Presentado porAna Stephanie Troestch

EL MICROSCOPIO

Instrumento ópticodestinado a observarde cerca objetos uorganismosextremadamentespequeños.Es la herramientabásica para el estudiode la Biología.

Del micro- (pequeño) y scopio, (observar)

Para el estudio del material biológico sedispone de varios tipos de microscopios, locuales se pueden clasificar básicamente deacuerdo al tipo de fuente luminosa que usan:• Ópticos o luminosos:

- Campo claro- Campo oscuro- Contraste de fases- Fluorescencia- Ultravioleta

• Electrónicos- Barrido- Transmisión

El microscopio ópticoconvencional es compuestoporque posee dos sistemasprincipales de lentesconvergentes (ocular yobjetivo). La mayoría de losmodelos actuales sonbinoculares, aunque tambiénlos hay monoculares. Elmicroscopio compuestoconvencional se denomina "decampo claro" o "de campobrillante" porque todo elcampo se ilumina con una lentecondensadora común queproyecta luz fotonica.

Microscopio óptico o de campo claroSistema mecánico: sostiene al sistema óptico y aloja los elementos necesarios para la iluminación y enfoque del preparado. Sistema de iluminación: lo integran aquellos componentes encargados de colectar la luz, dosificarla y dirigirla a través del preparado Sistema óptico: incluye todos los elementos que colaboran en la ampliación de la imagen.

El condensador proyecta uncono de luz sobre las célulasque están siendo examinadasen el microscopio. Después deatravesar a las células, esehaz luminoso, en forma decono, penetra en el objetivo;el objetivo proyecta unaimagen aumentada en el planofocal del ocular, quenuevamente la amplia. Por finla imagen provista por elocular puede ser percibidapor la retina del ojo

Limite de resolución: es la menor distancia quedebe existir entre dos objetos para que puedanvisualizarse por separado. Cuando se ilumina unobjeto, los puntos de su superficie reflejan lasondas luminosas. Dos puntos próximos de lasuperficie se verán como distintos si ladistancia que los separa es grande comparadacon la longitud de onda que reciben.Si la distancia que los separa es inferior a lalongitud de onda que los ilumina aparecerán anuestra vista como dos puntos unidos.

Comparación de limites de resoluciónentre microscopio óptico, electrónico yojo humano.

LR= λC/NA

Donde:λ= longitud de onda de la luz (en µm)C= constante de proporcionalidadNA= abertura numérica

Cálculo del límite de resolución

Longitud de ondaLa longitud de una onda es ladistancia entre dos crestasconsecutivas, en otras palabrasdescribe lo larga que es la onda.En el espectro visible, las diferenciasen longitud de onda se manifiestancomo diferencias de color.

Si el espécimen se ilumina con luzblanca, se considera la longitud deonda del verde amarillo (0,55 um)

Constante de proporcionalidad

Constante de proporcionalidad estarelacionada con el grado desuperposición de dos puntos paraque puedan ser resueltos por el ojohumano.

Esta constante es 0,61

Abertura numérica

Es una medida de la capacidad delmicroscopio de agrupar las refraccionesde la luz producidas por los finosdetalles del objeto, debido a quedetermina el tamaño del haz de luz quees captado por el objetivo luego de através del objeto. Es una característicapropia de cada objetivo, es por estoqueforma parte de las inscripcionesgrabadas en los objetivos.

La calidad de un objetivo es tantomayor cuanto más elevada es suapertura numérica.

Cálculo de la abertura númerica

Donde:n es el índice de refraccióndel medio en el que la lente seencuentraθ es la mitad del ángulo deaceptancia máximo que puedeentrar o salir de la lente.

NA=n sen Θ

Calcular el limite de resolución de losdiferentes objetivos del microscopioóptico10 xLR= λC/NALR= 0,55 µm(0,61) / 0,30LR= 1,12 µm 40 x

LR= λC/NALR= 0,55 µm(0,61) / 0,65LR= 0,52 µm

100x

LR= λC/NALR= 0,55 µm(0,61) / 1,30LR= 0,26 µm

Calcular el limite de resolución de losdiferentes objetivos del microscopioóptico

Los microscopios ópticos modernostienen un limite de resolución de 0,2a 0,4 um, aproximadamente l/20 deldiámetro de un eritrocito humanonormal

Para disminuir el LR podemos utilizaruna fuente con menor longitud deonda (el caso extremo es el de losmicroscopios electrónicos) o bienaumentar n, para lo que podemosintercalar entre la preparación y elobjetivo un medio más denso que elaire.

Características del ME que lodiferencian de la microscopíade luz y que permite mejorarel límite de resolución deeste último. Se logran hacesde electrones con unalongitud de onda de 0,05nm, cuyo poder de resoluciónes de 0,2 nm mientras que lalongitud de onda de la luzvisible oscila alrededor de500 nm y su poder deresolución es de 0,2 µm

Características importantes del microscopio

Aumento totalPoder de penetración Distancia focalPoder definidorPoder de resolución