el Ébola

- EMA: estatus de medicamento “huérfano” se concede a fármacos experimentales contra enfermedades mortales ( - de 5/10000 personas en UE) como Ébola.

- En proceso prioritario para ofrecer a los ttos y vacunas contra

Ébola los beneficios de medicamento “huérfano” (>exclusividad en el mercado alentar su desarrollo).

- Beneficios financieros asesoramiento científico gratuito, exenciones de impuestos y 10 años de exclusividad en mercado.

MB-003 • Anticuerpos monoclonales quiméricos ratón/humano anti-

ébola (c13C6, h13F6, c6D8) . • Caracterización de tres mAbs de ratón dirigidos contra los

epitopos de tres glicoproteinas de EBOV. • Se obtienen de células de ovario de hamster chino (CHO) o de

Nicotiana benthamiana.

MB-003 Método RAMP • Vectores virales deconstruidos • Introducción del vector mediante Agrobacterium tumefaciens • Proceso rápido, cambio de escala fácil y no puede expandir el gen

recombinante en otros individuos. • Nicotiana benthamiana: cepa transgénica con glicosiltransferasas

específicas inhibidas por RNAi = disminución ADCC.

Introducción vector Obtención Ac monoclonales

ZMab • Combinación de tres anticuerpos monoclonales que neutralizan

directamente la glicoproteína del virus del ébola (EBOV). • Protección 50-100% administrado a las 48 o 24 horas tras la

exposición respectivamente. • Administración intravenosa de tres dosis de ZMab con los mAbs

1H3, 2G4 y 4G7.

ZMapp • Combinación de

anticuerpos monoclonales c13C6, c2G4 y c4G7.

• Mapp Biopharmaceutical • LeafBio • Defyrus Inc. • Gobierno de EE.UU. • Agencia de Salud Pública

de Canadá (PHAC).

siRNA

siRNA como tratamiento Dianas de interés del EBOV Genes que codifican 3 proteínas principales: • VP35 • Proteína L: actividad RNA polimerasa RNA dep. • VP34 (y VP35): efectos inhibitorios sobre la liberación de IFN por parte del

hospedador.

¿Qué propone el estudio? • Se utilizó una mezcla de 3 siRNAs, uno para cada proteína diana.

Estudio de Geisbert W T et al. (2010).

Complejo RNA polimerasa

Encapsulación lipídica siRNA • SNALPS: Stable Nucleic Acid Lipid Particles =

Partículas lípidicas estables de ácido nucleico. • Se introducen los 3 tipos diferentes de siRNA en la

misma partícula lipídica. • Formación espontánea de vesículas que deben ser

esterilizadas por filtración. • Compuestas por:

o Colesterol sintético o Dipalmitoilfosfatidilcolina o Ácidos grasos catiónicos (y otros) o PEG

• La encapsulación protege al siRNA de: o La degradación por nucleasas del plasma. o El reconocimiento de receptores tipo Toll: activación de la

respuesta inmune y liberación de citoquinas

Resultados del estudio Se propusieron 2 pautas de tratamiento: • 4 dosis (30 min, 1, 3 y 5 días después de la infección): 2/3

macacos sobreviven. • 7 dosis (30 min, 1,2,3,4,5 y 6 días p.i.) : 4/4 macacos

sobreviven.

• Resultados similares a los obtenidos para el virus de Marburgo-Angola (también un filovirus), con nanopartículas lipídicas con siRNA contra la expresión de su nucleoproteína.

• El futuro parece prometedor para este tratamiento.

Se necesita más investigación…

Obtener mayor información sobre:

• Farmacología • Dosis • Posible toxicidad • Prevención de la respuesta inmune a SNALPS • Conocer cuántos días pueden pasar tras la infección

o tras los primeros síntomas para que el tratamiento siga siendo efectivo

USO PMO

¿Qué es un PMO? • OligoNT “antisense”bloqueo estérico de transcripción,

“splicing”…

• Anillo morfolínico, unión por enlaces metilenfosforodiamidato

• Se han manifestado efectivos para proveer una protección postexposición (o postinfección) frente a filovirus

• Pruebas sobre VP-35 y VP-24

Ventajas PMO • Gran estabilidad (se puede formular en vehículos acuosos

habituales)

