Manual de Bioquímica clínica 1

FAC. DE C. QUIMICAS./ CAMPUS IV/UNACH.

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIAPAS

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

CAMPUS IV

MANUAL DE LA MATERIA DE :

BIOQUIMICA CLINICA I

LICENCIATURA DE QUIMICO FARMACOBIOLOGO

TITULAR DE LA MATERIA: M. EN C. CONSUELO CHANG RUEDA

CICLO JULIO-DICIEMBRE .2009

M. EN C. CONSUELO CHANG RUEDA 1

FAC. DE CIENCIAS QUIMICAS/CAMPUS/ UNACH

TAPACHULA, CHIAPAS

I N D I C E

INTRODUCCION A LA BIOQUIMICA CLINICA . . . . . . 4

PRACTICA NO. 1:

1.0 DIGESTION:1.1 EXAMEN COPROLOGICO. . . . . . . 8

PRACTICA NO. 2:

2.0 METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS2.1 DOSIFICACION DE GLUCOSA. . . . . . . 122.1.1 METODOS ENZIMATICO. . . . . . . . 122.1.2 METODOS REDUCTIVOS. . . . . . . 132.1.3 POR CONDENSACION CON AMINAS AROMATICAS. . . 14

PRACTICA NO. 3:

3.0 PRUEBAS CONFIRMATORIAS DE DIABETES MELLITUS3.1 CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA. . . . . 163.2 PRUEBA POSTPRANDIAL. . . . . . . 17

PRACTICA NO. 4:

4.0 METABOLISMO DE LIPIDOS: 4.1 COLESTEROL TOTAL. . . . . . . . 204.1.1 DOSIFICACION DE COLESTEROL. . . . . . 224.2 TRIGLICERIDOS. . . . . . . . . 244.3 DETERMINACION DE HDL – COLESTEROL. . . . . 264.4 FACTOR DE RIESGO. . . . . . . . 28

PRACTICA NO. 5

5.0 PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO RENAL:5.1 DOSIFICACION DE UREA. . . . . . . . 315.2 DOSIFICACION DE CREATININA. . . . . . . 345.3 ACIDO URICO. . . . . . . . . . 36

PRACTICA 6

PROTEINAS TOTALES. . . . . . . . . 386.1 DETERMINACION DE ALBUMINA. . . . . . . 39

PRACTICA No. 7

M.C. CONSUELO CHANG RUEDA. 2


7.1 EXAMEN GENERAL DE ORINA.. . . . . . . 40

INTRODUCCION.

La bioquímica clínica es un campo multidisciplinario cuya finalidad es la aplicación de la Ciencia Química para la resolución de problemas de salud.

La función del laboratorio de Bioquímica clínica es realizar analisis tanto cualitativos como cuantitativos en fluídos corporales como sangre,orina líquido seminal , líquido cefalorraquídeo, así como en otros materiales por ejemplo cálculos. Para que los resultados de dicho análisis sean utiles a los médicos en el diagnóstico, tratamiento y seguimiento de una enfermedad estas deberán realizarse bajo un estricto control de calidad logrando niveles óptimos de precisión, exactitud, coordinación y plausibilidad, características deseables en cualquier resultado de diagnóstico.

Es indispensable que el estudiante de la licenciatura en Químico farmacobiologo, adquiera una formación y preparación bioquímica que le permita afrontar los retos que encontrará en su vida profesional, ante el creciente número de técnicas manuales y automatizadas, que continuamente se estan desarrollando para la detección y cuantificación de metabolitos de interés para la medicina moderna.

Al término del curso, el alumno deberá ser capaz de realizar el análisis de productos biológicos incluyendo una adecuada manipulación de los especímenes desde la toma y/o recepción de muestras hasta la entrega de resultados. Este proceso incluye: diseño selección, elaboración y ejecución analítica, evaluación y resolución de problemas con la metodología empleada, planeación aplicación e interpretación de programas de control de calidad, interpretación de gráficas y monogramas relativos, y correlación de los datos obtenidos con las posibles alteraciones que se presentan en el organismo en las diferentes patologias.



PRACTICA No. 1

EXAMEN COPROLOGICO

INTRODUCCION.-

La composición de las heces normales depende en gran medida de la cantidad y la calidad del alimento ingérido. Aún en un funcionamiento totalmente competente del sistema digestivo, no se puede procesar y absorver completamente una excesiva ingestión de limentos, por lo que para este examen, el paciente debe llevar una dieta no excedida, y particularmente no debe comer carne, durante 3 días que preceden al estudio.

El examen general de las heces, que cubre los aspectos macro y microscópicos, así como el estudio químico, tiene especial importancia en algunas disfunciones digestivas y en el reconocimiento de sangrado en tubo digestivo. Este examen refleja tan sólo el estado de la digestión en un determinado momento.

METODO.-

* EXAMEN MACROSCOPICO.-

- CANTIDAD: 200 - 300 gr/día.- COLOR: Café en distinta intensidad - Adulto

Verde obscuro ------- R/N

Amarillas -------------- Bebes alimentados con leche.

Arcilla ------------------Oclusión de las vías biliares, Hepatitis Aguda Esteatorrea (heces grasas)

Café muy obscuro ---Anemia hemolítica

Negras --------------- Sangrado en porciones altas del tubo digestivo.

-OLOR: Fecal ------------Normal.Acido picante -Excesiva fermentación de CHOS

Pútrido ---------Insuficiencia gastrica, Excesiva putrefacción intestinal



- FORMA: Una evacuación normal debe ser moldeada a la forma del conducto anorrectal, de consistencia pastosa a dura, mas bien gruesa.

* Moldeada --------------------------- Normal.* Afilada ------------------------------- Estenosis rectales.* Redondeadas y Fragmentos ---Espasmos del colon.* Gruesas -----------------------------Insuficiencia pancreática.* Alquitranadas ----------------------Sangrados gastrointestinales.* Pequeñas, Purulentas, sanguinolentas -------------------- Colitis ulcerativa.* Blanquesinas, purulentas sanguinolentas ----- Disenteria bacilar.* Normal, Mucosas y sanguinolentas ---------------------Disenteria amibiana. (fase inicial).* Diarreicas, Mucosas y sanguinolenta ----------------------Disenteria amibiana. (fases posteriores).* Liquidas ------------------------------Paratifoidea, Enteritis.

CONSISTENCIA:

La consistencia de las heces se registra como acuosas o líquidas, blanda, pastosa y dura.

Duras --------------------- Espasmos del colon.Pastosas y viscosas -- Insuficiencia pancreática.Viscosas ----------------- Sangrados gastrointestinales.Pastosas a líquidas --- Dispepsia putrefactiva.Acuosas ------------------ Presencia de trofozoítos de protozoarios.Duras --------------------- Quistes.

MOCO:El moco puede presentarse mezclado o recubriendo las heces, en forma de

filamentos, masas gelatinosas, bolas o cintas, que aveces tienen el aspecto de seudomembranas. Cuando el moco es abundante, caracteriza por lo general, la irritación o inflamación de la mucosa intestinal o del sigmoides.

pH: El pH de las heces depende de la relación que existe entre los ácidos producidos por el proceso de frementación y el amoniaco producido por el proceso de putrefacción.

7.0 - 8.0 ------------ NormalMenor de 6.5 ----- Dispepsia fermentativa.Mayor de 8.0 ----- Dispepsia putrefactiva.



La reacción de las heces se mide humedeciendo un papel indicador.

* EXAMEN QUIMICO.

El Analisis Químico asume importancia principal en sospecha de sangrado de tubo digestivo y en caso de esteatorrea.

- SANGRE OCULTA:El examen es de gran utilidad sobre todo en el estudio de las neoplasias del

tubo digestivo y de las anemias por deficiencia de hierro. Para detectar sangre oculta en heces el paciente no deberá comer carne durante los tres días que preceden al examen, ni tomará medicamentos que contengan hemoglobina.

Valores Normales: NEGATIVO.

- Investigación de Pigmentos Biliares.

Dicho analisis se realiza en base al color de las heces y mediante pastillas de ictotest .

Valores Normales: NEGATIVO.

- DETERMINACION DE LIPIDOS TOTALES:El aumento de grasa en heces (esteatorrea) sugiere menoscabo de la

absorción intestinal, por lo que la medición de lípidos fecales ayudará al diagnóstico de mala absorción.

Los adultos normales y los niños mayores eliminan hasta 5 gr de grasa total/24 hrs., valores por encima de 6 gr. han de ser considerados anormales. O bien, lípidos totales de 24 hrs; 7% de la ingestión o menos; 10% es el límite superior absoluto.

* EXAMEN MICROSCOPICO.

El examen coprológico general incluye el estudio microscópico de las heces para investigar:

-Residuos alimenticios microscópicos.

