Mohos y Levaduras

Ao de la Diversificacin Productiva y del Fortalecimiento de la Educacin Universidad Nacional del

Callao Escuela Profesional de Ingeniera Qumica Facultad de

Ingeniera Qumica

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA DE ALIMENTOS

91 G

IDENTIFICACIN DE MOHOS Y LEVADURAS

PROFESORA:

Ing. HERRERA SNCHEZ SONIA.

INTEGRANTES:

Albinco Quispe Jose Alexander 1026120516

Daz Guevara Lzbeth 092883B

Revoredo Cornejo Javier 1126120247

Tanohuye Tanohuye Takeshi Pablo 1001616

Vega Vega Elizabeth 092899F

2015-A

U N A C Facultad de Ingeniera Qumica

Laboratorio de Microbiologa de Alimentos Pgina 1

INTRODUCCIN

Los mohos y bacterias se encuentran presentes en nuestra vida diaria, son tan

pequeas que a veces se dice que las bacterias ya existan an mucho antes de

que apareciera el hombre, se adaptan a diversas temperaturas y habitan hasta en

los lugares menos pensado, es por esto encontramos bacterias beneficiosos en

nuestro organismo que nos ayudan a sintetizar nutrientes. Pero as como algunas

bacterias beneficiosas existen otras perjudiciales para nosotros as como por

ejemplo tenemos las que producen enfermedades como la neumona, producida por

el neumococo bacteriano que produce una infeccin directa y mortal.

Los mohos ms conocidos como hongos, se encuentran y desarrollan en materias

orgnicas como el agua, aire, suelo, etc. Esto se produce al descomponerse la

materia orgnica (putrefactarse).son causantes de plagas e infecciones en la piel.

As mismo son utilizados en la industria farmacutica y alimentara, ya que incluye

las levaduras que se utilizan para la fabricacin de pan y vino.

Los mohos y hongos son considerados dentro del reino vegetal, pero no son

vegetales ya que no contienes clorofila, por lo cual hoy en da poseen su propio

reino.



I. OBJETIVOS:

Realizar adecuadamente mediante el mtodo de cuenta en placa, el nmero

de mohos y levaduras viables presentes en productos destinados al consumo

humano.

Evaluar la calidad microbiolgica de un alimento.

II. MARCO TERICO

Los hongos que producen micosis en el ser humano se encuentran en dos estados

morfolgicos bsicos: levaduras y mohos

Los hongos tienen una nutricin absortiva, quimio hetertrofa, con reservas nutritivas

de glucgeno y paredes celulares de quitina, celulosa, glucanos; lo que justifica que

se siten en un reino independiente: el de los Gunfi o Mycetae.

La mayora tiene un habitat saprofito, encontrndose en los ms diversos biotopos.

Puede ser uni o pluricelulares y presentan una gran variedad morfolgica.

LEVADURAS

Hongo unicelular, redondo o elipsoidal que se reproduce por gemacin o fisin

binaria. La gemacin es la protrusin externa de parte del protoplasma materno

(gema o yema), que va creciendo progresivamente, hasta que se desprende

produciendo un nuevo individuo. Cada uno de estos elementos se denomina

blastosporo y a este tipo de divisin blastosprica. La clula progenitora queda con

las cicatrices de las distintas gemaciones. Es frecuente que exista el fenmeno del

"dimorfismo". Esto es, que una levadura forma parte de la evolucin morfolgica de

un hongo filamentoso y al revs. Una levadura que fuese capaz de producir hifas,

sera un hongo dimrfico.



Las colonias que crecen en un sustrato pueden ser cremosas o mucoides, lisas o

plegadas, limitadas circulares, blancas o rojas.

El prototipo es la Candida y a diferencia de los anteriores son ms agresivas y

difunden mejor por lo que pueden localizarse en partes ms profundas, como las

mucosas. Producen las micosis intermedias o candidiasis.

MOHOS

Hongo multicelular. Su estructura filamentosa se desarrolla a travs del crecimiento

continuo de una propgula. El elemento tubular que emerge se denomina "hifa". El

conjunto y las distintas ramificaciones de las hifas se denominan "micelio" o "thallus".

