Instructivo 001 preparacion de ziehl neelsen

Laboratorio ORION Investigación, Diagnóstico y Análisis Clínico Area de Microbiología y Bacteriología

Laboratorios “ORIOS” Investigación, Diagnóstico y Análisis Clínicos Jr. Lima Nº 208 II piso Of. 09 Tel. 351561 – Fax. 353865 www.laboratorioorionpuno.blogspot.com

Código: LO–B–001 Revisión: 00 Fecha de Emisión: 02.02.2016

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INSTRUCTIVO DE TRABAJO Nº 01

PREPARACION DE REACTIVOS ZIEHL - NEELSEN

Elaborado por: Blgo. Herbert L. Flores R. Revisado por: Aprobado por: Fecha: 02.02.2016

Firma: …………………………………….

Revisado por: Unidad de Calidad y Seguridad en Salud Fecha: 02.02.2016

Firma: …………………………………….

Aprobado por: Director de la Unidad Fecha: 02.02.2016

Firma: …………………………………….




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INSTRUCTIVO DE TRABAJO Nº 01

PREPARACION DE REACTIVOS ZIEHL - NEELSEN

TABLA DE CONTENIDOS

I. OBJETIVOS

II. ALCANCE

III. REFERENCIAS NORMATIVAS

IV. DEFINICIONES

V. RESPONSABILIDADES

VI. PROCEDIMIENTO

VII. VERIFICACION

VIII. DOCUMENTACION RELACIONADA

IX. TABLA DE REVISIONES

X. ANEXOS




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INSTRUCTIVO Nº 01

I. OBJETIVO

Normalizar el correcto uso y preparación de los reactivos para la

Tinción de Ziehl – Neelsen en el diagnóstico de baciloscopías.

II. ALCANCE

Se aplica al servicio de tuberculosis del Laboratorio “ORION” como

parte de los procesos que conducen a una correcta aplicación de la

Tinción de Ziehl- Neelsen.

III. REFERENCIAS NORMATIVAS

3.1. Instituto Nacional de Salud (INS). Centro Nacional de Control de

Calidad (CNCC). ISC-CNCC-001. Tratamiento de no

conformidades y toma de acciones correctivas y preventivas.

Primera Edición. Lima: INS/CNCC; 2002.

3.2. Instituto Nacional de Salud (INS). Manual de Bioseguridad para

los Laboratorios: MPR-CNSP-013. Segunda Edición. Lima: INS,

2002.

3.3. Instituto Nacional de Salud (INS). El Laboratorio de Salud

Pública Frente a la Emergencia de la Tuberculosis Resistente:

DT Nº 013. Primera Edición. Lima: INS/CNCC; 2001.

3.4. Instituto Nacional de Salud (INS). Manual de Procedimientos de

Laboratorio de Análisis Clínicos: MPR-CNSP-001. Primera

Edición. Lima: INS/MINSA; 1999.




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IV. DEFINICIONES

4.1. Acción correctiva

Acción tomada para eliminar la causa de una no conformidad

detectada u otra situación no deseable.

4.2. Acción preventiva

Acción tomada para eliminar la causa de una no conformidad

potencial u otra situación potencial no deseable.

4.3. Acta de Verificación

Las actas de verificación son testimonios de hechos ocurridos y

suelen escribirse en libros con hojas renglonadas para ello.

Además, se las numera correlativamente

4.4. Baciloscopía

Una baciloscopia es una técnica en la que se obtiene una

muestra mediante un pequeño corte en la piel y que se colorea

para poder identificar bacilos de Micobacterium tuberculosis.

4.5. Tinción de Zielh neelsen

La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción

diferencial rápida y económica, para la identificación de

microorganismos patógenos, por ejemplo M. tuberculosis.

V. RESPONSABILIDADES

5.1. Biólogo del servicio de tuberculosis.

5.2. Técnico en laboratorio del servicio de tuberculosis.




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VI. PROCEDIMIENTO

a. Descripción del procedimiento

i. Fucsina fenicada

Fucsina básica 10 gr

Alcohol de 95º 100 ml

Fenol acuoso 55 ml

Agua destilada 1000 ml

Preparación:

Preparar fenol acuoso calentando a baño maría 1 Kg de fenol

cristalizado hasta completar su disolución y agregando 100 ml

de agua destilada.

Disolver los 10 grs de fucsina con los 100 ml de alcohol,

agregando lentamente, en pequeñas cantidades y agitando

constantemente.

A 500 ml de agua destilada caliente (70º C) agregar 55 ml de

fenol acuoso (agua fenicada)

La fucsina disuelta en alcohol vaciar a una probeta y agregar

el agua fenicada en pequeñas cantidades y completar hasta

1000 ml con agua destilada.

Dejar reposar durante 24 horas protegida de la luz.

Filtrar y guardar en frasco color ambar. El tiempo máximo de

duración de la fucsina preparada es de un mes.

ii. Azul de metileno

Azul de metileno 1 gr


Agua destilada 1000 ml




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Preparación

En un matraz Erlenmeyer disolver mediante agitación el azul

de metileno agregándole pequeñas cantidades de alcohol.

Una vez disuelto agregar el agua destilada y filtrar.

iii. Solución decolorante

Acido clorhídrico concentrado 30 ml


Preparación

Dejar escurrir el ácido clorhídrico por las paredes del matraz

que contiene el alcohol con una pipeta y agitar suavemente.

iv. Solución decolorante

Cada vez que las soluciones sean trasvasadas a frascos o

dispensadores que se empleen para la tinción deben filtrarse

Esto es especialmente necesario para la fucsina fenicada,

porque con el tiempo el colorante se precipita.

Los dispensadores deben ser lavados con cuidado y deben

tener sus paredes secas cada vez que se remueva su

contenido.

Los reactivos deben conservarse en frascos color ambar y

protegidos lejos de la luz.

Se recomienda preparar los colorantes en cantidades para

consumo no mayor de un mes.

b. Monitoreo

i. Responsable

Biólogo del Servicio del Laboratorio de Tuberculosis.




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ii. Frecuencia

Cada vez que se prepare el reactivo

iii. Parámetros

Tiempo de coloración

iv. Metodología

A una lámina fijada con muestra de esputo cubrir con fucsina

fenicada 5 minutos y calentar hasta la emisión de 3 vapores.

Lavar con agua

Añadir con decolorante durante 3 minutos

Lavar con agua

Cubrir con azul de metileno durante 1 minuto

Lavar con agua

Secar al aire

v. Registros

Cuaderno de Registro de Evaluación

c. Acciones correctivas y preventivas posteriores

i. Responsable


ii. Tiempo de Resolución

Una semana




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iii. Registro

Cuaderno de Supervisión

VII. VERIFICACION

d. Responsable


e. Frecuencia

Cada tres meses

f. Registros

Cuaderno y acta de verificación

VIII. DOCUMENTACION RELACIONADA

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IX. TABLA DE REVISIONES

X. ANEXOS

Este documento no genera anexos

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