Microbiología Clínica: Tema 11

Microbiología Clínica: Tema 1 1

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INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA CLÍNICA


PROCESO DE APRENDIZAJE

• Conocimientos---------SABER. • Microbiología Medica.Microorganismos productores

• Hábitos---------------- SABER HACER. Microbiología Clínica. Pacientes con síndromes

de etiologia microbiana

• Actitudes--------------- SABER SER MEDICO.


MICROBIOLOGÍA CLÍNICA

• Diagnósticos etiológicos preliminares.• Utilización racional de las técnicas

diagnósticas.• Correcta obtención de muestras.• Fundamentos de técnicas y métodos

diagnósticos.• Evaluación correcta de los resultados.


FASES EN EL DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO

• Clasificación inicial. Tiene una infección ?

• Clasificación sindrómica.

• Que muestras tomar ?

• Cuando tomarlas ?

• Como tomarlas ?

• Diagnósticos simultáneos o sucesivos


FASES DEL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

• Fase pre analítica:– Proveer información sobre recogida/transporte y

conservación de las muestras.– Interpretación de los resultados.– Utilización de la prueba.

• Fase analítica:– Producir resultados de calidad.

• Fase post analítica:– Revisar exactitud del resultado.– Evaluar la relevancia clínica.


RELEVANCIA CLÍNICA

• Modificación de nuestra actitud con el

paciente:

– Gravedad del proceso

– Otras actividades derivadas• Declaración obligatoria

• Aislamiento del paciente

• Indicación de profilaxis


MISIONES DE UN SERVICIO DE MICROBIOLOGÍA

• Información necesaria para tomar una decisión clínica y adopción de medidas preventivas.

• Normas de obtención de muestras para un correcto diagnóstico microbiológico.

• Identificación de microorganismos.• Estudio de sensibilidad a antimicrobianos.• Facilitar recepción de muestras.• Envío rápido de resultados.• Valoración de las técnicas diagnósticas.• Puesta al día de los conocimientos.


NO PIDAS NADA QUE SI ES POSITIVO NO SEPAS QUÉ

HACER

UTILIZACIÓN DE UNA TÉCNICA DIAGNÓSTICA


UTILIZACIÓN DE UNA TÉCNICA DIAGNÓSTICA

• Valoración previa de que un paciente presente o no la enfermedad.

• Planteamiento inicial antes de solicitar una prueba diagnóstica de cual va a ser nuestra actitud y decisión después del resultado de la misma.

• Conocimiento de la eficacia de una prueba a utilizar.


PARÁMETROS DE UNA TÉCNICA DIAGNÓSTICA

• Sensibilidad• Especificidad• V.P.Positivo• V.P.Negativo• Eficiencia• Relevancia clínica

• Verdadero positivo• Verdadero negativo• Falso positivo• Falso negativo


SENSIBILIDAD (S)

S =Verdadero positivo (VP)

(VP) + Falso negativo (FN)

Verdadero negativo (VN)E =

X 100

X 100(VN) + Falso positivo (FP)

ESPECIFICIDAD (E)


EFICIENCIA

X 100VP + VN

Total


VALOR PREDICTIVO POSITIVO (VPP)

VPP =(VP)

(VP) + (FP)

(VN)VPN =

X 100

X 100(VN) + (FN)

VALOR PREDICTIVO NEGATIVO (VPN)


ERRORES DIAGNÓSTICOS

• Falso Positivo: Diagnóstico microbiológico de

un paciente que no padece la enfermedad

infecciosa. I.T.U.

• Falso Negativo: Descartar una patología

infecciosa en un paciente infectado. Meningitis

meningocócica.


VALOR PREDICTIVO DE UNA PRUEBA CON UN 95% DE S. Y UN 95% DE E. VARIACIONES EN FUNCIÓN DE LA PREVALENCIA DE

LA ENFERMEDAD

Prev. Enfermedad (%) Valor Predictivo (%)

1

2

5

10

15

20

25

50

16’1

27’9

50

67’9

77

82’6

86’4

95


NORMAS GENERALES DE TOMA DE MUESTRAS CLÍNICAS PARA EL DIAGNÓSTICO

DE LAS EE.II.• La muestra debe ser representativa del cuadro

clínico.• Debe obtenerse antes de la instauración del

tratamiento antimicrobiano.• En determinados procesos infecciosos (p. ej.

septicemia) el momento de la obtención puede ser importante.