-Células, como eritrocitos, leucocitos y células epiteliales.

-Microorganismos, como bacterias y hongos.

-Objetos inertes, como cristales de CHARCOT-LEYDEN.

-Huevecillos y larvas de Helmintos, Quistes de protozoarios y trofozoitos, cuando se recibe y procesa.



* PREPARACIONES PARA MICROSCOPIA DE RESIDUOS ALIMENTICIOS CELULAS Y OTROS ELEMENTOS *

Para el examen de rutina, se disponen cuatro preparaciones húmedas para observación directa de la muestra de heces, entre porta y cubre objetos, tomando una pequeña porción de heces con una varilla de vidrio o mediante una asa de platino y homogenizándola en uno o dos gotas de las soluciones siguientes, previamente depositadas en los correspondientes portaobjetos:

1).- SOLUCION SALINA FISIOLOGICA:Corresponde al Examen ordinario para observación directa de heces en

preparación humeda. Permite una apreciación general de los elementos microscópicos presentes, en cuanto a su naturaleza y su numero. Si se observan objetos parecidos a quistes, se confirma la identidad con examen de la preparación con yodo y otros procedimientos.

2).- LUGOL:Se emplea principalmente para teñir quistes y establecer el numero de sus

núcleos, que se tiñen de amarillo; para la investigación de almidones, para el reconocimiento de vacuolas que contienen glucógeno (Iodamoeba) y para el reconocimiento general de los elementos en la preparación.

3).- ACIDO ACETICO AL 30%:Para investigar especialmente fibras musculares y células (leucocitos,

eritrocitos y células epiteliales).

4).- SUDAN III:Después de calentar ligeramente la preparación, esta solución colorante se

emplea para la investigación de grasas neutras y ácidos grasos.

Pueden hacerse, además, otras preparaciones para la diferenciación de lípidos. El estudio microscopico de las heces nos puede revelar:

Fibras muscularesTejido conectivoLípidosAlmidónCelulosaCélulasOtros elementos.



ANALISIS COPROLOGICO

HOJA DE REPORTENOMBRE DEL PACIENTE:___________________________

Fecha:_______________

EDAD:____________ SEXO:_________

EXAMEN MACROSCOPICO:

CANTIDAD APROXIMADA:_______________COLOR:______________________________OLOR:_______________________________FORMA:______________________________CONSISTENCIA:_______________________ Ph:__________________________________

EXAMEN QUIMICO:

MOCO:_______________________________SANGRE:_____________________________PIGMENTOS BILIARES:_________________GRASAS:_____________________________ALMIDONES:__________________________

EXAMEN MICROSCOPICO:

PROTOZOARIOS:___________________________________________

HELMINTOS:_______________________________________________

BACTERIAS:________________________________________________

OTRAS OBSERVACIONES: ERITROCITOS:______________________

LEUCOCITOS:______________________

LEVADURAS:______________________

VoBo:_______________________CALIFICACION:___________________



PRACTICA No. 2

BIOQUIMICA CLINICA DE CARBOHIDRATOS.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS DEL APRENDIZAJE:

1. Describir los conceptos fundamentales del metabolismo de los carbohidratos.2. Describir el metabolismo intracelular de la glucosa vía glucogénesis,

glucogenolisis, gluconeogénesis y oxidación de la glucosa.3. Describir el origen y regulación hormonal de la glucosa.4. Describir la fisiopatología de la hiperglicemia: Diebetes Mellitus y su

clasificación.5. Describir las causas secundarias de la hiperglicemia.6. Describir las causas de hipoglicemia7. Describir la importancia diagnóstica de las pruebas de glucosa posprandial y

curva de tolerancia a la glucosa.8. Describir los métodos análiticos más usuales para el análisis de la glucosa9. Determinar correctamente los niveles de glucosa en suero y orina e interpretar

los rangos de referencia.

METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS:

Digestión y absorción:

Los carbohidratos de la dieta contienen comúnmente, polisacáridos como el almidón, y disacáridos como la lactosa y sacarosa. La amilasa de las glándulas salivales y el páncreas actúan sobre las moléculas del almidón y las convierten en disacáridos(maltosa). Estos últimos, por la actividad intestinal de sistemas enzimáticos específicos, son digeridos degradándolos en sus monosacáridos constituyentes, las hexosas: Las exosas: glucosa galactosa y frustosa.(5,6)Estos productos finalesde la digestión principalmente la glucosa, por un mecanismo de difusión activoy sodio dependiente, se absorven en las vellosidades del intestino, sobre todo en la primera porción del yeyuno, y pasan a la sangredel sistema portal cuya circulación va al hígado; por ello despues de la absorción, los monosacáridos deben pasar por el hígado antes de llegar a la circulación general.(1)Desde el punto de vista clínico, la glucosa es la hexosa principal con niveles de normalidad de 70-110 mg/dL. En condiciones ordinarias, la concentración de la glucosa en la sangre es el resultado de un equilibrio entre procesos productores y consumidores de la misma, estos procesos son regulados por las hormonas insulina, glucagón y somatostatina, producidas por el páncreas. (2,3)



Metabolismo Intracelular de la Glucosa:

Las células del hígado y riñón metabolizan la glucosa de manera similar. La glucosa entra en las células bajo la influencia de la insulina y de la enzima glucocinasa para formar intracelularmente glucosa-6-fosfato (G-6-P),compuesto clave que puede tomar una de las tres rutas metabolicas, las dos principales vías son la glucogénesis y la glucolisis a través del ciclo del ácido tricarboxílico (TCA), mientras que una proporción variable de G-6-P, puede entrar por la vía de oxidación alternativa denominada el shunt de monofosfato de hexosa (HMP), también conocido como ciclo de las pentosas. Los requerimientos de energía elevada (ATP o trifosfato de adenosina) probablemente empiezen por la demanda de glucógeno (glucógenolisis), y el glucógeno puede también generar glucosa y puede haber glucogénesis cuando las necesidades energéticas lo permiten. (2)

Vía de la glucogenólisis:Es la síntesis de glucogéno a partir de glucosa. La síntesis de glucógeno ocurre practicamente en todos los téjidos del cuerpo, pero principalmente en en el hígado y músculo. Los monosacáridos pasan del intestino a la sangre portal que llega directamente al hígado, si el hígado no utiliza la glucosa la almacena un 6% de su peso en forma de glucógeno, la demás glucosa es enviada a los tejidos para que éstos la utilizen o almacenen enforma de glucógeno.

Vía de la glucogenólisis:Es la degradación del glucógeno, La glucosa es el principal producto de la glucogenólisis en el hígado, y el piruvato y el lactado son los principalñes productos en el músculo. El glucígeno hepático está en gran parte de encargado del mantenimiento de la glucosa sanguínea, cuando la concentración de ésta disminuye se liberan las homonas glucagón-adrenalina, que hacen que se active la fosforilasa hepática, iniciandose asi la síntesis de glucosa. La función de glucógeno muscular es actuar como fuente de unidades de hexosa para la glucolisis dentro del músculo, la hormona que desencadena este mecanismo es la adrenalina(6).



Vía de oxidación de la glucosa:La función principal de los carbohidratos en el metabolismo es la de un combustible que al ser oxidado suministra energía para otros procesos metabólicos. La oxidación de la glucosa se divide en dos etapas: 1) metabolismo anaerobio, también llamado glucólisis o ciclo de embden Meyerhof; 2) metabolismo aerobio, del cual forma parte el ciclo de Krebs. La fase anaerobia debe su nombre a que no requiere de oxígeno, aunque puede tener lugar en presencia de él . Forman parte del metabolismo anaerobio la producción y desdoblamiento de glucógeno y las transformaciones mutuas de las hexosas, galactosa, fructosa con glucosa; esta etapa termina con la producción de piruvato o lactato, y una pequeña cantidad de energía. Para poder entrar al metabolismo aerobioel ácido pirúvico necesita oxidarse hasta acetil-CoA. El acetil-CoA, entra al ciclo de Krebs em el cual por una serie de reacciones se obtienen como productos finales CO2, agua y energía.(6)

Gluconeogénesis.La gluconeogénesis es la formación de glucosa a partir de fuentes que no son carbohidratos. Las comprometidas en la gluconeogénesis son principalmente las del ácido cítrico y la glucólisis. Los substratos principales para la gluconeogénesis, son los aminoácidos glucógenicos, el lactato y el glicerol. La gluconeogénesis se efectúa cuando no se disponen de suficientes carbohidratos de la dieta. En la hipoglicemia se obtiene primeramente glucosa a partir de glucógeno, al no existir éste, se tiene que activar la gluconeogénesis, para esto primero se libera la hormona adrenocorticotrópica cuya principal función es la de estimular a la corteza suprarrenal para que libere cortisol. El cortisol estimula el catabolismo proteíco en los tejidos y activa a las enzimas que actúan en la gluconeogénesis(5).

