Manual de Evaluación II

7/25/2019 Manual de Evaluacin II

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UNIVERSIDADNACIONALAUTNOMADE MXICO

FACULTADDE ESTUDIOSSUPERIORESZARAGOZA

AUTORES

Mara Teresa Griselda Fuentes LaraEsperanza Jimnez CastaedaJuana Rosado PrezEstela Valencia Platas

COLABORADORES

Adrin Flores BarreraSandy Isabel Hernndez OrtegaGuadalupe Nlida Ortega SotoJavier de Jess Pin Ortega De losSantos Mendoza Karina


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Sptimo Semestre 2012


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Manual de Evaluacin de Frmacos y Medicamentos II

A Manera de Prlogo

Generalmente esta parte la escribe una persona reconocida en el mbito a trataren el texto,

pero a menudo a los lectores, y sobre todo a los estudiantes, esta persona nos parece

completamente lejana o ajena a nosotros y sus palabras no llegan a tener gran influencia. Es

por esto que decidimos aclarar que tambin somos o fuimos estudiantes dela UNAM, tus

compaeros de la FES Zaragoza, que cursamos la materia justo como ests a punto de hacerlo

t.

El Manual de Prcticas de Laboratorio de Evaluacin de Frmacos yMedicamentos II queahora tienes en tus manos contiene un acercamiento general a la informacin que como

profesionista requerirs y es resultado de la exigencia de cientficos mejor preparados pero

con una conciencia ms responsable con el planeta

Hoy en da, los cientficos tenemos que estar al da en la legislacin nacional e internacional y en esta se han dado grandes avances conforme al uso y manejo adecuado de

animales de experimentacin en donde destaca la Regla de las 3R (Remplazar, Reducir y

Refinar). Es por esto que en el presente manual encontrars nuevas tcnicas de

experimentacin como simuladores computacionales, manejo de organismos de rdenes

menores y lotes experimentales de menor tamao que hoy se emplean con mayorfrecuencia

en la vida profesional.

En cada prctica encontrars una pequea introduccin cuya nica finalidad esguiarte enla bsqueda de informacin. Es fundamental comprender que todo el tiempo necesitars

buscar profundizar en el tema lo mayor posible con la idea de que tu educacin depende

principalmente de ti y de lo que quieras lograr. De la mismamanera recomendamos que tusfuentes de informacin sean lo ms actuales posible ya que la ciencia es un mundo en

constante construccin y lo que es cierto hoy puede no serlo del todo maana.

Uno de los objetivos primordiales de este manual es que realices toda esa bsqueda de

informacin antes de la actividad en el laboratorio para que no trabajes a ciegas, por lo cual

se proponen una serie de cuestionarios que junto con la introduccin te guiarn en la

informacin bsica que debes conocer del tema.

Con toda la nueva filosofa de trabajo y una serie de pensamientos de personajes clebres al

inicio de cada prctica se pretende que el estudiante genere una educacin universal y

responsable haciendo honor al lema de la UNAM de Jos Vasconcelos POR MI RAZAHABLAR EL ESPRITU recordando que los estudiantes de hoy sern los profesionistas del

maana que moldearn al pas y a la sociedad.

Sabemos que la carrera es pesada pero, aunque no lo creas, la humanidad depende de ti as que no te

rindas.

TUS COMPAEROS

FES Zaragoza, UNAM

Mxico 2012

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Introduccin

En la presente edicin del Manual de Prcticas de Laboratorio de Evaluacinde Frmacos y Medicamentos II de la carrera de QUMICA FARMACUTICO

BIOLGICA, se ha tratado de mantener los criterios que en un inicio tuvieron los

profesores del modulo, respetando su valioso trabajo, pero a su vez, se implementaron

algunos cambios que, a nuestro criterio, van de acuerdo a la actualidad, sin que con

ello el alumno se pierda en un mar de informacin.El principal objetivo de este manual, fue el crear una gua que constituyera una

herramienta eficaz para el aprendizaje, para lo cual, se tuvo el cuidado de que en cada

prctica se incluyeran los siguientes puntos:

Introduccin: Que sustenta los principios bsicos de cada prctica. Objetivos: Proporcionan directrices a los estudiantes sobre lo que deberan

saberpara desarrollar adecuadamente las prcticas.

Metodologa: Clara y precisa que facilita las actividades a realizar. Figuras, Esquemas y Tablas: Que dan un diseo ms didctico y sencillo.

Cuestionario: Cuya funcin es indicadora del grado de conocimientoadquiridos previos a la prctica.

Referencias: til como gua para la bsqueda de informacin adicional. Anexos: Contienen suplementos de los simuladores computacionales as como

el tratamiento de los datos obtenidos.

Se ha procurado que todo el manual tenga el mismo formato para un mejor uso

del mismo, por todo lo anterior, desde nuestro punto de vista, el manual cumple

con su cometido, ser un texto bsico para estudiantes.

LOS AUTORES

FES Zaragoza, UNAM

Mxico 2012

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anual de Evaluacin de Frmacos y Medicamentos II

Prctica No.1Valoracin del Efecto Analgsico


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Int roduccinAl considerar que el trmino Analgesia proviene de los vocablos griegos, An que significa siny LGESIS dolor, es fcil deducir que un analgsico es cualquier frmaco que administrado demanera adecuada disminuye o calma la Sensacin de Dolor.En general, los analgsicos se pueden dividir en dos grandes categoras, segn su naturalezaqumica, los opioides y los no opioides (o no esteroideos). Los opioides son de exclusivaprescripcin mdica y su uso es ms frecuente en el paciente hospitalizado, un ejemplo es la

morfina. El nico de stos que puede ser parte del botiqun es la codena. Dicha sustancia esmuy efectiva en dolores agudos de los huesos y las articulaciones, sobre todo despus deuna ciruga.Los analgsicos no esteroideos comprenden una amplia lista de sustancias. Estos son loscalmantes adecuados para el botiqun por su utilidad en diversos tipos de dolor y la seguridadcon que pueden ser usados a las dosis recomendadas. El prototipo de stos es la aspirina, estegrupo tambin recibe el nombre de Analgsicos Antiinflamatorios No Esteroideos (AINES).

Tabla 1.1 Ejemplos de AINES

DERIVADOS DE: EJEMPLOS

cido Salicilico cido acetil-salicilico (aspirina).p-aminofenol Acetaminofn.

cido actico Indometacina, ketorolaco y diclofenaco.

cido propionico Ibuprofeno, naproxn y oxaprozina.Fenamatos cido mefenmico y cido meclofenmico

cidos enlicosPiroxicam, fenilbutazona y dipirona

Alcanonas Nabumetona

La mayora de los AINES, son frmacos que tienen otras propiedades como antiinflamatoriosy/o antipirticos (reducen la fiebre).Los analgsicos Opioides incluyen los derivados de los alcaloides, ya sean naturales osintticos. El prototipo de estos es la Morfina, obtenida a partir de la amapola, tambin seencuentra la Metadona, Meperidina y Propoxifeno (analgsico dbil).

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Definicin del DolorPara poder entender cmo es que actan estos frmacos, es necesario tener una idea

de lo significa el Dolor, aunque es muy difcil hacerlo, pues es subjetivo.La definicin ms comnmente aceptada del dolor es la proporcionada por la

Asociacin Internacional para el Estudio del Dolor (Internacional Association for the Study ofPain, IASP):

"El dolor es una experiencia sensorial y emocional no placentera relacionada con daopotencial o real del tejido, o descripta en trminos de tal dao. El dolor siempre es subjetivo".

La cuestin de que el dolor siempre es subjetivo es muy importante y enfatiza que eldolor es una experiencia somatopsquica. Aristteles se refiri a esto cuando describi al dolorcomo una "pasin del alma". Esto enfatiza que una variedad de factores diversos puedencausar o agravar el dolor, lo cual debe considerarse en la evaluacin y tratamiento. Unadefinicin clnica ms prctica es:"El dolor es lo que el paciente dice que es. Es lo que el paciente describe y no lo que los demspiensan que debe ser. Por lo que el dolor es una respuesta del organismo ante el dao, leve osevero y se convierte as en un signo de alerta.

La sensacin se desencadena cuando, se producen ciertas sustancias llamadasProstaglandinas estas sustancias a su vez generan la accin de enzimas que actan sobreotros componentes de las clulas. Una de las enzimas que favorece la produccin deprostaglandinas es la llamada Ciclooxigenasa, de las cuales existe la I y la II. La primera seencuentra en todos los tejidos mientras que la segunda solo est en el rion y en los sitios enque ocurre inflamacin y dolor es a este nivel donde actan los AINES.

