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BIOLOGÍA MOLECULARBIOLOGÍA MOLECULAR

Romina MartinelliRomina MartinelliMédica - T.S. en GenéticaMédica - T.S. en Genética

Mg. Biología Molecular MédicaMg. Biología Molecular Médica

Dogma CentralDogma Central

Biología MolecularBiología Molecular

¿A qué se denominan ¿A qué se denominan técnicas de biología moleculartécnicas de biología molecular??Técnicas de laboratorio que se usan para extraer Técnicas de laboratorio que se usan para extraer ADNADN (ARN o (ARN o proteínas), proteínas), visualizarlovisualizarlo para ver su estado, para ver su estado, cortarlo y pegarlocortarlo y pegarlo (Ingeniería (Ingeniería genética), genética), amplificar una regiónamplificar una región en una enorme cantidad de moléculas en una enorme cantidad de moléculas (PCR - clonación), (PCR - clonación), corte de una determinada región con enzimas de corte de una determinada región con enzimas de restricciónrestricción para ver si por una mutación se gana o se pierde un sitio de para ver si por una mutación se gana o se pierde un sitio de restricción (análisis de mutaciones por RFLP o Restriction fragment restricción (análisis de mutaciones por RFLP o Restriction fragment lengt polymorphism) o lengt polymorphism) o secuenciarlosecuenciarlo..

Rama de la biología que está centrada en el Rama de la biología que está centrada en el análisis de los fenómenos biológicos a partir de análisis de los fenómenos biológicos a partir de la perspectiva de la estructura de las la perspectiva de la estructura de las moléculasmoléculas..

Estructura del ADNEstructura del ADN

Estructura del ADNEstructura del ADN

Estructura del ARNEstructura del ARN

Estructura de las proteínasEstructura de las proteínas

Estructura del genEstructura del gen

Biología MolecularBiología Molecular

¿A qué se denominan ¿A qué se denominan técnicas de biología moleculartécnicas de biología molecular??Técnicas de laboratorio que se usan para extraer Técnicas de laboratorio que se usan para extraer ADNADN (ARN o (ARN o proteínas), proteínas), visualizarlovisualizarlo para ver su estado, para ver su estado, cortarlo y pegarlocortarlo y pegarlo (Ingeniería (Ingeniería genética), genética), amplificar una regiónamplificar una región en una enorme cantidad de moléculas en una enorme cantidad de moléculas (PCR - clonación), (PCR - clonación), corte de una determinada región con enzimas de corte de una determinada región con enzimas de restricciónrestricción para ver si por una mutación se gana o se pierde un sitio de para ver si por una mutación se gana o se pierde un sitio de restricción (análisis de mutaciones por RFLP o Restriction fragment restricción (análisis de mutaciones por RFLP o Restriction fragment lengt polymorphism) o lengt polymorphism) o secuenciarlosecuenciarlo..

Rama de la biología que está centrada en el Rama de la biología que está centrada en el análisis de los fenómenos biológicos a partir de análisis de los fenómenos biológicos a partir de la perspectiva de la estructura de las la perspectiva de la estructura de las moléculasmoléculas..

Amplificación: Amplificación: reacción en cadena de la polimerasareacción en cadena de la polimerasa

Amplificación: Amplificación: reacción en cadena de la polimerasareacción en cadena de la polimerasa

Amplificación: Amplificación: reacción en cadena de la polimerasareacción en cadena de la polimerasa

TermocicladorTermociclador

Amplificación: Amplificación: reacción en cadena de la polimerasareacción en cadena de la polimerasa

RT-PCRRT-PCR

SecuenciaciónSecuenciación

SecuenciaciónSecuenciación

Estudios de expresión: Estudios de expresión: MicroarraysMicroarrays

Estudios de expresión: Estudios de expresión: MicroarraysMicroarrays

Estudios de expresión: Estudios de expresión: RNAseqRNAseq

HistoquímicaHistoquímica

InmunohistoquímicaInmunohistoquímica

Hibridación in situHibridación in situ

Extracción de ácidos nucleicos de cortes histológicosExtracción de ácidos nucleicos de cortes histológicos

Por qué es importante?Por qué es importante?

La técnica mantiene la estructura del tejido e impide la putrefacción durante añosLa técnica mantiene la estructura del tejido e impide la putrefacción durante años

Es la técnica más usada para el guardado de tejidosEs la técnica más usada para el guardado de tejidos

Permite conservar el tejido a la espera de nuevas técnicas diagnósticasPermite conservar el tejido a la espera de nuevas técnicas diagnósticas

Existe gran cantidad de cortes que pueden ser utilizados en investigaciónExiste gran cantidad de cortes que pueden ser utilizados en investigación

Extracción de ácidos nucleicos de cortes histológicosExtracción de ácidos nucleicos de cortes histológicos

Por qué es importante?Por qué es importante?

La técnica mantiene la estructura del tejido e impide la putrefacción durante añosLa técnica mantiene la estructura del tejido e impide la putrefacción durante años

Es la técnica más usada para el guardado de tejidosEs la técnica más usada para el guardado de tejidos

Permite conservar el tejido a la espera de nuevas técnicas diagnósticasPermite conservar el tejido a la espera de nuevas técnicas diagnósticas

Existe gran cantidad de cortes que pueden ser utilizados en investigaciónExiste gran cantidad de cortes que pueden ser utilizados en investigación

Pero...Pero...

El formaldehído puede producir cross-linking que interfiera en los estudios a realizarse luego El formaldehído puede producir cross-linking que interfiera en los estudios a realizarse luego de la extracciónde la extracción

Los protocolos de rutina pueden aumentar la degradación y/o fragmentación de los ácidos Los protocolos de rutina pueden aumentar la degradación y/o fragmentación de los ácidos nucleicos nucleicos

El guardado de los tacos en malas condiciones condiciones puede llevar a la degradación de El guardado de los tacos en malas condiciones condiciones puede llevar a la degradación de los ácidos nucleicos los ácidos nucleicos

Extracción de ácidos nucleicosExtracción de ácidos nucleicos

Extracción de ácidos nucleicosExtracción de ácidos nucleicos

Algunas soluciones...Algunas soluciones...

Desparafinización: es uno de los pasos más críticos ya que restos de parafina reducen Desparafinización: es uno de los pasos más críticos ya que restos de parafina reducen la calidad de la muestrala calidad de la muestra

Utilización de kits comercialesUtilización de kits comerciales

Utilización de amplicones más pequeños para RT-PCRUtilización de amplicones más pequeños para RT-PCR

Ajustar los protocolos para muestras de tamaño más pequeñoAjustar los protocolos para muestras de tamaño más pequeño

Romina MartinelliRomina MartinelliMédica - T.S. en GenéticaMédica - T.S. en Genética

Mg. Biología Molecular MédicaMg. Biología Molecular Médica

Muchas Gracias Muchas Gracias por su Atenciónpor su Atención