Control y regulación hormonal de la glucemia.



2.1.- DOSIFICACION DE GLUCOSA

INTRODUCCIÓN:Los principales monosacáridos que resultan de los procesos digestivos son:

Aldosas, Glucosa, Galactosa,y la Cetosa como la Fructosa. Los Carbohidratos son utilizados por las células principalmente en forma de Glucosa, que sirve como combustible para suministar energía para otros procesos biológicos.

Los métodos que se utilizan para la identificación y cuantificación de Glucosa de los fluidos del cuerpo, se dividen en:

2.1.1.- METODOS ENZIMATICOS.

El uso de enzimas específicas para la Glucosa, como Glucooxidasa y Hexoquinasa purificadas dá una alta especificidad a la cuantificación de dicho monosacárido. Utilizando éstos métodos directamente en suero o plasma, la presencia de ciertos inhibidores como altas concentraciones de Acido Ascórbico, Hemólisis, Bilirrubina, Acido Urico, Catecolaminas pueden restarle a esta técnica algunas de sus ventajas teóricas.

Utilizando la Glucoxidasa tenemos la siguiente reacción:

Glucoxidasa H2O

GLUCOSA -----------> GLUCONOLACTONA ---------> AC. GLUCONICO FAD FADH2 H2O2

MUESTRAS:

Suero sin hemolisis. Liquido cefalorraquídeo

TECNICA:

1.- Marcar 3 tubos ( blanco, Estandar y Muestra) posteriormente pipetear los reactivos como se indican en la siguiente tabla:

BLANCO ESTÁNDAR MUESTRAReactivo en uso 1ml (1000l) 1ml (1000l) 1ml (1000l)Agua destilada 10 l --------- ---------Estandar --------- 10 l --------Muestra --------- --------- 10 l

Mezcle e incube a 37 oC durante 10 min.o deje a temperatura ambiente durante por lo menos 30 min..



Leer la absorvancia a 500 (492 –550) nm de la muestra y el patron frente al blanco 500 nm contra el blanco.

CALCULOS: A (abs)muestra x (Conc. Del Estandar)A (abs) patron

VALORES DE REFERENCIA:

Suero o Plasma: 70 – 105 mg/dL

Liquido Cefalorraquídeo: 50 – 70 mg/dL

2.1.2.- METODOS QUIMICOS

Por reducción .

a).- Usando FERRICIANURO como oxidante.La Glucosa se calienta frente a un exceso de Ferricianuro los iones

amarillos de éste son reducidos en solución alcalina a iones incoloros de Ferricianuro. El cambio de color (de amarillo a incoloro) puede medirse por titulación Iodométrica o por medición Fotométrica, (Método de Hoffman).

b).- Usando COBRE como oxidante.Los monosacáridos se oxidan fácilmente ya que son sustancias reductoras.

Las sales cúpricas en solución alcalina caliente se reducen a óxido cuproso rojo. Se puede medir el óxido formado utilizando Fosfomolibdato (Folín-Wu), Fosfotungstato (Benedict), Arsemolibdato (Somogyi-Nelson) que dan un color estable para su medición Fotométrica.

METODO UTILIZANDO COBRE COMO OXIDANTE:

METODO DE FOLIN-WU

DESPROTEINIZACION:

En los métodos que utilizan cobre es necesario eliminar las proteínas como paso preeliminar la mayoria de las proteínas muestran una tendencia a experimentar cierta forma de alteración, llamada DESNATURALIZACION, por acción de calor, de álcali, de ácidos, alcoholes e incluso agitación.

Generalmente en Bioquímica Clínica se prefieren los métodos a base de ácidos (como el ácido Tungstico, Ac. Tricloroacético, etc).

Para el método de Folin-Wu se sigue el siguiente procedimiento:* FUNDAMENTO DE LA DESPROTEINIZACION.



El Acido Sulfúrico reacciona con el Tungstato de Sodio para formar Acido Túngstico, el cual precipita las proteínas que son separadas por centrifugación o filtración.

* REACTIVOS

Acido Sulfúrico 1/12 N. Tungstato de Sodio al 10% en Agua Destilada.

* FUNDAMENTO DEL FOLIN-WU

La Glucosa reduce en solución alcalina y caliente el ión cúprico en ión cuproso con formación de Oxido Cuproso insoluble el cual reacciona con el Acido Fosfomolibdico dando lugar a un complejo azul que es proporcional al contenido de Glucosa y que puede ser medido espectrofotométricamente.

REACTIVOS:

1.- Solución Patrón Stock de Glucosa . . 1 ml = 10 mg.3.- Solución cuproalcalina4.- Solución Fosfomolíbdica.

CIFRAS NORMALES:

Suero: 80-120 mg%

2.1.3.- METODO DE CONDENSACION CON AMINAS AROMATICAS.

METODO DE ORTO-TOLUIDINA

Las aldosas se condesan con Aminas Aromáticas en solución de Acido Acético caliente para formar Glucosilaminas (Aldosilaminas). Se han utilizado Bencidona, O-Aminodifenil y la O-Toluidina.

* FUNDAMENTO

Los aldosacáridos dan con la O-Toluidina disuelta en ácido acético glacial, por calentamiento, una aldosilamina y la base de Schiff correspondiente. El color azul verdoso obtenido es suceptible a medirse fotométricamente.

REACTIVOS:

1.- Solución de O-Toluidina (Merck o Hycel) para Glucosa.



2.- Solución patrón de trabajo. De la solución Stock del método de Folin se hace una dilución de 1:10 con agua destilada para obtener 1 ml. = 1 mgr., que equivale a un patrón de Glucosa de 100 mgr.

CIFRAS NORMALES:

Sangre Total: 70 l00 mgr%Plasma o Suero: 65 100 mgr%LCR: 40 74 mgr%

REPORTE DEL RESULTADO:

No. De Clave:_________________

No. De Identificación de su muestra:__________________________________

NOMBRE DEL PACIENTE:_________________________________________

Resultado de su muestra : _________________________________________

________________________________________________________________

COMPARATIVAMENTE EXPONGA SUS RESULTADOS DE ACUERDOS A LAS TECNICAS EMPLEADAS . (EXPLIQUE)._______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

OBSERVACIONES:_______________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________

_______________________________________________________________



PRACTICA No. 3

3.2.- PRUEBAS CONFIRMATORIAS DE DIABETES MELLITUS:

CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA

INTRODUCCIÒN

El proposito de esta prueba es saber en que forma maneja el organismo una dosis fija de Glucosa administrada por vía oral o venosa en condiciones adecuadas del paciente; se trata de pruebas naturales que permiten establecer la respuesta insulínica a un estímulo fisiológico por glucosa.

Los pacientes con diabetes leve o controlada, pueden tener en ayunas niveles de glucosa en sangre que están dentro del intervalo normal, sin embargo, no pueden producir suficiente insulina para metabolizar pronto los carbohidratos ingeridos. Como resultado de ello, la concentracion de glucosa en sangre sube a niveles anormalmente altos y se retarda el retorno al valor normal.

PROCEDIMIENTO:

1.- Obtener una muestra de sangre en ayunas (Basal). Trabajar la muestra según la técnica a emplear.

2.- Administrar la solución de glucosa, haciendola beber completamente, (ej. 100 gr. de glucosa disuelta en agua con unas gotas de limón), marcar el tiempo.

3.- Obterner otra muestra de sangre cada 30 min. durante dos horas (pueden omitirse estas muestras y tomarse una después de dos horas).

VALORES NORMALES:

En una respuesta normal, el nivel de glucosa en ayunas (basal) esta dentro de los límites normales; la concentración máxima se alcanza hasta los 30 a 60 min. y no excede de 170 mg/dl y el nivel de glucosa a las dos horas desciende por debajo de 120 mg/dl. Se recupera nuevamente el nivel de Glucosa en ayunas después de tres horas.



REPORTE DE SUS RESULTADOS:

GLUCOSA EN AYUNAS:______________________ORINA:____________

GLUCOSA A LOS 30 MIN:______________________ORINA:____________

GLUCOSA A LOS 60 MIN:______________________ORINA:____________

GLUCOSA A LOS 120 MIN: ____________________ORINA:_____________

GLUCOSA POSTPANDRIAL

Glucosa en ayunas:

Glucosa postpandrial:

Cuestionario:

1.- Cual es la dieta previa que se le debe de dar al paciente:

2.- Que otras pruebas para el control del paciente diabético existen:

3.- Indique en base a sus resultados si su paciente esta o no diabetico:

Observaciones y Conclusiones:

Calificacion:_______________ VoBo._____________________



Practica No. 4

METABOLISMO DE LOS LIPIDOS:

Todos los lípidos son transportados en la sangre como lipoproteínas, sus clases son:

Lipoproteínas de alta densidad ()Lipoproteínas de baja densidad ()Lipoproteínas de muy baja densidadQuilomicrones (ricos en triglicéridos) transitoriamente elevados despues de la ingestión de grasas.