Ac cin de los An algsi co sLos analgsicos bloquean la produccin de las prostaglandinas necesarias para

desencadenar la sensacin del dolor, gracias a que inhiben la accin de las enzimasdenominadas ciclooxigenasas Por eso mismo, los analgsicos tienen tambin propiedades

antiinflamatorias y antipirticas (controlan la fiebre). El Acetaminofn es el nico cuya formade accin no afecta las prostaglandinas.El otro mecanismo de accin es mediante la fijacin a los receptores opiceos

produciendo analgesia; a nivel del SNC bloqueando y modulando las seales dolorosas a loscordones espinales y cerebro, esta accin es caracterstica del el D-Propoxifeno(dextropropoxifeno)

Objet ivoObservar y valorar el efecto analgsico del Tramadol en ratn, administrado en dosis

variadas por va intraperitoneal (I.P.) valorando el efecto a diferentes tiempos.

Material, Equ ipo y Reactivo sMATERIAL BIOLGICO

Cinco ratones adultos (20-30gramos)

MATERIAL Y EQUIPO Una pinza de mosco con mango de hule (tipo caimn) Dos jeringas de 1 mL (tipo insulina) Una balanza granataria con canastilla para pesar animales. Un relojREACTIVOS


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Analgsico (Tramadol) Solucin salina

Metodo logaEl mtodo que se utilizar, se basa en producir dolor experimentalmente en

los animales de laboratorio, y medir el tiempo en que tarda en aparecer una conducta o

sntoma indicativo del dolor. Este procedimiento se lleva a cabo en ausencia y enpresencia del analgsico.

Los mecanismos para producir dolor son fsicos (se aplica una pinza sobre la coladel animal, se coloca al animal sobre una placa caliente o bien se sumerge la cola en aguaa 50 C), y qumicos (se inyecta un agente qumico al animal).

Procedimiento 11. Colocar la pinza de mosco (o caimn) a 1 cm de la base de la cola del ratn.

2. La respuesta positiva al dolor se caracteriza por vocalizacin y/o movimientos paraalcanzar o morder la pinza, en un lapso de 10 segundos. En caso contrario, deseche alanormal y tome otro.

3. Enseguida pese y numere a cada ratn.4. Administre a cada ratn por I.P. la dosis

del frmaco (asignada aleatoriamente) deacuerdo a la siguiente tabla:

Tabla 1.2 Dosis de Administracin

Preparar soluciones a partir de la solucinmadre de 25 mg/mL.Tomando en cuentaque 1mL de solucin tiene 100 unidades.

5. Una vez administrado el frmaco, mida el tiempo.

RATN Dosis (mg/Kg)1201

2 90

6030

3

4

5 Control 0.1 mL Solucin Salina/ 10g

Imagen1.Forma correct

colocar el caim

la base de la c

ratn

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Manual de Evaluacin de Frmacos y

6. Aplique nuevamente la pinza arterial de la manera antes descrita, a los50', 60', 70', y 90', y evale la respuesta de cada ratn.

7. Si muerde la pinza (positivo al dolor) no existe analgesia.8. Si no muerde la pinza (negativo al dolor) existe analgesia.9. Anote sus resultados en la siguiente tabla:

Tabla 1.3 Resultados porEquipo

RATN DOSIS MG/KG VALORACIN DELEFECTO50' 60' 70' 90'

1

2

3

4

5

10. Los resultados de todos los equipos se anotarn en la tabla 1.4.

Tabla 1.4 Resultados por Grupo

DOSIS MG/KG LOG Dosis Animales (sin dolor)

Animales Probados

% RESPUESTA

50' 60' 70' 90' 50' 60' 70' 90'

120

90

50

30

11. Con los resultados obtenidos construya una curva de tiempo vs efecto para cada

dosis.

12. Si los resultados lo permiten, calcule la dosis efectiva media (DE50) con el tiempo de

efecto mxime

Procedimiento 2

Existe una variante del mtodo 1, que consiste en lo siguiente:

1. Calentar aproximadamente 100 mL de agua a 50 C.

2. Colocar un ratn dentro de un cono (o algo parecido), de

tal manera que la cola salga del mismo.

Imagen 3

Ratn encono concolasaliente


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3. Introducir la mitad de la cola por 10 segundos en el agua.

4. La respuesta positiva al dolor se caracteriza por vocalizacin

y/o movimientos bruscos para extraer la cola del agua o salir del

cono. En caso contrario, deseche al animal y tome otro.

5. Enseguida pese y numere a cada ratn.6. Administre a cada ratn por va I.P. la dosis del frmaco

(asignada aleatoriamente) de acuerdo a la tabla 1.2.

7. Una vez administrado el frmaco, mida el tiempo.

8. Repita los pasos del 1 al 3 a los 15', 30', 60', y 90',

9. Evale la respuesta de cada ratn.

10. Si su actitud no es agresiva, es decir, si no le afecta el agua

caliente, existe analgesia.

11. Anote sus resultados en la tabla 1.3.

12. Los resultados de todos los equipos se anotarn en al tabla1.4.

13. Con los resultados obtenidos construya una curva de tiempo vs efecto para cada dosis.

14. Si los resultados lo permiten, calcule la dosis efectiva media (DE50) con el tiempo de

efecto mximo.

Cuestionario

1. Describa el papel que juegan las prostaglandinas en el dolor.2. Cul es el mecanismo de accin analgsica de la aspirina, naproxeno y piroxicam?3. Cul es el mecanismo de accin del Tramadol?

4. Qu funcin tienen las Ciclo-oxigenasas 1 y 2, y como afectan al organismo?

5. Cules son las teoras del dolor y que dice cada una de ellas?

6. Cul es la norma oficial mexicana que aborda el manejo y sacrificio correcto de losanimales empleados en el laboratorio?7. Realice una gua de manejo y sacrificio para ratas, ratones, conejos y ranas.

Referencias

1. Goodman L.S.& Gilman A. 1996. The Pharmacological Basis of Therapeutics. 9a.edicin. McGraw Hill. U.S.A.2. Barastegui, AC, Esquemas y Prcticas de Farmacologa. Espaxs, Espaa 1976.3. Bertrand G. Katzung, Farmacologa Bsica y Clnica, 8a ed. Manual Moderno, Mxico2002.4. NOM-062-Z00-1999 Especificaciones Tcnicas para la Produccin, Cuidado y Usode los Animales de Laboratorio.

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Manual de Evaluacin de Frmacos y Medicamentos IIManual de Evaluacin de Frmacos y Medicamentos II

Prctica No.2

Bloqueadores de la PlacaNeuromuscular


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Manual de Evaluacin de Frmacos y Medicamentos IIIntroduccin

Durante el siglo XVI los exploradores europeos encontraron que los nativos de laCuenca del Amazonas usaban un veneno en la punta de sus flechas que producala muerte.

Despus de muchas investigaciones se encontr que el curare es el extracto crudoactivo de varias especies de plantas cuyo principio activo es la D-tubocurarina.

El msculo esqueltico voluntario est inervado por neuronas motoras cuyos

axones son capaces de conducir potenciales de accin a altas velocidades. Al rea delmsculo que yace junto a la terminacin axnica se le conoce como placa motora y a lasinpsis qumica que existe entre ambas como unin neuromuscular.

Los frmacos que actan en la unin neuromuscular pertenecen a dos grupos:

PRESTNPTICOS: Frmacos que inhiben la sntesis de acetilcolina por ejemplo hemicolinio. Frmacos que inhiben el almacenamiento de la acetilcolina en las vesculas por

ejemplo el AH5183. Frmacos que inhiben la liberacin de acetilcolina por ejemplo la estreptomicina.

POSTSINPTICOS Frmacos no despolarizantes.Antagonistas competitivos de los receptores

nicotnicos de la acetilcolina. Ejemplo la D-tubocurarina' Frmacos despolarizantes. Activan los receptores nicotnicos produciendo una

despolarizacin inicial, pero bloquean la accin subsecuente de los receptores.Ejemplo la succinilcolina.

Estructu ra de la

Succin i lcol ina

Objetivo Demostrar experimentalmente el efecto de la succinilcolina en la unin

neuromuscular de ratones balb/c.

