Introduccin a la ClulaMicroscopaJA Card, PhDUPR-Aguadilla

ObjetivosRepasar las partes que componen el microscopio y sus funciones.Conocer los diferentes microscopios utilizados para estudiar la clula. Establecer la importancia que posee el uso del microscopio en el estudio de la clula a distintos niveles.Practicar en el uso y manejor el correcto del microscopio.

El Microscopio

Terminologamagnificacinresolucinapertura numricandice de refraccininversinprofundidadcontrasteparfocal

Resolucin= 0.6 x largo de onda____________________Apertura Numrica (NA)

Apertura Numrica

Indice de refraccin

01_06_What can we see.jpgResolucin: distancia mnima entre dos puntos a la que son distinguidos como dos puntos Cul microscopio tendr una mejor resolucion: uno con 200nm o uno con 0.2 nm?

01_09_Scale.jpg

Tipos de MicroscopiosTipo Uso / Imagen

campo brillante : tejido, clulas, microorganismos vivos o fijos. Imagen: gris o negro con fondo blanco. Comunes, baja resolucin campo oscuro : especmenes sin tincin. Imagen: fondo oscuro imagen brillante

invertidos: morfologa de cultivos vivos, Imagen: gris cultivo de tejido

contraste de fase: especmenes vivos, no tincin, Imagen: grises;

-1000Xr: 0.2um

3 factores

luz enfocada por condensador buena preparacin para que la luz pase conjunto de lentes y buen enfoque

01_04_Early microscopes.jpg

01_07_Internal structures.jpg

01_05_Cells form tissues.jpg

Tipos de MicroscopiosTipo Uso / Imagen

fluorescencia: estructuras discretas, fluorocromos, UV confocal: organelos, citoesqueleto, macromoleculas, laser, imagen fluorescente, alta resolucin

TEM: estructuras internas celulares, imagen blanco/negro 2D, alta resolucin

SEM: estructuras externas, image, 3D, alta resolucin

01_17_Mitochondria.jpg

01_27_cytoskeleton.jpgCitoesqueleto-Unico de eucariotasActina, tubulina Dirigen y Guian los Movimientos celulares

01_08_TEM.jpg

01_11_E. Coli.jpg

01_14_Yeasts.jpg

01_15_Nucleus.jpg

01_16_Chromosomes.jpg

01_18_folds mito.jpg

01_20_Chloroplasts.jpg

01_22_ER.jpg

01_23_Golgi apparatus.jpg

01_28_Microtubules.jpg- Abonan al concepto de un citop dinamico!!

01_30_protozoan eats.jpg

Organismos Modelos

OcularCuerpo tubularBrazoRevolverPinzasObjetivosCarro mecanicoLaminillaPlatinaMacroCondensador/DiafragmaLamparaMicroNivelBase

Visualizacin ClulaMicroscopiosLaminillasCubreobjetosCubeta o bandeja de tincinAgujasPinzasEscalpeloPinzasAcetocarmn y Azul de metileno GoterosCebollaPalillos de dientesAgua

ProtocoloSeparar una de las hojas internas de la cebolla y desprender la tenue membrana que est adherida por su cara inferior cncava.

Depositar el fragmento de membrana en una laminilla con unas gotas de agua. Pon el porta sobre bandeja de tincin para que caiga en ella el agua y los colorantes.

Escurrir el agua, aadir una gotas de Acetocarmn sobre la membrana y dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente.

No debe secarse la epidermis por falta de colorante o por evaporacin del mismo!

ProtocoloCon el cuentagotas baar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante.

Colocar sobre la preparacin un cubreobjetos evitando que se formen burbujas y llevarla al microscopio.

Observa la preparacin a distintos aumentos, empezando por el ms bajo. (10x y 40x)

Identifica las distintas clulas del tejido epidrmico y las de las hojas del bulbo de cebolla si estuviera disponible

Cebolla nativa (150x)Cebolla azul metilen (150x).

Ncleo (600x)Retculo Endoplsmico (600x)

Clulas Epiteliales Bucales

Raspa suavemente el interior de la mejilla con un palillo (siempre por la parte roma, procurando no cortarse).

Coloca la mucosa blanca que se obtiene en el portaobjetos, aade una gota de agua.

Realiza una extensin (frotis) deslizando el borde de un porta sobre el que tiene la muestra.

ProtocoloColoca el porta en la placa de Petri, aade unas gotas de colorante sobre la muestra y djalo actuar durante cinco minutos.

Lava con cuidado el exceso de colorante y scalo con un poco de papel de filtro.

Aade una gota de agua a la muestra.

Coloca el cubreobjeto apoyndolo por un lado y dejndolo caer para que no queden burbujas.

Observa la preparacin al microscopio, utilizando varios objetivos, realiza un dibujo detallado de las clulas e indica el aumento del mismo.

Clulas epitelio bucal con azul de metileno

Resultados y DiscusinPrepara en tu libreta dibujos de las clulas sin tincin y con tincin en distintos aumentos.Rotula e identifica las partes de la clula en los dibujos.Busca en internet las estructuras principales de la clula con su nombre y funcin.Compara y contrasta clulas animales con vegetales.A que se podra deber que el ncleo adquiera mas intensidad de color?Que mas se observo ademas de clulas de mucosa bucal?