Las "hifas" pueden introducirse en el sustrato formando un micelio vegetativo o

proyectarse hacia el exterior constituyendo el micelio areo, que es el que define

aspecto y morfologa de la colonia, pudiendo ser: algodonoso, plumoso, lanudo,

velloso, sedoso, brillante, mate, arrugado, plegado, plano, acuminado, extendido,

desparramado, circunscrito, membranoso, cerebriforme, pigmentado o no, etc.

En este micelio se producen elementos de propagacin o propgulas que pueden

ser: esporas, conidios, fragmentos de micelio, esclerocio, etc.

Existe un grupo que merece destacarse por su frecuencia y tipo de patologa, los

Dermatofitos.

Estos poseen enzimas proteolticos capaces de digerir la queratina de la que se

alimentan, por tanto van a localizarse en zonas muy superficiales como la piel, ua

y pelos produciendo micosis superficiales llamadas Dermatofitosis o "Tias" (tineas).

Los ms representativos son Epidermophyton, Microsporum y Trichophyton.

Estructura

Los hongos como clulas eucariotas poseen:

-Ncleo con membrana que encierra entre 5 y 20 cromosomas.

-Mitocondria 6 a 10 por clula.

-Algunas son encapsuladas, inmviles, poseen esteroles en su membrana

citoplasmtica.



-Tipo de nutricin quimio hetertrofos, utilizan compuestos orgnicos como fuente

de carbn y energa.

-La mayora tiene pared celular.

-Anaerobios o aerbicos facultativos.

-Crecimiento pH entre 2 y 9, temperatura entre 10 y 40 grados centgrados.

REPRODUCCIN

Los hongos se multiplican a travs de estructuras que pueden ser asexuales (slo

mitosis)

o sexuales (meiosis previa fusin del protoplasma y ncleo de clulas distintas). La

tendencia actual en micologa es restringir el trmino espora a las propgulas que

se desarrollan dentro de un esporangio o las producidas por va sexual.

REPRODUCCIN ASEXUAL.

Bajo esta denominacin quedan englobados el crecimiento vegetativo y la

reproduccin mediante formacin de elementos resistentes y diferenciados que son

propgulas asexuales.

stas pueden ser de dos tipos: esporangios oras y conidios.

Las esporangio esporas se encuentran dentro de la una estrucutra globosa

denominada esporangio y sin caractersitcas de Zygomycetes. Las conidias se

forman a partir deculas especializadas en una estructura hifal que es el conidiforo.

Su clasificacin se basa de acuerdo al proceso de desarrollo o conidiognsesis, que

puedeser tlico o blstico.



o Cndidos tlicos: Son los desarrollados dentro del cuerpo. Un fragmento de

la hifa se delimita por en tabique ms grueso y queda diferenciada

(artroconidia)

o Cndidos blsticos: Producidos por un proceso de gemacin o crecimiento

polar en la clula conidigena que da lugar a la formacin del conidio:

o Blastoconidia: las gemaciones de la levadura.

o Fialoconidias: la clula conidigena es una filide o botella de la que emergen

las conidias

o Aneloconidia: Cuando en la clula conidigena queda una franja o anillo por

cada conidia que emerge.

REPRODUCCIN SEXUAL

Da lugar a un nmero par de clulas denominadas esporas sexules. segn el tipo

morfolgico de esta espora, asi como el tejido o estructuras que lo sostienen, los

hongos se clasifican en seis divisiones distintas: Myxomicota, Chytridiomycota,

oomycota, zygomycota, ascomycota y basdiomycota.



VISUALIZACIN, CULTIVO E IDENTIFICACIN DE LOS HONGOS

- EXAMEN MICROSCPICO

El examen microscpico de los hongos en las muestras clnicas o de los cultivos se

efecta previa tincin o directamente en fresco.

Los hongos se observan en nuestras clnicas tejidas con la tincin de Gram como

Gram positivos. Tambin se visualizan bien contrastando las muestras con una gota

de azul de lactofenol.

En productos fluidos en los que se sospecha la existencia de levaduras capsuladas,

como el criptococo, puede depositarse en el prota una gota de material, y aadir una

gota de tinta china, lo que permite observar la levadura con la cpsula.