Con respecto al riesgo, las dos clases más importantes son las lipoproteínas de baja densidad y las de muy baja densidad. Las lipoproteínas de alta densidad son ricas en Colesterol y lleván algunos triglicéridos; y sólo tienen algo de colesterol.

La determinación de triglicéridos debe hacerse siempre en conjunto con la determinación de colesterol en suero. Ya que por medio de la medición de am,bos, es posible hacer una estimación de la naturaleza de algunos desordenes lípidicos.

El colesterol se sintetiza sobre todo en el hígado , pero también en la piel, intestino, glándulas suprarrenales, el ovario, el testiculo, el riñón y el pulmón. Todas las sustancias que en el organismo producen ácido acético pueden ser precursoras de colesterol(ácidos grasos, glucosa, algunos aminoácidos, etc.) El colesterol es esencial para el funcionamiento normal del organismo ya que es:

1.- Componente estructural esencial de membranas de todas las células y partículas subcelulares.

2.- Precursor de ácidos biliares.3.- Precursor de hormonas esteroides.Clinicamente es importante ya que existe una relación entre la

concentración del colesterol plasmático y la presencia de problemas coronarios.

Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) han demostrado tener una correlación inversa con enfermedades isquémicas del corazón y su determinación ayuda al pronoóstico de riesgos cardíacos. Hay dos metodos básicos disponibles para medir HDL, El primero es la ultacentrifugación y el segundo la precipitación LDL, VLDL (lipoproteínas de baja densidad y lipoproteínas de muy baja densidad.



COLESTEROL TOTAL

FECHA:__________

Existe una gran variedad de métodos para la determinación de Colesterol sanguíneo, como enzimaticos, gravimétricos, cromatográficos, fluorométricos, turbidimétricos, etc. siendo los más usados los colorimétricos.

El Colesterol como otros esteroides dan colores intensos cuando son tratados con reactivos ácidos. El color producido depende del ácido empleado y de su concentración, además de otras variantes. Se pueden clasificar los métodos colorimétricos según la reacción empleada; y tambien en métodos directos e indirectos.

4..1.- DOSIFICACION DE COLESTEROL TOTAL:

4.1.1.- METODO DE LIEBERMAN -BOURCHARDMétodo en medio acético-sulfúrico; es una modoficación al método original

de LIEBERMAN-BOURCHARD.

* FUNDAMENTO:El colesterol libre y esterificado forma con el anhidrido acético y el ácido

sulfúrico una combinación verde cuya intensidad de color es proporcional a la cantidad de colesterol.

REACTIVOSAc. Acético GlacialAnhidrido AcéticoColesterol Q.P.Ac. Sulfúrico Concentrado.Patrón de Colesterol 200mg/dl

CIFRAS NORMALES

1 mes a 20 años 100-140 mgrs%20 años- 29 años 144-27530 años- 39 años 165-29540 años- 49 años 170-31550 en adelante. 177-340



4.1.1 .- DOSIFICACION DE COLESTEROL. METODO ENZIMATICO

OBJETIVO: Realizar el análisis enzimático para la determinación de colesterol total en

suero y compararlo con el método de Lieberman Bourchard.

FUNDAMENTO:El colesterol y sus esteres se liberan de las lipoproteínas por los

detergentes. La colesterol-esterasa hidrolisa los ésteres. En la oxidación enzimática por el colesterol oxidasa, que tiene lugar a continuación se produce H2O2 por reacción de la 4 amino-antipirina y fenol, en un colorante quinonimina.

MUESTRA CLINICA:Suero o plasma (heparina o EDTA).

TECNICA:

1.- Marcar3 tubos ( blanco, Estandar y Muestra) posteriormente pipetear los reactivos como se indican en la siguiente tabla:

TECNICA:

1.- Marcar 3 tubos ( blanco, Estandar y Muestra) posteriormente pipetear los reactivos como se indican en la siguiente tabla:

BLANCO ESTÁNDAR MUESTRAEstandar --------- 10 l ---------Muestra --------- ---------- 10 lReactivo de trabajo 1ml (1000) l 1ml (1000) l 1ml (1000) l

Mezcle e incube a 37 oC durante 5 min. O deje a temperatura ambientee durante 20 min.Leer la absorvancia a 505 (490 –530) nm de la muestra y el patron frente al blanco 500 nm contra el blanco.

El color de reacción final es estable 30 minutos.

LINEARIDAD DEL METODO:



Hasta 700 mg/dL

CALCULOS:

Colesterol: D x f donde f= 200 mg/dl S


Deseable: < 200 mg/dL Moderadamente alto: 200 – 239 mg/dLElevado: >240 mg/dL

REPORTE:

Resultado de su muestra problema fue:_____________

OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES:



4.2 DETERMINACION DE TRIGLICERIDOS.

FUNDAMENTO:

El glicerol liberado en la hidrólisis de triglicéridos por la acción de la lipoproteína lipasa se convierte por acción de la glicerol quinasa en glicerol-3-fosfato, que se oxida por laacción de glicerol fosfato oxidasa en fosfato de dihidroxiacetona y péroxido de hidrogeno. En presencia de peroxidasa, el peróxido de hidrógeno oxida el cromógeno(4-aminoantipirina/pclorofenol) en un compuesto de color rojo.

.

MUESTRA CLINICA: Suero sin hemolisis. Plasma heparinizado, EDTA,o citrato.

REACTIVOS:

Estuche comercial para determinación de triglicéridos (Método enzimático).

Sol. estándar de trinoleina 100 mg/dL Sol. amortiguadora pH=7.7 Sol. de NADH2 PEP/ATP Suspención de PC/LDH Suspención de glicerocinasa Sol. de Sulfato de Magnesio Sol. etanólica dehidróxido de potasio Sol. reactiva Sol. amortiguadora

METODO ENZIMATICO



TECNICA:

BLANCO ESTANDAR MUESTRAREACTIVO 1 ml 1 ml 1 ml

AGUA DESTILADA

10 l ------- -------

ESTANDAR ------- 10 l -------

MUESTRAS ------- ------- 10 l

Mezclar, incubar a 37°C 10 minutos y leer a 500 nm. Leer contra blanco de reactivo.

VALOR DE REFERENCIA

HOMBRES: 60 – 165 mg/dLMUJERES: 40 - 140 mg/dL

CALCULOS:

Muestra abs x 200 mg/dLEstandar abs

EL RESULTADO DE SU MUESTRA FUE:___________________

OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES:

4.3 HDL (lipoproteínas de alta densidad)



FUNDAMENTO: Las lipoproteínas de alta densidad (HDL), se saparan de los quilomicrones, y de las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) así como de las de baja densidad (LDL) por la adición de un reactivo de precipitación (con ácido fosfotúngstico e iones magnesio) al suero o al plasma. Después de centriifugar, se determina el contenido de colesterol en la fracción HDL que permanece en el sobrenadante, por el método colorimetrico enzimatico de colesterol.

OBJETIVO: Separación de la fracción HDL de las fracciones LDL y VLDLpor precipitación con ácido fosfotúnsgtico e iones de magnesio y consecuente determinación.Establecer la significancia clínica de la determinación de HDL y su correlación con las demas determinaciones del perfil de lípidos.

MIESTRA CLINICA: Suero obtenido de 12 horas de ayuno. El suero puede conservarse a temperatura ambiente hasta 5 días. La refrigeración puede alterar la estructura de las lipoproteínas dando resultados bajos.Usar suero control comercial.

REACTIVOS:

Solución precipitante (Reactivo comercial):0.5 Molar de MgCl2Fosfotungstato al 4%

Reactivo para la determinación de colesterol enzimático ( reactivo comercial)

Solución estandar de colesterol de 200 mg/dL

Nota: las soluciones se deben atemperar ante de su uso.

MATERIAL POR EQUIPO:



Tubo de ensaye de 13x100 mmmTubos de centrifugaMicropipeta de vol. Variable p1000Micropipeta de volumen variable p200GradillaCentrifuga

POR GRUPOBaño maria a 25 oCEspectofotometroCeldas

PROCEDIMIENTO:

En un tubo de Kahn medir 200ml de muestra, y agregar 500ml de Reactivo Precipitante. Homogeneizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos y dejar 10 min en reposo a temperatura ambiente. Centrifugar 15 minutos a 3000 r.p.m o 2 minutos a 12000 r.p.m

Usar sobrenadante límpido como muestra. En tres tubos marcados blanco, standard y desconocido colocar:

B S DSobrenadante -------- --------- 200l

Standard ------- 20l --------Reactivo de Trabajo 2ml 2ml 2ml

Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C 0 15 minutos a Tem. Ambiente.Retirar del baño y enfriar. Leer a 505 (490 – 530) nm, llevando a cero con Blanco.

