Introduccin

La inmunodifusin radial es una tcnica cuantitativa, basada en la precipitacin en gel de un sistema antgeno-anticuerpo mono especfico. Para cuantificar un antgeno dado, se incorpora en el gel una cierta cantidad de los anticuerpos correspondientes, con lo que al aplicar una muestra en un hoyo y dejarla difundir libremente, se forma un precipitado circular. De aqu se deriva el nombre de esta tcnica, ya que la difusin de la muestra y su precipitacin ocurren en forma radial. El dimetro del crculo o anillo de precipitado guarda una proporcin con la cantidad de antgeno en la muestra. De esta forma, se puede establecer una curva de referencia con cantidades conocidas del antgeno (estndares o patrones de referencia) y as interpolar los valores de muestras desconocidas. Es un examen de sangre que mide la actividad de una cierta protena que es parte del sistema de complementos. Dicho sistema es un grupo de protenas que se mueven libremente a travs del torrente sanguneo. Las protenas trabajan con el sistema inmunitario y juegan un papel en el desarrollo de la inflamacin.Existen nueve protenas mayores del complemento. Se clasifican de C1 a C9. Este examen mide la C4.

Mtodo para inmunodifusin radial Para desarrollar una tcnica de inmunodifusin radial propia (no comercial) se requiere: agarosa; un antisuero monoespecfico contra el antgeno de inters; y una solucin patrn de concentracin conocida del antgeno (para preparar la curva de referencia). Los principales parmetros que deben estandarizarse y optimizarse son: (1) La concentracin de antisuero en el gel, la cual depender del ttulo y avidez de los anticuerpos; en general, el antisuero se utiliza a una concentracin del 2-10% (v/v).(2) la cantidad de muestra (usualmente 5-10 l). Es fundamental mantener constante el grosor del gel, as como los dos parmetros mencionados, para obtener resultados cuantitativos que sean confiables y reproducibles. Estas condiciones se deben ajustar con el fin de lograr anillos de precipitado con bordes ntidos, fcilmente visibles, cuyos dimetros varen entre los 5-15 mm. La aparicide ms de un anillo de precipitacin indica que el antisuero utilizado reconoce ms de un antgeno (no es monoespecfico), y por lo tanto, no sera apropiado para esta tcnica.Principio de la tcnica: Consiste en una inmunoprecipitacin en agarosa entre un antgeno a cuantificar y su anticuerpo especfico. Se realiza incorporando uno de los dos reactivos inmunes (generalmente el anticuerpo) uniformemente en una capa de agarosa y luego introduciendo el otro reactivo en los pocillos cavados en el gel. El antgeno difunde radialmente en la mezcla gel-anticuerpo y se forma un disco o anillo de precipitado visible en un punto que depende de la relacin estequeromtrica antgeno-anticuerpo. Al completarse la reaccin a las 24-48 Horas, se realiza la medida del dimetro del anillo de precipitacin en mm2 y se compara con una curva de calibracin que se construye con los dimetros al cuadrado de una serie de patrones vs. La concentracin de los mismos, siendo esta relacin lineal.DefinicinEl estudio de los factores del Complemento es la determinacin de los componentes de uno de los factores que influyen directamente en la inflamacin llamada cascada del Complemento, entre estos factores se suelen determinar principalmente los factores C3, C4, y la actividad del complemento total o CH50.Los factores del complemento son nueve protenas, del C1 al C9.La cascada puede ser iniciada por diversos factores, principalmente la unin de complejos antgeno-anticuerpo.El producto final de la cascada es la unidad de ataque de la membrana celular, que genera agujeros en las bacterias pero tambin en ocasiones en clulas del propio cuerpo (enfermedades auto-inmunes).Cuando la misma bacteria vuelve a infectar a un individuo se produce la activacin del complemento por la llamada va alterna, desde el componente C3 , y desde esta activacin se produce la unidad de ataque celular.La actividad del complemento CH 50 mide la actividad que le queda a la cascada por activarse, si esta actividad es baja es que el complemento ya est siendo activado por otros factores y se encuentra agotada su capacidad.

Para qu se realiza este estudio.La actividad de complemento (CH50 o las protenas individuales de complemento) se miden para determinar si el complemento est involucrado en el origen o en el proceso de diferentes enfermedades. La actividad de complemento se mide tambin para controlar la gravedad o evolucin de unaenfermedad, tanto como diagnstico como para comprobar la eficacia del tratamiento.Por ejemplo, los pacientes con Lupus Eritematoso Sistmico activos pueden tener niveles bajos de C3 y C4, y estos niveles del Complemento pueden seguirse como un ndice de la actividad de la enfermedad.La actividad de complemento puede variar en partes diferentes de cuerpo. Por ejemplo, actividad de complemento en la sangre de pacientes con Artritis Reumatoide puede ser normal o aumentada, pero en el lquido articular se encuentra muy baja.Los niveles del complemento se encuentran muy disminuidos en graves infecciones bacterianas, por hongos y por parsitos.