Material, Equipo y Reactivos.MATERIAL BIOLGICO

4 ratones balb/c.MATERIAL Y EQUIPO

2 cajas para ratones. 1 rejilla para caja de ratones 4 jeringas de 1mL Vaso de precipitados de 1L

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Reactivos

Solucin de succinilcolina5mg/ml

Solucion salina

1. Por medio del peso del ratn y la concentracinde la solucin de succinilcolina hacer el ajuste

para administrar al ratn 1 una dosis de 0.7mg/kg va intramuscular, preferentemente enuna de las patas delanteras.

2. Inmediatamente despus de repetir la pruebade escalada y registrar el tiempo que tarda elratn en caer por no poderse sujetarcorrectamente.


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nual de Evaluacin de Frmacos y Medicamentos II

10- Sucedido lo anterior repetir la prueba de nado y registrar el tiempo que tarda el ratn enno poder nadar ms.

11- Repetir la prueba de escalada y de nado hasta que el efecto pas y registrar el tiempotranscurrido.

12- Continuar de la misma forma con los ratones 2 a 4 uno tras otro (No realizar laspruebas simultneamente) administrando dosis de 0.9 mg/Kg y 1.1 mg/Kg a losratones 2 y 3. Al ratn 4 se le administra 0.1 mL/g de peso de solucin salina (Control).

13- Reportar los resultados en la siguiente tabla:

Ratn Dosis (mg/kg) Tiempo de latencia Tiempo derecuperacin

1

2

3

Control

st ionario1. Haga un esquema de la placa neuromuscular.2. Cmo se clasifican los frmacos que actan en la unin neuromuscular? Indiquecada grupo.3. Describa el mecanismo de accin d la succinilcolina.4. Menciona el perfil farmacocintico de la succinilcolina.5. Usos clnicos y efectos adversos de la succinilcolina.6. lnvestiga las interacciones farmacolgicas de la succinilcolina.7.Qu pasa al estimular directamente el msculo? Por qu?

erencias1.Goodman, L.S. & Gilman A. 1996. The Pharmacological Basis of Therapeutics. 9a.edition. McGraw HiII. U.S.A.

2.Flores J. 2000. Farmacologa Humana. Masson Barcelona.3. Rang H, Dale M. y Ritter J. 2000. Farmacologa. 4a. edicin., Harcourt. Espaa

4 . Taylor M. y Reide P. 1999. Harcourt. Espaa.5. Velasc A. 2003. Farmacologa. McGraw Hill. Espaa.

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nual de Evaluacin de Frmacos y Medicamentos IIManual de Evaluacin de Frmacos y Medicamentos II

PrcticaNo. 3AnestsicosLocales


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Int roduccin.Los anestsicos locales son frmacos que previenen o alivian el dolor alinterrumpir la conduccin nerviosa. Cuando se aplica de manera local en el tejidonervioso en concentraciones apropiadas, actan en cualquier parte del sistema nerviosoen cualquier tipo de fibra nerviosa. Este grupo de frmacos no produce inconciencia y susitio de accin es la membrana celular de las clulas excitables, como la membrana

nerviosa. El uso efectivo y seguro de los anestsicos locales requiere no solo que losfrmacos bloqueen la conduccin de algunos nervios, sino tambin que esta accinsea rpida y totalmente reversible y que no tenga efectos txico sistmicos mayores.Mecanismo de accin: El aspecto singularmente mas importante de las acciones de losanestsicos locales es la reduccin del aumento transitorio de la permeabilidad al sodioasociada con la fase de ascenso es decir la despolarizacin- del potencial de accin.Esta reduccin de la permeabilidad al sodio se debe a los efectos de los frmacos sobre loscanales de la membrana del sodio sensibles al voltaje.Los anestsicos locales son aminas de pKa que varia entre 8 y 9. Por lo tanto puede existiren solucin como la especie cargada (catinica) o no cargada, y el pH depender delmedio, Fig. 3.1. La lidocana (xilocana) y la procana (novocana) se consideran agentes

prototipo de los anestsicos locales. La lidocana introducida en 1948, actualmente es unode los anestsicos locales ms ampliamente utilizados. La estructura se muestra en la Fig.3.1. se utiliza como anestsico local en procedimientos odontolgicos, en el tratamientode disritmias ventriculares (especialmente cuando estas se presentan ene le infarto demiocardio o en ciruga cardiaca), atenuacin de la respuesta vaspresora (presin arterialsistmica/presin intracraneana) en la intubacin y en la atenuacin de lasfasciculaciones provocadas por succinilcolina.

Fig . 3.1.Est ru ct ur a qum ica de u n anes tsi co local

FARMACOCINETICA DE LA LIDOCANA: inicio, rpido: duracin, moderada (60-120 min); T1/2 1.6 h; Vd de91 L; depuracin, 91 L/min; unin a protena del 65%. Efecto: antiarrtmico. Sedacin, bloqueo nervioso;

disminuye la conduccin de los canales de sodio. Su eliminacin es por metabolismo heptico produciendo

metabolitos activos y txicos; eliminacin renal (10% sin metabolizar). Toxicidad: los efectos adversos de

la lidocana que se observan al aumentar la dosis consisten en vrtigo, convulsiones, desorientacin,

bloqueo cardiaco o hipotensin arterial. Concentracin srica teraputica = 1.5 mg/L

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Manual de Evaluacin de Frmacos y Medicamentos IIObjet ivos

Por medio del uso de un programa de simulacin que el alumno aprenda el efecto de losanestsicos locales al aplicar un estimulo nervioso.

Demostrar el bloqueo del impulso nervioso por la accin de un anestsico local, al aplicar unestmulo en una preparacin citico-gastrocnemio por medio del uso de un programa desimulacin.

Que el alumno de manera practica conozca el efecto de los anestsicos locales al aplicar un

estimulo nervioso (qumico, fsico o trmico).

Material , Equipo y Reactivo s.

PARTE1 (1Ses in )

MATERIAL BIOLGICO NO

MATERIAL Y EQUIPO Computadora personal con simulador instalado

REACTIVOS NO

PARTE2 (2Ses in )

MATERIAL BIOLGICO Lombrices de tierra.

MATERIAL Y EQUIPO

Termometro

Mechero Tripie

Vaso de precipitados de 600ml

AgujaREACTIVOS

Lidocana 2% Acido clorhdrico 0.1 N

Metodo loga

Mtodo 1: Uso del Simulador

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1. DETERMINACION DEL ESTIMULO UMBRAL

1.1- Seleccionar Fisiologadel impulso nervioso.1.2- Seleccionar en men EXPERIMENTO: Inhibirefecto nervioso.1.3- Fijar el voltaje a 1.0 V.1.4- Pulsar ESTIMULAR.1.5- Aumentar el voltaje en 0.5 V hasta obtener respuesta.1.6- Guardar el valor umbral.

2. INHIBICIN CON LIDOCAINA2.1- Borrar grfica anterior.

2.2- Seleccionar gotero con lidocana.2.3- Aplicar lidocana entre los electrodos.2.4- Pulsar ESTIMULAR y guardar.2.5- Presionar el botn LAVAR.2.6- Presionar ESTIMULAR y guardar.

REPETIR EL MISMO PROCEDIMIENTO EN EL SIMULADOR CON EL CURARE Y EL ETHER,

REGISTRAR Y OBSERVAR LOS CAMBIOS QUE SE EFECTUAN AL ADICIONAR CADASOLUCION.Mtodo 2: Uso de lombrices de tierra.

3. EFECTO DE LA LIDOCANA EN LOMBRIZ DE TIERRA.

3.1- ESTMULO QUIMICO.3.1.1- Tomar tres lombrices y colocarlas en una caja Petri.3.1.2- Colocarles tres gotas de HCL 1.0N en la cola de la lombriz (zona ms anillada), observar lareaccin de la lombriz.3.1.3- Despus de haber observado la reaccin de la lombriz colocarle unas gotas de lidocana dejar

reaccionar aproximadamente 5 min.3.1.4- Pasados los 5 min de efecto de la lidocana adicionar nuevamente unas gotas de HCl 0.1 Nobservar y registrar los resultados.

3.2- ESTMULO TRMICO.3.2.1- Calentar agua a 40C.3.2.2- Colocar tres lombrices en una caja Petri.3.2.3- Dejar caer de manera continua y con ayuda de una pipeta pasteur agua previamente calentadaa 40 C y observar si reaccionan, de no ser as intentarlo con otras lombrices hasta ver que reaccionen3.2.4- Seguir calentando el agua hasta los 50 C.3.2.5- Colocar unas gotas de lidocana e la cola de las lombrices dejar 5 min a que haga el efecto

anestsico.3.2.6- Pasados los 5 min verter de manera contante un poco de agua previamente calentada a50 C.3.2.7- Observar si reaccionan o no y registrarlo.