LINEARIDAD DEL METODO:La reacción es lineal u sigue la ley de Lambert-Beer hasta 1000 mg/dLVALORES DE REFERENCIA:

HOMBRES (mg/dL) MUJERES(mg/dL)Pronóstico favorable > 55 > 65Riesgo Normal 35 – 55 45 – 65Alto riesgo < 35 < 45



CALCULOS:

HDL colesterol= D x f f= 0.762 S

DETERMINACION DEL FACTOR DE RIESGO DE INFARTO AL MIOCARDIO.

VLDL + LDL F.R. = --------------------------- HDL

CUESTIONARIO:

1.- Determine el Factor de Riesgo del paciente analizado.

2.- Indique el Perfil de Lípidos completo.

3.- Porque es importante realizar el perfil de Lípidos.

4.- Que indicaciones se le deben de dar al paciente antes de realizar el Perfil de Lípidos.

5.- Cuales son los factores de riesgo que favorecen las hiperlipidemias:



REPORTE PERFIL DE LIPIDOS:

No. DE MUESTRA:_________________________

RESULTADOS: METODO VALOR DE RERENCIA

COLESTEROL :___________ __________ _________________

TRIGLICERIDOS :___________ __________ _________________

HDL-COLESTEROL:___________ __________ _________________

LDL-COLESTEROL:___________ __________ _________________

FACTOR DE RIESGO:_________ __________ _________________

INTERPRETACION DIAGNOSTICA DEL LABORATORIO:

ANALIZO:_____________________________________NOMBRE Y FIRMA



PRACTICA NO. 5PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO RENAL

Las principales funciones del riñon son:1) Formación de la orina2) Regulación del equilirio hidroelectrolitico3) Regulación del equilibrio acido-base4) Excresión de los productos de desecho del metabolismo proteico5) Función hormonal

El laboratorio clinico desempeña un papel importante en el diagnostico y evaluación de todas las enfermedades renales. Las pruebas clínicas de laboratorio permiten a veces detectar la presencia de anormalidades de la función renal mucho tiempo antes del desarrollo de los sintomas de la enfermedad.

El papel principal desempeñado por las pruebas funcionales renales en la medicina clínica consisten en la evaluación de la severidad de la enfermedad renal y en el seguimiento de su evolución.

Las principales pruebas de bioquimica clínica que se realizan para valorar la función renal son:

1.- Determinación de Urea

2.- Nitrogeno Ureico Sanguíneo (BUN)

3.- Determinación de Creatinina

4.- Depuración de Creatinina “CLEARENCE”

5.- Determinación de Acido Urico.

FECHA: .



PRACTICA NO. 5.1

CUERPOS NITROGENADOS

* U R E A *

Ls urea constituye la fracción de nitrógeno no proteico mas importante en la mayoría de los líquidos biológicos. En el hombre es el principal producto final del metabolismo proteico. Se produce en el hígado y es excretada por la orina atraves de los riñones.

Una elevación de la concentración sérica de urea, se interpreta como una posible disfunción renal. Sin embargo, no debe dejarse de lado el hecho de que los valores sericos de urea se encuentran íntimamente relacionados con la dieta y el metabolismo proteico, por lo que cualquier alteración en ests variables se traducirá en un cambio de la concentración de urea en suero.

Los métodos de urea en líquidos biológicos pueden dividirse en 3 grupos:

a.- DIRECTO:Condensación de la Urea con diacetilmonoxina

b.- INDIRECTO:Determinación como amoniaco como producto de la acción de la ureasa

sobre la urea.

c.- OTROS PROCEDIMIENTOS que incluyen principios fisicos o fotométricos de análisis.

METODO ENZIMATICO:

PROCEDIMIENTO:

TECNICA EN SUERO O PLASMA:

En tres tubos marcados blanco, Standard y Desconocido colocar una o dos gotas de agua y agregar:

B S DStandard --------- 20l ---------

Suero o Plasma -------- --------- 20lUreasa 1 gotal 1 gotal 1 gotal

Mezclar por agitación suave e incubar 5 minutos a 37°C.Luego agregar:



REACTIVO 1 1 ml. 1 ml. 1 ml.REACTIVO 2 1 ml. 1 ml. 1 ml.

Mezclar por agitación suave e incubar 5 minutos a 37°C. Luego agregar

Agua destilada 10ml 10ml 10ml

Mezclar por inversión y retirar del baño. Después de 10 minutos leer a 540 nm llevando a cero con el blanco.

CALCULO:

Suero o Plasma

Urea= D x Factor

Factor=60 mg/dl S

CIFRAS NORMALES.

20 - 45 mg/dl



5.2 CUERPOS NITROGENADOS

* C R E A T I N I N A *

TECNICA DE PETERS MODIFICADA.-La creatinina reacciona con el picrato alcalino formando un complejo que va

del color amarillo al anaranjado (reacción de Jaffé) suceptible de medición fotométrica. La reacción no es específica ya que abarca todos los cromógenos de la sangre, pero como la mayoría de estos se encuentran en los eritrocitos, se evita su interferencia usando suero o plasma (no hemolizado).

REACTIVOS:- Solución de Acido Pícrico al 1 % (guardar en frasco obscuro).- Hidróxido de Sodio al 10 %.- Solución patrón de CreatininaPROCEDIMIENTO:

NOTA: No usar sangre hemolizada ya que los eritrocitos contienen creatinina.

METODO ENZIMATICO

FUNDAMENTO:

La creatinina, compuesto sumamente difusible, se elimina del organismo casi exclusivamente por filtración renal.

La creatinina reacciona con el picrato alcalino (reacciónde Jaffe) produciendo un cromógeno rojo. La velocidad de esta reacción, bajo condiciones controladas, es una medida de la concentración de creatinina de la muestra puesto que se comporta como una reacción cinéticade primer orden para la creatinina.

TECNICA:

Equilibrar el reactivo de trabajo a la temperatura de reacción (25°C). antes de agregar la muestra, llevar el aparato a cero con agua destilada.

ESTANDAR MUESTRAREACTIVO DE TRABAJO 1,0 ml 1,0 mlESTANDAR 100µL -------MUESTRA ------ 100µL

Mezclar inmediatamente, iniciando al mismo tiempo el cronometro y proseguir la incubación. A los 10 segundos exactos medir la absorbancia (S1 y M1) y continuar



la incubación. Medir nuevamente la absorbancia (S2 y M2) a los 2 minutos después de la primera.

CALCULOS:

1) CREATININA EN SUERO (mg/l)= (M2 – M1) x f

f= 2.0 mg/dl S2 – S1


0.6 – 1.3 mg/dl.

P RACTICA NO. 10



FECHA: .

CUERPOS NITROGENADOS

* A C I D O U R I C O *

INTRODUCCION:

El Acido Urico proviene del metabolismo de las bases purícas (guanina) y se elimina por la orina. Parte del ácido úrico circulante es endógeno (por destrucción normal de los tejidos del organismo) y parte exógeno (por el metabolismo de los alimentos).

La mayor parte de los métodos para dosificarlo se basa en su oxidación y otros por su degradación con Uricasa.

METODO ENZIMATICO

PROCEDIMIENTO

En tres tubos marcados blanco, Standard y Desconocido colocar:


AGUA DESTILADA 25 l ---------- -----------ESTANDAR ---------- 25 l ----------MUESTRA ---------- ---------- 25 l

Mezclar e incubar a 37°C por 5 minutos a 555 nm, llevando a cero con blanco.

CIFRAS NORMALES

ACIDO URICO: 3.0 – 5.7 mg/dL

CALCULOS:

Abs muestra x 6.0 mg/dlAbs Estandar

PRACTICA NO. 6FECHA: .



PROTEINAS TOTALES

FUNDAMENTO:

Las proteínas del suero reaccionan con elreactivo de Biuret formando una coloración violeta, cuya intensidad es proporcional a la concentración de las mismas en la muestra.

Se recomienda que el suero se procese el mismo día de su recolección, pero puede ser almacenado 3 días en refrigeración o 7 en el congelación.

REACTIVOS:

1.- Patrón de Proteínas totales (7gr/100ml).

2.- Reactivo de Biuret (concentrada).

METODO ENZIMATICO:


AGUA DESTILADA 10 l --------- ---------ESTANDAR --------- 10 l ---------MUESTRA --------- --------- 10 l

Mezclar e incubar a 37°C por 10 minutos y leer a 550 nm (546), llevar a cero con blanco.

CALCULO:Abs Muestra x 6g/dLAbs Estandar


Proteínas totales: 6.2 - 8.0 g/dL.