• Debe transportarse rápida y adecuadamente al laboratorio.

• Debe rotularse correctamente y venir acompañada de una orientación o juicio clínico que permita realizar las técnicas adecuadas al microorganismo sospechado.


MUESTRAS PARA EL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO: TIPOS

• Muestras de obtención directa de localizaciones estériles. Alta rentabilidad.

• Muestras de obtención indirecta de localizaciones estériles. Rentabilidad dependiente de la flora saprofita.

• Muestras obtenidas de localizaciones con flora microbiana.

• Muestras para el diagnóstico virológico. Alta rentabilidad , si no es flora viral habitual.


PRINCIPALES MUESTRAS CLÍNICAS PARA AISLAMIENTO DE VIRUS

Cuadro clínico Exudado faríngeo

LCR Orina Heces Vesículas Otros

Meningitis y Encefalitis

V. de la parotiditis

Enterovirus

Herpes simple

Respiratorios:

Gripe y V. parainfluenzae

Adenovirus

(++++)

(+++)

(+/-)/(++++)

(++++)

(++++)

(++)

(++)

(+/-)

(-)

(-)

(+)

(-)

(-)

(-)

(-)

(-)

(+++)

(-)

(-)

(+++)

(-)

(-)

(+)

(-)

(-)

Biopsia (++++)


MÉTODOS DIAGNÓSTICOS

• Métodos directos:– Visualización del microorganismo.– Aislamiento del microorganismo.– Detección de antígenos.– Detección de metabolitos, componentes y

ácidos nucleicos.

• Métodos indirectos:– Detección de anticuerpos: Diag. Serológico.– Detección Respuesta Inmune Celular.


PRINCIPALES TÉCNICAS MICROSCÓPICAS USADAS PARA LA VISUALIZACIÓN DE

MICROORGANISMOS EN MUESTRAS CLÍNICAS

Técnica UtilidadMicroscopía óptica: Fresco

Microscopía óptica: Tinción

Microscopía campo oscuro

Microscopía contraste de fases

Microscopía luz ultravioleta

Microscopía electrónica

Hongos, parásitos y virus (efecto citopático)

Bacterias, hongos y parásitos.

Treponemas (chancro sifilítico)

Hongos y parásitos (poca utilidad diagnóstica)

Inmunofluorescencia(bacterias, hongos y parásitos.

Virus (poca utilidad diagnóstica)


VISUALIZACIÓN DEL MICROORGANISMO

• Microscopía: diferentes tipos

• Examen en fresco

• Tinciones:– Tinción de Gram– Tinción de Ziehl-Neelsen


TINCIÓN DE GRAM: APLICACIONES

• LCR y otros fluidos estériles• Esputo• Exudado uretral• Exudado vaginal• Exudados inflamatorios• Orina


INFORMACIÓN QUE APORTA UNA TINCIÓN DE GRAM EN MUESTRAS CLÍNICAS (EXUDADOS

INFLAMATORIOS Y FLUIDOS ESTÉRILES)

• Permite evaluar la calidad de la muestra. Presencia de:– Células inflamatorias → muestra adecuada

– Células epiteliales → posible contaminación

• Permite visualizar la morfología, su disposición y localización intra o extracelular de las bacerias

• Permite diferenciar bacterias: Gram + y Gram –• Permite detectar la presencia de flora contaminante• Permite cuantificar el número de bacterias.