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3.3- ESTMULO FSICO.3.3.1- Colocar tres lombrices en una caja Petri.3.3.2- Picar la cola de la lombriz (la zona ms anillada y mvil) con una aguja, observar lareaccin de la lombriz.

3.3.3- Adicionar unas gotas de lidocana y dejar hacer efecto por un aproximado de 5 min.3.3.4- Tras pasar los 5 min volver a picar la cola de la lombriz con la misma aguja observar

y registrar si hubo o no reaccin.

Cuestionario

1. Mencione brevemente el mecanismo de accin de un anestsico local.2. La estructura qumica de un anestsico local consta de:3. En la preparacin citico-gastrocnemio, menciona el sitio de accin del anestsico

local.4. Que se observa al colocar los electrodos directamente en el msculo?

5. Usos clnicos de los anestsicos locales.

6. Por qu se tiene que descerebrar y desmedular a la rana en la preparacincitico-gastrocnemio?

7. Defina Umbral deexcitacion8. Al aadir un vasoconstrictor, como la adrenalina a un anestsico loca, la absorcin

aumenta o disminuye.

Referencias1. William Catterall y Kenneth Mackie. Anestsicos locales. In Goodman and Gilman,

las bases farmacolgicas de la teraputica, 9th ed. (Ardian JUL, Limbird LE,

Molinoff PB, Rudon RW Eds). Ed. McGrawn-Hill. Inc., New York 1996.2. Cedric M. Anestsia local y anestsicos locales. In farmacologa, 1. Ed. (Smith,

CM., Reynard, AM Eds). Buenso Aires, Argentina, 1993, pp. 219-2303. Mary J, Myce, Sheldon B, Gertner, Maria Mena Perper. In farmacology,

Lippincotts illustrated Reviews. (Harvey RA., Champe PC Eds) J.B. LippincottCompany, 1992.

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PrcticaNo. 4Anestsicos Generales


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Int roduccin

La definicin de anestesia general ha sufrido pocas modificaciones desde su descubrimientoen 1845, con las experiencias de Wells con xido nitroso y de Morton en 1846 con ter.

Clsicamente, se la ha definido como una depresin descendente y controlada de lasfunciones del SNC inducidas farmacolgicamente. Otra forma ms prctica de definir laanestesia general es en funcin de los objetivos que persigue, como un estado reversible dedepresin del SNC, caracterizado por prdida de la conciencia (hipnosis), de la sensibilidad(analgesia), de la actividad refleja (proteccin neurovegetativa) y de la motilidad (relajacinmuscular).En la actualidad se habla de estado anestsico, que se define como el resultado de laaccin combinada y dinmica de diversos efectos farmacolgicos que pueden aparecer por laactivacin de diversos grupos de receptores, dando lugar a hipnosis, analgesia, bloqueo dela unin neuromuscular, amnesia y bloqueo de la respuesta vegetativa al estrs. Dinamismo(cambio de las necesidades de efecto farmacolgico) y sinergia (potenciacin de los efectos)son dos aspectos fundamentales en la combinacin necesaria para mantener este estadoanestsico.

Al obtener mayor informacin sobre el mecanismo de accin de los anestsicos generales,se han diferenciando dos componentes fundamentales en la representacin grfica delconcepto de anestesia moderna. Un componente sera el cortical, que integrarainconsciencia y amnesia, y el segundo o subcortical, que correspondera a la antinocicepcin(analgesia) y la estabilidad motora y autnoma (relajacin muscular y proteccin neurovegetativa).

A pesar de las investigaciones realizadas, an no est claro el mecanismo de accinde los anestsicos generales. Se ha considerado que los agentes anestsicos

generales eran frmacos de accin inespecfica que modificaban las propiedadesfisicoqumicas de la membrana neuronal. Meyer y Overton postularon la teora de un lugar de accin lipofilo y relacionaron la

potencia del anestsico con su solubilidad lipdica. En la actualidad se piensa que los anestsicos generales ejercen su efecto en la

transmisin sinptica y no en la conduccin axonal. Actuaran fundamentalmentesobre protenas y no sobre lpidos, de forma que los estudios que se realizan en laactualidad se dirigen a los mecanismos moleculares de la anestesia.

Una serie de receptores, canales de iones (Ca2+, K+) dependiente de voltaje, canalesde iones dependientes de ligando (GABA, NMDA) y neurotransmisores se hanconsiderado lugares especficos en los que actuaran los anestsicos generales.

Coeficiente de particin sangre/gas. El agente inhalatorio pasa desde el alvolo a lasangre para luego llegar al cerebro. Este coeficiente informa de la solubilidad en sangre(agua) del frmaco y es, por lo tanto, inversamente proporcional a la rapidez de su accin.Coeficiente de particin aceite/gas. El tejido cerebral es rico en lpidos. Cuanto msliposoluble sea el agente, ms se retendr en el SNC. Por lo tanto, es un ndice directamenteproporcional a la potencia del agente anestsico.

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Etapas de la anestesiaPerodo I: induccin-analgesia. Abarca desde el inicio de la anestesia hasta la prdida deconciencia. Se comprueba la ausencia de respuesta a las rdenes verbales, no hay prdida de

respuesta al dolor, aunque el grado de analgesia depende del tipo de anestsico empleado.Perodo II: excitacin o delirio. La respiracin es irregular, hay retencin de la respiracin,posibilidad de laringospasmo y secreciones. El ritmo cardaco aumenta e incluso puede haberarritmias. La respuesta a estmulos fsicos est aumentada. Es el periodo de mayor peligro para elpaciente porque pueden aparecer complicaciones, como obstruccin de las vas respiratoriassuperiores por relajacin de la musculatura de la faringe, laringospasmo, regurgitacin o aspiracindel contenido gstrico, acumulacin excesiva de secreciones e hipotensin secundaria a unadepresin miocrdica o a vasodilatacin perifrica.Los dos primeros perodos constituyen la induccin, que se caracteriza por la prdida rpida dela conciencia y el paso al plano superficial de la anestesia quirrgica.

Perodo III: anestesia quirrgica propiamente dicha: En este periodo, que incluye cuatro planos, larespuesta somtica a los estmulos disminuye progresivamente hasta ser nula en la anestesiaprofunda. Al principio, el ritmo cardaco y la frecuencia respiratoria son regulares, pero sta vadeprimindose hasta presentar apnea. La frecuencia cardaca se mantiene estable en cuanto al ritmo,pero se inicia un ligero descenso de la presin arterial; se produce relajacin muscular.Perodo IV: parlisis bulbar. Se produce por depresin de los centros bulbares hasta el parorespiratorio, coma y muerte. Esta situacin puede ocurrir por un accidente anestsico al profundizarla anestesia.

Tipos de anestesia general

Segn el tipo de frmaco empleado para garantizar la hipnosis, se distinguen los siguientes tipos de

anestesia: Monoanestesia. Se empleaba un solo frmaco. Este tipo era caracterstico en las anestesias

con ter y cloroformo. Anestesia general balanceada. Generalmente se utiliza un inductor hipntico intravenoso,

se mantiene con un agente inhalatorio y se combinan con opioides y relajantes musculares. Anestesia intravenosa total. Se emplea propofol como inductor y en perfusin para el

mantenimiento de la hipnosis. Se prescinde por completo de los inhalatorios y se empleananalgsicos y relajantes musculares.

Anestesia con induccin y mantenimiento inhalatorio total. Se emplea un agente inhalatoriopara la induccin anestsica (generalmente sevoflurano) y se mantiene la hipnosis con l. Nose utiliza propofol ni otros hipnticos intravenosos. Se combina con analgsicos centrales yrelajantes musculares.

Neuroleptoanestesia. Se empleaban neurolepticos (deshidrobenzoperidol) asociados aopiceos. Mayor efecto antiemtico, despertar ms lento. En desuso.

Anestesia analgsica. Se basa en el efecto hipntico colateral de los opioides cuandose emplean en dosis muy altas. Muy empleada en ciruga cardaca.

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Manual de Evaluacin

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6. A la pecera con halotano agregar otros 0.25 ml de este ANESTESICO ycolocar al otro camarn.