El uso correcto del microscopio puede producir una cantidad sustancial de informacin sobre la estructura y funcin de los componentes de la clula. *Usualmente se considera que la magnificacin, un aumento aparente en tamao, es la funcin principal del microscopio. Pero ms importante en el microscopio es su poder de resolucin, la distancia mnima entre dos puntos que puede ser reconocida. Los dos componentes ms importantes en proveer magnificacin y resolucin son los lentes y la luz. La diferencia en la calidad de los lentes aumenta la calidad de la resolucin versus la magnificacin. Como demostrado en la siguiente ecuacin, la resolucin no depende de la magnificaci

*La diferencia en la calidad de los lentes aumenta la calidad de la resolucin versus la magnificacin. Como demostrado en la siguiente ecuacin, la resolucin no depende de la magnificacin

Mientras mas bajito R mejor es el micro

*Apertura numrica: medida de la capacidad de un lente de obtener luz. Cada lente es catalogado con una apertura numrica que se observa escrita en el mismo lente. Mientras ms alta la apertura numrica, mayor la resolucin que provee el lente.

*El ndice de refraccin mide la cantidad de luz que es trasmitida versus refractada (figura 1). LT/LR A mayor ndice de refraccin mayor es la cantidad de luz que es transmitida por el lente por lo que se produce una mayor iluminacin e intensidad de la imagen. El aceite de inmersin posee un ndice de refraccin mayor que el aire. **01_06_What can we see.jpgResolucion: - distancia minima entre dos puntos a la q un microscopio los distinguira: la distancia mnima entre dos puntos que puede ser reconocida. Los dos componentes ms importantes en proveer magnificacin y resolucin son los lentes y la luz.

Ojo 200um o 2 mmMicro de luz 200nmTEM/SEM 0.2 nm Tamano de las celulas y sus componentes

Unidades en las q se mide

*01_09_Scale.jpgHasta donde podemos ver? nuestras huellas digitales**01_04_Early microscopes.jpg

Microscopia como se forman las celulas a partir de division celular?*01_07_Internal structures.jpg*01_05_Cells form tissues.jpgLas ceulas forman los tejidos de plantas y animales**01_17_Mitochondria.jpg*01_27_cytoskeleton.jpg

Citoesqueleto 27 responsable de los movimientos dirigidos en la celula 1-2728Unico de eucariotes, filamentos cris crossed anclado en la membrana o que sale del centro del citoplasmaActina, microtbulos, intermediosSistema de motores, sogas, que cambia formas, y dirige y guia movimientosCitoplasma dinmico movimiento por citoesqueleto, filamentos se forman y deforman, pistas de organelos, proteinas libresOrganelos libres

*01_08_TEM.jpg*01_11_E. Coli.jp

pared celular, membrana celular, citoplasma y DNA, (Fig 1-11 Interior celular desorganizado E coli.reproduccion rapida (20 min)

*01_14_Yeasts.jpg

Clula Eucariota 1-14, 15,16,17mas gdes y complejasalgunas independientes unicelularesy otras en grupos multicelularesncleo, membrana nuclear, cromosomas, mitochondria17,18, (simbiosis)19 ATP, respiracion celular, oxigeno como veneno

*01_15_Nucleus.jpg

ncleo, membrana nuclear, cromosomas, mitochondria17,18, (simbiosis)19 ATP, respiracion celular, oxigeno como veneno

*01_16_Chromosomes.jpg*01_18_folds mito.jpg*01_20_Chloroplasts.jpg*01_22_ER.jpg

Compartamentalizacion celular: ER1-22, Golgi1-23, Lisosomas,24 Peroxisomas, vesiculas, endocitosis y exocitosis25, Citosol:26, lo que queda luego de quitar la membrana celular y todos los organelos membranosos. Moleculas, concentradas forman solucion tipo Gel, donde ocurren las reacciones quimicas ej sintesis de prot 1-8 b y 1-22 b

*01_23_Golgi apparatus.jpg

Compartamentalizacion celular: ER1-22, Golgi1-23, Lisosomas,24 Peroxisomas, vesiculas, endocitosis y exocitosis25, Citosol:26, lo que queda luego de quitar la membrana celular y todos los organelos membranosos. Moleculas, concentradas forman solucion tipo Gel, donde ocurren las reacciones quimicas ej sintesis de prot 1-8 b y 1-22 b

*01_28_Microtubules.jpg

Citoesqueleto 27 responsable de los movimientos dirigidos en la celula 1-2728Unico de eucariotes, filamentos cris crossed anclado en la membrana o que sale del centro del citoplasmaActina, microtbulos, intermediosSistema de motores, sogas, que cambia formas, y dirige y guia movimientosCitoplasma dinmico movimiento por citoesqueleto, filamentos se forman y deforman, pistas de organelos, proteinas libresOrganelos libres

*01_30_protozoan eats.jpgComo se originan las celulas eucariotes? 1.29 Depredadores?1.30 Didinium Protozoarios 1.31

Organismos modelo organismos que son mas convenientes para estudiar que otros en un laboratorio o en investigaciones experimentalesreproduccionanatomiatransparentemanipulacion genticaGeneracionFenotipos *