Tcnica de realizacin del estudio. Para realizar este anlisis NO se precisa estar en ayunas. El componente C3 del complemento es inestable a altas temperaturas. Se puede realizar la toma en un lugar apropiado (consulta, clnica, hospital) pero en ocasiones se realiza en el propio domicilio del paciente. Para realizar la toma se precisa de localizar una vena apropiada y en general se utilizan las venas situadas en la flexura del codo. La persona encargada de tomar la muestra utilizar guantes sanitarios, una aguja (con una jeringa o tubo de extraccin).

Le pondr un tortor (cinta de goma-ltex) en el brazo para que las venas retengan ms sangre y aparezcan ms visibles y accesibles.Limpiar la zona del pinchazo con un antisptico y mediante una palpacin localizar la vena apropiada y acceder a ella con la aguja. Le soltarn el tortor.

Cuando la sangre fluya por la aguja el sanitario realizar una aspiracin (mediante la jeringa o mediante la aplicacin de un tubo con vaco). Al terminar la toma, se extrae la aguja y se presiona la zona con una torunda de algodn o similar para favorecer la coagulacin y se le indicar que flexione el brazo y mantenga la zona presionada con un esparadrapo durante unas horas. La sangre extrada se traslada al laboratorio de anlisis en un tubo especial para bioqumica, que contiene un producto anticoagulante. En general no suelen ser necesarios ms de 10 mililitros de sangre para una batera estndar de parmetros bioqumicos.Problemas y posibles riesgos. La obtencin mediante un pinchazo de la vena puede producir cierto dolor. La posible dificultad en encontrar la vena apropiada puede dar lugar a varios pinchazos. Aparicin de un hematoma (moratn o cardenal) en la zona de extraccin, suele deberse a que la vena no se ha cerrado bien tras la presin posterior y ha seguido saliendo sangre produciendo este problema. Puede aplicarse una pomada tipo Hirudoid o Trombocid en la zona. Inflamacin de la vena (flebitis), a veces la vena se ve alterada, bien sea por una causa meramente fsica o por que se ha infectado. Se deber mantener la zona relajada unos das y se puede aplicar una pomada tipo Hirudoid o Trombo cid en la zona. Si el problema persiste o aparece fiebre deber consultarlo con su mdico.Valores normales del complementoCH 5075 a 160 U/ml

C1 Inhibidor16 a 33 mg/ dl

C3 Hombres88 a 252 mg/ dl

C3 Mujeres88 a 206 mg/ dl

C4 Hombres12 a 72 mg/ dl

C4 Mujeres13 a 75 mg/ dl

En estos valores puede haber muy pequeas diferencias por la tcnica o por criterios de normalidad propios de laboratorios concretos, a veces en el rango de valores y otras veces por las unidades a las que se hace referencia.Valoracin de resultados anormalesLa actividad aumentada de complemento puede verse en: Cncer Colitis ulcerosa Infarto agudo de miocardioLa actividad disminuida de complemento puede verse en: Angioedema hereditario Cirrosis heptica Glomerulonefritis Hepatitis infecciosa Lupus Eritematoso Sistmico con afectacin renal Malnutricin Rechazo de trasplante de rganos.

UNIVERSIDAD DE ORIENTENUCLEO BOLIVARDEPARTAMENTO DE BIOANALISISESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD

INMUNODIFUCION RADIAL Y DETERMINACION DEL C4

PROFEOSRA BACHILLER:MaraMalav Castro GnesisCI: 23732809

Ciudad Bolvar, febrero del 2016.

Conclusin

El estudio de los factores del Complemento es la determinacin de los componentes de uno de los factores que influyen directamente en la inflamacin llamada cascada del Complemento, entre estos factores se suelen determinar principalmente los factores C3, C4,y la actividad del complemento total o CH50.Los factores del complemento son nueve protenas, del C1 al C9.La cascada puede ser iniciada por diversos factores, principalmente la unin de complejos antgeno-anticuerpo.La actividad de complemento se mide tambin para controlar la gravedad o evolucin de una enfermedad, tanto como diagnstico como para comprobar la eficacia del tratamiento.La inmunodifusin radial es una tcnica de anlisis inmunolgico de tipo cuantitativo. Se utiliza para detectar la cantidad de anticuerpos IgG, IgM e IgA que hay en el suero de un individuo.

Bibliografa

https://es.wikipedia.org/wiki/Inmunodifusin_radialhttps://microinmuno.files.wordpress.com/.../inmunodifusic3b3n-radial.exa.unne.edu.ar/bioquimica/inmunoclinica/.../LaboratorioN5.pdf. www.tuotromedico.com/temas/estudio_complemento.htmwww.nlm.nih.gov Pgina Principal Enciclopedia mdica.www.lablasamericas.com.co/.../complemento_serico__c4__por_nefelom