7. Realizar el mismo procedimiento que con el primer camarn.

Cuestionario1. Cul es el mecanismo de accin de los anestsicos generales?2. Mencione las etapas de la anestesia general.3. Qu otros frmacos adems del halotano existen como anestsicos

generales?4. Qu otras sustancias se administran en conjunto con los anestsicos

generales y cmo funcionan?5. A qu se refiere el CAM de un anestsico general y que representa?6. Qu es el coeficiente de particin?

Referencias

1. Goodman & Gillman's, Las bases Farmacolgicas de La teraputica, 10a

ed., Me. Graw Hill, Mxico 20032. BertrandG. Katzung, Farmacologa Basica y Clnica, 8a ed., Manual Moderno,

Mxico 20023. C. Barastegui Almagro. Esquemas y Prcticas de Farmacologa. Editorial

Espax, 1976, Barcelona, Espaa.

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PrcticaNo. 5Valoracin del EfectoAnticonvulsivante


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Int roduccin

El trmino epilepsia, es una enfermedad crnica que se refiere a un grupo de sndromesdel SNC, caracterizado por accesos de descargas neuronales sincrnicas sostenidas, loscuales son sbitos, transitorios y recurrentes. Afectan los siguientes sistemas:

autonmico, psquico, sensitivo y motor, creando gran variedad de signos y sntomas. Eltrmino convulsin se utiliza como sinnimo de epilepsia. La etiologa es multifactorial(causas metablicas, defectos cerebrales congnitos, prenatales, perinatales (durante elparto), postnatales y convulsiones provocadas por agentes qumicos).Como ejemplos tenemos: hipoglucemia, hidrocefalia, infecciones, dao cerebral por partoprolongado, cisticercosis y las provocadas por pentilentetrazol, etc. Son varios los mecanismosneurofisiolgicos y bioqumicos que intervienen en la enfermedad: cambios bioqumicoslocales, isquemia, prdida de sistemas inhibitorios vulnerables, descargas sincrnicas deotras clulas, etc.Las crisis epilpticas se clasifican en:

1- Parciales (focales y locales)a. Parciales simplesb. Parciales complejasc. Parciales generalizadas de tipo secundario2- Crisis Generalizadas Convulsivas o No Convulsivasa. Crisis de ausenciab. Crisis de ausencia atpicasc. Mioclnicas

d. Clnicase. Tnicas

f. Tonico clnicas (Gran Mal) status epilpticog. Atnicas

Por lo tanto, para tratar la epilepsia se debe descartar si hay un solo tipo de crisis o si sepresentan varios tipos ya que de eso depende un buen tratamiento.Los anticonvulsivos se clasifican en varios grupos para tratar los diferentes tipos decrisis:

1- Hidantoinas: hidantoina (Canales de Na+)

2- Iminoestilbenos: carbamazepina (Canales de Na+)3-Barbitricos: fenobarbital (Mediadores GABA)

4- Desoxibarbitricos: primidona5- Succimidas: etosuccimida (Canales de Ca2+)

6- Oxazolindionas: parametadiona (Canales de Na+)7-Benzodiacepinas: diacepam (Mediadores GABA)8-Otros grupos: cido valproico (Canales de Na+)

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Los ms utilizados para crisis generalizada son las hidantoinas y la carbamazepina y paralas ausencias la etosuccimida. Para el estado epilptico el ms recomendable es elDiazepam.

Estruc tura del Diazepam

El mecanismo de accin de los anticonvulsivos (del tipo benzodiacepinas) es disminuirla entrada de calcio por bloqueo de los conductos de sodio (despolarizacin) y potenciarlos efectos inhibitorios debido a la estimulacin de vas GABAergicas por aumento dedescargas de abertura de los canales de cloro.Para la valoracin de nuevos medicamentos, se utiliza el pentilentetrazol para crear crisisconvulsivas. Esto provoca hipoxia por espasmo vascular lo que ocasiona cambiosdegenerativos en la corteza cerebral debido al antagonismo fisiolgico.

Objet ivos Demostrar el efecto anticonvulsivante del diazepam en las convulsiones

producidas por el pentilentetrazol, Observar que tipo de convulsiones produce el pentilentetrazol.

Material, Equ ipo y Reactivo s

MATERIAL BIOLGICO Dos ratas Wistar

MATERIAL Y EQUIPO Dos jeringas para insulina

REACTIVOS Solucin de Pentilentetrazol de 65 mg/mL Diazepam de 5 mg/mL

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Metodo loga

1. Pesar cada rata y marcarlas, una se usar para probar el efecto preventivo y en la otra elefecto curativo del diazepam.2. En la rata marcada como 1,administrar diazepam 2mg/kg va intraperitoneal

3. Esperar 20 minutos.4. Aplicar una dosis de pentilentetrazol 64mg/kg va intraperitoneal.5. Observar si se presenta algn tipo de convulsin.6. En caso de que ocurra se anota la latencia del pentilentetrazol y tipo de convulsin.7. Para observar el efecto curativo del diazepam, administrar a la rata marcada como 2, unadosis de 64mg/kg de pentilentetrazol va intraperitoneal.8. En cuanto aparezca la convulsin aplicar la dosis de diazepam 2mg/ kg va intraperitoneal.9. Tomar el tiempo de latencia para el inicio del efecto del diazepam.10. Realizar el sacrificio de los animales con ayuda de cloroformo.11. Anote sus resultados en las siguientes tablas

Tabla 1: Anlisis del efecto Preventivo

1. Equip

Tiempo de latencia del Pentilentatrazol No Convulsion

12

3

45

6

Tabla 2: Anlisis del efecto AnticonvulsivoEquipo Tiempo de latencia del Diazepam No Convulsion

1

2

3

45

6

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CUESTIONARIO

1. Defina estado epileptico

2. Escriba la clasificacion de las crisis convulsivas

3. Escriba la clasificacin de los anticonvulsivos

4. Escriba y analice el mecanismo de accin de los anticonvulsivos5. Cuales son los efectos adversos generals de los anticonvulsivantes?

6. Describa la farmacocintica del Diazepam7. Cules son los efectos adversos del Diazepam?8. Cules son los usos clnicos del Diazapam y del Pentilentetrazol?9. Cules son las interacciones del Diazepam?

Referencias1. Hardman, J. Limbird L. Molinof P. Ruddon R. and Goodman A. 1996. Goodman & Gilman. Las

Bases Farmacolgicas de la Teraputica. 9 Edicin. Vol. 1. Ed. McGraw Hill Interamericana.

E.U.2. Katzung, B. 2001. Farmacologa Bsica y Clnica. 8 Edicin. Ed. Manual Moderno, Mxico.3. Smith, C. Reynard A. 1993. Farmacologa. Ed. Mdica Panamericana. Argentina.

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PrcticaNo. 6

Frmacos Cardiotnicos


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Objet ivo

Se alcanzar y demostrar el efecto txico de un glucsido cardiaco (digoxina)aplicado al corazn de la pulga de agua

Se demostrarn los efectos inotrpicos positivos y cronotrpico negativos de ladigoxina aplicada al corazn de la pulga de agua

Se compararan los efectos producidos de la digoxina con otras substanciascardiotnicas administradas a la pulga de agua

Material, Equip o y Reactivos.

MATERIAL BIOLGICO NO

PARTE 1 (1Sesin )

MATERIAL Y EQUIPO

Computadora personal con simulador instalado

REACTIVOS NO

PARTE 2 (2Ses in )

MATERIAL BIOLGICO

Pulgas de agua (1 bolsa por grupo)

MATERIAL Y EQUIPO

Microscopio Cronometro 1 Caja de Petri

2 Pipetas Pasteur 6 jeringas de 1 ml

2 Portaobjetos

REACTIVOS

Digoxina Epinefrina Atropina Pilocarpina Solucin de cloruro de sodio al 2% p/v Solucin de cloruro de potasio al 2% p/v Solucin de cloruro de calcio al 2% p/v

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Contar los latidos por 15 segundos.2.6 Evale cada substancia con una pulga diferente y registre el efecto

presentado en una tabla indicando si el efecto fue positivo o negativo.