6.1 * A L B U M I N A *FUNDAMENTO:



La albumina reacciona con el verde de Bromocresol y debido al llamado error proteíco de los indicadores, se forma una coloración verde que es proporcional a la concentración de la albúmina en la muestra.

REACTIVOS:

1.- Amortiguador (concentrado).

2.- Verde de bromocresol (concentrado).

REACTIVO DE ALBUMINA:

Transferir 100 ml del amortiguador y 3 ml de verde de bromocresol a un matraz de 500 ml y aforar con agua destilada.

PROCEDIMIENTO:

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------- REACTIVO BLANCO MUESTRA PATRON--------------------------------------------------------------------------------------------------------------Muestra - 0.01 - Patrón - - 0.01Reactivo de Albúmina 1.0 ml. 1.0 ml. 1.0 ml.--------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Mezclar y reposar 5 minutos.

Leer a 600 nm8550-628)

Color estable por1 hora.

CALCULO:Abs Muestra x 5 g/dLAbs Estandar


Albúmina: 3.8 - 5.4 g/dl.

PRACTICA No. 7



FECHA:________

EXAMEN GENERAL DE ORINA

INTRODUCCION:

La orina es un líquido excretado por el riñón y su examen es de gran utilidad en el diagnóstico de varios padecimientos , en los que se modifican sus caracteres físicos y/o químicos o aumentan los elementos celulares que normalmente se encuentran en pequeña cantidad. Su estudio es de utilidad no sólo en transtornos urinarios sino también en muchos transtornos generales o localizados en porciones distales del organismo. El estudio de los componentes químicos normales se debe efectuar en orina de 24 hrs. debido a las variaciones de concentración de sus componentes y la aparición de ciertos compuestos durante el día, entre los principales tenemos:

1.- UREA: Se elimina de 15 a 35 gr/24 hrs. Aumenta en casos de degradación proteínica, cancer, fiebre, diabetes, etc. Disminuye en casos de inanición, transtornos hepáticos, etc.2.- AMONIACO: Se elimina unido a ácidos principalmente fosfatos y sulfatos. Su determinación solo tiene valor en orinas frescas cuando no se ha iniciado la acción bacteriana. Aumentan en la ACIDOSIS.3.- ACIDO URICO: Se elimina de 0.4 a 1.2 gr/24 hrs. Aumenta en incremento de destrucción nucleoproteíca como neoplasias, tuberculosis, leucemias, ictericias hemolíticas, etc.4.- CREATININA: Se elimina de 1 a 1.5 gr/24 hrs. Aumenta en actividad muscular anormal como epilepsia.5.- CLORUROS, FOSFATOS, CALCIO, ETC.

El uriànalisis implica el examen de los caracteres fìsicos y componentes quìmicos de la muestra, asì como el estudio microscopico del sedimento urinario.

OBJETIVOS:

- Conocer las técnicas básicas y actualizadas para el exámen general de orina.

- Analizar las propiedades físicas y químicas de la orina.- Realizar la observación microscópica de elementos celulares en el

sedimento urinario.

REACTIVOS:



- Tiras reactivas comerciales.- Colorante de Eternheimer-Malbin ( Solución diluida).

MATERIAL.

Recipientes recolectores de orina.

Tubos de ensaye VACUTAINER.

Etiquetas adheribles.

Portaobjetos.

Cubreobjetos.

Pipeta automática de 20 microlitros.

Puntillas plásticas para pipeta.

Cámaras KOVA.

Papel adherente.

Gradilla.

EQUIPO.

Microscopio.

Centrifuga.

Equipo automatizado Clinitex 50.

REACTIVOS.

Control positivo (tiras) Chek-Stix. BAYER.

Control negativo.(tiras) Chek-Stik. BAYER.

Tiras reactivas para uroanalisis (Multistix 10SG, Ames de Mexico)

Agua destilada.

INDICACIONES DE TOMA DE LA MUESTRA:



De ser posible, utilize guantes de latex; de no ser asì , lave perfectamente sus manos con jabòn y abundante agua. Cualquier residuo de jabòn puede causar errores en el anàlisis.

1.- En el caso de ser mujer realizar un aseo del àrea pùbica con jabòn y abundante agua. En el caso de ser Varòn y no tener la circunciciòn, se retrae la cabeza que cubre la cabeza del glande (pene) con un movimiento hacia atras para exponer el meato uretral.

Debe de realizarse para ambos casos una limpieza posterior con una gasa de preferencia estèril. (Ver anexos)

Este procedimiento debe de repetirse con una segunda gasa. 2.- Iniciar la micciòn sin recolectar la primerà fracciòn, la cual se desecha

en el excusado. en el recipiente que se le proporcionò en el laboratorio, recolecte la fracciòn del chorro medio. Termine de orinar desechando la fracciòn final.

3.- Etiquetar la(s) muestra(s), anotando # de identificaciòn, nombre y hra de recolecciòn de la muestra.

4.- Iniciar el anàlisis en un tiempo no mayor de una hora de iniciada la recolecciòn.

EXAMEN FISICO:

1.- VOLUMEN: En el adulto normal se forma diariamente de 600 a 1,800 mL. de orina. El volùmen normal depende de la ingestiòn de agua, de la temperatura del ambiente, de la dieta y del estado fìsico y mental de la persona.

600 - 800 mL ----------- NormalPoliuria ----------- Aumento anormal del volùmen de orina de

24 hrs.Oliguria ----------- Disminuciòn anormal.

Anuria ---------- Cesaciòn total de la excresiòn urinaria.

2.- ASPECTO: Normalmente la orina recien emitida es transparente, pero puede volverse turbia por reposo o por la presencia de cristales, moco . A medida que la orina se enfria y que ocurren cambios de pH como resultado de la accciòn bacteriana, ocurre precipitaciòn de solutos. La orina normal es lìmpida y transparente, o con escasos fosfatos, uratos u oxalatos. El exàmen del sedimento urinario es la forma màs segura para determinar la naturaleza de la turbidez urinaria.



3.- COLOR: La orina de personas normales puede presentar toda gamma de amarillos, generalmente tiene color amarillo claro( paja) o ambar. Elcolor varìa con la cantidad y concentraciòn de la orina eliminada.

El color y la transparencia del frasco interfieren se aconsejan usar tubos de 16 x 150 mm. se homogeiniza por rotaciòn y se observa con buena luz.

Amarillo paja a àmbar ------------------------- Normal.Amarillo marròn al verde ------------------------ Enfermedades

hepaticas Rojizo --------------------------------------------------- Sangre o hemoglobina.

4.- Olor: La orina reciente tiene un olor caracterìstico aromàtico, debido a la presencia de àcidos volàtiles, màs intenso en las orinas concentradas.

Suigèneris -------------------------------------------- NormalAcetona ----------------------------------------------- Cetosis diabètica.Amoniacal pùtrido -------------------------------- Infecciòn.

5.- pH : Mide la cantidad de iones hidrògeno libres, no la excresioòn total de àcidos. Para que esta prueba tenga valor diagnòstico se debe medir el pH en orina reciente y respetar las indicaciones de uso al igual que los tiempos de lectura de la tira del fabricante. (Lakeside , Bayer o Ames)

FUNDAMENTO: Principio de doble indicador.

Interpretación:Se lee a los 60 segundos. La mala técnica de uso de la tira, ocaciona contaminación del área de pH, produciendo resultados falsamente disminuidos.

Para que esta prueba tenga valor diagnóstico se debe medir el pH en orina reciente. NORMAL. El pH urinario en pacientes adultos puede variar desde 4.5 a 8.0 en

especimes recién emitidos. ANORMAL. El pH usualmente más ácido en el caso de acidosis diabética,

fiebre, efisema pulmonar, diarrea y deshidratación. Un pH alcalino se encuentra en cistitis crónica, ciertas infecciones en tracto urinario, obstrucción pilórica, disfunción renal aguda y crónica, acidósis renal tubular, intoxicación por salicilatos de acetozolamida.

Valor de Referencia: pH : 5.5 – 6.5



6.- DENSIDAD o GRAVEDAD ESPECIFICA.

FUNDAMENTO: Cambio aparente de pKa de polielectrolitos pretratados en relación a la concentración iónica.Procedimiento: Se lee a los 45 segundos.Interpretación:

En orinas con pH alcalino debe asumirse 0.005 a la lectura obtenida. Se pueden obtener resultados elevados en presencia de cantidades moderadas de proteínas (100-750 mg/dl).

NORMAL. La gravedad especifica mide la capacidad del riñon para diluir ó concentrar, indica la proporción relativa de sólidos disuleltos en el volumen total del espécime. La gravedad especifica varía entre 1.010 a 1.025, dependiendo de la ingesta de líquidos, la más alta es la obtenida en la primera de la mañana.