Muchas veces el examen microscpico de las micosis de los tejidos y rganos

profundos se hace por tcnicas histolgicas a partir de biopsias.

La hematoxilina-eosina se til para examinar las lesiones inflamatorias que, en

ciertas ocasiones, orientan el diagnstico, pero no permite la deteccin de elementos

fngicos, que se tien mal por esta tcnica. La tincin de PAS colorea intensamente

la pared polisacrido de los hongos y permite na deteccin rpida de los elementos

fngicos en los tejidos.

Las tinciones argentinas permiten igualmente reconocer los elementos fngicos ya

que la pared se tie en negro. En los tejidos de los hongos pueden observarse como

levaduras aisladas, o como filamentos ramificados infiltrantes.



- CULTIVO

Los hongos crecen bien en medios artificiales y tienen requerimientos nutritivos

simples, una fuente de carbono orgnico, generalmente azcar, y de nitrgeno

suelen ser los elementos suficientes para obtener un buen crecimiento.

Junto a ellos, un soporte slido, el agar, permite a los hongos filamentosos el

desarrollo del micelo areo, donde se localizan las estructuras reproductoras y el

desarrollo de colonias en el caso de las levaduras.

El medio de cultivo ms utilizado para los hongos es el medio de Saouraudm que

rene estas caractersticas y un pH de 5,6, que dificulta el crecimiento bacteriano.

No es cierto que los hongos requieran necesariamente para su crecimiento ser

cultivados en el medio de Saboureaud, la mayor parte de medios de cultivo utilizados

en bacteriologa permiten su desarrollo, pero su utilizacin est consagrada por la

costumbre. De hecho, la mayora de las descripciones de crecimiento y

caractersticas morfolgicas de las colonias fngicas se han hecho sobre el medio

Saboureaud.

La adicin al medio de antibiticos como el cloranfenicol o la gentamicina,que

inhiben el crecimiento bacterias contaminantes, o anti fngicos especiales (como la

actidiona o cilohexamida) que inhiben el crecimiento de muchos hongos no

patgenos, transforman al medio de Sabouraud en un medio ms selectivo.

Los medios de cultivo despus de sembrados, se incuban en aerobios y la

temperatura ptima suele ser 25-30 C para los que producen infecciones profundas.

Los hongos levaduriformes dan lugar en 24-48 horas a colonias de aspecto y

morfologa similar a las bacterias. El desarrollo de las colonias de os hongos

filamentosos es mucho ms variable; algunos crecen muy lentamente, pero sus

colonias son muy caractersticas y en general se diferencian fcilmente de las

levaduras.



- Medio de cultivo Sabouraud.

- Medios para aislamientos especiales:

- Medio de patata: T.rubrum Aadiendo zanahoria y bilis (Cndida albicans) o

glucosa (Tricophyton rubrum).

- Medio de arroz: Microsporum auduinii

- Medio Czapek: Aspergillus spp.

- Medio de alpiste: Criptococcus neoformans.

- Medio Chromagar Candida: Cndida spp.

- IDENTIFICACIN

Un hongo se identifica en primer lugar por la morfologa macroscpica de la colonia,

color, textura y velocidad de crecimiento.

Para observar la estructura microscpica puede tomarse un pequeo fragmento de

cultivo y montarlo entre cubre y porta, en fresco o contrastado con un colorante para

su posterior observacin, lo que permitir confirmar la sospecha de hongo

levaduriforme o filamentoso basada en la morfologa colonial.

Los hongos filamentosos se identifican a nivel de gnero especie por la morfologa

del micielo, pero sobre todo por las caractersticas microscpicas de sus esporas

asexuadas y los elementos que las originan.



Para conseguir la produccin de esporas a veces se requieren medios de cultivo

especiales que facilitan la esporulacin. Las estructura reproductivas asexuadas

(conidioforos) son muy frgiles y para poder observarlas al microscopio sin

distorsionarlas o destruirlas se emplean tcnicas especiales (micro cultivo).

Los hongos no esporulados (micelio estril) son difcilmente identificables.

Los hongos levaduriformes se identifican mediante pruebas metablicas, de modo

semejante a las bacterias.