• Efectividad por diversas rutas de administración : buenas BDP • Síntesis y diseño rápidos Por ello: buenas características para uso en circunstancias

difíciles • Además, no se degrada por RNasaH

Mejoras PMO(I) Para soslayar resistencias: • Uso bases promiscuas (inosina) • Dirigir contra secuencias conservadas • Dirigir contra secuencias claves en interacción hospedador-

virus

Mejoras PMO (II)

• PPMO: adición o pequeños péptidos penetradores de células ( ricos en arginina) penetración mejorada. o ácido 6-aminohexanoico: mejor estabilidad y escape endosomal

• PMOplus: adición entre bases de número limitado(2-5) de cargas positivas: o mejor cinética de unión y eficacia o menos problemas de tolerabilidad que PPMO

Mejoras PPMO (III)

¿Es efectivo?

• Se ha visto eficacia en ratón , cerdo de Guinea y primates • Bien tolerados en ensayos clínicos humanos podría usarse

para ttos. profilácticos para médicos y enfermeros en situaciones de emergencia

• ¡Ojo! Se vio que hay poca homología VP-24 de cepa Zaire

(probada) a Sudán

Vacunas en evaluación clínica

• La OMS ha concedido una gran prioridad a la evaluación acelerada de todas las vacunas contra el virus del ébola utilizando materiales aptos para uso clínico.

• Ya se cuenta con dos vacunas experimentales para uso clínico que se están utilizando en ensayos clínicos de la fase 1.

- GSK/NIAID: cAd3-ZEBOV - Newlink/PHAC: rVSV-ZEBOV

GSK/NIAID: cAd3-ZEBOV

• Ha sido obtenida por GlaxoSmithKline con la colaboración del

Instituto Nacional de Alergias y Enfermedades Infecciosas de los Estados Unidos.

• Utiliza como vector un adenovirus obtenido del chimpancé al que se la ha insertado un gen del virus del Ébola.

GSK/NIAID: cAd3-ZEBOV Objetivos

Resultados Fase I

• Evaluar la seguridad y tolerabilidad en adultos sanos (18-50 años).

• Evaluar la respuesta de anticuerpos a las 4 semanas después de la vacunación.

• Evaluar las respuestas de las células T específicas de la GP del virus a las 4 semanas después de la vacunación

• La vacuna cAd3-EBO produce el 100% de protección a las 5 semanas

• A los 10 meses, la protección es del 50%.

• cAd3-EBO + vacuna MVA-EBO induce una protección duradera del 100% a los 10 meses.

• La vacuna sólo ha sido evaluada para la profilaxis pre-exposición.

Newlink/PHAC: rVSV-ZEBOV • Ha sido obtenida por el Organismo de Salud Pública del

Canadá en Winnipeg. La licencia para comercializarla es propiedad de una empresa estadounidense, NewLink Genetics.

• Utiliza un virus atenuado de la estomatitis vesicular, una enfermedad del ganado, uno de cuyos genes ha sido remplazado por un gen del virus del Ebola.

Newlink/PHAC: rVSV-ZEBOV

• Los vectores recombinantes basados en vacunas vesiculares, que codifican una glicoproteína EBOV en lugar de la glicoproteína de VSV, han demostrado 100% de eficacia contra homóloga Sudán ebolavirus (SEBOV) o Zaire ebolavirus (ZEBOV) en primates.

• En humanos se están realizando los estudios en Fase I de los

cuales no se han obtenido todavía datos del grado de protección.

Vacunas • Los ensayos se están realizando en voluntarios sanos y tienen la

finalidad de examinar la seguridad y la capacidad inmunógena, así como seleccionar la dosis adecuada.

• Dos ensayos de la fase 1 de la vacuna cAd3-ZEBOV comenzaron en septiembre de 2014 en los Estados Unidos y el Reino Unido, y el primer ensayo de la fase 1 de la vacuna VSV-ZEBOV debió empezar los primeros días de octubre en los Estados Unidos.

• Desde la OMS se ha pedido agilizar la realización de los ensayos clínicos de la fase 2, que permitirán obtener más datos sobre la seguridad y comprobar que las vacunas confieren protección.