ANORMAL. Esta elevada cuando hay vómito ó diarrea , disminuida cuando hay incremento en la ingesta de líquidos, insuficiencia adrenal, hepatopatías, falla cardiaca congestiva, ó en diabetes insípida y anormalidades como : falla renal aguda, defectos tubulares, glomerulonefritis y pielonefritis.

VALOR DE REFERENCIA: 1.003 y 1.030, variando según la ingestión de alimentos a agua, y en relación directa con la cantidad de sólidos disueltos.

EXAMEN QUIMICO: Se consideran todos aquellos metabolitos que frecuentemente aparecen en las orinas normales en cantidades mìnimas, tan pequeñas que con los reactivos normales comunes no alcanzan a ser descubiertas por lo cual se consideran practicamente ausentes, y que sòlo aumentan en trastornos orgànicos.

Generalmente se reportan por cruces de acuerdo con la intensidad de la reacciòn, con el siguiente significado.

(-) Negativo ( +) Positivo debil ( +++) Positivo

(H) Huellas (++) Positivo fuerte.



A) GLUCOSA:

FUNDAMENTO: Doble reacción secuencial enzimática de glucosa oxidasa y peroxidasa.

Procedimiento:Se lee a los 30 segundos

Interpretación:La temperatura, las cetonas, el ácido ascórbico y la gravedad especifica alteran

la reactividad del área. NORMAL. Normalmente no existe glucosa detectable en la orina, esta es

absorbida en el riñon por los túbulos después de atravesar el glomérulo. El umbral renal es aproximadamente 10 –14 mmol/l. , si la concentración sanguínea excede éste nivel aparece en orina. (glucosuria).

ANORMAL.La diabétes mellitus es la principal causa de glucosuria, otras causas más comunes son el dolor, hipertiroidismo, infarto del miocardio, traumatismos, sindrome de Cushing, acromegalis. Daño hepatico. Shock y pancreatitis aguda. Puede verse también una elevación posterior a la administración de corticoides y anestesia.

Puede ser determinada con los siguientes métodos cuando se desea hacer una cuantificación. - Benedict cualitativa- Orto-Toluidina (cuantitativo)- Somogyi-Nelson- Folin-wu

B) PROTEINAS:

Fundamento: Principio de error proteíco de los indicadores.

Procedmiento: Se lee a los 60 seg.

Posibles Interferencias:Pueden ocurrir falsos positivos en orinas alcalinas, en presencia de

compuestos de amonio cuaternario (antiséptico, detergentes), o con limpiadores de la piel que contengan clorohexidina.

VALOR DE REFERENCIA:

NORMAL. Los niveles de albumina por debajo de 15 ug/ml pueden ser considerados como normales ya que en orina puede aparecer por ejercicio extenuante y exposición al frío, en algunas con personas con proteinuria ortostática pueden aparecer proteínas después de levantarse.



ANORMAL. Proteinuria: puede ocurrir en varias enfermedades renales debido a un incremento en la permeabilidad del glomérulo. La glomerulonefritis, pielonefritis o hipertensión maligna pueden ocasionar proteinuria al igual que la toxemia del embarazo, hipertensión benigna, la falla cardiaca congestiva y la diabetes mellitus.

Cuando se requieren resultados cuantitativos se usa la siguiente prueba:- Pruebas con acido sulfosalicilico

C) CUERPOS CETONICOS:

Fundamento: Reacción de ácido acetoacético con nitroprusiato de sodio.

Procedimiento: Se lee a los 40 seg.

Interpretación:

La gravedad especifica elevada, el pH bajo, los metabolitos de levo-dopa, puede dar resultados elevados. NORMAL. Los cuerpos cetónicos, ( ácido acetoacético, acetona y ácido b-

hidroxibutírico), pueden aparecer en muestras de pacientes normales con dietas deficientes en carbohidratos, cuando el cuerpo no puede hallar glucosa que catabolizar, obtiene la energía de los depósitos de grasas las cuales a su vez son convertidas en cuerpos cetónicos.

ANORMAL. Los cuerpos cetónicos aparecen en la orina antes que en la sangre. En la diabetes fuera de control, la cetonuria es un signo importante y puede estar presente en los casos en los que están incrementados los requerimientos energéticos como hipertiroidismo, diarrea, vómito, fiebre, embarazo, lactancia, inanición o trauma.

Las pruebas que pueden servir para confirmación del resultado de cetonas són las siguientes:- Prueba de Rothera

- Reacción de Legal

D) BILIRRUBINAS, UROBILINOGENO Y UROBILINA:



FUNDAMENTO: Acoplamiento de la bilirrubina con la dicloranilina diazotizada en un medio fuertemente ácido.

Procedimiento: Se lee a los 30 seg

Interpretación:

La reactividad puede ser alterada por la presencia de sulfato de indoxilo, etodolaco y ácido ascórbico.

NORMAL. La bilirrubina se forma del metabolismo de la hemoglobina en el reticuloendotelio. Después es transportada al hígado , donde se conjuga con el ácido glucorónico, y después es excretada vía tracto biliar al intestino, donde es reducida a urobilinogeno con la ayuda de la flora intestinal, Normalmente hay pequeña cantidad de bilirrubina en orina que se encuentra por debajo de la sensibilidad de cualquier tira reactiva.

ANORMAL. La bilirrubina aparece por obstrucción biliar y en hepatopatías. La ictericia causada por la obstrucción eleva la bilirrubina, la hemolítica no. Enfermedades como hepatitis, cirrosis , carcinoma del páncreas, obstrucción biliar, envenenamiento por inhalaciones nocivas y la falla cardiaca congestiva asociada con ictericia cursan con bilirrubinuria.

E).- UROBILINOGENOFUNDAMENTO: Reacción de Erhlich modificada.

PROCEDIMIENTO: Se lee a los 60 seg.

Causa interferencias: El ácido paraaminisalicílico, las sulfonamidas y la formalina presentes en la orina por medicación o contaminación.

VALOR DE REFERENCIA: Negativo

INTERPRETACIÓN:

NORMAL. El urobilinogeno se forma a partir de la bilirrubina por la acción de la flora intestinal, de donde una parte es excretada por las heces. Otra parte (+/- 10-15%) es regresada al hígado y excretada por la orina; la presencia de una pequeña parte de urobilinogeno en la orina es normal.

ANORMAL. No existe en el caso de obstrucción biliar. Hay disminución en el caso de terapia antibiótica. El incremento se presenta en caso de daño celular



hepático, cirrosis incipiente, hepatitis viral aguda, hepatitis asociada con mononucleosis (periodo ixtérico), anemia hemolítica, hemólisis extravascular, anemia perniciosa, talsemia o falla cardiaca congestiva.

F) HEMATURIA Y HEMOGLOBINURIA:

FUNDAMENTO: Catalización del di-hidroperóxido de di-isopropibenceno y 3,3´,5,5- tetrametibencidina por la similut de la actividad de peroxidasa y hemoglobina.

METODOLOGÍA: Se lee a los 60 seg.


INTERPRETACIÓN:

La sensibilidad del área disminuye en orina con gravedad especifica elevada ó por ingesta de Capotena (captotril), El hipoclorito y peroxidasas microbianas en infecciones del tracto urinario pueden causar falsos positivos.

NORMAL. Más de 10 eritrocitos/uL es considerado como patológico ,el área de sangre en la tira multistix 10SG es capaz de revelar la presencia de sangre oculta en tres condiciones más comunes: hematuria (eritrocitos intactos), hemoglosuria (eritrocitos lisados), mioglosuria(de tejido muscular).

ANORMAL. La hematuria esta presente en : nefritis aguda, litiasis, infección cronicau carcinomas renales, papiloma maligno. Las sulfonamidas y anticoagulantes pueden también causar hematuria. La hemo-globinuria puede ser resultado de reacciones hemotliticas post-transfuncionales, descargas electricas, quemadas severas, etc. La mioglobinuria ocurre en transtornos musculares, traumatismos y dermatomiocitis.

Para c0onfirmar el resultado se utiliza una de las siguientes pruebas como són:

- Prueba de la Bencidina.- Prueba de la O- Toluidina

G) LEUCOCITOS.



FUNDAMENTO: Hidrólisis de un derivados del éster ácido aminipirrol, liberando 3- hidroxi-5-fenil pirrol. Catalizado con esterasa.

PROCEDIMIENTO: Se lee a los 120 seg.


Interpretación:

La descarga vaginal puede ocasionar contaminación de la muestra. Los resultados disminuidos pueden ser causados por elevadas concentraciones de glucosa, gravedad especifica elevada, medicación con cefalosporinas tetraciclina. NORMAL. La prueba detecta la esterasa liberada de los leucocitos granulocitos

en la orina. En condiciones normales la orina debe ser negativa a leucocitos. Los falsos positivos pueden aparecer por contaminación del espécimen.