-AGENTES FNGICOS

La composicin antignica de los hongos es compleja y vara segn la estructura

anatmica considerada (levadura, hifa, espora) y el resultado metablico.

En algn caso los antgenos principales de los hongos han sido purificados y

caracterizados tanto en su composicin qumica como en su localizacin celular,

pero en otros casos se trabaja con extractos antignicos ms o menos purificados,

cuya composicin precisa se desconoce.

Estos extractos antignicos pueden ser celulares o metablicos, en este ltimo caso

son productos celulares segregados al medio de cultivo. En el criptococcus el

antgeno ms estudiado es el capsular, de estructura polisacardica.

Su deteccin en los lquidos orgnicos constituye un mtodo de diagnstico de la

infeccin.

La mayora de los antgenos fngicos se localizan en la pared, siendo principalmente

mnanos y protenas estructurales.

La complejidad antignica de los hongos, puede documentarse en el estudio de

Aspergillus. Sus antgenos son muy variados y los extractos celulares enfrentados

a sueros de paciente infectadas pueden mostrar ms de 52 bandas antignicas

diferentes reconocidas por el suero inmune.

Algunos antgenos, como el polisacrido capsular del criptococcus, algunos de

Candida e incluso de aspergillus, se han purificado y obtenido anticuerpos

especficos (monoclonales) que han permitido su caracterizacin precisa.



III. MATERIALES Y REACTIVOS:

- Solucin salina al 8%

- 10g de pie de manzana

- Agua destilada

- Agar saboraud selectivo

- Placas Petri

- Pipetas

- Vaso

- Probeta

- Mechero

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Primero colocamos el Agar SABOURAUD en un vaso precipitado de 250ml

que para someterlo a calor por medio de un mechero y as fusionar al agar.



2. Luego preparamos la solucin salina al 0,08%

10 gr de sal en agua destilada

3. Pesamos 10gr de muestra que es MERMELADA FANNY.



4. A los 10gr de la muestra, agregamos 90ml de solucin salina (concentracin

de la solucin = 10-1 g/ml), luego de sta mezcla separamos 1ml en un tubo y

agregamos 9ml de solucin salina (concentracin de la nueva solucin = 10-

2 g/ml).



5. De la solucin de 10-2 g/ml, tomamos 1ml, colocamos en la caja Petri y

adicionamos 15ml del medio lquido (agar sabouraud) y lo dejamos enfriar.

6. Colocamos a la incubadora a 37o C por un tiempo de 2 o 3 das.



7. Despus sacamos nuestra muestra de la incubadora y contamos colonias.

En nuestro caso solo encontramos 11 colonias.

11 102

Contaj

e

Factor de

disolucin



INFORME DE ENSAYO

o Anlisis : Mermelada

o Lugar : Laboratorio de microbiologa (FIQ - UNAC)

o Fecha de Muestreo : 21/04/2015

o Fecha de Ejecucin : 25/04/2015

RESULTADOS MICROBIOLOGICOS

ENSAYO

RESULTADO(UFC/ml)

LMP(m)

Mohos

1.102

102

Levaduras

10.102

102



V. CONCLUSIONES

Se observ 11 colonias de color los cuales se interpretaron como hongos ya

sean mogos y levaduras

La muestra no cumple con las condiciones microbiolgicas de calidad

sanitaria e inocuidad segn la norma 591-2008/MINSA y 1020-2010/MINSA

, al presentar un UFC encima del lmite permisible, por lo que no es apta para

el consumo humano.

VI. RECOMENDACIONES

Homogenizar correctamente la muestra en la placa petri.

Al momento de la siembra, colocar el agar en la placa petri a la temperatura

correcta, para evitar que los microorganismos mueran por el exceso de calor

del medio de cultivo.

VII. BIBLIOGRAFIA

Prescott, L. M., Harley, J. P., y Klein, D. A. Microbiologa. 4 edicin. McGraw-

Hill Interamericana, 1999

Daz, R., Gamazo, C, y Lpez-Goi, I. Manual prctico de Microbiologa. 2

edicin. Masson, S.A. Barcelona, 1999

http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/sabouraudgluagar.htm

http://bd.com/europe/regulatory/Assets/IFU/HB/CE/PA/ES-PA-254515.pdf

Mohos y Levaduras

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