Substancia Efecto Inotropismo CronotropismoDigoxina

Epinefrina Atropina

Pilocarpina

Calcio

Sodio

Potasio

Cuestionario

1. Qu es un cardiotnico y que un glucsidocardioactivo, anotar ejemplos?

2. Cul es la relacin estructura -actividad de losglucsidos cardioactivos?

3. Qu diferencias farmacocinticas existen entre losdigitlicos?

4. Qu parte de la estructura del digitlico le da laspropiedades farmacocinticas?

5. Cul es el mecanismo de accin de losglucsidos cardioactivos y como se manifiesta en la

funcin cardiaca?6.Cules son los efectos txicos de los glucsidos cardioactvos?7.Cules sern los usos o indicaciones de los glucsidoscardioactivos?8. Haga un esquema de la anatoma de la pulga de agua, localice el corazne indique cuntos latidos realiza por minuto

Referencias

1. Goodman & Gillman's, Las bases Farmacolgicas de

La teraputica, 10" ed., Mc. Graw Hill, Mxico 20032. Bertrand G. Katzung, Farmacologa Bsica y Clnica,8a ed., Manual Moderno, Mxico 2002

3. Barastegui, AC, Esquemas y prcticas deFarmacologa. Espaxs, Espaa 1976.

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DiurticosPrcticaNo. 7


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Int roduccin

Los diurticos (o salurticos) son frmacos que incrementan la produccin de orina (diuresis)y la excrecin de sodio (Na). Actan principalmente sobre el rin, inhibiendo la reabsorcinde NaCI y agua, aumentando por tanto la excrecin urinaria de estas sustancias. Se utilizan

principalmente para el tratamiento del EDEMA.

Fisiologa De La Nefrona

Los riones controlan el volumen del fluido extracelular ajustando la excrecin de NaCI y

H20. Diariamente los riones filtran ms de 22 moles de Na +, los cuales se reabsorben porlos tbulos renales, para mantener el equilibrio.

El cuerpo mantiene la presin sangunea a expensas del volumen del fluido extracelular.Cuando la ingesta de NaCI es mayor que su eliminacin (p.ej. en falla congestiva cardiacao falla renal) se desarrolla edema.La reabsorcin de sodio se debe primeramente a la adenosin trifosfatasa (ATPasa) localizada

en la parte lateral de la membrana de las clulas epiteliales del nefrn. La bomba de Na+

/K+

necesita energa para intercambiar un Na+ por cada dos K+, manteniendo una bajaconcentracin de Na+ y alta concentracin de K+ en el interior de la clula. En el lado de la luztubular, existen vas pasivas para el movimiento del Na+ electroqumico del lumen a la clula.Esas clulas son las bases fisiolgicas de la accin diurtica.

Farmacologa De Los Diurticos.EL primer acierto de los diurticos es la reduccin del edema por reduccin del volumendel fluido extracelular, y para que esto ocurra, la secrecin de Na+ deber exceder a su ingesta.

En principio, los diurticos previenen la entrada de Na+ a las clulas tubulares. Una vez queel diurtico entra al fluido tubular, el sitio de la nefrona donde acta determina su efecto. Esdecir, el sitio de accin determina tambin que otros electrolitos, adems del Na+, sernafectados.

Todos los diurticos, excepto la ESPIRONOLACTONA, ejercen sus efectos en el lado luminalde la nefrona. Por eso deben alcanzar el fluido tubular para tener efecto. Por ejemplo, elmanitol lo hace por filtracin en los glomrulos; los dems diurticos, como estn fuertementeenlazados a las protenas, se filtran escasamente, llegando al lumen por secrecin a travs deltbulo proximal (va secretoria de bases y cidos orgnicos).El bajo flujo sanguneo renal o falla renal, disminuyen la eficacia de los diurticos, as comodrogas que compiten por la bomba secretoria como el PROBENECID para las drogas cidas, ola CIMETIDINA para drogas bsicas. Diurticos Con Accin En El Tbulo Contorneado

Proximal.El tbulo proximal determina el grado de liberacin de Na+ y H20 a zonas ms lejanas de lanefrona. Una amplia variedad de transportadores acoplan el paso del Na+ al interior de laclula, al movimiento de aminocidos, glucosa, fosfato, y otros solutos,MANITOL: ES un diurtico osmtico no metabolizable y es filtrado haca el espacio tubularincrementando la osmolalidad del fluido tubular. Esto trae como consecuencia reabsorcinaumentada de fluido resultando en excrecin aumentada de agua acompaada de un pocode Na+.

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Inhibidores De La Anhidrasa Carbnica (Acetazolamida)

El bicarbonato se reabsorbe en el tbulo proximal. El in H + es secretado al lumen endonde se une con bicarbonato filtrado (HC03+) para formar H2C03 el cual es convertido enH20 y C02 por accin de la anhidrasa carbnica. EL C02 difunde al tbulo proximal en dondese combina con H20 para formar H2C03, el cual a su vez forma H+ y HC03+. Este ltimo

sale del tbulo hacia la sangre, mientras H+ es secretado nuevamente a la luz tubular,resultando en reabsorcin de HC03+. Si la actividad de la anhidrasa carbnica se reduce, lareabsorcin de HC03+ tambin disminuye y la sale al tbulo proximal en cantidadesmucho ms grandes. Aunque el Na+ es el principal catin que acompaa la salida delHC03+ del tbulo proximal, se reabsorbe ampliamente en el tbulo distal el intercambiadopor K+. Por lo tanto, la ACETOLAMIDA causa principalmente un incremento de HC03+\ K+ yH20 urinario.Diurticos De Asa

Actan principalmente bloqueando el co-transportador de Na+/K+/Cr en la membranaapical de la rama ascendente del asa de Henle. Como en este sitio se concentra y

diluye la orina, los diurticos de asa disminuyen al mximo la concentracin y dilucinurinaria. En esta parte ascendente del asa se reabsorbe Ca++ y Mg++, proceso dependientede la reabsorcin normal de Na+ y CI-. Por lo tanto los diurticos de asa incrementan laexcrecin urinaria de agua, Na+, K+, Ca++ y Mg++. EJEMPLOS: Furosemida, bumetanida ycido etacrinico.

Diurticos De Tbulo Contorneado Distal.Tiazidas y drogas anlogas inhiben el transporte de Na+ y CI- a nivel de tbulo distal. Acomparacin de los diurticos de asa, poseen accin diurtica suave o moderadadebido a que en esta parte del glomrulo se reabsorbe menos Na+. Adems, si los rangos defiltracin glomerular declinan, menos fluido llegar al tbulo distal y las tiazidas tendrn un

impacto mnimo sobre la excrecin de agua y Na

+

.EL uso de la tiazidas incrementa la reabsorcin de fluidos y solutos en el tbulo proximal.Se manifiesta un incremento de la absorcin de Ca++ y cido rico en el tbulo proximal.Diurticos de Tbulos Colectores.ESPIRONOLACTONA: ES un antagonista competitivo de la aldosterona. Bloquea lareabsorcin de Na estimulada por aldosterona y la excrecin de K+ y H+ en tbulos distal ycolector. Tambin reduce la amoniognesis estimulada por aldosterona a lo largo delnefrn.

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AMILORIDE Y TRIAMTERENE: Inhiben el canal de Na+ en la membranas apicales de los tbulosdistal y colector. Debido a que en esta zona de la neurona la secrecin de K+ y H+ se explicanprincipalmente por los gradientes electroqumicos generados por la reabsorcin de Na+, sereduce el transporte de K+ e H+ haca la orina.

El estudio de estos frmacos generalmente se basa en la determinacin de la diuresis

y en los electrolitos eliminados al administrar estos frmacos en animales deexperimentacin. Para ello se recomienda usar ratas o perros debido a que su patrn deexcrecin urinaria es ms regular. Los mtodos que nicamente miden diuresis soncualitativos, como el usado en esta prctica. Existen otros mtodos para estudiarmecanismos y sitio de accin de estos medicamentos (mtodos de aclaracin renal,mtodos de diuresis interrumpida, mtodos de micropuncin y mtodos de microperfusin ensegmentos de la nefrona).

Objet ivo

Demostrar la diuresis en ratas producida por frmacos o sustancias con propiedadesdiurticas.

Material, Equip o y Reactivo s

MATERIAL BIOLGIO

1 Rata Wistar de 150-200 gramos de peso, de preferencia del mismo sexo y edad.

MATERIAL Y EQUIPO

Jaula Metablica Probeta Graduada Balanza Granataria Jeringas de 1 y 5 mL

REACTIVOS

Solucin fisiolgica (NaCI 0.9 %), que se utiliza como control negativo. Furosemida (Control positivo)

Metodo loga

1. Pesar e identificar a cada animal de experimentacin.2. Al grupo control negativo (sin tratamiento) se administra 25 mL/kg de solucin salina

va I.P.