ANORMAL. La presencia de leucocitos en la orina sugiere una infección del tracto urinario, la combinación de leucocitos y nitritos positivos es una buena indicación para uqe que se haga el análisis del sedimento urinario y se confirme la presencia de leucocitos.

H).- NITRITOS:

FUNDAMENTO: Conversión de nitratos en nitritos por la acción de las bacterias

PROCEDIMIENTO: Se lee a los 60 seg. Gram negativas en orina.


INTERPRETACIÓN: La prueba sólo detecta infecciones producidas por gram negativas. El ácido

ascórbico interfiere y puede haber resultados falsos negativos si falta incubación en vejiga ó si no se ingieren nitratos en la dieta. NORMAL. La pruebade Griess modificada –cuando es positiva- es virtualmente

diagnostica de bacteriuria significativa, (105 microorganismos por ml de orina),como la prueba depende de la conversión (in vivo) de nitratos de la dieta, en nitritos por la presencia de bacterias gram negativas se recomienda el uso de orina con no más de dos horas de haber sido emitida y por lo menos 4 horas de 0incubación en vejiga, para obtener resultados confiables.

ANORMAL. Una reacción positiva de nitritos indica de manera muy precisa la presencia de infección. Aproximadamente de 1 – 2% de las niñas y entre un 5 –10 % de las mujeres presentan bacterinuria, esta puede estar asociada a pielonefritis, cictitis y uretritis.

EXAMEN MICROSCOPICO:



METODOLOGÍA PARA EL ANALISIS DEL SEDIMENTO URINARIO.

Existen 2 métodos que son la forma tradicional y la estandarizada, recomendada por la Norma internacional de la NCSL que hasta ahorita no se ha implantado en México, pero que debemos de tratar de saber y realizar para estar conforme a dichas Normas de calidad que rigen los laboratorios clínicos y que nos compete por ser nuestra fuente de trabajo, por lo cual les enlisto las dos metodologías ya que para la Internacional se requiere de equipo cosa que en la Universidad no contamos más que con lo indispensable. METODO TRADICIONAL.

PROCEDIMIENTO:1.- Se mezcla la orina y se colocan unos 10 ml en un tubo de ensayo de

16x150.2.- Centrifugar a 2 000 r.p.m. durante 5 minutos.3.- Decantar el sobrenadante dejando solo el sedimento Se

homogeneizará por golpes suaves laterales con los dedos y se tomará una gota de la suspensión que se depositará en el centro de un portaobjetos limpio y nuevo, se colocará un cubreobjetos de 20 x 20 mm sobre la gota dejando que asiente, enfocar al microscopio atenuando la luz y así mismo, se deberá describir la presencia de los distintos elementos formes que componen la orina y la cantidad en forma subjetiva (abundantes, regular y escasos)(Argeri y Lopardo, 1993). y observar al microscopio el sedimento urinario. METODOLOGIA ESTANDARIZADA:

Con la metodología estandarizada Kova una vez depositado los 12 ml de orina en el tubo de ensaye, se centrifugará durante 5 minutos a una fuerza centrífuga relativa (FCR) de 400g.Se calculará las revoluciones por minuto (R.P.M.) a las que debe centrifugar para tener una FCR de 400g empleando la siguiente formula: RFC= 11.18 x Radio en cm x [R.P.M./1000]2En donde:RFC= fuerza centrífuga relativa.Radio = distancia en centímetros entre el eje de rotación y el centro del tubo de la centrífuga.Una vez centrifugada la muestra, eliminar 11ml de sobrenadante con pipeta o jeringa, conservar en el tubo 1ml para resuspender el sedimento. En los casos pediátricos se utilizarán bolsas pediátricas dependiendo del sexo (niño o niña) en que no puedan recolectar 12 ml, se pueden centrifugar 6 ml, eliminando 5.5 y resuspender en 0.5ml.

Adicionar al sedimento una gota de colorante Sternheimer-Malbin, mezclar suavemente hasta obtener una mezcla homogénea. Con una pipeta Pasteur o con un capilar, tomar una gota de la suspensión del sedimento teñido y colocarla en la esquina de una cámara de KOVA glasstic slide 10. La cámara se llenará por capilaridad con un volumen estándar de 6.6 microlitros. Localizar la cámara y las estructuras de mayor tamaño (cilindros) con objetivo



100x.Estudiar los otros elementos formes con objetivo 400x.Para reportar los elementos formes/microlitro hay dos métodos descritos por el fabricante:

Realizar el conteo de cada elemento forme en 10 cuadros pequeños de diferentes cuadrantes empleando aumento de 100x para cilindros, o 400x para otros elementos formes. Realizar el cálculo empleando la formula siguiente: Elemento forme/microlitro = [N entre C] x 7.5

En donde:N= numero de elementos formes observados.C= numero de cuadros pequeños en los que se efectúa el conteo7.5= factor constante. (Bayer, 1997).

De esa manera se realizará una tabla en donde se igualara la cantidad en cruces de los elementos formes con la cantidad en microlitros de dichos elementos formes. Para la estadística de los datos se usará la prueba de chi cuadrada para los análisis, sobre diferencias de concordancia entre las lecturas.

4.- Anotar los elementos encontrados ya sea por la forma tradicional o estandarizada los cuales pueden ser cualquiera de las células enlistadas a continuación.

a).- CELULAS EPITELIALES:Generalmente tienen poco significado.

b).- LEUCOCITOS:

La eliminación normal de leucocitos en la orina es del orden de 3000/ml lo que corresponde aproximadamente a un leucocitos por cada 3 - 5 campos en orina no concentrada.

c).- ERITROCITOS:La presencia de eritrocitos en la orina indica sangrado en algún lugar de

las vías urinarias.

d).- CILINDROS:Los cilindros urinarios son precipitados de proteínas que se forman en los

túbulos de la nefrona. Las orinas normales pueden presentar algunos cilindros hialinos. Pueden observarse ademas de estos los cilindros leucocitarios, hemáticos, epiteliales, granulosos, céreos, grasos.

e).- CILINDROIDES:Son en todos los aspectos iguales a los cilindros, excepto que tienen

extremos Puntiagudos.

f).- FILAMENTOS MUCOSOS O MUCINA:



Se pueden encontrar en la orina normalmente pequeñas cantidades de filamentos mucosos.

g).- ESPERMATOZOIDES:Normalmente se encuentra en la orina de los hombres después de la

eyaculación en la mujer contaminada por la secresión vaginal después del coito.Nota: No se reportan unicamente para cuestiones medico-legales.

h).- BACTERIAS:La orina normal no debe contener bacterias, cuando menos en número

apreciable.

i).- HONGOS Y LEVADURAS:En las orinas normales no deben observarse estos elementos.

j).- PARASITOS:Exceptuando el flagelado Trichomana vaginalis, es raro encontrar

zooparásitos en el.

SEDIMENTO NO ORGANIZADO:

CRISTALES:Normalmente no hay cristales en la orina recién emitida. En general los

cristales urinarios no tienen significación salvo si son de sulfonamidas, cistina, leucina, tirosina u oxalatos. La naturaleza de los cristales esta en relación directa con el pH de la orina.

1.- CRISTALES DE ORINA ACIDA:Oxalato de Calcio, Ac. Urico, Cistina, Leucina, Tirosina Urato de Sodio, Uratos Amorfos.

2.- CRISTALES DE ORINA ALCALINA:Fosfatos Amorfos, Fosfatos Triples, Carbonato de Calcio, Fosfato de Calcio, Urato de Amonio, Urato de Calcio.

CUERPOS EXTRAÑOS:

No es raro que la orina se contamine con substancias extrañas exógenas. Suele suceder así cuando se emplean recipientes sucios para recogerlas o cuando las muestras no se conservan adecuadamente.

REPORTE DEL EXAMEN GENERAL DE ORINA.



PACIENTE:__________________________

ESTUDIO FISICO DE LA ORINA:

ESTUDIO FISICO DE LA ORINA:VOLUMEN:_________________ COLOR:________________________OLOR........: _________________ ASPECTO:______________________pH.............: _________________ Densidad:_______________________

ESTUDIO QUIMICO DE LA ORINA:

GLUCOSA:__________________ SANGRE: _______________________ACETONA:__________________ HEMOGLOBINA:_________________ALBUMINA:_________________ BILIRRUBINA:___________________NITRITOS:__________________ UROBILINA:____________________

ESTUDIO MICROSCOPICO:

LEUCOCITOS:__________________ERITROCITOS:___________________LEVADURAS:___________________CEL.EPITELIALES:________________ BACTERIAS:____________________FILAMENTOS DE MUCINA__________ CRISTALES DE:_________________________________________________OTROS:_______________________________________________________________________________________________________________________

RESPONSABLE DEL ANALISIS:


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