AISLAMIENTO DEL MICRORGANISMO

• Cultivo en medios artificiales:– Nutritivos– Selectivos– Diferenciales

• Cultivos celulares:– C. de órgano C. primarios– C. Secundarios Línea celular

• Inoculación animal


CARACTERÍSTICAS UTILIZADAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS

• Crecimiento en distintos medios de cultivo

• Características bioquímicas

• Producción de toxinas

• Estructura antigénica

• Estructura genómica


DETECCIÓN DIRECTA DE ANTÍGENOS MEDIANTE TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN

• Antígenos bacterianos– H. influenzae– S. pneumoniae– N. meningitidis

• Antígenos fúngicos– C. neoformans

• Antígenos víricos– Rotavirus– Adenovirus


DETECCIÓN DIRECTA DE ANTÍGENOS MEDIANTE TÉCNICAS DE ELISA

• Antígenos bacterianos– S. pyogenes– L. pneumophila– C. trachomatis– C. difficile (toxina)

• Antígenos fúngicos– C. neoformans– A. fumigatus

• Antígenos víricos– Adenovirus– Herpesvirus– V. respiratorio sincitial– Rotavirus

• Antígenos parasitarios– G. lamblia– C. parvum– E. histolytica


VENTAJAS DE LAS TÉCNICAS DE AMPLIFICACIÓN

• Sensibilidad extrema (detectan hasta 1-10 microorganismos)

• Alta especificidad (diseño de cebadores en función de secuencias específicas del microorganismo)

• Rapidez de realización (máximo 24 horas)• Detección de microorganismos viables y

no viables• Automatizables


INCONVENIENTES DE LAS TÉCNICAS DE AMPLIFICACIÓN

• Posibles falsos positivos

• Acondicionamiento especial del laboratorio

• Alto nivel de entrenamiento del personal

• Elevado coste inicial


DIAGNÓSTICO MEDIANTE BIOCHIPS-MICROARRAYS

• Se fundamenta en una técnica de afinidad utilizando sondas de ácidos nucleicos para hibridación soportadas en un chip.

• Es una aplicación de la Bioinformática.

• Un microarray es una herramienta para analizar la expresión genética que consiste en una pequeña membrana o un portaobjetos de vidrio que contienen muestras de muchos genes organizados según un petrón determinado.


Experimento con un Microarray de ADN


VENTAJAS DE LA DETECCIÓN RÁPIDA DE LA RESISTENCIA MEDIANTE TÉCNICAS

MOLECULARES

• Reducir el tiempo requerido para instauración tratamiento definitivo

• Evitar tratamientos incorrectos

• Detección de portadores infectados con microorganismos resistentes

• Reducción de costes y tiempo de estancia hospitalaria


INCONVENIENTES DE LAS TÉCNICAS MOLECULARES DEN LA DETECCIÓN DE

RESISTENCIAS

• Desconocimiento de la secuencia del gen/es implicados

• Casos con múltiples genes implicados

• Diferente grado de expresión de los genes en condiciones ambientales diferentes

• Los microorganismos de la flora saprofita poseen también genes de resistencia


DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO: UTILIZACIÓN

• Agente causal:– No cultivable– Peligroso su cultivo– Crecimiento lento

• Cambiar el diagnóstico o el tratamiento• Comprender el proceso de la enfermedad• Estado inmunológico del paciente.• Datos para Epidemiología.


DETERMINACIONES SEROLÓGICAS

• Inmunofluorescencia– Directa– Indirecta

• Radioinmunoanálisis

• Enzimainmunoanálisis– ELISA tipo1– ELISA tipo2– ELISA tipo3 (captura)


• Precipitación– Medio sólido– Medio líquido

• Aglutinación– Directa– Hemaglutinación– Látex

• Fijación de complemento

DETERMINACIONES SEROLÓGICAS

Interpretación de la Serologia

• Parejas de sueros

- Seroconversion. Negativo a Positivo

- Serorefuerzo. Titulo .inicial x 4 o más.

Infecciones cronicas.

-Deteccion IgM.

- Acs frente a diversos antigenos.

Periodo Ventana

Diag. Serológico. Infecciones

1) Valoración de IgG E IgM específica.

2) Valoración de IgG. Avidez.

3) Diagnóstico de Primoinfección.

Diag. Serológico. Objetivos

• Diag. Etiológico por la Respuesta Inmune Humoral.

• Determinar Protección Frente a Infecciones.

• Determinar Prevalencia de Infecciones.


DETECCIÓN DE RESPUESTA INMUNE CELULAR

• Pruebas cutáneas• Activación linfocitaria• Inhibición de los macrófagos• Linfotoxicidad. Actualmente NO se usan

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