3. Al grupo control positivo (con tratamiento) se le administrar por va I.P. 25 mL/kg desolucin salina ms una dosis de furosemida (20 mg/kg de peso).

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4. Se colocan las ratas en jaulas metablicas durante 2.5 horas.5. Se mide el pH y el volumen de orina excretada cada 15 minutos, durante las 2.5

horas.6. Se determina la orina acumulada durante las 2.5 horas.7. Terminado el experimento, se retiran los animales de las jaulas metablicas.

8. Determinar y tabular: pH, densidad y volumen de cada una de las muestras.

CLCULOS:

Realizarlos siguientes clculos para cada animal de experimentacin:

Excrecin urinaria:

Accin Diurtica:

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Cuestionario

1. El mtodo usado en este experimento permite determinar la diuresis dediferentes frmacos,

es suficiente para evaluar el efecto diurtico? Diga que otro tipo de anlisis realizara y porqu.

2. Qu otros mtodos existen para investigar el mecanismo de accin de losdiurticos?3. La eleccin de la rata como animal de experimentacin, es correcta?Fundamente su respuesta.4. Esquematice el mecanismo de accin de la furosemida.5. Indica los factores fisicoqumicos involucrados en la accin de los diurticos en

general.

Referencias

1. FLISER D, SCHROTER M, NEUNECK M, RITZ E. Coadminis-tration ofthiazides increases the efficacy of loop diuretics even in patients withadvanced renal faiiure. Kidney int 199;446(2):482-8.2. SUKI WN, STINEBAUGH BJ, FROMMER JP, EKNOYAN G. Physiology ofdiuretic action. En: Seldin DN, Giebisch G. eds. The kidney: physiology andpathophysiology. New York: Raven, 1985:2127-62.3. BYERS J, GOSHORN J. How to manage diuretic therapy. Am J Nurs

1995;95(2):38-43.4. MELILLO L. Diuretic plants in the paintings of Pompeili. Am JNephrol 1994;14(4- 6):423-

5. VAN MEYEL JJ. Comparison of the diuretic effect and absorption of a

single dose of furosemide and free and the fixed combinations of furosemideand triamterene in hearthy male adults. EUR J CLIN PHARMACOL1990;39(6):595-7.6. KANG MJ, YOON WA, KIM ON, LEE MG. Effects of water deprivation for48 hours on the farmacodynamics of furosemide in rats. J Clin Pharm Ther1995;20(1): 13-21.

7. Goodman & Gillman's, Las bases Farmacolgicas de La teraputica,10a ed., Me. Graw Hill, Mxico 20038. BertrandG. Katzung, Farmacologa Basica y Clnica, 8a ed., ManualModerno, Mxico 20029. C. Barastegui Almagro. Esquemas y Prcticas de Farmacologa.Editorial Espax, 1976, Barcelona, Espaa.10. Cairo M., Fresneda M.V., Campos D. Determinacin del efectodiurtico de Cymbopogon citratus (DC) Stapf (Caa Santa). Rev. CubanaPlant. Med. 1(3): 13- 17, sept.- dic. 1996.11. Nedi, T. ET AL Diuretic effect of the crude extraets of CARISSA EDULIS in rats.

Journal

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Prctica No 8Determinacin Espectrofotomtric

de sodio en orina.

ervicio social.

abor: De Los Santos Mendoza Karina

sesora: Jimnez Castaeda Esperanza


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Manual de Evaluacin de Frmacos y Medicamentos IIInt roduccin

Los diurticos aumentan la excrecin urinaria de agua y electrolitos y se administran parareducir el edema asociado a la insuficiencia cardaca, el sndrome nefrtico o la cirrosisheptica. Algunos diurticos se administran a dosis ms bajas para reducir la presin arterialelevada.Los diurticos de asa, o diurticos de techo alto, como la furosemida, son los ms

potentes y rpidamente producen una diuresis intensa dependiente de la dosis de duracin

relativamente corta. La furosemida por va oral produce diuresis en los 30administracin,

con el efecto diurtico mximo en 1-2 horas. La accin diurtica dura -60 minutos de l4-a 6

horas. La furosemida intravenosa produce diuresis a los 5 minutos, con el efecto diurtico

mximo en 20-60 minutos y diuresis completa en 2 horas.

Los diurticos de asa inhiben la reabsorcin desde el asa ascendente de Henle en el tbulorenal, y son tiles sobre todo en situaciones en las que es necesaria una diuresis eficaz y rpida,como la reduccin del edema pulmonar agudo secundario a insuficiencia ventricular izquierda.

Tambin se utilizan para tratar el edema asociado a enfermedades renales o hepticas y seadministran a dosis altas en el tratamiento de la oliguria por insuficiencia renal crnica. Losdiurticos de asa pueden ser eficaces en pacientes que noresponden a los diurticos tiacdicos.

MECANISMO DE ACCION:

Los diurticos de asa provocan la excrecin del 20-25% del sodio (Na+) filtrado por losriones, de ah que tambin se les conozca como diurticos de alto techo. Actanfundamentalmente sobre la rama

ascensodio (Na+) y cloruro (Cl-) desde el tbulo dente del asa de Henlerenal hacia el tejido

intersticial (reabsorcin , inhibiendo el transporte de tubular). Esto tiene un efecto adicional,ya que al llegar ms electrlitos a la parte distal de la nefrona, tambin se reduce lareabsorcin de agua, como consecuencia del aumento de la presin osmtica de la orina.Los diurticos del asa inhiben el sistema co-transporte sodio-potasio-cloruro, situado en lamembrana luminal de las clulas del asa gruesa ascendente, esencial para la reabsorcinfisiolgica de estos electrlitos. Los diurticos del asa parecen ser responsables del desarrollode una accin venodilatadora, aunque se ignora si sta es de tipo directo o indirecto. Se debea la liberacin de algn factor renal (posiblemente, prostaglandinas). El efecto venodilatadorpodra contribuir significativamente al efecto diurtico de estos frmacos.

Mecanismo de accin de los diurticos de asa Reduccin de la reabsorcin tubular de sodio

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El siguiente mtodo sirve para determinar sodio en orina mediante la precipitacin del

sodio del sobrenadante libre de protenas como triple sal. La disminucin resultante de la

absorbancia de la mezcla de reactivo de color -sobrenadante es proporcional al contenido

de sodio de la muestra, por lo cual al determinar el sodio excretado por una rata a la que se

e administre un diurtico de asa podremos determinar el tiempo mximo de diuresis.

Objet ivo:

Determinar el tiempo mximo de diuresis, cuantificar el sodio en orina y con esto demostrar el

mecanismo de accin de los diureticos de asa.

Material

Tres pipetas de 0.5ml Una pipeta de 5ml

Doce tubos de ensayo Gradilla.

Material bio lgico

Orina de rata (Prctica 7: diurticos)Equipo:

Espectrofotmetro

Centrifuga

Reactivos:

Reactivo de color:

Solucin de acetato de uranilo, 20g/100ml de agua y acetato de zinc60g/100ml de aguacon cido actico (4ml y 2ml respectivamente)etanol(200ml).

Reactivo precipitante:

Solucin acuosa de cido tricloroactico (TCA) al 25%

Estndar de sodio:

Cloruro de sodio, 4,091g/L en solucin de cido tricloroactico.Equivalente

a 140mmol/L.

Agua destilada.

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Preparacin de los reactivos:

Reactivo de color (1L)

De acuerdo a las proporciones ya mencionadas pesar 50g de acetato de uranilo ydisolver en 20ml de agua en ebullicin con 0.8ml de cido actico.

Por otra parte pesar y disolver 150g de acetato de zinc en 250ml de agua en

ebullicin con 0.4ml de cido actico.

Una vez preparadas las dos disoluciones mezclar ambas y colocarlas a ebullicin

hasta que sea una disolucin transparente de color amarillo homogneo.

Enfriar la mezcla y en caso de observar algn precipitado filtrar, posteriormente la

cantidad re sultante de esta medirla en una probeta y adicionar una cantidad igualde etanol.

Nota: En caso de que das posteriores se observe un ligero precipitado filtrar o

calentar nuevamente hasta disolverlo.

Precaucin: No se almacene en refrigeracin ni se exponga a la luz.

Reactivo precipitante (100ml)

Pesar 25g de cido tricloroactico y disolver en 100ml de agua destilada.