• El próximo paso consistirá en distribuir esas vacunas tan pronto como sea posible y en cantidades suficientes para proteger al personal sanitario de primera línea y modificar la evolución de la epidemia.

Conclusiones • Importancia de desarrollar nuevos fármacos para

combatir esta enfermedad de alta letalidad. • Necesidad urgente de realizar ensayos clínicos en

humanos de los posibles tratamientos. • Controlar los focos con tratamientos seguros y

efectivos para impedir la expansión de la enfermedad.

• Llevar a cabo el desarrollo de las posibles vacunas para poder realizar una buena profilaxis.

Bibliografía http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs103/es/ (OMS) http://www.forbes.com.mx/ue-ofrecera-beneficios-de-medicamento-

huerfano-tratamientos-contra-ebola/ (FORBES) http://noticias.lainformacion.com/salud/tratamiento-de-salud/los-siete-

tratamientos-contra-el-virus-del-ebola_afdwPFD9CGtFlxaUnYgoc1/ (LA INFORMACIÓN)

http://www.cdc.gov/vhf/ebola/spanish/preguntas.htmlv (CDC) http://www.la-razon.com/index.php?_url=/sociedad/Virus-OMS-decreta-

emergencia-mundial-ebola_0_2103989603.html (LA RAZÓN) http://blogs.unicef.org/2014/09/17/las-5-medidas-de-unicef-para-combatir-

el-ebola/ (UNICEF)

Bibliografía • www.nature.com/nature/journal/v514/n7520/full/nature13777.html • www.mappbio.com/ • Qiu X, Audet J, Wong G, Pillet S, Bello A, Cabral T, Strong JE, Plummer F,

Corbett CR, Alimonti JB, Kobinger GP. Successful treatment of ebola virus-infected cynomolgus macaques with monoclonal antibodies. Sci. Transl. Med. 2012 Jun 13;4(138):138ra81.

• Olinger Jr. GG, Pettitt J, Kim D, Working C, Bohorov O, Bratcher B, Hiatt E, Dume SD, Johnson AK, Morton J, Pauly M, Whaley KJ, Lear CM, Biggins JE, Scully C, Hensley L, Zeitlin L. Delayed treatment of Ebola virus infection with plant-derived monoclonal antibodies provides protection in rhesus macaques. PNAS 2012 109 (44) 18030-18035

• Zhang YF, Li DP, Jin X, Huang Z. Fighting Ebola with ZMapp: spotlight on plant-made antibodies. Science China 2014 Oct Vol. 57 Nº 10: 987-988.

Bibliografía • Geisbert W T, Robbins M, Geisbert G B et al. Postexposture protection of non-

human primates against a lethal Ebola virus challenge with RNA interference: a proof-of-concept study. Lancet 2010;375:1896-905.

• Emily P T et al. Marburg virus infection in nonhuman primates: Therapeutic treatment by lipid-encapsulated siRNA. Sci Transl Med 6, 250ra116 (2014).

Bibliografía • Discovery and Early Development of AVI-7537 and AVI-7288 for the

Treatment of Ebola Virus and Marburg Virus Infections Patrick L. Iversen,1,* Travis K. Warren,2 Jay B. Wells,2 Nicole L. Garza,2 Dan V. Mourich,1 Lisa S. Welch,2 Rekha G. Panchal,2 and Sina Bavari2

• Chemical Modifications of Antisense Morpholino Oligomers Enhance Their Efficacy against Ebola Virus Infection Dana L. Swenson,1,†‡ Kelly L. Warfield,1,† Travis K. Warren,1 Candace Lovejoy,2 Jed N. Hassinger,2 Gordon Ruthel,1Robert E. Blouch,2 Hong M. Moulton,2 Dwight D. Weller,2 Patrick L. Iversen,2,* and Sina Bavari1,

• Advanced morpholino oligomers: a novel approach to antiviral therapy. Warren TK1, Shurtleff AC, Bavari S.

• VP35 knockdown inhibits Ebola virus amplification and protects against lethal infection in mice.

• Enterlein S1, Warfield KL, Swenson DL, Stein DA, Smith JL, Gamble CS, Kroeker AD, Iversen PL, Bavari S, Mühlberger E.