Estndar de sodio (20ml)

Pesar con exactitud 0.08g de Cloruro de sodio grado analtico y disolver en un

matraz volumtrico de 20ml y aforar con agua destilada.

Metodologa:

Enjuagar todo el material con poca agua destilada y secar perfectamente con

papel limpio.

De la orina recolectada de la prctica de diurticos tomar 0,5ml de cada tiempo

con una pipeta y colocarla en un tubo de ensayo cada una

teniendo la precaucin de etiquetar correctamente, posteriormente con otra

pipeta agregar 0,5ml del reactivo precipitante y agitar vigorosamente, despus

dejar reposar por cinco minutos a temperatura ambiente. Transcurridos los

cinco minutos centrifugar por cinco minutos ms (Para precipitar protenas).

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Mmol de Na x 140

De los resultados obtenidos graficar la cantidad de sodio en mmol excretados, por el

tiempo en el que se tom la muestra y analizar los resultados con respecto al control

negativo.

Ejemplo de cmo se deben organizar los resultados y como graficarlos:

Por otra parte etiquetar 11 tuboscon las siguientes leyendas, RB, S, U15, U30, U45, U1h,U1h15, U1h30, U2h, U2h30y UC-(Reactivo blanco, estndar, muestra al minuto 15..muestra alas 2h y media y muestra control negativo respectivamente). Al tubo RB adicionar 0,5ml de

agua destilada, al S 0.5ml del estndar de sodio y a todos los U 0,5ml de la muestradesproteinizada quele corresponde. Ya que cada tubo tenga lo correspondiente adicionarsin excepcina todos los tubos 2,5ml del reactivo de color y agitar vigorosamente parahomogenizar (ver tabla de abajo), realizado todo esto dejar reposar por 10 minutos atemperatura ambiente y centrifugar a alta velocidad por 5 minutos ms.

Para obtener la cantidad de sodio en orina es necesario ajustar el espectrofotmetro conagua destilada a 0 de absorbancia con una longitud de onda de 420nm. Luego leer elcontenido de los tres tubos ajustando entre lectura y lectura con agua.Los resultados registrados sustituirlos en la siguiente frmula:


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Cuestionario:

1.- Qu resultados se esperaran obtener al cuantificar el sodio despus de administrar un

diurtico de asa?

2.- Porqu con los diurticos de asa hay un incremento de sodio en

orina? 3.- Qu tipo de protenas se pueden encontrar en la orina?

4.- Aparte del sodio que otro tipo de electrolitos se encuentran en la orina de forma cotidiana?

Bibliografa:

1. A Photometric Method For The Estimation Of Sodium And Its ApplicationTo Serum Sodium Determinatione. C. Butterworth. J. Clin. Path, (1951),4, 99.

2. C.Barastegui Almagro. Esquemas y Prcticas de Farmacologa. EditoriaEspax, 1976, Barcelona, Espaa.

3. http://ocw.uv.es/ciencias-de-la-salud/farmacologia-clinica-aplicada-a-la-enfermeria/l eccion24.diureticos.pdf

Tiempo

(minutos)

Absorbancia mmol Na

15 0.84 120.65

Absorbancia

RB 1.183

0.785

46

30 0.816 129.09

45 0.719 137.88

60 0.822 126.98

90 0.836 122.06

120 0.837 121.7

150 0.837 121.7

Control

negativo

0.903 98.49
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PrcticaNo. 9Efectode los FrmacosHipoglucemiantes


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Int roduccin

Una de las enfermedades ms importantes a nivel mundial, que es un serio problema desalud publica y que ataca a toda sociedad sin importar su estado de desarrollo de laDIABETES MELLITUS, el 8.2% de la poblacin entre los 20 y 69 aos de edad la padecen

y cerca del 30% de estos individuos afectados desconoce si es diabtico. Adems ocupael tercer lugar de la mortalidad.En condiciones normales el control del metabolismo de los carbohidratos se da por unantagonismo fisiolgico entre dos hormonas: la insulina, que disminuye la glucemiamientras que el glucagn la aumenta. Ambas son secretadas por el pncreas en lugaresdiferentes, la insulina en las clulas y el glucagn en las clulas de los islotes deLangerhans.La DIABETES MELLITUS TIPO I (Diabetes Juvenil), se desencadena por la destruccinde las clulas produciendo carencia de insulina y por lo tantohiperglucemia, por lo que,quienes la padecen son candidatos a la administracin de insulina como terapia de

sustitucin. La Diabetes Mellitus tipo II se desencadena por factores metablicosincluyendo una funcin deficiente de las clulas beta y la resistencia a la insulina en musculoesqueltico, tejido adiposo e hgado, actualmente se sabe que su origen es gentico. Eltratamiento en este caso se sabe que es con el uso de hipoglucemiantes orales condiferentes mecanismos de accin.

Secretagogos de insulina: nitaglenida, repaglinida y sulfonilureas (estimulana las clulas beta del pncreas para incrementar la liberacin de insulina)

Antihiperglucemiantes: inhibidores de alfa glucosidasas, (retrasan laabsorcin de los carbohidratos en la luz intestinal), las biguadinas y lastiazolidinedionas (aumenta la sensibilidad de la insulina).

En el caso de la prctica nos enfocaremos a dar las caractersticas generales de la insulina quees el frmaco a evaluar como hipoglucemiante.La insulina es una protena sintetizada en las clulas beta en los islotes de Langerhansen el pncreas y est formada por dos cadenas peptdicas (A con 21 aminocidos, B con30) unidas por dos puentes disulfuro. Su funcin fisiolgica es promover la captacin deglucosa por las clulas de todos lo rganos, pero los sitios especiales para elalmacenamiento de sta, es el hgado, tejido adiposo y musculo esqueltico.Su mecanismo de accin se da cuando se une a un receptor en la membrana celular,desencadenndose una seria de fosforilaciones incluyendo la del transporte de glucosa que al estar

fosforilado promueve la captacin de sta al interior de la celular.

Fig.7.1 Mecanismo de

accin de la insulina a

nivel celular y molecular

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Metodo loga

En este procedimiento la evaluacin del frmaco (insulina) se lleva acabo comparando elefecto hipoglucmico en el animal experimental contra controles, un positivo (previamentecargado de solucin glucosada) y un negativo manipulado igual que el de experimentacin yC+, en vez de solucin glucosada se le administra el mismo volumen de solucin salina. Aningn control se le administra insulina. Esto es con el fin de que se vea el efecto del frmacoadministrado exgenamente contra el efecto ms lento que se observar de la insulinaendgena previa estimulacin por la carga de glucosa (control (+) ) y el control (-) servircomo referencia de la concentracin de glucosa normal y para asegurar que la disminucinde glucosa en sangre del animal experimental se debe al frmaco y no a la manipulacin.

1.- Marcar las ratas del 1 al 4. Tomar una muestra a tiempo cero antes de manipular alanimal, para obtener el valor basal de glucosa. La muestra se toma realizando una

incisin en la arteria caudal de la cola de la rata.2.- La rata marcada ser utilizada segn la siguiente indicacin

Rata 1 (control -): Administrar por va intraperitoneal 7mL de solucin salina. Rata 2 (control +): Administrar por va intraperitoneal 7mL de solucin glucosada.

Rata 3 (experimental): Administrar por va intraperitoneal 7mL de solucin glucosada

Rata 4 (experimental): Administrar por va intraperitoneal 7mL de solucinglucosada. 3.- Tomar muestra cada 10 minutos hasta los treinta minutos.

4.- Para observar la absorcin de glucosa; despus de la ltima toma administrar elvolumen correspondiente de solucin salina, insulina o matarique, dependiendo delnmero de rata:

Rata 1: Administrar el volumen correspondiente de solucin salina va subcutnea. Rata 2: Administrar el volumen correspondiente de solucin glucosada va subcutn Rata 3: Administrar 3 unidades de insulina va subcutnea. Rata 4: Administrar el volumen correspondiente de la infusin de matarique.

5.- Posterior a esta administracin tomar muestras cada 15 minutos hasta los 90 minutos o hastaalcanzar el nivel basal de glucosa.6.- La determinacin de la concentracin de glucosa se realiza por medio de tiras reactivas (ver lasinstrucciones para correcta lectura del resultado), la lectura la deber realizar una sola persona. Conlos resultados obtenidos construya una grfica de concentracin de glucosa contra el tiempo.

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Anexo Prctica 3: Simulador


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exo Prctica 6: Simulador


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t Edith Santamara Vquez

Anexo Pr

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Manual de Evaluación II

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